Альбумин и мегалин, которые вам нужно знать

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Часть Ⅱ: Обработка альбумина в почках — от ранних результатов до современных концепций

Якуб Гбурек, Богуслава Конопска и Кшиштоф Голжаб

НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ ЧАСТЬ Ⅰ // НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ ЧАСТЬ Ⅲ

цистанхеможно лечитьпочкаболезньулучшатьфункция почек

3.3. Кубилин

Кубилинбыл идентифицирован какальбуминрецептор Birn et al. в 2000 г. [64]. Авторы изолироваликубилиниз мембран щеточной каймы почек крыс методом аффинной хроматографии с иммобилизованным альбумином. Они также определили константу диссоциации комплекса методом поверхностного плазмонного резонанса (Kd=0,63 мкМ) и продемонстрировали, что инбредные собаки с функциональным дефектомкубилини мыши с ингибированныммегалинэкспрессии выделяют значительное количество альбумина с мочой. Более того, они также указывали на взаимное взаимодействие обоих рецепторов при эндоцитозе альбумина.

Кубилинпредставляет собой внеклеточный гликопротеин с молекулярной массой около 460 кДа. Первоначально он был идентифицирован как антиген тератогенных антител, вырабатываемых у кроликов после инъекции щеточной каймы почек. Первоначально известный как гликопротеин 280 (gp280), он располагался в проксимальных отделах почечных канальцев и эпителии желточного мешка. Его экспрессия была также обнаружена в подвздошной кишке, матке и плаценте. Первоначально этому белку не приписывали никаких лигандов. Более поздние исследования показали, чтокубилинбыл идентичен рецептору комплекса внутренний фактор-витамин B12 (IF-B12), присутствующему в тонкой кишке. Ему была отведена функция рецепторного белка [65]. ЧеловеккубилинГен был расположен на хромосоме 10p12.33-p13. Этот белок состоит из N-концевой части из 110 аминокислот, за которой следуют 8 доменов, подобных эпидермальному фактору роста (EGF-подобных), и 27 доменов, подобных C1r/C1s комплемента, родственному эпидермальному фактору роста белку морского ежа (Uegf ) и костный морфогенный белок 1 (CUB).Кубилинне имеет трансмембранного домена. N-конец отвечает за встраивание белка в мембрану. Каждый домен CUB состоит из 110 аминокислотных остатков. Структура CUB-доменов состоит из двух слоев из пяти антипараллельных -листов, также связанных -структурами. Они составляют наиболее консервативную часть молекулы и отвечают за связывание лиганда. В дополнение кальбумини IF-B12, железосодержащие белки (трансферрин, гемоглобин, миоглобин), аполипопротеин А1 и белок, связывающий витамин D, также могут быть связаны 56,59,66,67I. Анализ связывания альбумина с экспрессированными in vitroкубилинфрагменты позволили идентифицировать сайты связывания внутри CUB-доменов 6-8 [68]. Эти сайты, вероятно, частично перекрываются с сайтами связывания гемоглобина, как показано в конкурентном исследовании с использованием клеток HK-2 (проксимальный каналец почки человека, взрослый мужчина, иммортализованная папиллома) [69].

Кубилинне является полностью независимым эндоцитарным рецептором. Для правильной локализации и стабильности в мембране он должен взаимодействовать с белком AMN. Кроме того, этот белок отвечает закубилининтернализация. Недавно было продемонстрировано, что последовательность FXNPXF в цитоплазматическом домене AMN функционально активна и опосредует секвестрацию комплекса путем взаимодействия с адапторными белками: инвалидным белком -2 (Dab2) и аутосомно-рецессивным белком холестеринемии (ARH). Интернализация CUBAM также может происходить через связь смегалин[55,70]. Мегалинкажется, несет ответственность закубилинподдержание клеточной мембраны. Одновременное выпадениекубилиниз мембраны и его потеря с мочой была обнаружена у пациента с синдромом Донне-Барроу/FOAR (Facio-Oculo-Acustico-Renal Syndrome) из-за функциональной мутации в гене этого рецептора, приводящей к его цитоплазматической ретенции [71].

Основная роль CUBAM в трубчатыхальбуминпоглощение было продемонстрировано в недавних исследованиях на мышах с почечным нокаутомкубилина такжемегалин, при котором наблюдалась умеренная тубулярная альбуминурия [54,72]. Это наблюдение было также подтверждено генетическим и фенотипическим анализом пациентов с синдромом Имерслунда-Грасбека, вызванным мутацией вкубилинили ген AMN. В обоих случаях альбумин и другие лигандыкубилинтерялись с мочой [58].

Интересно,кубилина такжемегалинбыли также обнаружены в клубочках крысы и человека по схеме, аналогичной описанной длямегалин. Кубилинвыявили как поверхностную, так и внутриклеточную экспрессию в подоцитах [73]. Более того,кубилинЭкспрессия мРНК была обнаружена в мезангиальных клетках, но отсутствие амниона означало, чтокубилинне полностью функционален в этих клетках. Тем не менее,альбуминэндоцитоз был значительно нарушен при индуцируемоммегалинусловия нокдауна в стабильно трансдуцированных мезангиальных клетках |74]. Эти данные могут быть важны для лучшего понимания патологии клубочков.

