Водный экстракт Cistanches Tubulosa защищает яички от повреждений, вызванных циклофосфамидом: действие и механизм

СЯ Лунь-бинь1,2,ЦЗЯН Пин 1,2,ХЭ Янь-фэй 1,2,СУН Тао-тао 1,ЧЖОУ Юй1,ЦЗУО Ｒуй-хуа 1,2

1． Школа биологической и фармацевтической инженерии, Западный Аньхойский колледж, Луань, Аньхой 237012, Китай; 2． Аньхойская инженерная лаборатория по сохранению и устойчивому использованию традиционной китайской медицины Ｒesources, Lu＇an, Anhui 237012, China

【Абстрактный】

Цель: исследовать защитный эффектВодный экстракт цистанхе трубчатой ( КТВЕ) против вызванного циклофосфамидом (CTX) повреждения яичек (TI) у мышей и механизма его действия.

Порошок экстракта цистанхе

Нажмите здесь, чтобы просмотреть продукты Cistanche для лечения заболеваний почек

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

Методы: Тридцать мышей-самцов были в равной степени рандомизированы в группу нормального контроля, контрольной модели CTX-индуцированного TI и группы лечения CTWE. После 7 дней адаптивного кормления мышам в группе лечения CTWE внутрижелудочно вводили CTWE в дозе 1{{2{{3{0}}}}} г/кг/день, как в нормальном контроле, так и в модели TI. контрольные группы получали одинаковый объем физиологического раствора каждый день в течение 35 последовательных дней, а группы в контрольной модели TI и группах лечения CTWE путем внутрибрюшинной инъекции циклофосфамида в дозе 80 мг/кг/сут в 7,14,21 , 28 и 35 дней. Затем всех животных взвешивали, собирали образцы крови, собирали их семенники и придатки яичка для определения содержания Т в сыворотке крови, исследования качества спермы, измерения массы семенников, наблюдения за гистопатологическими изменениями в семенниках и определения уровней супер оксиддисмутаза (СОД) и малоновый диальдегид (МДА) в ткани яичка и экспрессия mＲNA генов, связанных с ядерным фактором, связанным с эритроидным {{10}}фактором, родственным эритроидному (Nrf2) сигнальному пути. ＲРезультаты: у мышей в контрольной группе модели TI по ​​сравнению с контрольной группой наблюдалось значительное снижение массы тела (［34． 13 ± 1． 56］по сравнению с ［47． 08 ± 1． 98］г. ,P ＜ 0． 05), вес яичка ( ［81． 82 ± 1{{101}}． 61］по сравнению с ［148． 50 ± 14． 82］мг, P ＜ 0． 05), концентрация спермы (［32． 60 ± 5． 29］по сравнению с ［78．90 ± 7． 95］ × 106 /мл, P ＜ 0． 05), подвижность сперматозоидов ( ［45． 20 ± 7． {{186 }}9］% против［86．70 ± 5．64］процентов, P<0．05), содержание T в сыворотке (［7．49±1．03］против［15．93±1．36 ］нг/л, P ＜0．05) и уровень СОД (［152．22 ± 10．66］по сравнению с［356．10±30．95］Ед/мг прот,P＜0．05), но значительное увеличение по проценту морфологически аномальных сперматозоидов (МАС) (［39． 30 ± 7． 36． % против ［14． 40 ± 3． 53］ %, Р＜ 0． 05) и уровню МДА (［54． 91 ± 5． 12］vs［31． 71 ± 3． 57］нмоль/мг прот, P ＜ 0． 05) ． Животные, получавшие CTWE, по сравнению с контрольной моделью TI, демонстрировали заметное увеличение массы тела (［40．67±2．13］по сравнению с［34．13±1．56］г, P＜0．05), массы семенников. (［121． 21 ± 17． 38］по сравнению с ［81． 82 ± 10． 61］мг, P＜0．05), концентрация сперматозоидов (［58． 40 ± 9． 94］по сравнению с［32． 60 ± 5． 29 ］ ×106/мл, P ＜ 0． 05), подвижность сперматозоидов (［72． 30 ± 7． 51］ % против ［45． 20 ± 7． 09］ %, P ＜ 0．05), содержание Т в сыворотке ( ［ 10． 89 ± 1． 07］против［7． 49 ± 1．03］нг/л, P＜0．05) и уровень СОД (［217． 69 ± 24． 59］против ［152．22 ± 10．66 ］Ед/мг прот, P ＜ 0． 05), но сниженный процент MAS (［22． 20 ± 6． 07］ % против ［39． 30 ± 7． 36］ %, P ＜ 0． 05) и уровень МДА (［36． 41 ± 4． 27］по сравнению с ［54． 91 ± 5． 12］нмоль/мг прот, P＜0．05) ． Экспрессия mＲNA Nrf2, HO-1 и NQO-1 в ткани яичка была значительно снижена в контрольной модели TI по ​​сравнению с контрольной группой в норме (P < 0． 05) и заметно активировалась в группе, получавшей CTWE, по сравнению с таковой в группе, получавшей модель TI (P < 0, 05), в то время как активность каспазы 3 заметно увеличивалась в контрольной группе, получавшей модель TI (P < 0, 05), и снижалась в группе, получавшей CTWE. ( P ＜ 0． 05) ． Гистопатологически ткань семенников контрольной модели TI показала нечеткие очертания от основания семенных канальцев до поверхности просвета, с беспорядочными и редуцированными слоями сперматогенных клеток и уменьшенным количеством сперматозоидов в семенных канальцах, в то время как структура сперматогенных канальцев восстановился почти до нормы в группе лечения CTWE.

