Химические составляющие листьев цистанхе Ⅱ

3. Обсуждение

Широко проводились фитохимические исследования по выявлению биологически активных соединений в листьях хурмы. До сих пор сообщалось о значительном количестве тритерпеноидов и флавоноидов, включая производные кемпферола и кверцетина.Д. каки[1]. В данном исследовании мы получили 27 соединений, в том числе шестнадцатьфлавоноиды, один ионон, два кумарина, семь тритерпеноидов и один ацетофенон. Из них составные1 был обнаружен новый флавоноид и соединение2 впервые был выделен изД. каки. Кроме того, кемпферол-3-O- -200 -ферулоилглюкозид (3) сообщалось только как о гидролизованном продукте 3-O- -(2-O-ферулоил)-глюкозил-7,40 -ди-О- -глюкозил кемпферол (3), изолированный отЛук клубненосный[35]. Сложный3 был не только впервые получен непосредственно из природного источника, но и не сообщался вД. какиранее. Кроме того, кемпферол-3-O- -200 -галлоилгалактозиды (11) ранее сообщалось во многих источниках, в том числеД. каки, но только1Сообщалось о Н-ЯМР и МС из-за отсутствия подробных исследований. Следовательно13Данные С ЯМР приведены здесь впервые.

До настоящего времени было проведено несколько исследований, демонстрирующих антиоксидантные свойства экстрактов или фракций листьев хурмы.37,38]. В большинстве исследований использовались экспресс-методы анализа, такие как анализы DPPH или ABTS. В частности, в предыдущей статье 200µг/мл фракции, богатой флавоноидами, показал 68,73-процентное ингибирование радикала DPPH. Однако, помимо этого результата, эта фракция также показала супероксидный анион.радикальная очистка, удаление гидроксильных радикалов и активность хелатирования металлов [38]. Хотя мы не оценивали эти анализы, было проведено выделение под контролем биоанализа, поскольку этанольный экстракт и этилацетатная фракция в настоящем исследовании показали сопоставимую активность по удалению радикалов DPPH. Кроме того, несмотря на предыдущие результаты, было проведено лишь несколько исследований по идентификации биологически активных соединений. Некоторые секоиридоиды и лигнаны продемонстрировали активность по удалению радикалов.39]. В случае флавоноидов было несколько сообщений о том, что кверцетин, кемпферол и их гликозиды обладают антиоксидантными свойствами.40]. Сообщалось об антиоксидантных свойствах выделенного гликозида кемпферола и выделенного гликозида кверцетина, полученных из других источников.41]. До сих пор не было сообщений о том, что каждое из этих соединенийполученный из листьев хурмы, обладает антиоксидантным действием, за исключением того, что смесь этих соединений проявляла антиоксидантный эффект.21]. 

Кроме того, до сих пор для количественного анализа этих соединений проводилось одновременное определение только нескольких тритерпеноидов или флавоноидов [1].42,43]. Однако настоящее исследование предлагает метод одновременного определения большинства компонентов в листьях хурмы.

Нажмите здесь, чтобы получить больше информации о том, как Cistanche Anti-Aging

4.1. Растительный материал

ЛистьяДиоспирос какиБольшой палец (Ebenaceae) были куплены в местном корейскомрынок трав в Ёнчхоне в марте 2018 г. Листья были собраны в бассейне, окруженном горами, на высоте 800–1200 м в Кёнсанбук-до в августе 2017 г. Среднегодовое количество осадков в этом районе составило 1050 мм,из них половина приходится на период с июня по август. Среднегодовая температура была около12.5 ◦C, а средняя относительная влажность составляла 69 процентов. Температура во время уборки былапримерно 37–40◦C. Полученные листья сушили примерно при 45◦C в растениисушилка. Ваучерный образец (DIKA1-2018) был депонирован в Лаборатории природныхПродуктовая медицина, Фармацевтический колледж, Университет Кён Хи, Республика Корея.