Польза цистанхе для мужчин

3.4. Мегалин

Мегалинбыл идентифицирован какальбуминрецептор Cui et al. в 1996 г. [75]. Исследование проводили in vivo путем введения в проксимальные канальцы крыс растворов альбумина, меченного коллоидным золотом или изотопом йода-125. В эксперименте установлено влияние многих соединений на канальцевое поглощение этих белков. Введение рецептор-ассоциированного белка (RAP), цитохром С снижал, а гентамицин полностью ингибировал канальцевую реабсорбцию меченого альбумина. Эти лиганды характеризуются высоким сродством кмегалин, и их присутствие эффективно препятствует связыванию альбумина через этот рецептор. То же самое относится к ЭДТА, хелатору Ca2 плюс ионы, который также ингибирует поглощение. Это указывало на то, чтомегалинспособствует канальцевой реабсорбции этого белка. Эти выводы были подтверждены аффинной хроматографией на колонке с иммобилизованныммегалин.

Мегалинпервоначально был обнаружен как антиген мембранозной нефропатии типа Хеймана и назван гликопротеином 330 (gp 330). В 1994 году, после удачной попытки клонирования, его структура стала более известной, а название было изменено на используемое в настоящее время [76. Человекмегалинген был расположен на хромосоме 2g24-g31.Мегалинпредставляет собой крупный трансмембранный белок, принадлежащий к семейству рецепторов липопротеинов низкой плотности. В проксимальных канальцахмегалинобнаруживается в апикальной мембране и покрытых клатрином эндоцитарных везикулах. Этот белок имеет молекулярную массу 600 кДа и состоит примерно из 4600 аминокислотных остатков.мегалинмолекула содержит большой N-концевой внеклеточный домен, один трансмембранный домен и короткий C-концевой цитоплазматический фрагмент. Внеклеточный домен имеет четыре области, богатые цистеином, и отвечает за связывание лигандов. Несколько повторов последовательности, сходной с эпидермальным фактором роста (EGF), и бедный цистеином фрагмент, содержащий мотив YWTD, отделяют лиганд-связывающую область от части для встраивания. Сигнальная последовательность отвечает за диссоциацию лиганда в кислой среде эндосомы. Цитоплазматическая часть содержит три мотива NPXY, которые инициируют процесс эндоцитоза альбумина путем концентрации рецепторов в оболочечных ямках через адапторный белок отключенного белка -2(Dab2) [77]. Рекрутирование этого адаптера, в свою очередь, зависит от фосфорилирования, катализируемого протеинкиназами B (Akt1 и Akt2) [78,79].

Мегалинтакже обладает способностью связывать многие другие белки. Помимо альбумина, его лиганды включают, среди прочего: аполипопротеины (В, Е, HD), белки, транспортирующие витамины (А, D, В12), гормоны (ангиотензин I, эпителиальный фактор роста, лептин), ферменты и их ингибиторы (лизоцим, плазминоген). и др. [80]. В случае альбумина сайты связывания на молекуле рецептора еще не картированы. Он также усваивает комплекс CUBAM и его лиганды, включая альбумин. Образовавшиеся комплексы интернализуются с образованием ранних эндосом. После подкисления среды эндосомы комплекс диссоциирует, и свободный рецептор возвращается на клеточную поверхность через плотные апикальные канальцы [59,66,67,81].

Следует отметить, что высокий уровень глюкозы регулируетмегалинопосредованный альбумином эндоцитоз в клетках проксимальных канальцев почек. Повышенный уровень глюкозы в плазме ингибируетмегалинэкспрессии и, следовательно, эндоцитоза альбумина [61].

Польза цистанхе для мужчин

3.5. Неонатальный Fc-рецептор фрагмента иммуноглобулина

Недавние исследования почечной абсорбции альбумина указывают на важную роль неонатального Fc-рецептора (FcRn) в процессе извлечения альбумина из фильтрата и защиты этого белка от внутриклеточной деградации. FcRn представляет собой гетеродимерный трансмембранный белок, сходный по своей структуре с молекулами главного комплекса гистосовместимости (MHC) класса I. Обычно встречается в эндотелиальных и эпителиальных клетках. Его присутствие было подтверждено в подоцитах клубочков и в проксимальных канальцах. Обладает способностью независимо связывать альбумины и иммуноглобулины IgG в кислой среде (рН 5-6). Увеличение значения рН выше 7 приводит к высвобождению лигандов из рецептора [82]. FcRn в подоцитах присутствует в везикулах, принадлежащих кислому эндосомальному компартменту, и отвечает за связывание иммуноглобулинов и альбумина, прошедших через эндотелий гломерулярных капилляров в фильтрационное пространство. Отфильтрованные белки поглощаются подоцитом посредством эндоцитоза и/или пиноцитоза, а затем связываются FcRn при кислом рН эндосом. Эндоцитарные везикулы, нагруженные белками, подвергаются трансцитозу по направлению к просвету капсулы Боумена. В условиях повышения рН белок-рецепторный комплекс диссоциирует, и интактный белок высвобождается из клетки в первичный фильтрат. Предполагается, что этот процесс предохраняет узкие фильтрационные щели от засорения крупными белками [83,84]. Часть альбумина, отфильтровавшегося и реабсорбировавшегося в проксимальных канальцах, не подвергается деградации в лизосомах канальцевого эпителия и, скорее всего, восстанавливается в процессе трансцитоза. В этой теоретической модели FcRn связывает альбумин, который высвобождается из его рецепторов, предположительномегалин/кубилинкомплекса в кислой среде эндосомы, а затем направляется посредством трансцитоза к базальному участку эпителиальных клеток канальцев, где высвобождается в интерстициальную ткань вследствие повышения рН [85]. Хотя в свете текущих результатов исследований восстановление альбумина путем трансцитоза с участием FcRn в проксимальных канальцах имеет место, это маргинальное явление для нормального гомеостаза альбумина в организме [56].

Польза цистанхе для мужчин