Химические составляющие листьев цистанхе

Аннотация: Цистанхелистья издавна использовались в народной медицине длялечениеишемический приступ, стенокардия, игипертонияи как полезный напиток икосметика дляпротив старения. Это исследование было направлено на выделение как можно большего количества соединений из этанольного экстракта.листьев хурмы для выявления биологически активных соединений. Антиоксидантный эффектэтилацетатного слоя из этанольного экстракта листьев хурмы.2,2-дифенил-1-пикрилгидразил (DPPH) и онлайн высокоэффективная жидкостная хроматография-2,20 -казино-бис(3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота) (ВЭЖХ-ABTS) анализ. Новый флавоноид,кемпферол-3-O- -D-2"-кумароилгалактозид (1) и новое природное соединение, кемпферол-3-O- -D-2"-ферулоилглюкозид (3) были выделены из этилацетатного слоя вместе с 25 ранееизвестные соединения, в том числечетырнадцать флавоноидов, один ионон, два кумарина, семь тритерпеноидов,и один ацетофенон. Интерпретация спектрометрических и спектроскопических данных определила их структуру.. Все выделенные соединения были быстро оценены с помощью онлайн-анализа.ВЭЖХ-ABTSанализ, и из них соединения4–8, 11, 13, 15, и16 ясно показалантиоксидантные эффекты.сумма этих соединений составила {{0}},3–0,65% экстракта.

Ключевые слова:Диоспирос каки; листья хурмы; флавоноид; антиоксидант

Нажмите здесь, чтобы получить цистанхе, богатую флавоноидами для косметического антивозрастного ухода

1. Введение

Диоспирос какиБольшой палец (хурма) принадлежит к семейству эбеновых и широкораспространяется в Корее, Китае и Японии. Его плоды едят свежими или сухими, а листьядавно используется в народной медицине для лечения ишемического инсульта, стенокардии, гипертонии,атеросклероз и инфекционные заболевания [1]. Кроме того, его листья использовалиськак здоровые напитки и косметика из-за их омолаживающих свойств и способностипомогают предотвратить накопление холестерина и меланина [1]. Недавние исследования показаличто экстракты листьев хурмы обладают широким спектром биологических свойств,включая очистку от радикалов, нейропротекцию, ингибирование тромбоза, антиатеросклероз,и противоаллергический [2–6]. Предыдущее фитохимическое исследование показало, что различныевидыфлавоноидыи терпеноиды являются основными составляющими [7] и несколько дубильных веществ,также сообщалось о нафтохинонах, кумаринах, иононах и жирных кислотах.8–12]. Активные формы кислорода (АФК) представляют собой химически активные молекулы, образующиеся в биологических системах.и баланс между образованием и элиминацией АФК хорошо контролируется в норме.клеточная физиология [13]. Однако чрезмерное образование АФК вызывает окислительное повреждение,и, в свою очередь, старение и возрастные заболевания, включая рак, диабет и болезнь Паркинсона.болезнь [14]. Следовательно, обнаружение антиоксидантов, таких как флавоноиды и фенольные соединенияможет быть многообещающей стратегией лечения этих заболеваний.

В рамках нашего постоянного проекта по поиску биологически активных соединений [15],антиоксидантный эффект этанольного (EtOH) экстракта и растворителей из хурмылистьев оценивали с помощью анализа 2,2-дифенил-1-пикрилгидразила (DPPH) и высокопроизводительного онлайн-анализа.жидкостная хроматография-2,20 -казино-бис (3-этилбензотиазолин-6-сульфоновая кислота)(ВЭЖХ-ABTS) анализ. Фитохимическое исследование листьев хурмы привело к выделениюодного нового флавоноида (1), одно новое природное соединение (3) и25 ранееизвестные соединения. Применение спектроскопических и спектрометрических методов охарактеризовало структуры. Все выделенные соединения были быстро проверены на ихантиоксидантные эффекты с помощью онлайн-ВЭЖХ-ABTS. Кроме того, количественный анализвсе выделенные соединения были выполнены в настоящем исследовании.