Заключение: Водный экстракт Cistanches tubulosa может эффективно ингибировать вызванное циклофосфамидом повреждение яичка за счет повышения активности антиоксидантного фермента и регулирования экспрессии генов, связанных с сигнальным путем Nrf2.

Цистанхе порошок

【Ключевые слова】водный экстракт цистанхе трубчатой; яичко; циклофосфамид; окислительный стресс; мышь

Циклофосфамид (ЦТХ) как противоопухолевый препарат [1] и иммунодепрессант [2] нашел широкое применение в медицинской клинической практике. Однако он также обладает значительными цитотоксическими эффектами, а повреждение репродуктивной системы является одним из его побочных эффектов. Предыдущие исследования показали, что CTX может вызывать окислительный стресс в ткани яичек у самцов или самцов животных, что приводит к дисфункции сперматогенеза, такой как снижение количества и подвижности сперматозоидов [3-6]. Таким образом, изучение методов уменьшения или устранения повреждения CTX ткани яичка и восстановления его нормальной сперматогенной функции стало горячей точкой исследований.

Цистанхе пустынная была впервые упомянута в «Классической Шэньнунской Материи Медике» и является традиционной и ценной китайской медициной. Он оказывает тонизирующее действие на эссенцию и кровь, тонизирует Ян почек, питает Инь почек, увлажняет кишечник и избавляет от запоров. Согласно Китайской фармакопее, Cistanche Deserticola является многолетним травянистым паразитическим растением семейства Orobaceae. Цистанхе пустынная YCMa или Cistanche tubulosa (Schenk) Light представляет собой сухой, чешуйчатый, мясистый стебель. Согласно «Лекарственному значению» [8], цистанхе пустынная «принадлежит к инь ян… это основное укрепляющее почки вещество и продукт, который способствует укреплению ян и эссенции». Препарат Materia Medica [9] подчеркивает, что ключом к использованию Cistanche Deserticola в качестве лекарства является «питание почек и питание кишечника». Цистанхе пустынная широко используется в рецептах традиционной китайской медицины и является одной из наиболее часто используемых лекарственных трав для тонизирования почек, укрепления ян и повышения силы. В последние годы химический анализ и фармакологические исследования показали, что цистанхе пустынная содержит различные активные ингредиенты, такие как фенилэтаноидные гликозиды, иридоиды и их гликозиды, лигнаны и их гликозиды, полисахариды, алкалоиды, аминокислоты и микроэлементы. [10]. 

Эффективность Cistanche Deserticola — тонизирует почки

Современные фармакологические исследования показали, что он не только обладает фармакологическими эффектами, такими как омолаживающий [11-12], антиусталостный [13], антиоксидантный [14], иммунный контроль [15] и защита нервов [{{6 }}], но и значительно улучшает репродуктивную функцию [18]. ЛИ и др. [19] сообщили, что Cistanche Deserticola может обратить репродуктивную токсичность, вызванную гликозидом триптеригия у мышей; Ван Дэцзюнь и др. [20] доказали, что Cistanche Deserticola может стимулировать сперматогенез в яичках и улучшать микроокружение придатка яичка; Чжао Дунхай и др. [21] обнаружили, что фенилэтаноидные гликозиды из Cistanche Deserticola оказывают значительный терапевтический эффект на индуцированные CTX нарушения сперматогенеза у мышей, и указали, что его механизм может быть связан с повышением уровня тестостерона в ткани яичка. Тем не менее, имеется несколько сообщений о механизме воздействия Cistanche Deserticola на стимулирование репродуктивных функций, таких как сперматогенез, и необходимы дальнейшие углубленные исследования. В этом экспериментальном исследовании использовали CTX для создания мышиной модели повреждения ткани яичка и изучали восстановительный эффект водного экстракта Cistanche tubulosa (CTWE) на поврежденную ткань яичка у мышей. Исследование проводилось гистологическими, физиологическими и биохимическими методами. Изучение антиоксидантных показателей и экспрессии генов, связанных с ядерным фактором E2, связанным с фактором 2 (Nrf2), в ткани яичка направлено на обогащение фармакологической основы Cistanche Deserticola и обеспечение научная основа его лекарственной ценности и разработки продукта.

