Экспериментальное исследование защитного действия цистанческих общих гликозидов (CTG) на почечное ишемическое реперфузионное повреждение
Mar 09, 2022
Контакт: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Электронная почта:audrey.hu@wecistanche.com
ЧЖУ Цзюнь, ЧЖАО Си
Абстрактный:Цель Установить крысиную модель геморрагического шока и реанимации таким образом, чтобы наблюдать защитный эффектцистанхе общие гликозиды( КТГ)на почкахишемо-реперфузионное повреждение. Метамфетаминовые крысы SD были рандомизированы в фиктивную операционную группу, ударную и реанимационную группу (экспериментальную группу) и группу КТГ, с 10 крысами в каждой. После моделирования крысы в группе КТГ получали внутрибрюшинную инъекцию КТГ 400 мг/кг. В экспериментальной группе и группе фиктивной операции вводили физический физиологический раствор 3 мл. Уровни Cr, BUN и Cys - C были определены для выявления функции почек в каждой группе. Проточная цитометрия использовалась для выявления скорости апоптоза почечных клеток. ИФА использовалась для выявления экспрессии XIAP в почечной ткани. Результаты По сравнению с экспериментальной группой, уровни Cr, BUN и Cys - C, по-видимому, были снижены вКТГгруппа (Р < 0,01),="" а="" апоптоз="" почечных="" клеток="" снижен="" (р="">< 0,01).="" ктг="" значительно="" улучшила="" экспрессию="" xiap=""><0.05). conclusion="">КТГоказывает защитное действие наишемическая реперфузияповреждение почек у крыс, которое, возможно, связано с продвижением экспрессии XIAP.
【Ключевые слова】 Почки; Ишемическая реперфузионная травма; Цистанхе Общие гликозиды; СИАП; Клеточный апоптоз
Ишемия-реперфузионная (I/R) травмаявляется распространенным патофизиологическим явлением поражения почек в процессе геморрагического шока, тяжелой травмы, трансплантации почки, хирургии опухоли почек. Исследования показали, что апоптоз является важным звеном в повреждении функции почек, вызванном повреждением I/R [1]. X-хромосомно-связанный ингибитор белка апоптоза (XIAP) является одним из сильнейших эндогенных ингибиторов апоптоза, обнаруженных до сих пор [2]. Существует несколько исследований антиапоптотического эффекта XIAP в почечной ткани после повреждения I/R.Цистанхе общие гликозиды(CTG) входят в список фенилэтанол гликозидных соединений, извлеченных изЦистанчеимеют разнообразные биологические функции. Существует несколько исследований по его почечной защите после повреждения I /R. В этом эксперименте была установлена крысиная модель реанимации геморрагического шока и модель системного повреждения I/R для изучения защитного эффекта предварительной обработки КТГ на почку от повреждения I/R и изучения его возможного механизма.
Эффекты цистанча: профилактикаИшемия-реперфузионная (I/R) травма
1 Материал и методы
1.1 Экспериментальные материалы
1.1.1 Лабораторные животные 30 чистых здоровых самцов SD крыс, предоставленных Экспериментальным центром Шанхайского университета традиционной китайской медицины, номер сертификата животного: SYXK (Shanghai) 2009-0069, масса тела (320 ± 30) г.
1.1.2 Экспериментальный реагентКТГ(приобретено у Zhejiang Hangzhou Xinghui Tianli Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии: 20081516); пентобарбитал натрия (номер партии: P3761), йодид пропидия (PI), родамин123 (оба приобретены (у Sigma, США); Набор для определения Rat XIAP ELISA Kit (приобретен у Shanghai Kemin Biotechnology Co., Ltd., номер партии CSB-ELO26172MO).
1.1.3 Лабораторный прибор считывателя микропластин (American Thermo Company); Многопараметрический физиологический детектор (приобретен у компании NIHON KOHDEN, Япония); Проточный цитометр (приобретен у компании Becton-Dickinson, США); 24 Г трокар (Шаньдун Цзеруй Медицинская аппаратура Компания).