2. Результаты и обсуждение

2.1. Антиоксидантный эффект листьев хурмы

Оценен антиоксидантный эффект этанольного (EtOH) экстракта листьев хурмы.для предварительного скрининга через DPPH (рис.1А). 0.125 мг/млэкстракт удалял приблизительно 80 процентов радикала DPPH, а 0,025 мг/мл аскорбиновойкислота составляла 94 процента радикала. Онлайн-анализ HPLC-ABTS был проведен для быстрогообеспечить достоверность этих результатов (рис.1Д). Галловая кислота и тролокс использовались в качестве внутреннегостандарты. Хроматограмма при 734 нм (отрицательный пик) предполагает, что примернодевять компонентов могут обладать антиоксидантной активностью. Галловая кислота и тролокс (6-гидрокси- 2,5,7,8-тетраметилхроман-2-карбоновая кислотакислоты) использовались в качестве внутренних стандартов для обеспечениядостоверность результатов. Было высказано предположение, что большинство этих пиков были производными флавоноидов.такие как флавоноидный гликозид и флаванол, на основе проведенного анализа деререпликациипутем сравнения ультрафиолетовых (УФ) и масс-спектров соединений с опубликованнымиданные. Фракционирование под контролем биоанализа показало, что эти антиоксидантные соединения былив изобилии в слое этилацетата (EtOAc), в то время как вода (H2O) слой показал слабыйактивность (рис.1B,C). 

Рисунок 1. Эффект удаления DPPH экстракта EtOH (A), слоя EtOAc (B) и слоя HO (C). Слой HhO листьев хурмы: (D) онлайн-хроматограмма ABTS-HPLC экстракта EtOH.

2.2. Фитохимическое исследование

Для идентификации этих антиоксидантных соединений используются различные хроматографические и спектроскопические методы.были проведены методы выделения и структурной характеристикисоединения. Новый флавоноид (1) и новое природное соединение (3) были получены изэтилацетатный слой этанольного экстракта вместе с 25 ранее описанными соединениями,а именно кемпферол-3-O- -2"-кумароилглюкозид (2) [16], (плюс)-катехин (4) [17], гиперозид(5) [17], изокверцитрин (6) [18], кверцетин-3-O- -2"-галлоилгалактозид (7) [19], кверцетин-3-O- -2"-галлоилглюкозид (8) [20], трифолин (9) [18], астрагалин (10) [18], кемпферол-3-O- - 2"-галлоилгалактозид (11) [21], кемпферол-3-O- -арабинозид (12) [22], кемпферол-3-O- - 2"-галлоилглюкозид (13) [23], кверцетин-3-O- -2"-кумароилглюкозид (14) [24], кверцетин(15) [15], кемпферол (16) [25], (6S,9S)-розеозид (17) [26], скополетин (18) [27], умбеллиферон(19) [28], 1-(2,4-дигидрокси-6-метилфенил)этанон (20) [29], барбинервовая кислота (21) [30], диоспировая кислота В (22) [7], ротунговая кислота (23) [31], помоловая кислота (24) [32], сиарезиноловая кислота(25) [33], олеаноловая кислота (26) [25] и урсоловая кислота (27) [25] с помощью спектроскопических испектрометрические и физические данные в сравнении с литературными данными, а также с тонкимианализ методом послойной хроматографии (ТСХ) (рис.2 и3). Среди них соединения2, 16, 17, 19, 20, и24 впервые были выделены изД. каки. 