1 Материал и методы

1.1 Материалы

1.1.1 Экспериментальные животные

40 белых мышей Куньмин чистоты, самцы, с массой тела (18 ± 2) г, приобретенные в Центре экспериментальных животных Аньхойского медицинского университета, номер лицензии на животных SCXK (Аньхой) 2017-001. Мышей выращивали в отдельных клетках, кормили и поили свободно при комнатной температуре 20-24 градусов и влажности 55 процентов -65 процентов. Через 7 дней адаптивного питания их использовали для эксперимента.

1.1.2 Лекарственные материалы и реагенты

Высушенные таблетки Цистанхе пустынногобыли куплены на рынке лекарственных трав в городе Бочжоу, провинция Аньхой. Они были идентифицированы как трубчатые цистанхе пустыни профессором Чен Найдуном из Отдела преподавания и исследований традиционной китайской медицины Школы биологической и фармацевтической инженерии Университета Ваньси. Стандартный продукт эхинацетина (чистота больше или равна 98 процентам), Shanghai Tongtian Biotechnology Co., Ltd; краситель для окрашивания гематоксилин-эозином (HE), Zhuhai Besso Biotechnology Co., Ltd; малоновый диальдегид (MDA), набор ELISA для супероксиддисмутазы (SOD), Nanjing Jiancheng Technology Co., Ltd; CTX, Shanghai Aladdin Biochemical Technology Co., Ltd; Тестостерон ELISA Kit, Shanghai Zhenke Biotechnology Co., Ltd; Колонка UN1Q-10 Набор для экстракции тотальной РНК Trizol, Shenggong Biotechnology (Shanghai) Co., Ltd; Удаление гДНК EasyScript One Step и синтез кДНК SuperMix, Trans Start Green qPCRSuperMix, Beijing Quanshi Biotech Co., Ltd.

Высушенные таблетки Цистанхе пустынного

1.1.3 Инструменты и оборудование

микроскоп BX53, фирма Olympus; YD-335 машина для резки парафина, Zhejiang Jinhua Yidi Medical Equipment Co., Ltd; RE-2002 Ротационный испаритель, Shanghai Yaote Instrument Equipment Co., Ltd; TU-1950 УФ-спектрофотометр видимого диапазона, Beijing Puxi General Instrument Co., Ltd; Ультрамикроспектрометр NanoDrop2000, Thermo Fisher Scientific; Система жидкостной хроматографии Agilent 1260 Infinity II Prime, Agilent Technologies; Шаг первый плюс прибор для количественной ПЦР с флуоресценцией, Applied Biosystems.

1.2 Метод

1.2.1 Подготовка CTWE

Ссылаясь на метод экстракции горячей водой, описанный в ссылке [22], с небольшими улучшениями. Измельчите 500 г цистанхе пустынной и погрузите в 5 л дистиллированной воды. Прокипятить и экстрагировать при 100 градусах в течение 2 часов. Фильтруют и собирают фильтрат. К остатку на фильтре добавляют 5 л дистиллированной воды и продолжают экстрагирование. Повторяют экстракцию три раза, сливают фильтрат, выпаривают его в вакууме при 65°С и концентрируют до содержания неочищенного лекарственного средства 0,5 г/мл. Контроль качества CTWE основан на содержании эхинацетина [23]. Содержание эхинацетина в СТВЕ определено методом высокоэффективной жидкостной хроматографии и составляет (7,63 ± 0,08) мг/мл.

1.2.2 Группировка животных и администрация

30 мышей были случайным образом разделены на нормальную контрольную группу, модельную группу и группу лечения Cistanche Deserticola, по 10 мышей в каждой группе. Мышам экспериментальной группы давали дозу CTWE 10 г/кг массы тела через желудочный зонд [рассчитывается как 20-кратное взросление 0,5 г/(кг · сут) для взрослых [13]], в то время как мышам контрольной и модельной групп давали тот же объем. физиологического раствора через зонд 1 раз в сутки в течение 35 дней подряд; На 7-й, 14-й, 21-й, 28-й и 35-й день введения мышам модельной группы и группе лечения Cistanche Deserticola давали дозу 80 мг/кг массы тела CTX для внутрибрюшинной инъекции, в то время как мышам контрольной группы давали тот же объем физиологического раствора для внутрибрюшинного введения.

1.2.3 Сбор и обработка проб

После последней инъекции СТХ и голодания в течение 12 часов измеряли массу тела и брали образцы крови. Затем мышей каждой группы внутрибрюшинно анестезировали хлоралгидратом (0,3 мл/100 г), удаляли и взвешивали семенники; Возьмите ткань придатка яичка с обеих сторон для проверки качества спермы; Возьмите левое яичко и поместите его в 4-процентный раствор параформальдегида для получения срезов тканей и гистопатологического исследования; Возьмите правое яичко и храните его в жидком азоте для биохимических показателей ткани и количественного обнаружения флуоресценции ПЦР.

