Методы контроля качества цистанхе пустынной

для получения дополнительной информации:ali.ma@wecistanche.com

Ши Цзыи, Ву Юн, Чжу Юэмэй и др.

Традиционная китайская медицинаЦистанхеэто сочный стебельЦистанхе пустыннаяYC Ma или Cisanche tubulosa (Schenk) Wight с сухими чешуйчатыми листьями. Он имеет функции тонизирующего ян почек, питания эссенции и крови, увлажнения кишечника и слабительных средств и т. Д. Он в основном используется при дефиците ян почек, дефиците эссенции и крови, импотенции и бесплодии, болезненности и слабости талии и коленей, слабости. мышц и костей, сухость кишечника и запоры. Современные фармакологические исследования показывают, чтоЦистанхеимеет много функций, таких как улучшение сексуальной функции, сопротивление болезни Альцгеймера и болезни Паркинсона, улучшение способности к обучению и памяти, омолаживание, снятие усталости, защита печени и слабительное [4]. Большое количество исследований подтвердило, что фенилэтаноидные гликозиды вЦистанхе пустыннаяоказывают очевидное влияние на улучшение способности к обучению и памяти, сопротивляемость болезни Альцгеймера и болезни Паркинсона (4, олигосахариды и полиолы оказывают слабительное и слабительное действие 64 ). «Фармакопея Китайской Народной Республики» измеряет только содержание фенилэтаноидных гликозидов эхинакозида и вербаскозида вЦистанхепустыня, но не измеряет активные компоненты его слабительного действия, поэтому трудно добиться всестороннего анализа лекарственного сырьяЦистанхепустыня. Контроль качества. Чтобы преодолеть это ограничение и создать многоиндексную систему оценки качества, связанную с основными функциями и показаниямиЦистанхепустыня, это исследование использовало HPLCELSDP4 для разработки метода количественного анализа бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы в лекарственных материалахЦистанхепустыня. Кроме того, 58 партийЦистанхепустынялекарственные материалы различного происхождения и 10 партий лекарственных материаловЦистанхев районе Хотан Синьцзяна, которые могут служить ориентиром для всестороннего контроля качества и оценки лекарственных материаловЦистанхепустыняв будущем.

Нажмите, чтобы получить преимущества экстракта цистанхе

1 Прибор и реактивы

1.1 Инструменты

электронные весы Sartorius BT25 S, BS 124 S (Beijing Sartorius Balance Co., Ltd.); высокоэффективная жидкостная хроматография Agilent 1100; ALLTECH 2000ES Детектор испарительного светорассеяния (EISD); Ультразвуковой очиститель KQ 250 (Kunshan Ultrasonic Instrument Ltd). 1.2 Реагенты

Контрольное вещество: бетаин (партия: {{0}}, чистота: 99,2 процента), маннит (партия: 10053-201304, чистота: 99,0 процента), D-фруктоза (партия: 111504-201703 , чистота: 99,8 процента), D - безводная глюкоза (номер партии: 110833-201506, чистота: 99,9 процента), сахароза (номер партии: 111507-201303, чистота: 99,8 процента), все закуплено в Китайском национальном институте. по контролю за продуктами и лекарствами.

Лекарственные материалы изЦистанхепустынябыли собраны во Внутренней Монголии, Синьцзяне, Ганьсу и других местах, всего 58 партий. Они были идентифицированы профессором Ту Пэнфэем из фармацевтической школы Пекинского университета как высушенные мясистые стебли.ЦистанхепустыняYCMa растения Lidangaceae, как показано в таблице 3.

Лекарственные материалы изЦистанхепустынябыли собраны в районе Хотан, Синьцзян, всего 10 партий. Они были идентифицированы профессором Ту Пэнфэй из Фармацевтической школы Пекинского университета как высушенные мясистые стебли с чешуйчатыми листьями Cistanche tubulosa (Schenk) Wight растения Liedangaceae, как показано в таблице 4.

