Определение пяти компонентов в Rehmannia Glutinosa и определение отпечатка пальца ВЭЖХ

Абстрактный:Метод определения содержания пяти компонентов вРемания клейкая, а именно,реманнозид D, леонурин,эхинакозид,цистанхезид Аивербаскозид, и был установлен отпечаток Rehmannia Glutinosa с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), чтобы обеспечить научную основу для контроля качества Rehmannia Glutinosa. Использовали колонку Shiseido CAPCELL PAK C18 с ацетонитрилом-0,1% раствором муравьиной кислоты в качестве подвижной фазы, градиентным элюированием, температурой колонки 30 градусов, определением переменной длины волны и скоростью потока 1,0. мл/мин. ВЭЖХ-отпечаток Rehmannia Glutinosa был проанализирован с помощью "Система оценки сходства хроматографических отпечатков пальцев китайской медицины (2012 Edition)" software to evaluate its quality consistency. The results showed that according to the established content determination method, the five components had a good linear relationship within their respective concentration ranges (R2>{{0}}.999 0), RSD теста точности, теста повторяемости и теста стабильности составляло 0,12%~1,58%, а средний коэффициент извлечения пробы составлял 96,5%. ~98,6%; установленный отпечаток пальца Rehmannia Glutinosa ВЭЖХ выявил 23 общих пика, а сходство между образцом Rehmannia Glutinosa и контрольным отпечатком пальца составило 0,904~0,950. Результаты показывают, что установленный метод определения содержания и отпечаток ВЭЖХ подходят для оценки качества Rehmannia Glutinosa и идентификации сырой Rehmannia Glutinosa и приготовленной Rehmannia Glutinosa с высокой точностью и хорошей воспроизводимостью, а также могут обеспечить техническую поддержку для контроля качества Лекарственное сырье Rehmannia Glutinosa.

Ключевые слова:Ремания клейкая; определение содержания; отпечаток пальца; оценка качества

НОВАЯ ТРАВА ЦИСТАНША СЭХИНАКОЗИД,ЦИСТАНХЕЗИД АИВЕРБАСКОЗИД

Ремания клейкаяСвежий или сушеный корневой клубень растения Scrophulariaceae Rehmannia Glutinosa Libosch. Из-за различных методов обработки ее в основном разделяют на свежую рехманию, сырую рехманию и приготовленную рехманию [1-2]. Основными производственными районами являются Хэнань, Шаньси, Шэньси и т. д. земли. Среди них сырая ремания клейкая обладает эффектом отвода тепла и охлаждения крови, питания инь и стимулирования выработки жидкости и в основном используется для лечения жара в крови, согревающих токсинов и пятен и т. д.; приготовленная ремания клейкая обладает эффектом питания крови и инь, восполнения эссенции и костного мозга и в основном используется для лечения дефицита крови, хлороза и т. д. Сердцебиение, беспокойство и т. д. [1-2]. Оба имеют разные свойства и вкус, но оба принадлежат меридианам печени и почек. Рехмания клейкая содержит сложные химические компоненты, в основном включающие иридоиды, иононы, фенилэтанолгликозиды, флавоноиды и др. [3-5].

После обработки Rehmannia Glutinosa различными методами обработки типы, содержание и пропорции химических компонентов в каждом обработанном продукте сильно различаются, что приводит к значительным различиям в его фармакологической активности [6-10]. в соответствии с

Соответствующие исследования[11-12] показывают, что в процессе перехода Rehmannia Glutinosa от «сырого» к «приготовленному» содержание химических компонентов, таких как каталпол, пустырник, стахиоза и аминокислоты, значительно снижается, а содержание фруктозы, 5-гидроксиметилфурфурола и др. Значительно увеличивалось содержание , изоребаскозида и др. В настоящее время при контроле качества сырой и приготовленной ремании клейкой в ​​качестве показателей оценки в основном используют содержание каталпола и реманниазида D. Показатели системы оценки относительно едины, что затрудняет комплексный контроль качества ремании клейкой. Кроме того, исследования показали, что содержание рехманнии клейкой D меняется до и после обработки. Он мал и имеет низкую специфичность для характеристики изменения состава после обработки и степени обработки [12-13].

