Антиоксидантная нанолента на основе оксида графена как новый отбеливающий агент ингибирует механизм меланогенеза, связанный с фактором транскрипции, связанным с микрофтальмом

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

АННОТАЦИЯ:вмеланинВ процессе синтеза окислительные реакции играют важную роль, и это хорошая стратегия для подавления выработки меланина путем снижения окислительного стресса. Фуллерен и его производные или комплексы считались сильными поглотителями свободных радикалов, и мы дополнительно применили многослойный sp2-наноуглерод, чтобы обнаружитьмеланинмеханизмы ингибирования синтеза. В настоящем исследовании мы использовали новые наноматериалы, такие как многослойные углеродные нанотрубки (МУНТ), МУНТ короткого типа, наноленты оксида графена (GONR) и GONR короткого типа, в качестве антиоксидантов для регулированиямеланинпроизводство. Результаты показали, что GONR обладают лучшими антиоксидантными способностями в платформах анализа внутриклеточного и внеклеточного окислительного стресса, чем другие. Мы предположили, что GONR имеют кислородсодержащие функциональные группы. В анализе диацетата 2',7'-дихлордигидрофлуоресцеина мы обнаружили, что GONR может хелатировать ионы металлов, поглощая активные формы кислорода. С точки зрения молекулярного понимания мы наблюдали, что эти наноматериалы подавляли синтез меланина за счет снижения экспрессии генов, связанных с фактором транскрипции, связанным с микрофтальмом, и были аналогичные последствия в экспрессии белков. Подводя итог, можно сказать, что ПНГ является потенциальным агентом в качестве новогоантиоксиданти отбеливающий кожу косметологический материал.

цистанхеингибировать образование меланина

1. ВВЕДЕНИЕ

Кожа – это орган, покрывающий внешнюю поверхность человеческого тела. Поскольку интерфейс находится в контакте с окружающей средой, слой кожи играет важную роль в защите организма от патогенов, предотвращении чрезмерной потери воды, регулировании температуры тела и т. д. Меланоциты растут в базальной мембране эпидермиса кожи и составляют от 5 до 10 процентов клеточного содержимого. Они были охарактеризованы как одноклеточные «железки», имеющие тонкие, длинные, похожие на ленты дендриты и разветвления. Меланоциты перемещаются через эпидермальные клетки в непосредственной близости от них, создавая созвездие эпидермальных клеток вокруг каждого меланоцита. Существует множество внутренних и внешних причин старения кожи, и одним из таких факторов является ультрафиолетовое (УФ) излучение солнечного света. Во время воздействия УФ-излучения уровень активных форм кислорода (АФК) в коже резко возрастает, что известно как окислительный стресс. Несколько факторов токсичности окружающей среды. также усиливают окислительный стресс кожи, например, пестициды, четыреххлористый углерод, тяжелые металлы, ароматические амины и твердые частицы 2.5 (PM2.5).2 В биохимическом механизме внутриклеточные оксиданты образуются из неферментативной системы, превращая их АФК для запуска пути меланогенеза.

Помимо АФК, на выработку меланина влияет множество факторов, включая экспрессию генов, воспаление, эндокринные изменения и поглощение пигмента.1 На первых этапах выработки меланина тирозиназа играет роль в катализе тирозина в феомеланин и эумеланин. Механизмы производства обоих пигментов схожи, они включают гидроксилирование L-тирозина в 3,4-дигидрокси-L-фенилаланин (L-DOPA) и окисление L-DOPA в допахинон. На следующем этапе дофамин окисляется родственным тирозиназе белком 1 (TRP-1) и родственным тирозиназе белком 2 (TRP-2) в меланосоме, который регулируется фактором транскрипции, ассоциированным с микрофтальмом (MITF). формироватьмеланинНаконец, меланин созревает и осаждается в роговом слое.4,5 Они проникают в соседние кератиноциты базального слоя и защищают их ДНК от любых мутаций или модификаций, вызванных УФ-излучением. Созревшиймеланинвнутри меланосом переносится на кератиноциты6-9 и, наконец, приводит к длительной пигментации. Лентиго, веснушки и коричневые/черные точки иногда вызывают социальные проблемы у мужчин и женщин. Блокирование окислительного стресса или подавление активности тирозиназы является одной из стратегий подавления синдрома гиперпигментации и дерматологических нарушений.Антиоксидантыизлечивают гиперпигментацию и повреждение клеток, вызванные АФК.10,11 Таким образом, синтезированные антиоксидантные соединения имеют множество биофункциональных применений в средствах по уходу за кожей.

Фуллерен (C60), углеродные нанотрубки (CNT), графен и графеновые наноленты (GNR) — это четыре вида наноуглерода sp2, которые широко исследуются во всем мире.12 Фуллерен и его производные или комплексы долгое время считались сильными поглотителями свободных радикалов. Йодо и др. использовали водорастворимый C60 в качестве защитного агента от дегенерации, вызванной катаболическим стрессом. Инжак и др. пришли к выводу, что C60(OH)24 является сильнымантиоксидантсоединения, когда окислительный стресс слишком высок. Окуда и др. предположили, что комплексы C60 могут предотвращать опосредованное NO повреждение клеток.13,14 Tong et al. показали, что комплексы C60 могут быть многообещающими кандидатами для лечения заболеваний головного мозга, вызванных повышенным уровнем супероксида. Фактически, японская компания идентифицировала фуллерены с сильной антиоксидантной активностью для косметического применения в 2006 году. Lucente Schultz et al. продемонстрировали, что способность функционализированных однослойных УНТ (ОУНТ) поглощать кислородные радикалы почти в 40 раз выше, чем у дендритных C60.15-19Fenoglio et al. обнаружили, что многослойные УНТ (МУНТ) обладают замечательной способностью поглощать радикалы при контакте с внешним источником гидроксильных или супероксидных радикалов. Расчеты теории функционала плотности также выявили модель ОУНТ как поглотителей свободных радикалов. В 2004 году Новоселов и др. впервые продемонстрировали, что графен проявляет сильный амбиполярный электрический эффект и может быть многообещающим для электронных приложений.21 После этого они продолжали показывать, что графен обладает электронными свойствами, которые характерны для двумерного газа частиц, описываемого уравнением Дирака. 22,23 После этих двух новаторских статей все больше и больше внимания стало уделяться исследованиям на основе графена.24–30 Например, Qiu et al. в 2014 году показали, что оксид графена и малослойный графен демонстрируют значительныеантиоксидантактивности и может защищать различные биомолекулярные молекулы от окисления.31Han et al. экспериментально продемонстрировал в 2007 году, что энергетическая запрещенная зона ЗНС может контролироваться в процессе литографии путем изменения ширины ленты.32 Среди четырех наноуглеродов ЗНС привлекли наименьшее внимание. Насколько нам известно, существует мало исследований антиоксидантных свойств нанолент оксида графена (GONR).31,33 Поэтому в этом исследовании мы тщательно подготовили MWCNT, короткие MWCNT, GONR и короткие GONR и стремились систематически сравнивать их антиоксидантные свойства и связанные результаты. .

2. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

2.1. Морфология MWCNT и GONR.

Figure 1a shows the low- and high-magnification transmission electron microscopy (TEM) images of MWCNTs and short MWCNTs. Following acidic cutting under ultrasonication, the length of MWCNTs could be shortened from >от 10 мкм до 2−3 мкм. Одновременно было замечено, что обработка азотной кислотой делает гладкие поверхности труб шероховатыми. Некоторые выемки и неправильные формы отображаются на изображении с большим увеличением. Кроме того, используя МУНТ и короткие МУНТ в микроволновых реакциях, получают GONR и shortGONR соответственно. Мы также проиллюстрировали ПЭМ-изображения GONR с низким и большим увеличением и короткие GONR. Из-за большого продольного расстегивания и незначительного горизонтального разреза кажется, что GONR были короче, чем MWCNT. С другой стороны, изображения с большим увеличением показали больший диаметр, то есть 0,11–0,18 мкм, GONRs, чем у MWCNT, что указывает на то, что процесс распаковки прошел успешно. Точно так же короткие GONR имели меньшую длину и больший диаметр, чем короткие MWCNT. В воздушном компрессоре нашего нового процесса расстегивания тонкие слоистые структуры GONR были меньше, чем то, что мы получили в раннем отчете для той же микроволновой мощности 250 Вт, при сохранении более толстых центральных МУНТ. вместо полностью расстегнутой структуры нанолент при всех мощностях микроволн в новом процессе. Для сравнения с короткой GONR в наших предыдущих исследованиях 34 более высокая мощность микроволн приводила к образованию большего количества выемок на сторонах лент и не образовывала хороших гладких краев лент. Обратите внимание, что на рис. 1а мы использовали два разных типа медных сеток. Для MWCNT и GONR с достаточной длиной использовалась сетка Gu с кружевным формваром, стабилизированным углеродом (номер продукта 01881-F, Ted Pella, Inc., США). Открытые отверстия в ажурной углеродной пленке предотвратили наложение изображения передачи между наноуглеродом и углеродной пленкой. Темно-серые сетки принадлежат лейси-углеродной пленке. Однако сетка Gu с формваром, стабилизированным углеродом (продукт № 01800-F, Ted Pella, Inc., США) была необходима для коротких MWCNT и коротких GONR. Это было связано с тем, что большие отверстия в ажурной углеродной пленке создавали проблемы для эффективного удерживания коротких MWCNT и коротких GONR. Как показано на рисунке 1, светло-серый контраст под короткими МУНТ и короткими GONR представляет собой светлый слой углерода. Этот углеродный слой стабилизировал формваровую пленку, подвергнутую воздействию электронного пучка, благодаря своим тепло- и электропроводным свойствам.

2.2. Конфигурации связывания MWCNT и GONR.

Спектры комбинационного рассеяния четырех наноуглеродов представлены на рис. 1b; полоса D GONR была выше, чем у MWCNT после процесса распаковки. Это было связано с более высоким уровнем окисления и большим количеством краевых структур GONR по сравнению с МУНТ. Это явление также похоже на то, что мы наблюдали в 2011.12. Из-за высокого уровня графитизации полоса G МУНТ имела наименьшее значение полной ширины на полувысоте. Отношения ID/IG четырех наноуглеродов составляли 0.076, 0.502, 0,483 и 0,700 соответственно. Вкратце, уменьшенная длина и окисление поверхности увеличили уровень дефектов и, таким образом, повысили отношение ID/IG. Пик D' присутствует во всех дефектных графенах и рассматривается как мера качества.35 Как показано на рис. 1b, пики D' в четырех спектрах становятся более заметными после процесса разрезания или расстегивания, предполагая, что они являются деструктивными процессами, которые вводят много дефектов. На рис. 1c,d показаны спектры рентгеновской фотоэлектронной спектроскопии четырех наноуглеродов. По-видимому, пик D' наиболее четкий для коротких GONR. Как показано на рисунке 1c, уровень O значительно увеличился с 7,6% (МУНТ) до 19,9% (ГОНР) из-за сильной окислительной способности KMnO4 в кислой среде. С другой стороны, уровень O немного увеличился на 0,8 процента от МУНТ к коротким МУНТ. Важно отметить, что самый высокий уровень O составляет 38,3 процента для коротких GONR, что означает, что к концам нанолент будет легче прикрепить кислородные функциональные группы, чем к плоским поверхностям sp2. Большее число полной ширины на полувысоте и сдвиг пиков C 1s в сторону высокой энергии связи после процесса распаковки как МУНТ, так и коротких МУНТ показаны на рисунке 1d. сторона может быть отнесена к связям C-C(C-C), C-O, C-O и COOH.36 Мы охарактеризовали GONR (200 Вт) в 2013 г.,37 и результаты были аналогичны результатам этого исследования. Это исследование завершилось явления спектров комбинационного рассеяния, означающие, что во время преобразования трубки в ленту было создано больше кислородсодержащих функциональных групп (рис. 2).

2.3. Антиоксидантные свойства МУНТ и GONR.

2.3.1. Определение активности 1,1-дифенил-2-пикрилгидразила, поглощающей свободные радикалы.