1.2.4 Проверка качества спермы

Вырежьте собранную ткань придатка яичка и поместите ее в предварительно нагретый до 37 градусов физиологический раствор. Инкубируйте при постоянной температуре в течение 15 минут, чтобы сперма полностью выплыла, и приготовьте суспензию спермы. Возьмите суспензию спермы и поместите ее на доску для подсчета спермы, предварительно нагретую до 37 градусов. Наблюдайте под микроскопом и выбирайте сперматозоиды, которые могут двигаться по прямой линии или в ненаправленном направлении, как живые сперматозоиды. Другие сперматозоиды, которые могут только вращаться или оставаться неактивными на месте в виде мертвых сперматозоидов. Подсчитайте количество живых сперматозоидов в 200 сперматозоидах и рассчитайте скорость подвижности сперматозоидов [24]; Взять 10 мкл. После разбавления суспензии сперматозоидов физиологическим раствором в 20 раз рассчитать концентрацию сперматозоидов, используя метод подсчета клеток крови; Возьмите взвесь спермы и смешайте ее с 1-процентным раствором эозина в соотношении 10:1 для окрашивания, сделайте мазок, высушите на воздухе, зафиксируйте в метаноле, пронаблюдайте под микроскопом и подсчитайте степень деформации сперматозоидов.

1.2.5 Патологическое исследование ткани яичка

Берут левое яичко, законсервированное в 4-процентном растворе параформальдегида, обрезают его лезвием в блок ткани размером около 0,5 см3, заливают в парафин, окрашивают ГЭ и наблюдают патологические изменения яичка. ткани под микроскопом.

1.2.6 Определение биохимических показателей в ткани яичка

Согласно инструкции набора для определения СОД и МДА берут яички, хранящиеся в жидком азоте, и готовят 10-процентный гомогенат. Следуйте инструкциям набора для определения содержания СОД и МДА в ткани яичка.

1.2.7 Определение содержания тестостерона в сыворотке

В соответствии с инструкциями по эксплуатации набора для обнаружения тестостерона ELISA определите содержание тестостерона в сыворотке мыши.

1.2.8 Тестикулярная ткань мыши

Содержание генов, связанных с сигнальным путем Nrf2, было обнаружено с помощью количественной флуоресцентной ПЦР для определения уровней экспрессии мРНК таких генов, как Nrf2, каспаза-3, гемоксигеназа-1 (HO-1) , НАДФН-хининоксидоредуктаза-1 (NQO-1) и белок, ассоциированный с Келх-подобным ЭХГ-1 (Keap1) в ткани яичка мыши. Метод описан в ссылке [25] и слегка изменен . Тотальную РНК экстрагировали из тестикулярной ткани мышей с использованием набора для выделения тотальной РНК Trizol. кДНК синтезировали путем обратной транскрипции с использованием удаления гДНК EasyScript One Step и синтеза кДНК SuperMix и обнаруживали с помощью ПЦР RTFQ с использованием набора Trans Start Green qPCRSuper Mix. Праймеры для Nrf2, Caspase3, HO-1, NQO-1 и Keap1 были разработаны и синтезированы компанией Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd. Последовательности праймеров показаны в таблице 1. Данные были записаны с использованием встроенного программного обеспечения прибора флуоресцентной количественной ПЦР, и значения Ct образцов стабильно экспрессировались у мышей. Актин является эндогенным внутренним эталонным геном [26]. Формула 2 - ΔΔ Рассчитайте относительный уровень экспрессии мРНК, используя КТ.

1.3 Статистический анализ

Все данные были проанализированы с использованием SPASS 19.0 для однофакторного дисперсионного анализа, при этом данные измерений представлены x ± s, а P меньше или равно 0.05, что указывает на статистически значимые различия.

Таблица 1. Основные последовательности Nrf2, Caspase3, HO-1, NQO-1, Keap1 и -actin, используемые в RTFQ-PCR

2 результатов

2.1 Влияние CTWE на массу тела и массу яичек у мышей с повреждением яичек, вызванным CTX

По сравнению с нормальной контрольной группой масса тела и масса яичек мышей модельной группы были значительно снижены (P<0.05); Compared with the model group, the body mass and testicular mass of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). See Table 2.

2.2 Влияние CTWE на качество спермы у мышей с повреждением яичек, вызванным CTX

Из таблицы 3 видно, что по сравнению с нормальной контрольной группой подвижность и концентрация сперматозоидов у мышей модельной группы были значительно снижены (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the sperm motility and sperm concentration in the Cistanche deserticola treatment group were significantly increased (P<0.05), while the sperm deformity rate was significantly reduced (P<0.05). The results showed that CTWE significantly improved the semen quality of mice with testicular injury caused by CTX.

