2 метода испытаний

2.1 Сетевой фармакологический анализ

2.1.1 Активные ингредиенты Cistanche Deserticola

На основании существующих исследований [7, 22] «Эхинакозид»Вербаскозид", "Цистанозид А", "Тубулозид А", "изоактеозид", "2-Ацетилактеозид" и "Тубулозид Б" были выбраны в качестве биоактивных компонентов для анализа. Найдите трехмерные данные о химической структуре семи вышеупомянутых ингредиентов с помощью Pubchem (https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/) и сохраните их в формате sdf.

2.1.2 Прогнозирование и проверка потенциальных целей

Импортируйте файлы трехмерной структурыактивные ингредиенты в базу данных PharmMapper(http://lilab-ecust.cn/pharmmapper/index.html). Выберите «Только человеческие белки» в качестве целевого вида и оставьте другие параметры по умолчанию, чтобы получить соответствующие данные о различных ингредиентах. Соответствующая целевая цель.

Базу данных UniProt (https://www.uniprot.org/) использовали для получения информации о названии белка и названии гена, соответствующей каждой мишени. Объедините целевые точки, соответствующие 7 компонентам.

В базе данных GeneCards (https://www.genecards.org/) используйте «воспалительное заболевание кишечника» в качестве ключевого слова для поиска генов, связанных с воспалительными заболеваниями кишечника, и систематизируйте результаты поиска.

Добавка с цистанхе Противовоспалительная добавка PhGs75% Ech 30% Act 12%

2.1.3 Белково-белковое взаимодействие (PPI)

Построение сети Используйте jvenn (https:/jvenn.toulouse.inrae.fr/app/example.html), чтобы нарисовать диаграмму Венна онлайн и получить пересечение целевых показателей активного ингредиента Cistanche Deserticola и целевых показателей ВЗК. Загрузите полученные цели пересечения в базу данных String для скринингового анализа PPI. Загрузите файл TSV сети PPI, импортируйте его в Cytoscape 3.8.0, рассчитайте значение степени сети взаимодействия белков, а затем украсьте сетевую диаграмму PPI на основе значения степени.

2.1.4 Онтология генов (GO)

Функциональное обогащение и анализ обогащения пути Киотской энциклопедии генов и геномов (KEGG) были проведены с использованием базы данных DAVID (https://david.ncifcrf.gov/) для определения целей защитного действия активных ингредиентов Cistanche Deserticola на ВЗК. GO-анализ проводился по точкам, а затем база данных DAVID использовалась для проведения анализа обогащения пути KEGG на мишенях, где активные ингредиенты Cistanche Deserticola играют защитную роль при ВЗК.

2.1.5 Создание сети Cistanche Deserticola «активный ингредиент-мишень-путь»

Активные ингредиенты Cistanche Deserticola, мишени пересечения активных ингредиентов Cistanche Deserticola и ВЗК, а также пути, обогащенные KEGG, были использованы для создания сети путей активный ингредиент-мишень.

2.2 Проверка модели на животных

2.2.1 Создание животной модели

Использовали самцов мышей BALB/c класса SPF (5–8 недель, 18–21 г), предоставленных Центром тестирования здоровой пищи Школы прикладных искусств и наук Пекинского союзного университета [номер лицензии на использование экспериментальных животных: SYXK (Пекин) ) 2017-0038], их содержали в помещении для животных с защитой SPF при температуре (23±2) градуса, относительной влажности от 50% до 70% и 12-часовом воздействии флуоресцентного света попеременно днем ​​и ночью. . Все протоколы экспериментов на животных были одобрены Лабораторией животных Центра тестирования здоровой пищи Школы прикладных искусств и наук Пекинского союзного университета. После адаптивного кормления в течение 3 дней 20 мышей были случайным образом разделены на 4 группы в зависимости от массы тела, по 5 мышей в каждой группе. ①Контрольная группа (Чехия): свободно пить стерильную воду и использовать стерильную воду через зонд в течение 7 дней подряд; ②Группа управления DSS

(DZ): 3% раствор DSS, приготовленный ежедневно в течение 7 дней подряд, можно пить бесплатно; ③ Группа низких доз общих гликозидов Cistanche Deserticola (LZ) (концентрация жидкости: 0,1 г/мл): бесплатно пить 3% раствор DSS, приготовленный ежедневно в течение 7 дней; зондовый раствор в течение 7 дней подряд; ④ Группа высоких доз общих гликозидов Cistanche Deserticola (HZ) (концентрация жидкости 0,4 г/

мл): Свежеприготовленный 3% раствор DSS следует пить каждый день свободно и давать раствор через зонд в течение 7 дней подряд. После 7 дней непрерывного моделирования их голодали в течение 12 часов, а затем умерщвляли путем смещения шейных позвонков. Куриные эритроциты вводили внутрибрюшинно за 4 часа до казни. Сразу после казни глазные яблоки удаляли для сбора крови. Брюшную жидкость извлекли и вскрыли брюшную полость. Измеряли длину толстой кишки и удаляли селезенку мыши, узел Пейера и другие органы.

Добавка Цистанхе Противовоспалительная добавка

2.2.2 Индекс активности заболевания (DAI)

Мышей взвешивали перед внутрижелудочным введением в фиксированное время каждый день и наблюдали за психическим состоянием и свойствами фекалий мышей. Скрытую кровь в фекалиях измеряли и оценивали соответствующим образом. Стандарты оценки показаны в Таблице 1. Оценка DAI=(оценка массы тела + оценка характера кала + оценка скрытой крови в кале)/3 (1)

Таблица 1. Критерии оценки DAI

2.2.3 Количественная флуоресцентная ПЦР в реальном времени. Обнаружение иммунного сигнального пути (qRT-PCR).

Мышиные селезенки собирали, разрезали на блоки ткани 0,5 см и вымачивали в растворе, стабилизирующем тканевую РНК, для хранения. Удалите ткань и разрежьте ее на кусочки, добавьте раствор для экстракции РНК и измельчите на кусочки, чтобы извлечь общую РНК. После обратной транскрипции и ПЦР-амплификации в селезенке мышей была обнаружена активация двух ключевых иммунных сигнальных путей, mTOR и TGF-. Последовательности праймеров, используемые в qRT-PCR, показаны в таблице 2.

Таблица 2 Таблица последовательности праймеров