1,1-Дифенил-2-пикрилгидразил (DPPH) поглощает свободные радикалы.антиоксидантплатформа, применяемая для определения антиоксидантной способности; результаты для четырех наноуглеродов описаны в таблице 2. В анализе DPPH в качестве положительного контроля использовали витамин С в концентрации 100 мкМ. Для проверки антиоксидантной активности МУНТ, коротких МУНТ, GONR и коротких GONR в реакционный раствор инкубировали дозы 1, 5 и 1 0 мг/л для измерения свойств. МУНТ, короткие МУНТ, GONR и короткие GONR обладали умеренной ингибирующей способностью при 1{{2{0}}} мг/л (19,2 ± 0,3, 12,1 ± 0,3, 26,8 ± 0,3 и 30,0). ± 0,4 процента), в то время как витамин Чад находится в аналогичном состоянии при 100 мкМ (93,4 ± 0,1 процента) для подавления.

2.3.2. Анализ ионно-хелатной активности.

В условиях окислительного стресса феррозин может образовать комплекс с Fe2 плюс, что можно измерить количественно. В присутствии хелатирующих медиаторов комплекс разрушается, вызывая восстановление ионов двухвалентного железа из темно-красного цвета комплекса Fe2+. Мы использовали ЭДТА в качестве положительного контроля. В таблице 2 показано, что МУНТ, короткие МУНТ, GONR и короткие GONR обладают хелатирующей активностью 1 0 мг/л (29,2 ± {{10}},8, 28,7 ± 0. 7, 69,7 ± 0,6 и 68,9 ± 0,3 процента), в то время как положительный контроль имел аналогичные условия при 100 мкМ (93,4 ± 0,1 процента).

2.3.3. Измерение мощности антиоксидантов, восстанавливающих железо.

Анализ потенциала восстановления трехвалентного железа является простым и надежным тестом, используемым для количественной оценки синтеза комплекса Fe(III)-феррицианид. В этом анализе восстанавливающую способность четырех наноуглеродов, образующих комплекс двухвалентного железа Fe(III)-TPTZ, определяли по изменению цвета раствора с желтого на зеленый и синий. Таблица 2 демонстрирует, что восстанавливающая способность МУНТ, коротких МУНТ, GONR и короткого GONR составляла оптическую плотность (OD) 1,11, 1,13, 1,15 и 1,11 при 10 мг/л.

2.3.4. MWCNT и GONR ингибируют внутриклеточное накопление ROS.

Во многих сообщениях показано, что АФК разрушают структурную целостность клеточных мембран, включая клеточные мембраны и ядерные мембраны, что приводит к повреждению клеток и потере нормальной функции. Ингибирование производства АФК является хорошей стратегией для подавлениямеланин synthesis. In this study, we used the 2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate (DCFDA) staining assay to analyze the intracellular oxidative stress level in MWCNT and GONR treatment cells. Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) induced oxidative stimulations in MWCNT and GONR groups and was used as a negative control.41 When the concentration of PMA was 20 ng/mL, it induced oxidative stress, increasing the value to 38%; after treating GONRs and MWCNTs, the levels of ROS were downregulated to the normal level. The data showed that both materials inhibited oxidative stress levels, and the anti-oxidative effect of GONRs was higher than that of MWCNTs (Figure 3). Table 1 shows a similar consequence list. We contended that there are three reasons for our new findings: first, the order of solubility of these materials was as follows: short GONRs > GONRs >короткие MWCNT> MWCNT, что означает, что площадь контакта коротких GONR была наибольшей, поэтому она была лучше для удаления ROS. Во-вторых, GONR и MWCNT были sp2-углеродными структурами, которые могли разрушать электричество ROS посредством образования аддуктов или переноса электронов.42 Мы обнаружили, чтоантиоксидантные эффектыструктуры нанолент были лучше, чем структуры нанотрубок, поэтому наноленты облегчают перенос электронов, чем нанотрубки. Наконец, на рисунке 1b мы видим, что углеродный участок sp2- GONR содержит больше кислородных функциональных групп, чем MWCNT, группы карбоновой кислоты могут хелатировать ионы металлов, а гидроксильные группы могут быть H-донорами для удаления АФК и ингибирования выработки меланина.

2.4. Цитотоксичность MWCNT и GONR, обработанных в клетках дермальных фибробластов человека.

Для оценки цитотоксического свойства GONR на клетках Hs68 (рис. 3), и клетки культивировали при различных дозах 1, 5 и 10 мкг/мл. Мы проверили, что жизнеспособность клеток МУНТ составляла 100,7 ± 3,7, 99,8 ± 4,9 и 94,1 ± 4,7 процента при концентрациях 1, 5 и 10 мг/л соответственно; жизнеспособность коротких МУНТ была рассчитана в том же порядке и составила 93,9 ± 2,2, 86,4 ± 3,0 и 98,9 ± 2,1 процента. Мы наблюдали, что клетки B16-F10 инкубировали в высоких концентрациях, а выживаемость клеток Hs68 составляла более 80 процентов, что свидетельствует о том, что МУНТ и короткие МУНТ не оказывали токсического действия на клетки дермальных фибробластов человека. Жизнеспособность клеток GONR и короткого GONR составляла 86,24 ± 2,1, 90,87 ± 3,5, 88,58 ± 2,5, 89,03 ± 3,6, 90,71 ± 2,8 и 90,64 ± 2,5 процента. На рисунке 4а также указано, что GONR и shortGONR не оказывали заметного цитотоксического действия на клетки HS68. В предыдущих отчетах использование непроверенных наноматериалов в косметических целях могло быть сочтено сомнительным,43,44 и обычно это было связано с атакой ДНК после того, как наночастицы проникли в клетки. После теста на цитотоксичность мы обнаружили, что наши материалы не оказывают токсического действия на нормальные клетки кожи. Мы пришли к выводу, что после того, как наноматериалы проникли в клетки, наноматериалы просто ингибируют выработку меланина за счет снижения окислительного стресса и хелатирования ионов металлов и не повреждают митохондрии или ДНК, а это означает, что МУНТ и GONR безопасны для использования.

2.5. Два типа MWCNT и GONR в активности клеточной тирозиназы B16-F10 и содержании меланина.

вмеланинНа пути синтеза тирозиназа играет решающую роль. Тирозиназа окисляет и образует эумеланин и феомеланин в ходе ряда биохимических реакций. Чтобы определить, ингибируют ли GONR и MWCNT активность тирозиназы и вызывают ли снижение продукции меланина, мы проанализировали активность тирозиназы в клетках B16-F10. Мы обнаружили, что МУНТ и короткие МУНТ ингибируют активность тирозиназы примерно на 17,1% и 23% при 10 мг/л. GONR и короткие GONR обладали лучшим эффектом подавления активности тирозиназы при тех же концентрациях по сравнению с другим GONR. Они также были дозозависимыми и ингибировали 49,8% и 44,7% активности тетирозиназы, как показано на рисунке 4b.