4.2. Общие экспериментальные процедуры

силикагель (ODS-A 12 нм S-150µм, YMC, Токио, Япония). Флэш-хроматографияформируется с использованием CombiFlash (Teledyne Isco, Линкольн, Небраска, США) с предварительно упакованными картриджами,RediSep-silica (12 г, 24 г и 40 г) и RediSep-C18 (13 г, 26 г, 43 г и 130 г). ПодготовкаВЭЖХ проводили с использованием системы очистки Gilson (Gilson, Middleton, WI,США) с колонкой YMC Pack ODS-A (250× 20.0 мм, 5,0µм, YMC, Токио, Япония), сфераКолонка ОДС-М80 (250× 20.0 мм, 4,0µm, YMC, Токио, Япония) и Luna C18(2)колонна (250× 21,2 мм, 10.0µм, Phenomenex, Торранс, Калифорния, США). ВЭЖХ анализ былвыполняется на системе ВЭЖХ Youngin YL9100, включающей испарительное светорассеяниедетектор (Youngin, Anyang, Корея) с колонкой Luna C18(2) (150× 4,6 мм, 5.0µm, Phenomenex, Торранс, Калифорния, США). Онлайн-скрининг ВЭЖХ-ABTS был выполнен насистема ВЭЖХ Agilent 1200 с колонкой YMC Pack ODS-A (150× 4,6 мм, 5.0µm). Все растворители, используемые для хроматографического разделения, перегоняли.

4.3. Извлечение и изоляция

Высушенный растительный материал (15,0 кг) экстрагировали 216 л этанола (EtOH) вводяная баня на 60◦C в течение 4 ч, и растворитель выпаривали с получением EtOH-экстракта (1,2 кг,выход 8%). Экстракт суспендировали в H2O (2,1 л) и распределяют этилацетатом.(EtOAc, 4,9 л× 3) с получением EtOAc- (321,9 г, выход 2,15%) и H2O-растворимые слои (748.0 г,выход 4,99 процента) соответственно. Растворимый в EtOAc слой (321,9 г) подвергали воздействию силикагеля.столбец (φ 10.5 × 35.0 см) сn- смеси эксан:EtOAc:метанол (MeOH) (от 8:1,8:0.2до {{0}}:0:1v/v/v), чтобы получить девять фракций (E1~E9).

Фракцию E5 (14,2 г) хроматографировали на колонке Diaion HP-20 (φ 5.0 × 29.0 см) с ацетоном: H2градиент O (от 7:3 до 1:0), чтобы получить семь фракций (E5-1~E5-7). Фракция E5-1 былана колонке с силикагелем сn-гексан:EtOAc:MeOH от=7:2,7:0,3 до 0:0:1, чтобы получить 4 фракции(Е{{0}}~Е5-1-4). E5-1-1 (13,2 мг) и E5-1-2 (7,0 мг) объединяли и очищали препаративным(препарат)-ВЭЖХ с использованием колонки YMC Pack ODS-A (H2О: МеОН=27: 23,7 мл/мин) чтобы получитьсоединения19 (8,3 мг, тR 26.0 мин) и20 (2,5 мг, тR 24.0 мин).

Фракция Е8 (75,19 г) была разделена на растворимую в ацетоне (АС) и нерастворимую в ацетоне(АИС) дроби. Фракцию AS (44,07 г) хроматографировали на колонке Diaion HP-20.(φ 6.5 × 12,5 см) с ацетоном: H2смеси O (от 3:7 до 1:0) с получением 12 фракций (AS1~AS12).Фракция AS2 (2,5 г) была разделена на колонке Sephadex LH-20 (φ 4.7 × 51.0 см) сMeOH, чтобы получить девять фракций (AS2-1~AS2-9). Фракция AS2-2 (196,3 мг) была разделенафлэш-хроматография (FC) с использованием картриджа RediSep-C18 (26 г, ацетонитрил: H2О, 0: от 1 до7:1) для получения соединения17 (28,6 мг). Фракция AS3 (3,1 г) была разделена на 11 фракций.с помощью колонки Sephadex LH-20 (φ 4.7 × 51.0 см) с МеОН (AS3-1~AS3-11).