1.3 Реагенты

Ацетонитрил является хроматографически чистым (Tianjin Boshiqi Technology Development Co., Ltd.), метанол - хроматографически (Tianjin Saifu Century Technology Development Co., Ltd.), а вода - сверхчистой водой.

2 Методы и результаты

2.1 Хроматографические условия

Хроматографическая колонка представляла собой колонку с полимерным гелем ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 мм × 4,6 мм, 5 мкм); подвижная фаза – ацетонитрил-вода (77∶23); скорость потока 0,7 мл·мин-1; температура колонки 25 градусов; Детектор светорассеяния (ELSD): температура дрейфовой трубки составляла 100 градусов, а скорость потока газа-носителя составляла 3 л·мин-1.

2.2 Приготовление эталонного раствора

Возьмите соответствующее количество эталонного вещества бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы, точно взвесьте его, добавьте воду, чтобы приготовить смешанный раствор, содержащий 0,25 мг бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы на 1 мл, хорошо встряхнуть и получить.

2.3 Приготовление тестового раствора

Возьмите примерно 1,0 гЦистанхелекарственного порошка (пропущенного через сито № 4), точно взвесить, поместить в коричневую мерную колбу вместимостью 1{12}}0 мл, точно добавить 50 мл 50-процентного метанола, плотно закупорить, встряхнуть, взвесить его, замочить на 30 мин, а затем обработать ультразвуком (мощность 250 Вт, частота 35 кГц) на 40 мин, вынуть, дать остыть, снова взвесить, добавить 50-процентный метанол для уменьшения массы, хорошо встряхнуть и оставить это стоять. Точно аспирируют 5 мл супернатанта, помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят до метки 50%-ным метанолом, хорошо встряхивают и фильтруют через микропористую мембрану 0,2 мкм.

2.4 Метод определения

Точно отбирают 5 и 10 мкл эталонного раствора и 5 мкл испытуемого раствора соответственно, вводят их в жидкостный хроматограф, записывают площадь пика и вычисляют по логарифмическому уравнению двухточечного метода внешнего стандарта.

2.5 Проверка пригодности системы

В соответствии с условиями хроматографии по п. 2.1 точно отбирают по 5 мкл эталонного раствора и испытуемого раствора соответственно и вводят их в высокоэффективную жидкостную хроматографию, измеряют и записывают хроматограмму, как показано на рисунке 1. Хроматографические пики испытуемого образца показали то же время удерживания, что и хроматографические пики эталонного вещества, разрешение было хорошим, и условия хроматографии были приемлемыми.

Примечание: A. Контрольное вещество; Б.Цистанхеобразец № 49; 1. бетаиме; 2. фнукезе; 3. маннибол; 4. глюкоза; 5. сукреве

Рис. 1. Профили ВЭЖХ эталонного вещества и образца Цистанхе № 49

2.6 Исследование линейных отношений

Возьмите соответствующие количества бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы в качестве эталонных веществ, точно взвесьте их и добавьте воды, чтобы каждый 1 мл содержал бетаин 0.496 0 мг, маннит {{3} }.994 0 мг, фрукты 1.0126 мг, глюкоза 1.0882 мг и сахароза 0.9922 мг. 0.0992, 0.2480, 0.4960, 0,9920, 1,9840, 2,9760 мк, маннит 0,1988, 0,4970 , 0,9940, 1,9880, 3,9760, 5,9640 мк, фруктоза 0,5063, 1.012 6. 2.025 2. 4.050 4. 5.063 0. Были введены и определены хроматографические условия, и была записана площадь пика; затем значение логарифма X (мкг) каждого количества введенного эталонного вещества использовали в качестве абсциссы, а значение логарифма Y площади пика было ординатой, и была построена стандартная кривая. Результаты представлены в таблице 1.