Таблица 2. Масса тела и масса семенников мышей в разных группах ( x ± s )

NC: нормальное управление; TIMC: контрольная модель травмы яичка; CTWE: обработка водным экстрактом цистанхе трубчатой; * : P ＜ {{0}}}． 05 по сравнению с группой NC; #: P < 0. 05 по сравнению с группой TIMC．

Таблица 3． Подвижность сперматозоидов, концентрация сперматозоидов и процент морфологически аномальных сперматозоидов (MAS) мышей в разных группах (x ± s)

NC: нормальное управление; TIMC: контрольная модель травмы яичка; CTWE: обработка водным экстрактом цистанхе трубчатой; * : P ＜ {{0}}}． 05 по сравнению с группой NC; #: P < 0. 05 по сравнению с группой TIMC．

Рисунок 1. Патоморфологические изображения тканей семенников мышей разных групп (НЕ × 400)

A＇ и A: нормальный контроль; B＇и B: контрольная модель травмы яичка; C＇и C: обработка водным экстрактом цистанхе трубчатой; Стрелки указывают на изменения слоев сперматогенных клеток на всех уровнях в семявыносящих канальцах; прямоугольники указывают на неупорядоченные и редуцированные слои сперматогенных клеток; и кружки указывают на уменьшение количества сперматозоидов в семявыносящих канальцах.

2.3 Влияние CTWE на патологические изменения ткани яичек у мышей с CTX-индуцированным повреждением яичек

Как видно из рисунка 1, по сравнению с нормальной контрольной группой структура семенных канальцев в ткани яичка мышей модельной группы существенно изменилась. Очертания базальной мембраны семенных канальцев нечеткие, уровни сперматид на всех уровнях в просвете снижены и расположены беспорядочно, количество сперматозоидов в просвете значительно снижено (рис. 1Б, Б'); По сравнению с модельной группой после лечения в группе лечения Cistanche Deserticola очертания базальной мембраны семенных канальцев в семенниках мышей стали полными и четкими, слои сперматид в просвете увеличились, и их расположение имело тенденцию к регулярности. и количество сперматозоидов в просвете значительно увеличилось (рис. 1С, С').

2.4 Влияние CTWE на уровни SOD и MDA в тестикулярной ткани мышей с CTX-индуцированным повреждением яичек

По сравнению с контрольной группой содержание СОД в ткани яичка у мышей модельной группы значительно снизилось (P<0.05) and the MDA content significantly increased (P<0.05); Compared with the model group, the SOD content in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05) and the MDA content significantly decreased (P<0.05). The results showed that CTWE had a significant improvement effect on SOD and MDA indicators in the testicular tissue of mice with CTX-induced testicular injury. See Table 4.

Таблица 4． Уровни СОД и МДА в ткани семенников мышей разных групп ( x ± s )

СОД: супероксиддисмутаза; МДА: малоновый диальдегид; NC: нормальное управление; TIMC: контрольная модель травмы яичка; CTWE: обработка водным экстрактом цистанхе трубчатой; * : P ＜ {{0}}}． 05 по сравнению с группой NC; #: P < 0. 05 по сравнению с группой TIMC．

2． 5 Влияние CTWE на содержание тестостерона в сыворотке у мышей с повреждением яичек, вызванным CTX

Согласно таблице 5, по сравнению с нормальной контрольной группой содержание тестостерона в сыворотке мышей модельной группы было значительно снижено (P<0.05); Compared with the model group, the serum testosterone content of mice treated with Cistanche deserticola significantly increased (P<0.05). This indicates that CTWE not only has a good anti-injury and repair effect on CTX-induced testicular injury in mice but also significantly increases the serum testosterone content in testicular injury mice.

Таблица 5． Содержание сывороточного Т в разных группах мышей (x ± s)

NC: нормальное управление; TIMC: контрольная модель травмы яичка; CTWE: обработка водным экстрактом цистанхе трубчатой; * : P ＜ {{0}}}． 05 по сравнению с группой NC; #: P < 0. 05 по сравнению с группой TIMC．

2． 6 Влияние CTWE на экспрессию генов пути Nrf2 в яичках мышей с CTX-индуцированным повреждением яичек.

Как показано на рисунке 2, по сравнению с нормальной контрольной группой уровни экспрессии мРНК NQO-1, HO-1 и Nrf2 в тестикулярной ткани мышей модельной группы были значительно снижены (P<0.05), while the mRNA expression level of the apoptotic gene Caspase3 was significantly upregulated (P<0.05); Compared with the model group, the expression levels of NQO-1, HO-1, and Nrf2 mRNA in the testicular tissue of mice treated with Cistanche deserticola were significantly upregulated (P<0.05), while the expression levels of Caspase3 mRNA were significantly downregulated (P<0.05); The mRNA expression level of Keap1 gene showed no significant difference between the normal control group, model group, and Cistanche deserticola treatment group (P>0.05). Таким образом, CTWE может восстанавливать окислительное повреждение CTX в тестикулярных гистиоцитах мыши, повышая экспрессию NQO-1, HO-1 и других антиоксидантных факторов, регулируемых Nrf2, и ингибируя экспрессию гена апоптоза Caspase3. .