ДоляAS{{0}} (0,7 г) разделяли с помощью FC с RediSep-C18 (130 г, MeOH:H2O, 1:9 до 3:2), чтобы датьсоединения4 (51,8 мг),5 (21,7 мг, тR 42,5 мин) и6 (20,2 мг, тR 47.0 мин). Фракцию AS4 (8,8 г) помещали на колонку с силикагелем (φ 5.2 × 21,0 см) с MC:MeOH:H2Смеси O (от 8:1,8:0.2 до 7:2,7:0.3) для выделения соединений7 (5,0 мг),8 (5,1 мг),9 (20,0 мг), 10 (306.6 мг) и12 (20,1 мг). Фракцию AS5 помещали на колонку с силикагелем (φ 5.2 × 24,5 см)с CH2Кл2:МеОН:Н2Смеси O (от 8:1,8:0.2 до 7:2,7:0.3) для получения шести фракций (AS5-1~AS5-6), чтобы получить соединения11 (3,0 мг) и13 (7,4 мг). Фракция AS10 была выделенана семь фракций с использованием колонки Sephadex LH-20 (φ 3.5 × 50,5 см) с МеОН (AS10-1~АС10-7). Фракция AS10-4 была разделена с помощью FC с помощью RediSep-C18 (43 g, МеОН:Н2O,

0:1 до 3:2) картридж для очистки соединений1 (5,3 мг),2 (21,4 мг),14 (15,9 мг), и15 (40.4 мг). Фракция AS12 была разделена на пять фракций с использованием колонки Sephadex LH-20 (φ 3.5 × 50,5 см) с МеОН (AS12-1~AS12-5). Сложный16 (20,1 мг) получалиперекристаллизация с МеОН из фракции AS12-5.

Фракцию Als (31,1 г) хроматографировали на колонке с силикагелем со смесями ч-гексана EtOAc:MeOH (от 8:1,8:0.2 до 0:0:1) в качестве подвижной фазы для получают 2 0 фракции (AIS1-AIS2{{20}}). {{30}}.2 до 0:0:1) с получением соединения 23 (224,7 г). Фракцию AIS6 разделяли с помощью FC с картриджем RediSep-C18 (43 г, MeOH:HO, от 0}:1 до 9:1) с получением соединения 25 (25,6 мг). Фракция AIS7 помещалась на колонку с силикагелем с n смеси -гексан:EtOAc:MeOH (от 8:1,8:0.2 до {{60}}:0:1) с получением соединений 24 (10 0,0 мг) и 27 (214,1 мг). Фракцию AIS10 подвергали обработке на колонке с силикагелем смесями н-гексан:EtOAc:MeOH (от 7:2,7:0,3 до 0:0:1) для выделения соединений 18 (5,0 мг) и 23 (16,7 мг). Фракция AIS11 была разделена на 11 подфракций (AIS11-1-AIS11-11) с помощью FC с картриджем RediSep-C18 (130 г, MeOH:HO, от 1:1 до 4:1). Соединение 22 (37,8 мг) получали из фракции AS11-4 методом препаративной ВЭЖХ на колонке со сферами. Фракцию AIS12 помещали на колонку с силикагелем (0 5,2×28,0 см) со смесями HCl:ацетон (от 4:1 до 3:2) с получением соединения 21 (188,0 мг). Наконец, фракцию AIS16 разделяли с использованием колонки Lichroprep RP-18 (1,99 г, MeOH:H2O, от 3:2 до 13:7) с получением соединения 3 (2,3 мг).

4.3.1. кемпферол-3-O- -D-200 -кумароилгалактозид (1

) желтоватый порошок; 244,5 т.пл.◦C; [ ] 22 D -59.1◦ (c 0.1, МеОН); УФ (МеОН)λМакс(бревноε) 207 нм (3,98), 315 нм (3,92); ИК (ATR)νМакс3458, 2922, 1650, 1588, 1364, 1260, 1175, 1076, 834 см−1 ; 1Рука13Данные ЯМР С, см. табл.1; HRMS (положительный режим)m/z 595,1447 [М плюс Н]плюс(рассчитано для C30H27O13, 595.1452). 

4.3.2. кемпферол-3-O- -D-200 -ферулоилглюкозид (3) 

желтоватый порошок; 225,2 т.пл.◦C; [ ] 22 D -119.6◦ (c 0.1, МеОН); УФ (МеОН)λМакс(бревноε) 210 нм (4,17), 327 нм (3,94); ИК (ATR)νМакс3369, 1652, 1599, 1512, 1360, 1264, 1177, 1076, 841 см−1 ; 1Рука13Данные ЯМР С, см. табл.1; HRMS (отрицательный режим)m/z 623.1375 [M − H]− (рассчитано для C31H27O14, 623.1401).

