Определение содержания пяти соединений в сперме Rehmanniae и установление ее отпечатка ВЭЖХ

Таблица 3. Результаты теста восстановления (n=6)

2.4 Определение пробы

Шесть партий собранной Rehmannia были приготовлены в соответствии с методом «2.2.2», отобраны пробы и определены в соответствии с хроматографическими условиями, указанными в «2.1». Результаты определения содержания представлены в таблице 4. Результаты показывают, что среди пяти компонентов содержание рехмания гликозида D является самым высоким и варьируется от 0,460% до {{1 0}}.730%; содержание гликозида леонури занимает второе место и колеблется от 0,100% до 0,270%, причем содержание двух компонентов в пробах из разных производственных зон существенно не различается. В образце SX1, за исключением эхинакозида, содержание остальных четырех компонентов существенно выше, чем в других партиях образцов; Содержание эхинакозида, цистанхезида А и вербаскозида в ремании клейкой из разных производственных зон весьма различно и неравномерно.

ТРАВА ЦИСТАНША ССООТВЕТСТВИЕ ХОРОШЕГО КАЧЕСТВА

2.5 Установление и оценка сходства отпечатков пальцев ВЭЖХ Rehmannia Glutinosa

Хроматограммы и данные определения многокомпонентного содержания в Rehmannia Glutinosa были импортированы в программное обеспечение «Система оценки сходства хроматографических отпечатков пальцев китайской медицины (2012 Edition)», и была выбрана хроматограмма тестового образца SX1. в качестве эталонного спектра. Ширина временного окна была установлена ​​равной 0,10 мин, а для генерации наложенных спектров и эталонных спектров использовался медианный метод. Всего было идентифицировано 23 общих пика (см. рисунок 3). Сходство между отпечатками образца Rehmannia Glutinosa и эталона составляло 0,904~0,950, что указывает на то, что образцы Rehmannia Glutinosa из разных производственных зон, а также между сырой Rehmannia Glutinosa и приготовленной Rehmannia Glutinosa были схожими и имели хорошее качество.

Таблица 4. Результаты определения содержания 5 компонентов в сперме Rehmanniae/%

13. реманниозид Д; 17. леонурид; 19. эхинакозид; 20. кастанозид А; 21. актеозид

Рисунок 3. Наложение хроматограмм ВЭЖХ 6 партий Semen Rehmanniae (SX1-SX4, HN1, HN2) и эталона (R).

3 Обсуждение

3.1 Выбор хроматографических условий

В этом исследовании были исследованы четыре системы подвижной фазы: ацетонитрил-вода, ацетонитрил-0,1% раствор муравьиной кислоты, метанол-вода и метанол-0,1% раствор муравьиной кислоты. Результаты показали, что пять компонентов обладают хорошим эффектом разделения в ацетонитриловой системе; По сравнению с системой подвижной фазы ацетонитрил-вода пики гликозидов ремании клейкой и пустырника в подвижной фазе ацетонитрила-0,1% раствора муравьиной кислоты были более узкими и имели хорошую симметрию пиков. В то же время из-за разного поглощения ультрафиолета пятью компонентами содержание компонентов сильно различается. Чтобы более точно определить содержание каждого компонента и обеспечить равномерное распределение интенсивности поглощения пяти компонентов на одной хроматограмме, ультрафиолетовое поглощениеремания гликозид D, анализировали гликозид, эхинакозид, цистанхезид А и вербаскозид пустырника и выбирали определение переменной длины волны, то есть 0-24 мин, первый выделенный гликозид ремании определяли при 203 нм и 24-40 мин, разделенные эхинакозид, цистанхезид А и вербаскозид определяли при 330 нм. Кроме того, в этом исследовании также изучались эффекты экстракции метанола, 70% раствора метанола, 50% раствора метанола и 50% раствора ацетонитрила в качестве растворителей для экстракции. Результаты показали, что 70% раствор метанола в качестве растворителя для экстракции лучше растворяет тестируемые компоненты, а экстрагированный образец содержит меньше примесей. Поэтому в этом исследовании в качестве растворителя для экстракции был выбран 70% метанол, а в качестве подвижной фазы - раствор ацетонитрила-0,1% муравьиной кислоты, а для определения содержания пяти компонентов в ремании использовалась переменная длина волны.