Соединение 1 было получено в виде желтого порошка, молекулярная формула которого была установлена ​​как C3olO3 на основании данных масс-спектрометрии высокого разрешения (HRMS). В спектре присутствуют полосы поглощения при 207 и 315 нм, что указывает на то, что соединение 1 имеет флавонольную основу. Данные Н-ядерного магнитного резонанса (ЯМР) (таблица 1, рисунок S1) показали типичную картину кумароилированного флавонолгликозида, показывающую два набора сигналов типа AA'BB' ({{10}}.{{11 }} (2H, д, J= 8,5 Гц, H-2' и H-6), 6,87 (2H, д, J{{20}}} .5 HzH-3' и H-5')) в кольце B кемпферола, а также сигналы (0 7.45 (2H, d, J=8. 5 Гц H-2 и H{{3{{104}}}}"), 6,81 (2H, д, J=8,5 Гц, H-3 и H-5 процентов) в ароматическом кольце кумароильной группы. Два дублетных сигнала (8H 7,65 (1H, d, J=15,5 Гц, H-7"") и 6,35 (1Hd, J=16.0 Гц, H-8"), что указывает на трансолефиновые протоны страновой группы. Кроме того, сигнал аномерного протона (0H 5,57 (1H, d, J=8,0 Гц, H-1) наблюдали в области сахаров, что позволяет предположить присутствие циклической сахарной группы B-конфигурации. 1Рисунок S2) показывает 30 резонансов, включающих два транс-олефиновых атома углерода, десять ароматических атомов углерода и шесть атомов углерода глюкозильного фрагмента, а также десять непротонированных атомов углерода, включая два карбонильных атома углерода. В частности, химические сдвиги при C-2, C-3 и C-4 (8c 158,1, 134,9 и 179,2) были характерными сигналами флавонол3-0-гликозида. Кроме того, сигнал углерода карбонила при C-1" (8c 168,7) и два сигнала трансолефинового углерода при C-2'" и C-3"(6 146,9 , 115,2) были типичными химическими сдвигами кумароильной группы. Сигнал аномерного углерода при C-1(6C 100,4) и другие сигналы для гликозильного фрагмента от C-2" до C-6" '(6c74,3, 73,4, 70,5, 77,4 и 62,0). Эти данные одномерного (1D) ЯМР накладывались на данные для кемпферола-3-0-B-2"-кумароилглюкозида (2) (16).Однако тщательное сравнение данных ЯМР 13С между двумя соединениями показало, что соединение 1 имеет галактозный фрагмент, что было дополнительно продемонстрировано данными спектроскопии ядерного усиления Оверхаузера (NOESY) ЯМР (рис. S6).В то время как корреляция NOES между H-2 и H-4 наблюдались в соединении 2, корреляция между этими протонами в соединении 1 отсутствовала. В целом интерпретация данных ЯМР 13С и NOESY ЯМР является эффективным методом определения типа гликозильного фрагмента. . Было установлено, что галактозный фрагмент находится в точке C-3 в соответствии со сдвигом в слабое поле C-2 и C-4, о чем также свидетельствует корреляция гетероядерных множественных связей (HMBCмежду H{ {123}}" и C-3 (рис. S5). Положение кумароильной группы было продемонстрировано как C-2" на основании сдвига в слабое поле (0 5.36 (1H, dd, J=10.0, 8,0 Гц, H{ {134}}")) и корреляции HMBC между H-2' и C-1. В результате структура соединения 1 была определена как кемпферол-3-0-B-2"-кумароилгалактозид. Хотя соединение 2 ранее было выделено из различных источников, включая Ouercus suber (16) и Alliumporrum (34), соединение 1 выделено и структурно охарактеризовано впервые.

Сложный3 был выделен в виде желтого порошка и установлена ​​молекулярная формулакак С31H28O14 путем анализа данных HRMS. УФ спектр показал УФпоглощение при 210 и 327 нм за счет одного и того же агликона с соединениями1 и2.1H Данные ЯМР (табл.1, рисунок S10) были аналогичны соединениям2, но составной3 имел ферулоильную группу вместо кумароильной группы, о чем свидетельствует наличиедополнительная метоксигруппа (δH 3.91 (3H, s, 3000 -ОЧ3)). Кроме того, аномерный протонсигнал (δH 5.64 (1H, d, J {{0}}.0 Гц, H-100 )) наблюдалось, что указывает на то, что гликозильная связьбыл-конфигурация, а сигнал со сдвигом в слабое поле (5,03 (1H, t,J = 8.5 Гц, H-200 )) был показан в области сахара, как и в случае соединения1.13Данные ЯМР С (табл.1, ФигураS11) показал 31 резонанс, состоящий из двухтранс-олефиновые атомы углерода, десять четвертичных атомов углерода,десять ароматических углеродов, шесть глюкозильных атомов углерода и один метоксиуглерод и десять непротонированныхатомы углерода, включая два карбонильных атома углерода, соответствующие кемпферолу, ферулоилу,и группы глюкозы. В частности, сигналы углерода от C-200 в С-600 (δC 75.8, 76.3, 71.5, 78.8 и 62,5) предполагает наличие глюкозного фрагмента. Расположение фрагмента глюкозыи ферулоильной группы были отнесены по дальним корреляциям HMBC между H-100 иC-3 (δC 134.8) и Н-200 и С-1000 (δC 168.4) (Рисунок S14). Положение доп.метоксигруппу определяли по ключевому соотношению между 3000 -ОЧ3 и С-3000 (δC 149.4). Приведенные выше результаты позволили предположить структуру соединения3 как кемпферол-3-O- - 2"-ферулоилглюкозид. Насколько нам известно, соединение3 сообщалось только какпродукт гидролиза 3-O- -(2-O-ферулоил)-глюкозил-7,40 -ди-О- -глюкозил кемпферол, изолирован отЛук клубненосный[35]. Следовательно, структура3 было объяснено как новоеприродное соединение.