1.2 Экспериментальные методы
1.2.1 Препарат на животных моделях крыс натощак за 12 часов до эксперимента и анестезировали внутрибрюшинной инъекцией пентобарбитала натрия (50 мг/кг). Крыс фиксировали в лежачем положении, а в левой нижней части живота делали разрез в 3 см и отделяли. В бедренную артерию вводится троакар 24 Г, подключается многопараметрический физиологический тестер, гепаринизируется шприц объемом 20 мл, а артериальное давление падает до 40 мм рт.ст. Артериальное давление падает до 40 мм рт.ст. Считается, что шок начался, и артериальное давление сохраняется в течение 90 минут. Это (13 ± 3) мл, а затем аутологичная кровь в шприце медленно возвращается. Требуется около 30 минут, чтобы восстановить артериальное давление до более чем 90% от основного значения. Считается, что реанимация прошла успешно [3]. Вытащите иглу троакара, перевязать бедренную артерию и зашить разрез. После того, как крысы проснулись, их вернули в клетку для наблюдения, и у них был свободный доступ к пище и воде. Через 24 часа после реанимации крыс анестезировали пентобарбиталом натрия (50 мг/кг) путем внутрибрюшинной инъекции, лапаротомии, а из нижней полой вены было собрано 5 мл крови. Крыс сразу же убили, а левую и правую почки вывезли для использования.
1.2.2 Группа животных и введение 30 крыс были случайным образом разделены на группу фиктивной хирургии, группу шоковой реанимации (экспериментальную группу) и группу КТГ, с 10 крысами в каждой группе.
Экспериментальной группе внутрибрюшинно вводили 3 мл нормального физиологического раствора за 2 часа до кровопускания. ВКТГКТГ давали за 2 ч до кровопускания крыс, и дозу вводили в брюшную полость в дозе 400 мг/кг. Группа фиктивной операции подверглась только анестезии, лапаротомии и разделению троакара бедренной артерии и разрезов швов и т. д., кровопускание и реанимация не проводились, а остальные были такими же, как и экспериментальная группа.
1.3 Показатели и методы тестирования
1.3.1 Определение креатинина крови (Cr), азота мочевины (BUN), цистатина C Cr, BUN и цистатина C определяется лабораторией нашей больницы. Цистатин С является эндогенным маркером изменения скорости клубочковой фильтрации. При нарушении функции почек скорость клубочковой фильтрации снижается и концентрация цистатина С в крови может увеличиваться более чем в 10 раз. Диагностическая точность цистатина С значительно лучше, чем у креатинина сыворотки крови.
1.3.2 Определение скорости апоптоза клеток Проточная цитометрия использовалась для выявления скорости апоптоза клеток почек. Возьмите почку и измельчите ее лезвием, добавьте немного PBS и перенесите в пробирку. Добавьте 0,3% трипсина для пищеварения на водяной бане при температуре 37 °C и инкубируйте в течение 20 мин. Когда вещество в пробирке станет мутным, добавьте в два раза PBS для остановки пищеварения, отфильтруйте 300-сетчатой нейлоновой сеткой, отбросьте примеси и используйте низкотемпературную центрифугу Centerrifuge при 1500 г / с в течение 5 мин, выбросьте супернатант, отрегулируйте концентрацию в клетке до 1 × 106 ~ 1,5 × 106 / мл, возьмите 0,4 мл вышеуказанной клеточной суспензии, и добавить 10 мкл/мл Родамина123 0,4 мл, инкубировать на водяной бане 37 °C, защищенной от света, закрыть пробирку, промыть дважды PBS через 30 мин, затем центрифугировать при 1500 г/с в течение 5 мин, выбросить надосадочный материал и снова промыть таким же образом. Добавьте PI 0,4 мл, окрашивайте в течение 15 мин и проверьте процент нормальных, некротических и апоптотических клеток в почках. По сродству этих двух красителей в различных типах клеток известно, что только клетки PI-цвета являются мертвыми клетками, только цветные клетки Rhodamin123 являются живыми клетками, и обе цветные клетки являются апоптотическими клетками.
1.3.3 Иммуноферментный анализ (ИФА) использовался для обнаружения экспрессии XI-AP в тканях почек крыс. Брали почки каждой группы, а свежие ткани почек обрабатывали тканевым лизатом. Центрифуга со скоростью 1500 г/с в низкотемпературной центрифуге в течение 5 мин. Возьмите супернатант и действуйте в соответствии с инструкциями XI-AP ELISA Kit. Shanghai Jiaoda Fenghe Technology Co., Ltd. отвечает за тестирование.