Фигура 2. Ｒотносительная экспрессия генов, связанных с сигнальным путем Nrf2, в разных группах мышей

NC: нормальное управление; TIMC: контрольная модель травмы яичка; CTWE: обработка водным экстрактом цистанхе трубчатой; * : P ＜ {{0}}}． 05 по сравнению с группой NC; #: P < 0. 05 по сравнению с группой TIMC

3 Обсуждение

В качестве противоопухолевого и иммунодепрессивного препарата СТХ обладает сильной репродуктивной токсичностью и большим ущербом для фертильности [27]. Результаты этого исследования показали, что ткань яичек мышей модели СТХ была значительно повреждена, контур базальной мембраны семенных канальцев был нечетким, диаметр просвета был уменьшен, а уровни сперматид на всех уровнях были снижены, и деформация сперматозоидов увеличивалась, а жизнеспособность и концентрация сперматозоидов снижались, что согласуется с результатами исследования Jiang Ping [24], что также указывает на то, что CTX обладает сильной репродуктивной токсичностью. Цистанхе пустынная – хорошее средство для укрепления Ян и тонизирования почек. Результаты этого исследования показывают, что CTWE может эффективно устранять репродуктивную токсичность CTX у мышей. Вес и качество яичек мышей в группе лечения Cistanche Deserticola значительно увеличились, концентрация и жизнеспособность сперматозоидов значительно увеличились, скорость деформации сперматозоидов значительно снизилась, а содержание тестостерона в сыворотке значительно увеличилось; С точки зрения гистопатологии, наблюдение окрашивания HE срезов ткани показало, что повреждение ткани яичка значительно улучшилось, контур базальной мембраны семенных канальцев стал полным и четким, уровень сперматид в просвете был четким и имел тенденцию быть регулярным, и морфология ткани, как правило, была нормальной, что согласуется с исследовательским отчетом Wang Dejun et al. [20], указывая на то, что CTWE восстанавливает повреждение тестикулярной ткани мышей, вызванное CTX.

Цистанхе, живущая в пустыне — тонизирующая почки

В нормальных физиологических условиях ткани организма непрерывно выводят свободные радикалы кислорода и их пероксиды, образующиеся в результате метаболической активности, через антиоксидантную систему, тем самым поддерживая динамический баланс окислительно-восстановительной системы организма и избегая повреждения тканей вследствие окислительного стресса [28]. СОД и МДА являются важными индикаторами антиоксидантной активности тканей, отражающими антиоксидантную способность тканей и степень повреждения окислительным стрессом соответственно [29]. Ма Сяоцин и др. [30] обнаружили, что Cistanche Deserticola может значительно повышать уровень СОД и снижать уровень МДА в ткани почек крыс, оказывая, таким образом, определенный защитный эффект в отношении индуцированного гентамицином повреждения ткани почек крыс. Результаты этого исследования показывают, что CTWE может эффективно повышать уровень активности SOD и снижать содержание MDA в поврежденной ткани яичек мышей, аналогично результатам приведенных выше исследований, что указывает на то, что CTWE может противостоять повреждению окислительного стресса за счет повышения антиоксидантной способности. тестикулярной ткани.

Цистанхе на травах Супермена — тонизирующая почки

Nrf2 является членом семейства факторов транскрипции Cap'n'collar и играет важную роль в различных болезненных процессах, таких как опухоли и воспаление [31]. Nrf2 является ключевым фактором транскрипции, который регулирует клеточный антиоксидантный стресс. Когда организм испытывает окислительный стресс, он проникает в ядро ​​и связывается с нижестоящими элементами антиоксидантного ответа (ARE), регулируя транскрипционную активность различных эндогенных антиоксидантных факторов, включая SOD, HO-1 и NQO-1, ингибирование окислительных реакций [32]. В патологических условиях функция регуляции Nrf2 нарушается, и гистиоциты повреждаются окислительным стрессом. Ле и др. [33] сообщили, что CTX играет роль в нарушении репродуктивной токсичности, подавляя экспрессию Nrf2, тем самым ингибируя экспрессию антиоксидантных факторов, таких как HO{9}} и NQO-1. В этом исследовании экспрессия генов Nrf2, HO-1 и NQO-1 в ткани яичка мышей модельной группы была значительно снижена, а экспрессия гена апоптоза Caspase3 была усилена, что указывает на то, что CTX может способствовать апоптозу гистиоцитов яичка мыши через сигнальный путь Nrf2, вызывая повреждение ткани яичка, что согласуется с приведенными выше результатами исследований; Экспрессия Nrf2, NQO-1 и HO-1 в тестикулярной ткани мышей, получавших Cistanche Deserticola, была значительно повышена, в то время как экспрессия Caspase3 была значительно снижена, что указывает на то, что Cistanche Deserticola может способствуют проникновению в ядро ​​Nrf2 и интеграции ARE, усиливают экспрессию NQO-1, HO-1 и других антиоксидантных факторов, регулируемых Nrf2, восстанавливают окислительное повреждение CTX в гистиоцитах яичка мыши и восстанавливают сперматогенез яичка функция.