Сложный11 был выделен в виде желтого порошка.1Данные H ЯМР (рис. S19)показан набор АА0 ББ0 -сигналы типа (δH 8.06 (2H, d, J {{0}}.0 Гц, H-20 , H-60 ), 6.87 (2H, d, J {{0}}.0 Гц, H-30, H-50 )) в кольце B кемпферола и синглетный сигнал приδH 7.02 (2H, s, H-3000 , H-7000 ) галлоильного фрагмента в ароматической области, что является характерным сигналомвыделенного флавонола. Сигнал аномерного протона (δH 5.78 (1H, d, J {{0}}.0 Гц, H-100 )) показали, что гликозильная связь-конфигурация. Кроме того, слабое полесмещенный сигнал протона (5,27 (1Н, т,J = 9.5 Гц, H-200 )) предположил, что галлоильная группабыл присоединен к гидроксильной группе C-200 потому что это смещение может быть связано санизотропное влияниеO-галлоильная часть [21].13Данные C ЯМР (рисунок S20)выявлено 26 резонансов, что свидетельствует о выделении флавонолгликозида. Углеродные сигналыиз С-200 в С-600 (δC 71.1, 72.7, 68.2, 76.0 и 60.1) предполагает наличие галактозычасть. Таким образом, структура соединения11 было подтверждено как кемпферол-3-O- -200 - галлоилгалактозиды. Хотя соединение11 ранее был выделен из различных источников,включаяД. каки[21,36], только1Ранее сообщалось о данных H ЯМР и МС. Таким образом,в13Данные C ЯМР были представлены впервые в этом исследовании.

2.3. Антиоксидантная активность выделенных соединений

Все выделенные соединения оценивали на предмет их антиоксидантного действия с помощью экспресс-анализа.линейный анализ ВЭЖХ-ABTS, чтобы определить, какие соединения способствовали антиоксидантномуэффект листьев хурмы. Соединения4–8, 11, 13, 15, и16 показал мощный антиокстворческая деятельность (рис.4). Большинство этих соединений представляли собой кемпферол и кверцетин.производные, но некоторые производные (1–3, 9, 10, 12, и14) не проявлял активности.связь структура-активность полностью не определена, но частично выявлена. Вв частности, кверцетин и кемпферол с галлоильными фрагментами (7, 8, 11, и13) были обнаруженыобладают мощной активностью, но вещества с кумароильными или ферулоильными фрагментами (1–3 и16) непоказывать любые действия.

Рисунок 4.Активность выделенных соединений по удалению радикалов (4–8, 11, 13, 15, и16) были оценены онлайнАнализ ВЭЖХ-ABTS.

2.4. Количественный анализ выделенных соединений.

Количественный анализ всех выделенных соединений в EtOAc-растворимом экстрактебыло проведено, чтобы подтвердить, что антиоксидантное действие листьев хурмы может бытьвызванные этими активными соединениями. Специфический метод ВЭЖХ с обнаружением диодной матрицы идля одновременного определенияиз 27 соединений. Содержание всех выделенных тритерпеноидов составляло примерно 5,9%.экстракт, и из них сиарезиноловая кислота (25), олеаноловая кислота (26), и урсолкислота (27) составляли значительную часть, как сообщалось в предыдущих исследованиях [7].содержание флавоноидов составляло примерно 5,4 процента, из них активных соединенийсоставили 3,2% (табл.2). В частности, содержание кемпферола-3-O- -200 -галлоилгалактозиды(9), кемпферол-3-O- -2"-галлоилглюкозид (10), изокверцитрин (13) и кверцетин-3-O- -2"- галлоилглюкозид (15) составили более 0,3 процента . Аналитический метод был проверен с помощьюпростая процедура валидации для обеспечения актуальности метода, которая показала адекватноеспецифичность, линейность, точность и прецизионность.

Попросить больше:

Электронная почта:wallence.suen@wecistanche.com WhatsApp плюс 86 15292862950