1.4 Статистическая обработка
Все данные были статистически проанализированы с использованием программного обеспечения SPSS17.0, и данные были выражены как среднее ± стандартное отклонение (x ± с) и P<0.05 indicated="" that="" the="" difference="" was="" statistically="">
цистанхе общие гликозиды
2 результата
2.1 Показатели функции почек Cr, BUN, Cystatin C Сравнение Cr, BUN, Цистатина C в экспериментальной группе было значительно выше, чем в группе фиктивной операции (P<0.01), indicating="" that="" the="" rat="" kidney="" i/r="" model="" was="" prepared="">
По сравнению с экспериментальной группой, значения Cr, BUN и цистатина C вКТГгруппы были значительно сокращены, а разница была статистически значимой (P<0.01). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Таблица 1 Сравнение индексов функции почек Cr, BUN и Цистатина C крыс в каждой группе (x ± с)
Примечание: По сравнению с фиктивной оперативной группой, P<0,01; по="" сравнению="" с="" экспериментальной="" группой,=""><>
2.2 Скорость апоптоза почечных клеток и экспрессия XIAP в почечной ткани. Лишь несколько клеток в почечной ткани фиктивной операционной группы подвергаются апоптозу.
Количество апоптозов в экспериментальной группе было значительно увеличено, а разница была статистически значимой по сравнению с группой фиктивной операции (P<0.01); the="" number="" of="" apoptosis="" in="" the="" ctg="" group="" was="" decreased="" compared="" with="" the="" experimental="" group,="" and="" the="" difference="" was="" statistically="" significant="" (p=""><0.01)>
Фиктивная операционная группа имела только слабую экспрессию XIAP, в то время как экспериментальная группа имела значительное увеличение экспрессии XIAP (P<0.01). compared="" with="" the="" experimental="" group,="" the="" ctg="" group="" can="" significantly="" increase="" the="" expression="" of="" xiap=""><0.05). the="" results="" are="" shown="" in="" table="">
Таблица 2 Сравнение скорости апоптоза и экспрессии XIAP клеток почек крыс в каждой группе (x± s)
Примечание: По сравнению с фиктивной операционной группой, aP<0. 01;="" по="" сравнению="" с="" экспериментальной="" группой,="" b=""><0. 05,=""><0.>
3 Обсуждение
Механизм повреждения почек I/R очень сложен. Это патологический процесс, который происходит по многим путям под действием различных факторов, таких как перегрузка ионами кальция, повреждение перекисного окисления липидов, апоптоз и некроз, среди которых эндогенные каспазы Каспазозависимый апоптоз является одной из основных форм повреждения почечных канальцевых эпителиальных клеток, вызванного I/R повреждением почек [4]. Ингибитор семейства белков апоптоза (IAP) является единственным ингибитором каспазы, обнаруженным в клетках млекопитающих до сих пор, который может эффективно предотвращать возникновение апоптоза. XIAP является самым сильным ингибирующим каспазой членом семейства IAP, который может ингибировать клеточный апоптоз, вызванный различными патологическими раздражителями, и оказывать защитное действие на поврежденные органы [5].
В настоящее время метод установления почечных I/R повреждений животных моделей в основном заключается в удалении одной стороны почки и зажатии другой стороны почечной ножки или почечной артерии [6] для имитации состояния трансплантации почки. В данном исследовании автор использовал геморрагическую шоковую/реанимационную модель, которая ближе к патофизиологическому процессу системной ишемии-реперфузии, возникающему при клиническом травматическом шоке. В этом эксперименте в крови BUN, Cr и цистатин у SD крыс количество C значительно увеличивается, а функция почек сильно нарушается. Это идеальная животная модель для изучения I/R повреждения почек.