Таблица 1 Результаты исследования линейной зависимости

2.7 Проверка точности

Аккуратно наберите испытуемый раствор (образец № 49) при указанных выше хроматографических условиях, непрерывно введите 6 раз, измерьте площадь пика каждого хроматографического пика и рассчитайте его значение RSD. Результаты ОСО площадей пиков бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы составили 0,84 %, 2,56 %, 1,27 %, 2,62 % и 1,52 % соответственно, что указывает на то, что точность прибора, используемого в это исследование было хорошим. 2.8 Испытание на повторяемость

Возьмите 6 образцовЦистанхепустыня(образец № 49), готовят испытуемый раствор по методике п. 2.3, измеряют площадь пика каждого хроматографического пика и рассчитывают соответствующее содержание. Результаты. Среднее содержание бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы (n=6) составило 7,93%, 7,27%, 8,74%, 2,75% и 4,81%, а ОСО составило 2,83%, 1,94%, {{ 18}},97% и 2,60% соответственно. процентов, 1,40 процента, что указывает на хорошую воспроизводимость метода. 2.9 Испытание на стабильность

Берут испытуемый раствор (образец № 49), вводят его через 0, 4, 8, 12, 16 и 24 ч после подготовки к измерению и вычисляют значение ОСО каждого хроматографического пика. Результаты. ОСО бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы составили 0,61%, 1,92%, 1,34%, 2,83% и 0,69% соответственно, что указывает на то, что испытуемый раствор имел хорошие стабильность в течение 24 часов. 2.10 Тест восстановления

Возьмите 6 образцовЦистанхепустыняс известным содержанием (образец № 49), точно взвесьте 0,25 г, поместите их в коричневую мерную колбу вместимостью 50 мл и точно наберите 25 мл смешанного эталонного раствора с концентрацией 1: 1 (который содержит {{10}},7900 мг бетаина). мл-, фруктозы 0,7236 мг·мл-1, маннита 0,8812 мг·мл-1, глюкозы 0,2708 мг·мл-1, сахарозы 0,4883 мг·мл-'), и испытуемый раствор готовили по методу 2.3. Детектировали согласно указанным выше хроматографическим условиям, рассчитывали его извлечение, результаты приведены в таблице 2, что свидетельствует о хорошей точности метода.

Таблица 2: Результаты измерения степени извлечения образца 5 тестируемых компонентов (n=6)

3 Обсуждение

3.1 Выбор компонентов индекса

Сумма олигосахаридов вЦистанхеявляются эффективными частямиЦистанхедля слабительных. Автор проанализировал химический состав этой части с помощью ЖХ-МС и эталонного вещества и определил, что эта часть в основном состоит из бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы. Поэтому эти 5 компонентов были выбраны в качестве компонентов индексаЦистанхепустыняи был установлен метод определения содержания.

3.2 Выбор хроматографических колонок

Пять испытуемых компонентов, бетаин, маннит, фруктоза, глюкоза и сахароза, являются относительно полярными и не могут удерживаться в колонке Cn с обращенной фазой. Как правило, пики появляются в течение 1-2 минут, и компоненты невозможно разделить. Аминоколонки Waters Bonoapar NH (300 мм × 4,6 мм, 10 мкм) и Phenomenex Bondclone 10 NH (300 мм × 3,9 мм, 10 мкм) для разделения сахара и полиолов, а также аминоколонки на полимерной основе Prevail Carbohydrate ES (250 мм) ×4,6 мм, 5 мкм), ShodexAshaipak NH2P-50 4E (250 мм ×4,6 мм, 5 мкм). Результаты показывают, что аминоколонка с полимерной матрицей может эффективно разделять эти пять компонентов.

3.3 Выбор детектора

Пять испытуемых компонентов не имеют явного УФ-поглощения, и содержание УФ-детектора не может быть определено напрямую. Таким образом, в этой статье был установлен метод количественного анализа компонентов сахарного спирта.Цистанхепустыняс использованием ВЭЖХ-EISD. Результаты показывают, что метод обладает высокой чувствительностью, хорошей воспроизводимостью и высокой точностью и может быть использован для контроля качестваЦистанхепустыняи другие лекарственные материалы, содержащие бетаин и сахарные спирты.