Таким образом, CTWE может облегчить вызванное CTX повреждение ткани яичка у мышей, восстановить структуру поврежденной ткани яичка и восстановить сперматогенную функцию яичка. Механизм может быть связан со способностью CTWE повышать активность антиоксидантных ферментов, регулировать экспрессию генов факторов антиоксидантного стресса, связанных с сигнальным путем Nrf2, и подавлять экспрессию апоптотического гена Caspase3. В этой статье в основном исследуется антиокислительный стрессовый эффект CTWE на ткань яичка, и необходимы дальнейшие исследования механизма его действия.

ссылка

［1］ Смолей Л., Брихтова Ю., Кмунт Э. и др.． Низкие дозы флударабина и циклофосфамида в сочетании с ритуксимабом в терапии первой линии пожилых пациентов/пациентов с сопутствующими заболеваниями, страдающих хроническим лимфолейкозом/малой лимфоцитарной лимфомой (ХЛЛ/МЛЛ): долгосрочные результаты проекта Q-lite Чешской исследовательской группы по ХЛЛ. Br J Haematol, 2021, 193 (4): 769-778．

［2］ Ли Жуйцзюнь, Цинь Юн, Чжоу Ялинь и др. Влияние пептида нута на иммунную функцию мышей с ослабленным иммунитетом. пищевая наука, 2020, 41 (21): 133-139

［3］Лю Бо, Ли Е, Ву Ци и др. Влияние Erxian Tang на репродуктивную функцию мышей с моделью олигоспермии, индуцированной циклофосфамидом. Китайский журнал андрологии, 2018, 24 (6): 547-552

［4］Лай Юнвэй, Си Яньли, Шао Минхай и др. Защитный эффект флавоноидов Myrica rubra на репродуктивную токсичность циклофосфамида у самцов мышей. Исследования в области здравоохранения, 2020, 49 (5): 790 - 794

［5］Лю Цзяньго, Чжао Хунлэ, Ли Цзяоцзяо и др. Влияние рецепта Bushen Huoxue на апоптоз клеток сперматидов яичка мыши, индуцированный циклофосфамидом. Китайский журнал андрологии, 2020, 26 (9): 826-831

［6］Ми Чжаоян, Чжан Яньань, Хуа Жуй и др. Защитный эффект ресвератрола на вызванное циклофосфамидом окислительное повреждение спермы человека. Журнал современной урологии, 2021, 26 (4): 340-344

［7］Национальная фармакопея. Фармакопея Китайской Народной Республики: Часть 1. Пекин: China Medical Science and Technology Press, июль 2022 г.

［ 8 ］ Цзя Суо Сюэ. Фармацевтическая химия. Пекин: Китайское издательство традиционной китайской медицины, июль 2015 г.

［9］Ван Анг. Приготовление Материа Медика. Пекин: Китайское издательство традиционной китайской медицины, 2009 г. 121.

［10］Чжи Яцзин, Чжэнь Яцинь, Тянь Вэй и др. Ход исследований химического состава и фармакологических эффектов цистанхе пустынного и прогностический анализ маркеров качества (Q-Markers). Китайская фитотерапия, 2021, 52 (9): 2758-2767

［11］У Янь, Чжан Хун, Бу Рен и др. Исследование защитного действия полисахарида Cistanche Deserticola на модели острого старения, вызванного D-нененебой галактозой. Китайский фармакологический бюллетень, 2017, 33 (7): 927-933

［12］ Ван Н.К., Цзи С.З., Чжан Х. и др.． Herba Cistanches: Антивозрастной эффект. Старение Dis,2017,8( 6) : 740-759．

［13］Ван Сяомин. Исследование эффективных компонентов и механизма действия цистанхе пустыни при снятии физической усталости (докторская диссертация). Пекин: Медицинский колледж Пекинского союза, 2019 г.139-145

［14］Го Цяоли, У Чжибо, Чжоу Юйби ​​и др. Анализ состава и антиоксидантной активности полисахаридов из Ланьчжоу Cistanche Deserticola. Технологии пищевой промышленности, 2021, 42 (15): 96-103

［15］Ян Сюмэй, Ян Юй, Ван Даньян и др. Спиртовой экстракт Cistanche Deserticola в Синьцзяне регулирует иммуностимулирующий эффект созревания DCs на Th1/Th2 у мышей. Журнал животноводства и ветеринарии, 2021 г., 52 (3): 820-830

［16］Ван Цзинкан, Ван Личао, Цзян Юн и др. Изучение защитного действия и механизма воздействия спиртового экстракта из цистанхе пустынного на повреждение нейронов, вызванное реперфузией гипоксии/гипогликемии. Китайский журнал традиционной китайской медицины, 2019 г., 44 (13): 2686-2690

［17］Цай Керуй, Лю Чжисинь, Сунь Сяодун и др. Защитный эффект и механизм действия полисахарида Cistanche Deserticola на нейроны головного мозга у стареющих мышей, индуцированный D-нененэба галактозой. Китайский журнал геронтологии, 2018, 38 (19): 4732-4734