4.3.3. кемпферол-3-0--D-2-галлоилгалактозид (11)

Желтый порошок; H ЯМР (500 МГц, ДМСО-) 6 H ЯМР 8.06 (2H, d, J= 9.0 Гц, H{ {8}}H-6'), 7.02 (2H, S, H-3, H-'), 6,87 (2H, д, I=9 .5H, H-, H-5, 6,39 (1H, S, H-8), 6,16 (1H с, H-6), 5,78 (1H, д, {{33 }},0 Гц, H-1 % ), 5,27 (1H, т, =9,5 Гц H-2" 13C ЯМР (125 МГц ДМСО-6) {{45 }},1 (С-4), 165,4 (С-7), 165,4 (С-1), 161,2 (С-5), 160,1 (С{{59} }, 156,3 (С-2), 156,3 (С-9), 145,5 (С-4"), 145,5 (С-6", 138,4 (С{{74}) }/), 132,5 (С-3), 131,0 (С-2'), 131,0 (С-6), 120,7 (С1), 119,8 (С-2') , 115,2 (С-3'), 115,2 (С-5, 108,9 (С-3), 108,9 (С-7), 103,8 (С-10) , 98,8 (С-6)98,8 (С-1 процентов), 93,7 (С-8), 76,0 (С-5), 72,7 (С-3) , 71,1 (C-2%), 68,2 (C-4"), 60,1 (C-6").

4.4. Количественный анализ девяти соединений в линзах хурмы

ВЭЖХ-анализ выполняли на системе ВЭЖХ Waters, включающей 1525 насосов и 2996 матричных фотодиодных детекторов (Waters, Милфорд, Массачусетс, США). Длина волны УФ-излучения была установлена ​​на уровне 26 0 нм. Использовали колонку PhenomenexLuna C18(2) (15{12}} x 4,6 мм, 5,0 мкм, Phenomenex, Торранс, США), а вводимый объем составлял 10 мкл. Температуру колонки устанавливали на уровне 25 градусов. Подвижная фаза состояла из 0,02% трифторуксусной кислоты (ТФУ, Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) в воде (А) и ацетонитриле (В) со скоростью потока 0,7 мл/мин. Условия градиента были следующими: 0-30 мин, 15-20 процентов B; 30-45 мин, 20-35 процентов B: 45-70 мин35-100 процентов ; 70-80 мин, 100 процентов . Экстракт EtOH (10 мг) растворяли в растворе внутреннего стандарта 10 мкг/мл (1 мл). Для обеспечения актуальности разработанного метода и качественных результатов была проведена простая валидация метода. Для построения каждой калибровочной кривой анализировали пять различных растворов каждого соединения. Внутри- и междневная точность и правильность были подтверждены тремя повторами в течение одного дня и трех дней подряд. Все образцы фильтровали через мембранные фильтры 0,2 мкм.

4.5. DPPH и онлайн-анализ HPLC-ABTS

Способность образцов удалять радикалы DPPH оценивалась на основе предыдущей статьи. Вкратце, DPPH ({{0}},1 мМ) в метаноле (100 мкл) смешивали с различными концентрациями образцов (100 мкл) в течение 1 ч в темноте. Поглощение регистрировали при 517 нм. Онлайн-анализ ВЭЖХ-ABTS выполняли на основе предыдущего отчета с изменениями. Смешанный раствор, содержащий ABTS (0,08 мМ) с персульфатом калия (0,12 мМ), превращали в реагент ABTS. Реагент хранили при 4°С в течение 12 ч для стабилизации радикалов. Все образцы анализировали с помощью системы ВЭЖХ Agilent. Условия градиента были такими же, как и для количественного анализа. Элюат направляли в лабораторию и реагировали с реагентом ABTS в реакционной катушке при 40°С. Хроматограмму визуализировали при 254 нм (положительный пик), а также при 734 нм (отрицательный пик) для регистрации снижения содержания радикалов aBIS.

5. Выводы В заключение, это исследование представляет собой фитохимическое исследование, основанное на выделении под контролем биоанализа. В результате был получен новый флавоноид кемпферол-3-0-BD-2"-кумароилгалактозид(1) и новое природное соединение кемпферол-3-0--D-2"-ферулоилглюкозид (2 ), были выделены вместе с 25 ранее известными соединениями, включая четырнадцать флавоноидов, один ионон, два кумарина, семь тритерпеноидов и один ацетофенон. У всех соединений оценивали антиоксидантное действие, и из них было обнаружено, что девять флавоноидов обладают активностью. Был проведен одновременный количественный анализ, чтобы подтвердить, что листья хурмы обладают антиоксидантным действием благодаря этим соединениям.