меланинявляется незаменимым пигментом в организме человека, но гиперэкспрессия меланина часто вызывает ряд заболеваний. В предыдущих исследованиях Xiao et al. использовали аналогичный материал, Radical Sponge, наночастицы фуллерена, в качестве антимеланина.45 Были получены хорошие результаты; около 20 процентовмеланинпроизводство может быть остановлено. Чтобы повысить его эффективность, мы дополнительно усовершенствовали тестовый материал для измерения скорости ингибирования меланина и его молекулярного механизма, как показано на рисунках 4c и 5. МУНТ и короткие МУНТ снижали содержание меланина на 17,6 ± 5,5 и 13,2 ± 0. 2 процента при 10 мг/л и в зависимости от дозы. GONR и короткие GONR сильно снижали значения до 32,0 ± 2,3 и 35,3 ± 3,4 процента при 10 мг/л. Экспериментальные результаты показали, что все четыре типа могут ингибировать синтез меланина, а GONR обладают более сильным эффектом. С другой стороны, мы также заметили, что короткий GONR лучше ингибирует выработку меланина. Мы пришли к выводу, что короткие GONR имеют больше функциональных групп и могут эффективно предотвращать катализируемую ионами металла тирозиназу, дополнительно ингибируя выработку меланина (рис. 2). В Таблице 1 мы видим, что усилие короткого типа, хелатирующего ионы металлов, выше, чем у нормального типа; это означает, что эти короткие GONR могут потенциально применяться в области косметики в качестве средств по уходу за кожей.

2.6. Механизм MWCNT и GONR ингибирует содержание клеточного меланина B16-F10.

Клетки реагируют на внешний окислительный стресс, регулируя экспрессию белка. Клетки B16-F10 усиливают экспрессию гена c-myc и активируют AMPK для снижения уровня окисления,46 и в этой работе MITF представляет собой специфический транскрипционный фактор тирозиназы, регулирующий сигнальный путь синтеза молекулярного меланина.47-49 На рис. 5а, MWCNT и GONR подавляют фактор транскрипции, связанный с микрофтальмом, путем уменьшения окислительного стресса, а затем также подавляются нижележащие гены TRP-1 и TRP-2. На уровне белка был обнаружен аналогичный феномен, посредством которого MWCNT и GONR подавляли связанный с MITF путь меланогенеза, а затем, наконец, снижалимеланинсодержание (рис. 5b).

бодибилдинг

3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Подготовка MWCNTs и GONRs.

Соответствующий процесс изготовления GONR описан в предыдущей статье. 12MWCNT (0.05 г) суспендировали в 9:1 H2SO4/H3PO4 и обрабатывали в микроволновом реакторе (CEM-Discover) с установленной мощностью. при 250 Вт в течение 2 мин. После добавления к растворам KMnO4 (0,25 г) растворы обрабатывали такой же мощностью микроволн при 65 градусах в течение 4 мин12. Затем мы модифицировали этот процесс, используя более короткое время микроволн второй ступени, составляющее 8 мин, с использованием воздушного компрессора. Здесь воздушный компрессор используется для контроля температуры микроволнового реактора во время процесса. В предварительных испытаниях мощность микроволн была установлена ​​на уровне 250 Вт.

3.2. Подготовка коротких MWCNT и коротких GONR.

Соответствующий процесс изготовления коротких GONR описан в нашей предыдущей статье.34 Время обработки кислотой было выбрано равным 8 часам. Мощность микроволн была установлена ​​на уровне 250 Вт, что соответствует мощности для получения ГОНР.

3.3. Активность по удалению радикалов DPPH.

DPPH часто использовали для определения поглощающей способности образцов и антиокислительных свойств. 50 DPPH — это пурпурный реагент, который меняет цвет с пурпурного на желтый, если свободный радикал переносится на аналит. К раствору добавляли положительные антиоксидантные образцы с подходящими концентрациями, и образцы анализировали при 517 нм в течение 30 минут. Мы использовали проценты оставшихся DPPH помимо тестовых образцов, чтобы измерить количествоантиоксидантытребуется восстановить предыдущие радикалы DPPH. В качестве положительного контроля использовали витамин С в концентрации 100 мкМ. Активность очистки (в процентах) измеряли как

3.4. Металлохелатирующая активность.

Ион металла является фактором, вызывающим чрезмерное окисление липидов, а Fe2 плюс является одним из наиболее влияющих ионов.50 Различные концентрации нанобиоматериалов (1 мкл) загружали в 96-луночный планшет, который содержал 2 мМ FeCl2·4H2O ( 10 мкл), а затем загружали в феррозин (5 мМ, 20 мкл). Смесь полностью смешивали с 69 мкл ментола и выдерживали при комнатной температуре в течение 10 мин. Затем реакционный раствор образца наблюдали при 562 нм. ЭДТА использовали в качестве положительного контроля в концентрации 100 мкМ, а формула расчета металлохелатирующей активности была основана на уравнении 1.

3.5. Снижение мощности.

Расчет восстановительной способности основан на предыдущем исследовании.50 Сначала 2,5 мкл графеновых материалов смешивали с буфером PBS (67 мМ, pH 6,8) и K3Fe(CN)6 (2,5 мкл, 20 процентов), а затем инкубировали при 50 градусах в течение 20 мин. Затем 10-процентную трихлоруксусную кислоту (160 мкл) смешивали с реагентами при 300 g и центрифугировали в течение 20 мин. Длину поглощения определяли при 700 нм после смешивания с 25 мкл FeCl3 (2 процента). Бутилированный гидроксианизол (BHA) использовали в концентрации 100 мкМ.

3.6. Исследование пролиферации клеток.

Линию клеток дермальных фибробластов человека HS68 использовали для анализа степени пролиферации клеток. HS68 инкубировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM), содержащей 10 % фетальной телячьей сыворотки и 1 % смеси пенициллина и стрептомицина. 8000 клеток высевали в 96-луночные планшеты и обрабатывали образцами в течение 24 часов. Супернатант удаляли, и мы использовали раствор МТТ для культивирования в течение 2 часов при 37°С. После инкубации среду, содержащую МТТ, удаляли и растворяли в диметилсульфоксиде (ДМСО). Раствор считывали при ОП 590 нм, и скорость рассчитывали по уравнению 1.

