Цистанхе китайской медицины Химический состав и анализ компонентов в организме Ⅲ

Глава 3 Количественный анализ многокомпонентных компонентов Cistanche Deserticola на основе RPLC-HILIC-MS/MS

Химический состав традиционной китайской медицины сложен и содержит множество соединений, таких как первичные и вторичные метаболиты [55-561. Достижение всестороннего и надежного анализа химических компонентов традиционной китайской медицины (включая гидрофильные и гидрофобные компоненты) по-прежнему остается серьезной технической проблемой. Более того, содержание каждого компонента в традиционной китайской медицине сильно различается, и традиционные методы жидкостной масс-спектрометрии трудно одновременно точно определить количество как основных, так и микроэлементов. 1571 Традиционного разделения в одну колонку недостаточно, и анализ следовых соединений в традиционной китайской медицине будет ограничен константами. Из-за взаимодействия соединений явление перекрытия пиков является серьезным. Хотя для улучшения разделения сложных матриц использовались различные передовые методы хроматографии, такие как хроматографические колонки ядро-оболочка и субмикронные частицы, хроматографические колонки гидрофильного взаимодействия и т. д., все еще сложно добиться полного разделения различных соединений с использованием один столбец [58 -59. Многоколоночная хроматография, сочетающая по крайней мере два ортогональных хроматографических механизма, такие как двумерная ВЭЖХ, ВЭЖХ с переключением колонок и тандемная двухколоночная ВЭЖХ, считается возможным инструментом, который может значительно расширить охват метаболитов. Нет сомнений в том, что как двумерная ЖХ, так и ЖХ с переключением колонок могут значительно повысить пиковую производительность160). Однако оба метода зависят от клапана, оборудование сложное и требует много времени, а соединительные трубки и регуляторы просты в установке. Остатки существуют, и эти два метода склонны привносить ряд факторов неопределенности, приводящих к количественной невоспроизводимости1571. Хотя тандемная хроматография с обращенно-фазовым гидрофильным взаимодействием (RPLC-HILIC) не может значительно увеличить пиковую емкость, оборудование прибора простое, в соединительных трубках и регуляторах нет остатков, и он все же может реализовать переход от гидрофильного к гидрофобному. Комплексное удержание большого количества широкополярных соединений [61-66. Кроме того, режим мониторинга множественных реакций (MRM), уникальный для тройного квадрупольного масс-спектрометра (QgQ), может использоваться в качестве еще одного измерения разделения для дальнейшего улучшения способности разделения RPLC-HILIC. Короче говоря, RPLC-HILIC-MRM объединяет присущие преимущества RPLC, HILIC и MRM и, как ожидается, станет надежным аналитическим методом.

КАК ВРЕМЯ ДЕЙСТВУЕТ ЦИСТАНШЕ?

Содержание каждого компонента традиционной китайской медицины сильно различается. По сравнению с основными компонентами люди уделяют больше внимания разработке более чувствительных методов для полного обнаружения этих следовых или даже ультра-следовых соединений. Режим MRM часто рекомендуется из-за его превосходной чувствительности и хорошего линейного динамического диапазона167. Однако из-за насыщения камеры конечного электронного умножения камеры Q3 масс-спектрометра QqQ линейный диапазон обычно сужается, и верхний предел количественного определения (ULOQ) не может полностью охватить содержание некоторых основных соединений без надежного мониторинга. эти микроэлементы. Следовательно, подавление производства ионов-продуктов может расширить ULOO. Используя параметры ослабленных соединений, такие как ионные пары,депотенциальный(ДП) иэнергия столкновения(CE) может уменьшить количество целевых ионов-продуктов и тем самым расширить ULOQ[68-69]

Традиционная китайская медицинаЦистанчес Хербапредставляет собой высушенный мясистый стебель с чешуйчатыми листьямиЦистанчи завод. Это одно из широко используемых традиционных китайских лекарств, известное как «женьшень пустыни». Фенилэтаноидные гликозиды всегда были горячей темой исследований Cistanche Deserticola, но в последние годы фармакологические эффекты других гидрофильных компонентов, таких как маннит, также были хорошо известны! 70-721. Однако в нашем обычном количественном анализе CH содержание основных компонентов, таких какЭхинацея,вербаскозиди маннита иногда были слишком высокими, чтобы превысить диапазон измерения УФ-детектора или детектора испарительного светорассеяния (ELSD). Поэтому с точки зрения общей оценки качества важно разработать аналитический метод, который позволит одновременно контролировать гидрофильные и гидрофобные компоненты и точно определять количественные показатели как основных, так и следовых компонентов.