Дополнительные материалы:Следующее доступно в Интернете по адресуhttps://www.mdpi.com/article/10.3390/plants10102032/s1, Рисунки S1–S9: Спектры ЯМР 1H, 13C, COSY, HSQC, HMBC и ROESY, УФ-, ИК и HRMS спектры соединения 1, Рис. S10–S18: Спектры 1H, 13C, COSY, HSQC, HMBC, ROESY ЯМР , УФ-, ИК- и HRMS-спектры соединения 3, рисунки S19–S20: спектры ЯМР 1H и 13C соединения 11, таблица S1: количественный анализ других 18 соединений.

Вклад автора:JK и J.-EP внесли равный вклад в это исследование; концептуализация, Х.-К.К. и Д.-С.Ж.; методология и валидация, JK, J.-EP, J.-SL, J.-HL и HH; программное обеспечение,Дж.К. и Ж.-С.Л.; проверка, JK и HH; формальный анализ, Ж.К. и Ж.-Э.П.; расследование, Ж.К., Ж.-Э.П.,J.-SL, J.-HL, HH, S.-HJ, H.-CK и D.-SJ; ресурсы, H.-CK и D.-SJ; курирование данных, JK, J.-EP и J.-SL; написание — черновая подготовка, JK, J.-EP и J.-SL; написание - обзор и редактирование, H.-CK и D.-SJ; визуализация, Ж.К. и Ж.-С.Л.; наблюдение, Х.-К.К. и Д.-С.Ж.; проектадминистрация, H.-CK и D.-SJ; приобретение финансирования, S.-HJ, H.-CK и D.-SJ Все авторы имеютпрочитал и согласился с опубликованной версией рукописи.

Конфликт интересов:Авторы объявили, что нет никаких конфликтов интересов.

Рекомендации

1. Се, К.; Се, З .; Сюй, X .; Ян, Д. Хурма (Диоспирос какиL.) листья: обзор традиционного использования, фитохимии и фармакологических свойств.Ж. Этнофармакол.2015, 163, 229–240. [перекрестная ссылка]

2. Бей, В.; Занг, Л.; Го, Дж.; Пэн, В .; Сюй, А .; Хорошо, Д.А.; Ху, Ю .; Ву, В .; Ху, Д.; Zhu, X. Нейропротекторные эффекты стандартизированного экстракта флавоноидов изДиоспирос какилистья.Ж. Этнофармакол.2009, 126, 134–142. [перекрестная ссылка] [пабмед]

3. Саканака, С.; Тачибана, Ю.; Окада, Ю. Получение и антиоксидантные свойства экстрактов чая из листьев японской хурмы (какиноха-ча).Пищевая хим.2005, 89, 569–575. [перекрестная ссылка] 4. Сб, ЮС; Ким, С.-Дж.; Чой, Х.-С. Антикоагулянтная фракция из листьевДиоспирос какиЛ. обладает антитромботической активностью.Арка Фармацевтическая рез.2005, 28, 667–67

4. [перекрестная ссылка] [пабмед] 

5. Чжан, К.; Чжан, Ю .; Чжан, М .; Гу, Л .; Лю, З .; Цзя, Дж.; Чен, X. Эффекты фосфолипидных комплексов общих флавоноидов хурмы (Диоспирос какиЛ.) оставляет на экспериментальных крысах с атеросклерозом.Ж. Этнофармакол.2016, 191, 245–253. [перекрестная ссылка] 