3.7. Оценка содержания клеточного меланина.

Мы использовали метод с небольшими изменениями, основанный на предыдущем анализе.52,53 Клеточные осадки B16-F10 из Центра сбора и исследования биоресурсов (BCRC, CRL 6323, Hsinchu, Тайвань) растворяли в смеси 2,0 N NaOH. и 10% ДМСО. Затем образец нагревали в течение 1 ч при 90° и центрифугировали при 10,000g в течение еще 10 мин для получения осветленного супернатанта.меланинподсчет определяли, контролируя оптическую плотность супернатанта при 475 нм.

3.8. Активность клеточной тирозиназы B16-F10.

В отношении клеточной тирозиназной активности B16-F10 мы ссылались на предыдущую работу с некоторыми модификациями.50 Клетки культивировали в 12-луночных планшетах по 105 клеток в каждой лунке. После обработки образцами клетки лизировали в 1% растворе Triton X-100/PBS и 2 мМЛ-тирозина (50 мкл) в течение 3 часов. После инкубации среду удаляли и измеряли оптическую плотность при OD 590 нм. Формула активности тирозиназы была рассчитана по уравнению 1.

3.9. Обнаружение АФК окрашиванием DCFDA.

Ссылаясь на предыдущее исследование,54 1.2 1.105 Клетки B16-F10 высевали в6-луночные планшеты и обрабатывали образцами различной концентрации. Клетки суспендировали в PBS и затем загружали DCFDA (5 мкМ) в DMEM без фенолового красного в течение 30 мин при 37°С. Проточный цитометр (Guava, Merck, Германия) использовали для обнаружения флуоресцентного сигнала DCFDA. Длины волн возбуждения и излучения DCFDA составляли 488 и 535 нм соответственно.

3.10. Количественная полимеразная цепная реакция в реальном времени.

Мы следовали методам Lin et al. (2018).1Количественная полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией в реальном времени (qRT-PCR) состояла из эксклюзивного праймера-зонда для генерации флуоресценции. В нем использовалась методика обнаружения флуоресценции, определяющая каждый цикл с использованием системы 7500 qRT-PCRSystem (Applied Biosystems, США). Он обнаружил цикл на основе количества выпущенной флуоресценции, а затем продукт каждого цикла был рассчитан для сгенерированного содержимого, что привело к достижению количественных целей в реальном времени. Тризол (Invitrogen, США) использовали для выделения полной РНК из легочной ткани в соответствии с указаниями производителя. Затем для получения ДНК использовали набор для обратной транскрипции (Takara, Япония). В qRT-PCR с использованием праймеров, перечисленных в Таблице 1, сначала образец нагревали до образования одной нити ДНК; затем происходило связывание праймера с образованием двухцепочечной ДНК (дцДНК), после чего объединяли двухцепочечную ДНК SYBR Green, для чего использовали набор реагентов SYBR green plus (Roche, Basel, Swiss), что приводило к высвобождению флуоресценции. Полученный продукт пропускали через систему обнаружения флуоресценции. Обнаружение флуоресцентных сигналов происходило во время фазы элонгации или отжига каждого цикла; после обнаружения содержимое образца подвергалось обратному воздействию с помощью обнаруженной интенсивности флуоресценции. .

цистанхе отбеливающее действие на кожу с антиоксидантным действием

3.11. Вестерн-блот-тест.

Клетки B16-F10 лизировали при 4 градусах в течение ночи буфером для радиоиммунопреципитации (Thermo Scientific Co., США), содержащим ингибиторы протеаз. Набор для анализа белка бицинхониновой кислоты (BCA, Sigma-Aldrich Corp., USA) использовали для количественного определения количества белка. Образцы белков разделяли на 10-процентном полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и переносили на поливинилидендифторидную (ПВДФ) мембрану (Pall LifeScience, Анн-Арбор, Мичиган, США). Мембрану PVDF блокировали блокирующим буфером (Thermo Scientific) в течение 1 ч и инкубировали со специфическими первичными антителами в течение ночи при 4°С. Затем мембрану дважды промывали трис-буферным солевым буфером Tween 20 и инкубировали со вторичными антителами в течение 1,5 ч. После этого мембрану погружали в реагенты для детектирования хемилюминесценции (Thermo Scientific) и анализировали с помощью хемилюминесцентного томографа MiniChemi (Beijing Sage Creation Science, Китай). Источники антител включали кроличьи анти-MITF, кроличьи анти-TRP-1, кроличьи анти-TRP-2 и -актин (Thermo Scientific).

3.12. Анализ материалов.

ПЭМ (JEOL JEM-1230, 100 кВ) использовали для наблюдения за морфологией наноуглерода. Спектрометр Amicro Raman (PTT, RAMaker) применялся для проверки резонансных мод наноуглерода. Рентгенофотоэлектронная спектроскопия (XPS, Kratos Axis Ultra DLD) также была проведена для определения композиционного анализа.

3.13. Статистический анализ.

Все пробы и стандартные опыты повторяли не менее трех раз. Мы применили критерий Стьюдента для сравнения и статистического выражения среднего среднего значения ± стандартное отклонение.

4. ВЫВОДЫ

Подводя итог, мы заметили, что короткий GONR является потенциальным материалом для производства средств по уходу за кожей из-за его многочисленных биофункциональных свойств (рис. 6). Результаты показали, что наноуглерод играет роль внеклеточного и внутриклеточного антиоксиданта. Между тем, наноуглерод ингибировал активность тирозиназы имеланинсодержание и не вызвало серьезного повреждения пигментных клеток. В этой работе установлены антимеланогенезные функции четырех типов наноуглерода; в будущих исследованиях будет изучен механизм воздействия этих соединений на экспрессию специфических генов и белков, связанных с созреванием, транспортировкой и накоплением меланина.

cistanche bienfaits

ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

(1) Лин, Л.-К.; Чен, С.-Ю.; Куо, К.-Х.; Лин, Ю.-С.; Хван, Б.Х.; Ван, Т.К.; Куо, Ю.-Х.; Wang, H.-MD 36H: Новый мощный ингибитор антимеланогенеза. Оксид. Мед. Клетка. Долголетие 2018,2018, 6354972.