3.4 Исследование способа приготовления испытуемого раствора

Сравнивали различные растворители для экстракции, включая воду, 30-процентный метанол, 50-процентный метанол, 70-процентный метанол, метанол и т.д. Результаты показали, что, за исключением несколько более низкой степени экстракции 70-процентного метанола и метанольного растворителя, не было существенной разницы в других растворителях, поэтому был сделан прямой выбор. В качестве растворителя использовали 50-процентный метанол по пункту «Определение содержания»Цистанхев Фармакопее Китайской Народной Республики, и его готовили по методике приготовления соответствующего испытуемого раствора, а затем разбавляли в 5 раз для определения сахароспиртовых компонентов.

3.5 Обнаружение и анализ проб с разной основой

В этом исследовании содержание 5 компонентов в 58 партияхЦистанхепустыняи 10 пачекЦистанхепустыняЛекарственное сырье определено. Массовые доли бетаина, маннита, фруктозы, глюкозы и сахарозы в 58 партияхЦистанхепустыняобразцы были 2,73% -17,65%, 2,46% -16,34%, 2,52% {{10}},74%, 0,97% -14,06% , 3,15 процента -27,16 процента; Содержание маннита, фруктозы и глюкозы составляло 1,00 процента -13,04 процента, 2,98 процента -8,85 процента, 1,09 процента -5,33 процента в 10 партияхЦистанхепроб соответственно, а бетаин и сахароза не обнаружены. Состав лекарственных материалов сильно различается между партиями, и нет правила, которому нужно следовать, что предполагает необходимость установления стандарта определения содержания для контроля качества лекарственных материалов. Кроме того, этот метод позволяет эффективно различать два видаЦистанхебазовые растения, а именноЦистанхене содержит бетаин и сахарозу, при этом содержание этих двух компонентов выше вЦистанхе пустынная. Это также дает основу для анализа различий в текстуре и среде обитания двух лекарственных материаловЦистанхе пустынная. По сравнению с лекарственным материаломЦистанхе пустынная, текстура более мягкая, и в местном масштабе он известен как «Soft Dayun», в то время какЦистанхеназывается «Чай Даюн», потому что он содержит сахарозу (3,15% ~ 27,16%). ).Цистанхе пустыннаяв основном распространен в Алхе во Внутренней Монголии, в то время какЦистанхев основном распространен в районе Хотан в Синьцзяне, где температура выше, чем в районе Алкса, и в этом районе часто используется капельное орошение, но как только температура падает,Цистанхепонесет серьезный ущерб. Повреждение от замерзания, с одной стороны, имеет определенную связь с высоким содержанием воды, а с другой стороны, имеет какое-то отношение к содержащимся в нем ингредиентам. Бетаин 243 является важным осмотически регулирующим веществом, которое играет важную роль в повышении стрессоустойчивости растений, например устойчивости к засолению, засухе, низким температурам и яркому свету. Именно из-за высокого содержания бетаина, содержащегося вЦистанхе пустыннаячто он имеет лучшую устойчивость к соляно-щелочному, засухе и морозу, чемЦистанхе, и имеет относительно широкое распространение.

3.6 АнализЦистанхепустыняобразцы разного происхождения

Среди 58 участков пустыницистанхеобразцы лекарственного материала, 45 партий были произведены из Лиги Алха, Внутренняя Монголия, 3 партии были получены из Ваньеди (округ Дэнкоу), Внутренняя Монголия, и 1 партия была неизвестна. Все 49 партий лекарственного сырья имели различное содержание 5 компонентов. Однако существенной разницы нет. Причиной анализа может быть то, что все лекарственные материалы производятся в одной и той же пустынной местности, экология и географическая среда аналогичны, а качество продукции относительно однородно и стабильно. 3 партии произведены в уезде Минцинь провинции Ганьсу и 6 партий в Синьцзяне. Согласно анализу на рисунке 2, по сравнению с лекарственными материалами, произведенными во Внутренней Монголии, основное отличие отражается в содержании фруктозы и сахарозы. Содержание сахарозы в лекарственных материалах было относительно высоким, но, учитывая небольшое количество образцов из двух источников, этот вывод необходимо проверить, собрав больше образцов. 3.7 Резюме