3.2 Анализ результатов определения проб

Из результатов определения видно, что после пропаривания, за исключением незначительного увеличения содержания эхинакозида, содержание остальных четырех компонентов значительно снизилось, особенно содержание леонурида и цистанхезида А; содержание ремании гликозида D и цистанхезида А в ремании клейкой из одного и того же производственного участка несколько отличалось, а содержание леонуридида, эхинакозида и вербаскозида существенно отличалось; содержание эхинакозида в Rehmannia Glutinosa из производственной зоны Хэнань было значительно выше, чем в образцах из производственной зоны Шаньси, а содержание остальных четырех компонентов несколько отличалось. В то же время, по данным ВЭЖХ-отпечатка, установленного в данном исследовании, сходство между 6 партиями образцов Ремании и контрольным отпечатком составило 0,904~0,950, что указывает на то, что основной химический компоненты шести партий образцов Rehmannia до и после обработки были очень однородными.

Таким образом, метод определения содержания и отпечаток ВЭЖХ, установленные в этом исследовании, являются точными, надежными и обладают хорошей специфичностью. Они могут быть использованы для характеристики изменений компонентов и степени переработки Rehmannia Glutinosa до и после обработки, а также обеспечить техническую поддержку контроля качества Rehmannia Glutinosa. Однако данное исследование имеет недостатки, заключающиеся в небольших партиях выборки и неполном охвате производственных площадей, что требует дальнейшего анализа и проверки.

Ссылки

[1] Комитет китайской фармакопеи. Фармакопея Китайской Народной Республики: Том 1 [S]. Пекин: China Medical Science and Technology Press, 2020: 129-130.

[2] Сюй Цзюнь, Фу Чжетун. Исследование исторической эволюции названий обработанной Rehmannia Glutinosa и изучение ее эффективности [J]. Китайская патентная медицина, 2017 г., 39 (9): 1913-1916.

[3] Чжу Цзюэ, Чжу Сянмэй, Ши Юхэ и др. Прогресс исследований Rehmannia Glutinosa и прогнозный анализ ее маркеров качества [J]. Китайская патентная медицина, 2022 г., 45 (2): 1273-1281.

[4] Чэнь Цзиньпэн, Чжан Кэся, Лю И и др. Ход исследований химического состава и фармакологического действия Rehmannia Glutinosa [J]. Китайская травяная медицина, 2022, 52 (6): 1772-1784.

[5] Ли Хунвэй, Мэн Сянлэ. Ход исследований химических компонентов и фармакологического действия Rehmannia Glutinosa［J］.

Исследование по оценке лекарств, 2015 г., 38(2): 218-228.

[6] Чжан Бойонг, Цзян Чжэньцзо, Ван Юэфэй и др. Анализ химических компонентов свежей Rehmannia Glutinosa, сырой Rehmannia Glutinosa и приготовленной Rehmannia Glutinosa с помощью UPLC/ESI-Q-TOF MS［J］. Китайская патентная медицина, 2016, 38(5): 1104-1108.

[7] Чжан Лисянь, Вэй Юэ, Ли Фейфэй и др. Распознавание отпечатков пальцев и определение многокомпонентного содержания различных обработанных продуктов Rehmannia Glutinosa［J］. Сельскохозяйственные науки провинции Хубэй, 2023, 62(9): 135-141.

[8] Чэнь Цзиньпэн, Чжан Кэся, Лю И и др. Ход исследований химических компонентов и фармакологического действия Rehmannia Glutinosa［J］. Китайская фитотерапия, 2021, 52 (6): 1772-1784.

[9] Тао И, Цзян Яньхуэй, Тан Кэцзянь и др. Сравнительное исследование химических компонентов Rehmannia Glutinosa до и после обработки методом UHPLC-Q-TOF/MS［J］. Новые китайские лекарства и клиническая фармакология, 2016, 27(1): 102-106.

［10］ Сюй Чжо, Дай Синьсинь, Су Шулань и др. Динамическое накопление нуклеозидных и аминокислотных компонентов в Rehmannia Glutinosa на основе UPLC-TQ-MS［J］. Китайская травяная медицина, 2021, 52 (23): 7323-7330.

［11］ Ли Юйцзяо. Исследование технологии переработки и механизма «девяти пропариваний и девяти выдержек» Rehmannia Glutinosa［D］. Цзинань: Шаньдунский университет, 2023.

［12］ Ван Юэ, Чжоу Цяо, Чжан Сюэлань и др. ВЭЖХ Одновременное определение содержания восьми компонентов в Rehmannia Glutinosa и различных продуктах ее переработки с помощью UPLC-анализа отпечатков пальцев и многоиндексного определения содержания компонентов [J]. Китайские медицинские материалы, 2021, 44 (7): 64-68.

[13] Го Сяокай, Сюэ Шуцзюань, Чэнь Суйцин. Оценка качества Rehmannia Glutinosa на основе определения отпечатков пальцев UPLC и многоиндексного определения содержания компонентов [J]. Китайские лекарственные материалы, 2021, 44 (4): 917-923.