(2) Ли, Р.; Цю, X .; Сюй, Ф .; Лин, Ю.; Фанг, Ю .; Чжу, Т. Опосредованные макрофагами эффекты взвешенных в воздухе мелких частиц (PM2.5) на резистентность гепатоцитов к инсулину in vitro. АСУ Омега 2016, 1, 736−743.

(3) Вы, Ю.-Дж.; Ву, П.-Ю.; Лю, Ю.-Дж.; Хоу, К.-В.; Ву, К.-С.; Вэнь, К.-К.; Лин, С.-Ю.; Чан, Х.-М. Сезамол ингибирует вызванную ультрафиолетовым излучением гиперпигментацию и повреждение кожи мышей C57BL/6. Антиоксиданты 2019, 8, 207.

(4) Хсеу, Ю.-К.; Ченг, К.-К.; Лин, Ю.-К.; Чен, С.-Ю.; Чжоу, Х.-Ю.; Ма, Д.-Л.; Люнг, К.-Х.; Вен, З.-Х.; Ван, Х.-М. Синергетические эффекты линдеранолида В в сочетании с арбутином, PTU или койевой кислотой на ингибирование тирозиназы. Курс. фарм. Биотехнолог. 2015, 16, 1120−1126.

(5) Bae-Harboe, Y.-SC; Парк, Х.-Ю. Тирозиназа: центральный регуляторный белок кожной пигментации. Дж. Инвест. Дерматол. 2012 г., 132 2678–2680.

(6) Резапур-Лактоза, А.; Йегане, Х .; Остад, С.Н.; Гариби, Р.; Мазахери, З.; Ай, Дж. Термочувствительные полиуретановые/силоксановые мембраны для повязки на рану и трансплантации клеточных слоев: исследования in vitro и in vivo. Матер. науч. англ., C 2016, 69, 804-814.

(7) Boo, YC п-кумаровая кислота как активный ингредиент в косметике: обзор, посвященный ее антимеланогенным эффектам. Антиоксиданты 2019, 8, 275.

(8) Аван, Ф.; Ислам, MS; Май.; Ян, К.; Ши, З .; Берри, Р. М.; Там, К. С. Нанокристаллы целлюлозы и наногибриды ZnO для контроля фотокаталитической активности и УФ-защиты в косметических рецептурах. ACS Omega 2018, 3, 12403–12411.

(9) Кристина Негритто, М.; Вальдес, К.; Шарма, Дж.; Розенберг, К.; Селассие, К.Р. Ингибирование роста и повреждение ДНК, вызванное X-фенолами в дрожжах: количественное исследование взаимосвязи структуры и активности. АСУ Омега 2017, 2, 8568−8579.

(10) Гамелин, М.; Хеммати, С.; Варма, К.; Вейзи, Х. Гринсинтез, антибактериальное, антиоксидантное и цитотоксическое действие наночастиц золота с использованием экстракта фисташки атлантической. Дж. Тайвань Инст. хим.инж. 2018, 93, 21−30.

(11) Менесес-Гутьеррес, CL; Херна́ндез-Дамиан, Дж.; Педраса-Чаверри, Дж.; Герреро-Легаррета, И.; Теллез, Д.И.; Джарамилло-Флорес, М.Э. Антиоксидантная способность и цитотоксические эффекты катехинов и олигомеров ресвератрола, полученных путем ферментативного окисления, в отношении клеток рака мочевого пузыря человека T24. Антиоксиданты 2019, 8, 214.

(12) Вс, C.-L.; Чанг, К.-Т.; Ли, Х.-Х.; Чжоу, Дж .; Ван, Дж.; Шам Т.-К.; Понг, В.-Ф. Микроволновый синтез гетероструктуры ядро-оболочка МУНТ/ГОНК для электрохимического обнаружения аскорбиновой кислоты, дофамина и мочевой кислоты. ACS Nano 2011, 5, 7788-7795.

(13) Лин, Т.-Э.; Лу, Ю.-Дж.; Солнце, C.-L.; Пик, Х .; Чен, Дж.-П.; Леш, А.; Жиро, Х. Х. Мягкие электрохимические зонды для картирования распределения биомаркеров и инъекционных наноматериалов в тканях животных и человека. Ангью. хим., межд. Эд. англ. 2017, 56, 16498−16502.

(14) Окуда, К.; Хирота, Т .; Хиробе, М.; Нагано, Т .; Мочизуки, М.; Нишино, Т. Синтез различных водорастворимых производных G60 и их гасящая супероксид активность. Фуллереновые науки. Технол. 2000, 8 127–142.

(15) Лусенте-Шульц, РМ; Мур, ВК; Леонард, AD; Цена, БК; Косынкин Д.В.; Лу, М.; Парта, Р.; Коньерс, Дж. Л.; Тур, Дж. М. Антиоксидантные однослойные углеродные нанотрубки. Варенье. хим. соц. 2009, 131, 3934-3941.

(16) Инжак, Р.; Персе, М.; Обермайер, Н .; Джорджевич-Милич, В.; Приятель, М.; Джорджевич, А .; Церар, А .; Струкель, Б. Потенциальные гепатопротекторные эффекты фуллерена C60(OH)24 при доксорубицин-индуцированной гепатотоксичности у крыс с карциномой молочной железы. Биоматериалы 2008, 29, 3451−3460.

(17) Тонг, Дж.; Циммерман, MC; Ли, С .; Йи, Х .; Люксенхофер, Р.; Джордан, Р.; Кабанов, А.В. Нейрональное поглощение и внутриклеточное удаление супероксида фуллерен-(С60)-поли(2-оксазолин)нанопрепарата. Биоматериалы 2011, 32, 3654−3665.

(18) Югио, К.; Шишидо, К .; Мураяма, Х .; Яно М.; Мацубаяси К.; Такада, Х .; Накамура, Х .; Масуко, К .; Като, Т.; Нишиока, К. Водорастворимый фуллерен С60 предотвращает дегенерацию суставного хряща при остеоартрите за счет подавления катаболической активности хондроцитов и ингибирования дегенерации хряща во время развития заболевания. Ревмирующий артрит. 2007, 56, 3307-3318.

(19) Такада, Х.; Мимура, Х .; Сяо, Л.; Ислам, РМ; Мацубаяси, К.; Ито, С .; Мива, Н. Инновационный антиоксидант: фуллерен (INCI #:7587) действует на кожу как «радикальная губка». Его высокий уровень безопасности, стабильности и потенциала в качестве главного антивозрастного и отбеливающего косметического ингредиента. Фуллерены, нанотрубки, Carbon Nanostruct.2006, 14, 335-341.