6. Котани, М.; Мацумото, М .; Фудзита, А .; Хига, С.; Ван, В .; Суэмура, М .; Кисимото, Т .; Танака, Т. Экстракт листьев хурмы и астрагалин ингибируют развитие дерматита и повышение уровня IgE у мышей NC/Nga.Дж. Аллергия Клин. Иммунол.2000, 106, 159–166. [перекрестная ссылка] 7. Туонг, штат Пенсильвания; Ли, CH; Дао, ТТ; Нгуен, ПХ; Ким, В.Г.; Ли, SJ; О, WK Тритерпеноиды из листьевДиоспирос каки(хурма) и их ингибирующее действие на протеинтирозинфосфатазу 1В.Дж. Нат. Произв.2008, 71, 1775–1778. [перекрестная ссылка] 8. Мацуо, Т.; Ито, С. Химическая структура каки-танина из незрелых плодов хурмы (Диоспирос какиL.). Агр. биол. хим.1978, 42, 1637–1643. [перекрестная ссылка] 9. Бавазир, С.; Рауф, А. Исследования in vivo противовоспалительных, обезболивающих и седативных свойств экстракта и нафтохинона, выделенных изДиоспирос каки(хурма).САУ Омега2021, 6, 9852–9856. [перекрестная ссылка] 10. Йошимура, М.; Мотидзуки, А .; Амакура, Ю. Идентификация фенольных компонентов и ингибирующей активности чашечки хурмы и ситеито против пролиферации опухолевых клеток.хим. фарм. Бык.2021, 69, 32–39. [перекрестная ссылка] 11. Ван, Л.; Сюй, мл.; Расмуссен, СК; Ван, М.-Х. Вомифолиол 9-O- -арабинофуранозил (1→ 6)- -D-глюкопиранозид из листьевДиоспирос Какистимулирует поглощение глюкозы клетками HepG2 и 3T3-L1.углевод. Рез.2011, 346, 1212–1216. [перекрестная ссылка] [пабмед] 12. Хитака Ю.; Накано, А .; Цукигава, К.; Манабе, Х .; Накамура, Х .; Накано, Д.; Кинджо, Дж.; Нохара, Т .; Маеда, Х. Характеристика сложных эфиров каротиноидов и жирных кислот из кожуры хурмы.Диоспирос каки. хим. фарм. Бык.2013, 61, 666–669. [перекрестная ссылка] 13. Симпсон, Д.С.; Оливер, Генерация PL ROS в микроглии: понимание окислительного стресса и воспаления при нейродегенеративных заболеваниях.Антиоксиданты2020, 9, 743. [перекрестная ссылка] [пабмед] 14. Лю, З.; Рен, З .; Чжан, Дж.; Чуанг, CC; Кандасвами, Э.; Чжоу, Т .; Цзо, Л. Роль АФК и пищевых антиоксидантов в заболеваниях человека.Передний. Физиол.2018, 9, 477. [перекрестная ссылка] [пабмед] 15. Квон, Дж.; Хван, Х .; Селварадж, Б.; Ли, Дж. Х.; Парк, В.; Рю, СМ; Ли, Д.; Парк, Дж.-С.; Ким, ХС; Lee, JW Фенольные компоненты, выделенные изСенна Тораростки и их нейропротекторное действие против индуцированного глутаматом окислительного стресса в клетках HT22 и R28.Биоорганическая хим.2021, 114, 105112. [перекрестная ссылка] [пабмед] 16. Ромусси, Г.; Биньярди, Г.; Пицца, К.; Де Томмази, Н. Составные части купулифера, XIII: Новые и пересмотренные структуры ацилированных флавоноидов изQuercus SuberL. Арка Дер Фарм.1991, 324, 519–524. [перекрестная ссылка] 17. Ли, Х.-З.; Песня, Х.-Дж.; Ли, Х.-М.; Пан, Ю.-Ю.; Ли, Р.-Т. Характеристика фенольных соединений изРододендрон алютацеум. Арка Фармацевтическая рез.2012, 35, 1887–1893. [перекрестная ссылка] [пабмед] 18. Юнг, М.; Чой, Дж.; Че, Х.-С.; Чо, JY; Ким, Ю.-Д.; Хтве, км; Ли, В.-С.; Чин, Ю.-В.; Ким, Дж.; Юн, К.Д. Флавоноиды изСимплокос кистевидный. Молекулы2015, 20, 358–365. [перекрестная ссылка] 19. Сюй, Дж.; Ван, X .; Юэ, Дж.; Солнце, Ю.; Чжан, X .; Чжао, Ю. Полифенолы из листьев желудей (Quercus liaotungensis) защищают бета-клетки поджелудочной железы и их ингибирующую активность против -глюкозидаза и протеинтирозинфосфатаза 1В.Молекулы2018, 23, 2167. [перекрестная ссылка]