КТГ является важным лечебным компонентом традиционной китайской медициныЦистанче.Цистанче, который является теплым по своей природе, сладким и соленым, относится к меридиану почек и толстой кишки и первоначально содержался в Materia Medica Шэньнуна. «Бен Цзин, — говорит: «Поддерживает пять родов и семь травм, питает середину, питает пять внутренних органов, укрепляет инь и питает сущность и ци». Также».Цистанчеиспользуется в моей стране в течение двух тысяч лет. В прошлом он занимает первое место по формулам, повышающим силу, и второе место после женьшеня в питательных формулах.Цистанчемочьулучшают половую функцию, регулируют нейроэндокрин, улучшают иммунную функцию организма. Антиоксиданты, способствуют метаболизму материала, защищают ишемический миокард и другие функции. В качестве основного лекарственного ингредиентаЦистанче, КТГ имеет множество функций. Исследования по церебральному мозгуишемия-реперфузиямодель
Исследования показали, чтоКТГможет уменьшать возбуждающие аминокислоты в мозговой ткани после ишемии-реперфузии и защищать мозговую ткань SD крыс [7]. КТГ оказывает антиоксидантное действие на ткани мышей и оказывает определенное защитное действие на острую гипоксию головного мозга у мышей и повреждение сердечной мышцы у мышей [8]. КТГ может значительно улучшить нейроповедение модельных мышей Паркинсона и ингибировать снижение количества дофаминовых нейронов в черной субстанции [9]. Усиливая активность ферментов, поглощающих свободные радикалы, предотвращая перекисное окисление липидов, ингибируя отложение β-амилоидного пептида в мозге и ингибируя апоптоз клеток головного мозга, CTG значительно увеличила β-амилоидную пептид-индуцированную болезнь Альцгеймера мышей Способность к обучению и памяти [10]. Это исследование показало, что после применения КТГ предварительной обработки содержание BUN, Cr и цистатина С в крови у крыс SD значительно уменьшилось, а повреждение функции почек уменьшилось. КТГ увеличивала ингибирующий апоптоз белок XIAP в почечных тканях при повреждении I/R и блокировала клетки. Возникновение апоптоза играет защитную роль в повреждении почек.
Ссылки
[1] Кассис., Аццоллини Н., Солини С. и др. Как дарбепоэтин альфа, так и карбамилированный эритропоэтин предотвращают дисфункцию почечного трансплантата из-за ишемии/реперфузии у крыс [J]. Transplantation, 2011, 92 (3): 271-279.
[2] Вест Т., Пень М., Лодыгенский Г. и др. Недостаток Х-сцепленного ингибитора белка апоптоза приводит к увеличению апоптоза и потере тканей после травмы головного мозга новорожденных[J]. ASN Neuro, 2009, 1 (1). PII: e00004. doi:10. 10421AN20090005.
[3] Fu X, Tian H, Wang D и др. Множественные повреждения органов и отказы, вызванные шоком и реперфузией после огнестрельных ранений[J]. J Trauma, 1996, 40 (3 Suppl): S135-139.
[4] Паданилам БЖ. Гибель клеток, вызванная острым повреждением почек: взгляд на вклад апоптоза и некроза[J]. Am J Physiol Renal Physiol, 2003, 284 (4): F608-F627.
[5] Galbán S, Hwang C, Rumble JM, et al. Цитопротекторные эффекты IAP, выявленные антагонистом малых молекул[J]. Biochem J, 2009, 417 (3): 765-771.
[6] У Цзяньго, Чжан Дань, У Синьшэн и др., Установление и опыт модели острой ишемии-реперфузии повреждения почек у мышей [J]. Медицинская информация: Справочник по хирургии, 2007, 20 (12): 1103-1105.
[7] Чжу Чжэн. Влияние гликозидов цистанхе на возбуждающие аминокислоты в мозговой ткани крыс после ишемии головного мозга и реперфузии [J]. Аньхойская медицина, 2010, 14 (12): 1393 -1394.
[8] Julia Y, Wang XW, Wubuli AS, et al. Защитное действие общих гликозидов цистанхе пустыниколы на недостаток кислорода [J]. Rep Chin Pharm, 2003, 20 (1): 73-76.
[9] Ли Вэньвэй, Ян Ру, Цай Дунфан и др. Защитное действие общих гликозидов цистанхи на дофаминергические нейроны в черной субстанции модели болезни Паркинсона
[10] Лю Фэнся, Ван Сяовэнь, Ло Лань и др. Влияние и механизм действия общих гликозидов цистанхи на обучение и память мышиной модели болезни Альцгеймера, индуцированной β-амилоидным пептидом [J]. Китайский фармакологический бюллетень, 2006, 22 (5): 595-599.