(20) Фенолио, И.; Греко, Г.; Томатис, М.; Мюллер, Дж.; Раймундо Пиньеро, Э.; Бегин, Ф .; Фонсека, А .; Надь, Дж. Б.; Лисон, Д.; Фубини, Б. Структурные дефекты играют важную роль в острой легочной токсичности многостенных углеродных нанотрубок: физико-химические аспекты. хим. Рез.Токсикол. 2008, 21, 1690–1697.

(21) Новоселов К.С.; Гейм, А.К.; Морозов, С.В.; Цзян, Д.; Чжан, Ю.; Дубонос, СВ; Григорьева, И.В.; Фирсов А.А. Эффект электрического поля в атомарно тонких углеродных пленках. Наука 2004, 306, 666-669.

(22) Новоселов К.С.; Гейм, А.К.; Морозов, С.В.; Цзян, Д.; Катснельсон, М.И.; Григорьева, И.В.; Дубонос, СВ; Фирсов А.А. Двумерный газ безмассовых фермионов Дирака в графене. Природа 2005, 438, 197-200.

(23) Чжоу, X.; Вэй, Ю .; Он, В.; Бой, Ф .; Чжан, В.; Чжан, Х. Пленки восстановленного оксида графена, используемые в качестве матрицы MALDI-TOF-MS для обнаружения октахлордибензо-п-диоксина. хим. коммун. 2010, 46,6974-6976.

(24) Чжао, В.; Фанаты.; Сяо, Н.; Лю, Д.; Тай, Ю.Ю.; Ю, С .; Сим, Д.; Хуанг, Х. Х.; Чжан, В.; Бой, Ф .; Максимум.; Чжан, Х .; Ян, Q. Бумага из гибких углеродных нанотрубок с улучшенными термоэлектрическими свойствами. Energy Environ. науч. 2012, 5, 5364−5369.

(25) Ван, З.; Ву, С .; Чжан, Дж.; Чен, П.; Ян, Г .; Чжоу, X .; Чжан, Q .; Ян, К.; Чжан, Х. Сравнительные исследования однослойных восстановленных пленок оксида графена, полученных электрохимическим восстановлением и восстановлением паров гидразина. Наномасштаб Res. лат. 2012, 7, 161.

(26) Лян, X.; Фу, З .; Чоу, С.Ю. Графеновые транзисторы, изготовленные с помощью трансферной печати в активных областях устройства на большой пластине. Nano Lett.2007, 7, 3840−3844.

(27) Сан, X.; Лю, З .; Велшер, К.; Робинсон, Дж. Т.; Гудвин, А.; Зарик, С.; Дай, Х. Оксид нанографена для клеточной визуализации и доставки лекарств. Нано рез. 2008, 1, 203−212.

(28) Чен, В.; Сяо, П.; Чен, Х .; Чжан, Х .; Чжан, В.; Чен, Ю. Полимерные объемные графеновые материалы с трехмерной поперечно-сшитой монолитной графеновой сеткой. Доп. Матер. 2019, 31, 1802403.

(29) Чен, Д.; Фэн, Х .; Ли, Дж. Оксид графена: получение, функционализация и электрохимическое применение. хим. 2012, 112, 6027–6053.

(30) Ранджан П.; Агравал, С.; Синха, А .; Рао, ТР; Балакришнан, Дж.; Такур, А.Д. Недорогой невзрывной синтез оксида графена для масштабируемых приложений. науч. 2018, 8, 12007.

(31) Цю, Ю.; Ван, З .; Оуэнс, ACE; Кулаотс, И.; Чен, Ю .; Кейн, АБ; Hurt, RH Антиоксидантная химия материалов на основе графена и ее роль в технологии защиты от окисления. Наношкала 2014, 6,11744−11755.

(32) Хань, штат Мэн; Озилмаз, Б.; Чжан, Ю .; Ким, П. Разработка энергетической ширины запрещенной зоны графеновых нанолент. физ. Преподобный Летт. 2007, 98,206805.

(33) Соуза, Дж. П.; Мансано, AS; Вентурини, Ф.П.; Сантос, Ф.; Зуколотто, В. Антиоксидантный метаболизм рыбок данио после сублетального воздействия оксида графена и восстановления. Рыбная физиол. Биохим. 2019,45, 1289−1297.

(34) Вс, C.-L.; Такой.; Ву, Дж.-Дж. Синтез коротких нанолент оксида графена для улучшения обнаружения биомаркеров болезни Паркинсона. Биосенс. Биоэлектрон. 2015, 67, 327−333.

(35) Кинг, ААК; Дэвис, BR; Норбехешт, Н.; Ньюман, П.; Черч, Т.Л.; Харрис, А.Т.; Разал, Дж. М.; Минетт, А.И. Новая рамановская метрика для характеристики оксида графена и его производных. 2016, 6, 19491.

(36) Хсу, Х.-К.; Показано, И.; Вэй, Х.-Ю.; Чанг, Ю.-К.; Ду, Х.-Ю.; Лин, Ю.-Г.; Ценг, К.-А.; Ван, К.-Х.; Чен, LC; Лин, Ю.-К.; Чен, К.-Х. Оксид графена как перспективный фотокатализатор для превращения CO2 в метанол. Наношкала 2013, 5, 262−268.

(37) Лин, Л.-Ю.; Йе, М.-Х.; Цай, Дж.-Т.; Хуанг, Ю.-Х.; Вс, К.-Л.; Хо, К.-К. Новая гетероструктура «ядро-оболочка» с многослойными углеродными нанотрубками и нанолентой из оксида графена как потенциальный суперконденсаторный материал. Дж. Матер. хим. 2013, 1, 11237−11245.

(38) Инь, Х.; Сюй, Л.; Портер, Н.А. Свободнорадикальное перекисное окисление липидов: механизмы и анализ. хим. 2011, 111, 5944-5972.

(39) Тунг, К.-Х.; Чанг, Дж.-Х.; Се, Ю.-Х.; Хсу, Дж.-К.; Эллис, А.В.; Лю, В.-К.; Ян, Р.-Х. Сравнение выхода гидроксильных радикалов при фото- и электрокаталитической обработке воды. Дж. Тайвань Инст. хим.инж. 2014, 45, 1649−1654.