Эксперимент в этой главе установил надежный метод, подходящий для анализа сложных матриц - жидкостную масс-спектрометрию RPLC-HILIC-MS/MS (последовательная хроматография с обращенными фазами и гидрофильным взаимодействием-тандемная масс-спектрометрия), который позволил обнаружить 23 полярности в Cistanche Deserticola. . Одновременное разделение, анализ и определение содержания широкого спектра соединений (включая гидрофильные и гидрофобные компоненты); при использовании режима SMRM для обеспечения воспроизводимости этого метода, используя соответствующие значения CE и различные ионные пары для расширения сосновой шишки. ULOQ основных компонентов, таких как инулин и вербаскозид, позволяет одновременно определять количество основных компонентов и микроэлементов в Cistanche Deserticola, обеспечивая реальный инструмент для улучшения контроля качества Cistanche Deserticola и содействия достижению широкого целевого метаболизма растений. Геномика.

Раздел 1. Экспериментальные материалы.

1. Инструмент

Жидкостный масс-спектрометр HPLC-Qtap-MS оснащен системой ВЭЖХ Shimadzu (оснащен 2 насосами LC-20ADxR, автоматическим пробоотборником SIL-20ACxR, УФ-детектором SPD-M20A, CTO-20AC. термостат, онлайн-дегазация DGU-20A3R. Он состоит из машины, контроллера CBM-20A, Shimadzu Corporation, Япония) и масс-спектрометра SCIEX5500 Qtrap (источник ионов ESI, SCIEX, Фостер-Сити, Калифорния, США) . Сбор данных и расчет выполнялись с помощью программного обеспечения Analyst Software1.6.2. Система очистки сверхчистой воды Mili-Q (Milipore Company, США), электронные аналитические весы Mettler ME204 (Mettler Toledo Company, Швейцария), ультразвуковой экстрактор (230 В, Bransonmodel 5510, Дэнберри, Коннектикут, США).

2. Материалы и реагенты

Колонка Waters Acquity UPLC HSS T3 (2,1 x 100 мм, 1,8 мкм), колонка Waters XBridge Amide (4,6 x 150 мм, 3,5 мкм).Полиэфирэфиркетон(PEEK) трубопровод (Agilent Company, США). Метанол хроматографического и масс-спектрометрического качества, ацетонитрил и муравьиную кислоту масс-спектрометрического качества были приобретены у ThermoFisher (Питтсбург, Пенсильвания, США), а вода представляла собой сверхчистую воду Milli-Q (Millipore, Бедфорд, Массачусетс, США), изготовленную в лаборатории. . Ниацин (никотиновая кислота, cLogP, 0.799), янтарная кислота (cLogP, -0.526) были приобретены у Sigma-Aldrich Company (Сент-Луис, Миссури, США): уридин (cLogP, -2.219), аденоид аденозин (cLogP, -2.158), инозин (cLogP, {{10}}.106) и гуанозин (cLogP , -3.326) были приобретены у компании Beijing Xinjingke Biotechnology Co., Ltd. Салидрозид (cLogP -0.296), 6-дезоксикаталпол (cLogP, -3.071), фенилаланин (cLogP, -1.556), 8-эпи-логановая кислота (cLogP, -2.366), маннит (cLogP, -2.046), сахароза (cLogP , -3.087), глюрозид (cLogP, -1.757), алашаниозид A (алашаниозид A, cLogP -0.971), эхинакозид (эхинакозид, cLogP, -1 .811), феруловая кислота (cLogP, 1,421), актеозид (cLogP, -0.890), изоактеозид (cLogP, -0.057) и пинорезинол- -D-глюкопиранозид (cLogP, -0.384) был предоставлен Ключевой лабораторией природных и биомиметических препаратов Пекинского университета, цистанозид F (цистанозид F, cLogP, -2.211) приобретен у Chengdu Mansite Biotechnology Co., Ltd., цистанозид А (цистанозид А, cLogP, -1.365), 2'-ацетилактеозид (cLogP, -0.040) и апиозид ликвиритина (cLogP, -0.267) были приобретены в Шанхае. Shidande Biotechnology Co., Ltd. и тубулозид А (тубулозид A, cLogP, 0,287) были приобретены у Chengdu Weiqi Biotechnology Co., Ltd. Чистота всех эталонных веществ была проверена с помощью HPLC-DAD-IT-TOF-MS и чистота превышала 98%. Все значения cLogP контрольного вещества рассчитывали с помощью программного обеспечения ChemBioDraw Ultra14.0 (CambridgeSoftCambridge, Массачусетс, США).