В этом исследовании ВЭЖХ Wang ISD была создана для одновременного определения 5 активных ингредиентов слабительных средств, что обеспечило более удобный, эффективный и точный метод контроля качестваЦистанхе пустынная, и послужили основой для повышения стандарта качества и дальнейшего развитияЦистанхепустыня. содержательная ссылка.

использованная литература

【1】 Государственная фармакопея. Фармакопея Китайской Народной Республики: А 【M】. Пекин: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015; 135.

【2】 Сун Чжихун, Лэй Ли, Ту Пэнфэй. Прогресс исследований фармакологической активностиЦистанхеВыставка. Китайская фитотерапия, 2003, 34(9); 113415.

【3】 Сюэ Хайянь. Jiao Danyuan, Yao Jun. Исследовательский статус фармакологических эффектов общего количества глюкозидов в кинзе [J]. Китайский журнал клинической фармакологии, 2018 г., 34(4): 486-488.

【4】 Ан Чунна, Чжан Хуннин, Пу Сяопин. Успехи исследований нейрофармакологииЦистанхе пустыннаяВыставка [J]. Китайский фармацевтический журнал, 2011 г., 46(12): 887-890.

【5】 Гао Юхун, Кэ Зунджи. Прогресс в исследованиях фармакологических эффектовЦистанхе пустыннаяпри лечении болезни Альцгеймера []. Шанхайский журнал традиционной китайской медицины, 2018 г., 52(1): 109-112.

【6】 Чжан Байшунь, Чжао Сюэвэнь, Чен Шуанхоу и др. Слабительное действие изолированных частейЦистанхе пустыннаяЭкспериментальные исследования □. Китайский журнал традиционной китайской медицины, 2003 г., 10(1I1): 31-32.

【7】 Чжан Байшунь, Чен Шуанхоу, Чжао Сюэвэнь и др.Цистанхе пустыннаяэкстракт галактита Исследование доза-реакция на действие стула [J]. Китайский журнал традиционной китайской медицины, 2003 г., 10 (12): 28-29.

【8】 Гао Юньцзя, Цзян Юн, Дай Фан и др. Исследования лекарственных веществЦистанхе пустыннаядля слабительных исследований [J]. Современная китайская медицина в Китае, 2015 г., 17(4): 307-311.

【9】 Бао Чжун, Цай Хун, Цзян Юн и др. Три вида деятельностиЦистанхе пустыннаяпри различных воздействующих факторах. Количественный анализ компонентов. Журнал китайской травяной медицины, 2013, 44 (22): 32233230.

【10】 Бао Чжун, Цай Хун, Цзян Юн и др. ОпределениеЦистанхе пустыннаяпо HPLCEISD Content of Galactitol. Journal of Pharmaceutical Analysis, 2007, 27(7): 1004-1006.

【11】 Чжао Куйцзюнь, Лян Лицзюань, Би Дан и др. HPLCELSD определениеЦистанхеи пробирке Содержание галактита вЦистанхе[Дж]. Китайский журнал традиционной китайской медицины, 2012 г., 19(8): 52-54.

【12】 Ван Гуйпин, Сюэ Сяоминь, Лу Чао и др. Влияние бетаина на повышение стрессоустойчивости растений и механизм его действия. Сельскохозяйственный журнал Цзянси, 2014, 26(8): 2226.

【13】 Ван Цинцзе, Ван Ли. Обзор исследований генов холодоустойчивости растений. Сельская экономика и технологии, 2018, 29(8): 23-25.