［18］Ван Цисинь, Чен Цзехуа, Луо Хуцзе и др. Влияние различных экстрактов цистанхе пустынной на улучшение сексуальной способности у крыс с дефицитом ян почек. Китайский журнал экспериментальных рецептов, 2018 г., 24 (22): 95-101

［19］ Ли Дж., Хуан Д., Хэ Л.К.． Влияние Ｒoucongrong (Herba Cistanch es Deserticolae) на репродуктивную токсичность у мышей, индуцированную гликозидом Leigongteng (Ｒadix et Ｒhizoma Tripterygii). J Tradit Chin Med, 2014, 34(3): 324-328．

［20］Ван Дэцзюнь, Шэн Шуцин, Лян Хун. Влияние Cistanche Deserticola на морфологию и гистохимию семенников и придатков мышей. Анатомические исследования, 2000, 22 (2): 101-103158

［21］Чжао Дунхай, Чжан Лэй, Чжан Янь и др. Терапевтический эффект и механизм действия фенилэтанолгликозидов из Cistanche Deserticola на вызванные циклофосфамидом нарушения сперматогенеза у мышей. Журнал Цзилиньского университета (медицинское издание), 2014, 40 (3): 612-615

［22］Ли И, Пэн И, Ван МЮ и др.． Метаболизм водного экстракта cistanches herba в желудочно-кишечном тракте человека in vitro: выяснение метаболического профиля на основе всесторонней идентификации метаболитов в желудочном соке, кишечном соке, кишечных бактериях человека и кишечных микросомах. J Сельскохозяйственный химик, 2017, 65 (34): 7447-7456．

［23］Сюй Шаньшань, У Канюй, Ту Синмин. Определение эхинацетина в водном экстракте цистанхе пустынного методом ВЭЖХ. Новая китайская медицина и клиническая фармакология, 2019, 30 (5): 598-601

［24］Цзян Пин, Сюй Цинхун, Чен Цунву и др. Влияние Jingui Shenqi Wan на экспрессию генов сигнального пути Nrf2 в ткани яичек мышей с повреждением яичек, вызванным циклофосфамидом. Китайский журнал андрологии, 2020 г., 26 (2): 160-166

［25］Ма Чаоян, Чжу Лицзюань, Луо Чэньси и др. Защитный эффект бетулиновой кислоты при повреждении печени, вызванном циклофосфамидом у мышей. пищевая наука, 2020, 41 (21): 147-153

［26］Хай Чжо, Сюн Сяньжун, Ма Хунчэн и др. Скрининг внутренних эталонных генов для флуоресцентного количественного ПЦР-анализа семенников мышей. Журнал Юго-Западного университета национальностей (издание естественных наук), 2020 г., 46 (5): 448-456

［27］ Guo XB, Zhai JW, Xia H и др.． Защитный эффект экзосом, полученных из мезенхимальных стволовых клеток костного мозга, против репродуктивной токсичности циклофосфамида связан с сигнальными путями p38MAPK/EＲK и AKT. Азиат Джей Андрол, 2021, 23(4): 386-391．

［28］ Лю М, Ли Х, Чжан Л и др.． Хлопковое масло смягчает последствия окислительного стресса, вызванного ишемическим инсультом, путем активации сигнального пути Nrf2. Мол Нейробиол, 2021, 58( 6): 2494-2507．

［29］ Ян И, Ву Зи, Ченг Ю Ли и др.． Ｒэсвератрол защищает клетки пигментного эпителия сетчатки от окислительного повреждения, модулируя активность СОД/МДА и активируя экспрессию Bcl-2.． Eur Ｒev Med Pharmacol Sci, 2019, 23( 1) : 378-388．

［30］Ма Сяоцин, Ван Цзе, Ху Цзюньпин и др. Фармакодинамическое исследование общих гликозидов фенилэтанола из Cistanche Deserticola на гентамицин-индуцированное острое повреждение почек у крыс. Журнал Синьцзянского медицинского университета, 2020 г., 43 (7): 942-946950

［31］ Хуан И, Ян И, Сюй И и др.． Ось Nrf2/HO-1 регулирует ангиогенез рака желудка посредством нацеливания на VEGF. Менеджер по раку Ｒes,2021,13( ​​1) : 3155-3169．

［32］ Чжао И, Ван И, Чжан М и др.． Защитное действие гинзенозидов ( 20Ｒ)-Ｒg3 на H 2 O 2-индуцированное повреждение клеток миокарда путем активации сигнального пути Keap-1 /Nrf2 /HO-1. Химик Биодайвер, 2021, 18 (4): e2001007.

［33］ Ле С, Пинг Л, Гу И и др.． Полисахарид чернил кальмара уменьшает индуцированное циклофосфамидом повреждение яичек через путь активации Nrf2/AＲE у мышей. Иран J Basic Med Sci, 2015, 18 (8): 827-831．