(40) Ошима, Х.; Йоши, Ю.; Ориоль, С .; Гилберт И. Антиоксидантное и прооксидантное действие флавоноидов: влияние на повреждение ДНК, вызванное оксидом азота, пероксинитритом и нитроксианионом. Свободнорадикальная биол. Мед.1998, 25, 1057-1065.

(41) Чжоу, Х.-Ю.; Ли, К.; Пан, Дж.-Л.; Вен, З.-Х.; Хуанг, С.-Х.; Лан, К.-В.; Лю, В.-Т.; Час, т.-с.; Хсеу, Ю.-К.; Хван, Б.; Ченг, К.-К.; Ван, Х.-М. Обогащенный экстракт астаксантина из Haematococcus Pluvialis увеличивает секрецию фактора роста, чтобы увеличить пролиферацию клеток, и вызывает деградацию MMP1, чтобы увеличить выработку коллагена в фибробластах кожи человека. Междунар. Дж. Мол. науч. 2016, 17 955.

(42) Битнер, BR; Маркано, округ Колумбия; Берлин, Дж. М.; Фабиан, Р.Х.; Чериан, Л.; Калвер, Дж. К.; Дикинсон, Мэн; Робертсон, CS; Паутлер, Р. Г.; Кент, Т.А.; Tour, JM Антиоксидантные углеродные частицы улучшают цереброваскулярную дисфункцию после черепно-мозговой травмы. ACSNano 2012, 6, 8007-8014.

(43) Ляо, К.; Ли, Ю .; Тьонг, С. Графеновые наноматериалы: синтез, биосовместимость и цитотоксичность. Междунар. Дж. Мол. науч. 2018, 19, 3564.

(44) Конг, Х.; Ван, Л.; Чжу, Ю .; Хуанг, Кью; Fan, C. Физико-химические данные о цитотоксичности углеродных наноматериалов, связанные с питательной средой. хим. Рез. Токсикол. 2015, 28, 290−295.

(45) Сяо, Л.; Мацубаяси, К.; Мива, Н. Ингибирующее действие водорастворимого производного фуллерена, обернутого полимером, на меланогенез, индуцированный УФА, путем подавления экспрессии тирозиназы в меланоцитах и ​​тканях кожи человека. Арка Дерматол. Рез. 2007 г., 299 245–257.

(46) Кфури, А.; Амаро, М.; Коллет, К.; Сорде-Дессимоз, Дж.; Гинер, член парламента; Кристен, С.; Моко, С .; Лелеу, М.; Леваль, Л.; Кох, У.; Трамп, К.; Сакамото, К.; Бирманн, Ф .; Радтке, Ф. AMPK способствует выживанию c-Myc-позитивных клеток меланомы путем подавления окислительного стресса. EMBO J. 2018, 37, № е97673.

(47) Хсеу, Ю.-К.; Ченг, К.-К.; Лин, Ю.-К.; Чен, С.-Ю.; Чжоу, Х.-Ю.; Ма, Д.-Л.; Люнг, К.-Х.; Вен, З.-Х.; Ван, Х.-М. Синергетические эффекты линдеранолида В в сочетании с арбутином, PTU или койевой кислотой на ингибирование тирозиназы. Курс. фарм. Биотехнолог. 2015, 16, 1120−1126.

(48) Ли, С.; Ким, Дж.; Песня, Х .; Сок, Дж.; Хонг, С .; Бу, Ю. Лютеолин7-Сульфат ослабляет синтез меланина посредством ингибирования экспрессии CREB и MITF-опосредованной тирозиназы. Антиоксиданты 2019, 8, 87.

(49) Дюваль, К.; Коэн, К.; Шаньоло, К.; Флоре, В.; Бурро, Э.; Бернард, Ф. Ключевая регуляторная роль пигментации дермальных фибробластов, продемонстрированная с использованием реконструированной модели кожи: влияние фотостарения. PLoS One 2014, 9, № е114182.

(50) Ли, П.-Х.; Чиу, Ю.-П.; Ши, К.-К.; Вен, З.-Х.; Ибето, Л.К.; Хуанг, С.-Х.; Чиу, CC; Ма, Д.-Л.; Люнг, К.-Х.; Чанг, Ю.-Н.; Ван, Х.-М.Д. Биофункциональная активность экстракта Equisetum ramosissimum: защитные эффекты против окисления, меланомы и меланогенеза. Оксид. Мед. Клетка. Долголетие 2016, 2016, 2853543.

(51) Лян, К.-Х.; Чан, Л.-П.; Дин, Х.-Ю.; Итак, ЕС; Лин, Р.-Дж.; Ван, Х.-М.; Чен, Ю.-Г.; Чоу, Т.-Х. Активность по удалению свободных радикалов 4-(3,4-дигидроксибензоилоксиметил)фенил-O- -d-глюкопиранозида из Origanum vulgare и его защита от окислительного повреждения. Дж. Агрик. Пищевая хим. 2012, 60, 7690-7696.

(52) Ван, Х.-М.; Чен, С.-Ю.; Вен, З.-Х. Идентификация ингибиторов меланогенеза из Cinnamomum SubGenius с помощью систем скрининга in vitro и in vivo путем нацеливания на тирозиназу человека. Эксп. Дерматол. 2011, 20, 242−248.

(53) Ван, Ю.-К.; Хуан, X.-Y.; Чиу, К.-К.; Лин, М.-Ю.; Лин, В.-Х.; Чанг, В.-Т.; Ценг, К.-К.; Wang, H.-MD Ингибирование меланогенеза с помощью порошка экстракта плодов Phyllanthus Emblica в клетках B16F10. Пищевые биотехнологии. 2019, 28, 177−182.

(54) Панчук Р.Р.; Скорохид, Н.Р.; Козак, Ю.С.; Лехка Л.В., Моисеенок А.Г.; Стойка, Р.С. Тканезащитная активность селенометионина и D-пантерина у мышей с меланомой В16 при лечении доксорубицином не связана с их потенциалом удаления АФК. хорват. Мед. Дж. 2017, 58, 171.

(55) Ван, Х.-М.Д.; Чен, К.-К.; Хьюн, П .; Чанг, Дж.-С. Изучение потенциала использования водорослей в косметике. Биоресурс. Техн.2015, 184, 355−362