Поэтому, чтобы более полно оценить качество Rehmannia Glutinosa, в этом исследовании была установлена ​​взаимосвязь между рехманниазидом D и Йиму в Rehmannia Glutinosa.

Методы определения содержания пяти общих компонентов, включая глюкозид, эхинацеазид, цистанхеозид А и вербаскозид, и установлен ВЭЖХ-отпечаток Rehmannia Glutinosa для анализа содержания основных компонентов в Rehmannia Glutinosa из разных производственных зон, до и после обработки, с целью предоставления информации для контроля качества Rehmannia Glutinosa. Техническая поддержка.

Приборы, реагенты и тест-препараты

Высокоэффективный жидкостный хроматограф Agilent 1260 (детектор – диодная матрица); электронные аналитические весы с переменным диапазоном (МЕТТЛЕР ТОЛЕДО); цифровой ультразвуковой очиститель (Шанхайский завод ультразвуковых приборов, KH-500DE). Метанол (Sinopharm Group) имеет ч.д.а.; ацетонитрил (Merck) – хроматографического качества; вода — вода в бутылках Watsons. Эталонное вещество Rehmannia Glutinosa D (номер партии RFSD8401909016, чистота 98,0%), эталонное вещество гликозид леонуруса (номер серии RFS-Y22002208010, чистота 98,0%) и эталонное вещество цистанхезид А (серия) номер RFS-R05002009014, чистота 96,0%) были приобретены у Chengdu Ruifensidedan Biotechnology Co., Ltd.; Эталонное вещество эхинакозид (номер партии 111670-201907, чистота 91,8%) и эталонное вещество вербаскозид (номер партии 11530-201914, чистота 95,2%) были приобретены у Китайских институтов инспекции пищевых продуктов и лекарств. Образцы ремании (SX1~SX4, HN1 и HN2) были собраны с разных производственных участков (см. Таблицу 1), из которых SX4 и HN2 были обработаны паром SX1 и HN1 соответственно, а SX2 и SX3 были собраны с одного и того же производственного участка. Подлинность всех образцов была признана Сун Пиншуном, главным специалистом китайской медицины Института контроля над наркотиками провинции Ганьсу.

Таблица 1. Информация об образцах Semen Rehmanniae

2.1 Хроматографические условия

Использовали колонку Shiseido CAPCELL PAK C18 (250.0 мм×4,6 мм, 5 мкм), в качестве подвижной фазы А — ацетонитрил, в качестве подвижной фазы Б — 0,1% раствор муравьиной кислоты. Условия градиентного элюирования: 0-3 мин, 1% А; 3-9 мин, 1%А→5%А; 9-24 мин, 5%А→35%А; 24-35 мин, 35%А→65%А; 35-40 мин, 65%А→90%А. Обнаружение с переменной длиной волны (0-24 мин, 203 нм; 24-40 мин, 330 нм). Объем инъекции составлял 15 мкл раствора сравнения и 20 мкл раствора образца.

2.2 Приготовление раствора

2.2.1 Приготовление эталонного раствора

Возьмите соответствующие количества указанных выше пяти эталонных веществ, добавьте 70% метанола, чтобы приготовить смешанный эталонный раствор с массовой концентрацией 0,4 мг/мл.

2.2.2 Приготовление тестируемого раствора

Отвесить около 1,0 г порошка ремании (пропустить через сито № 2), точно взвесить, поместить в коническую колбу с пробкой, аккуратно добавить 25 мл 70% метанола, закупорить, взвесить, обработать ультразвуком (мощность 300). W, частота 50 кГц) в течение 30 мин, дают остыть до комнатной температуры, снова взвешивают, восполняют потерянную массу 70%-ным метанолом, фильтруют и отбирают фильтрат.

2.3 Методологическое исследование

2.3.1 Исследование специфичности

Возьмите смешанный эталонный раствор согласно «2.2.1» и испытуемый раствор (образец SX1) согласно «2.2.2», введите и измерьте в соответствии с хроматографическими условиями согласно «2.1». Результаты показывают, что хроматограмма образца Rehmannia представляет собой хроматографический пик с тем же временем удерживания, что и эталонные стандарты Rehmannia Glutinosa D, Леонурин, Эхинакозид, Cistanche Deserticola A и Вербаскозид (см. Рисунок 1), что указывает на то, что этот метод имеет сильные специфичность.

2.3.2 Исследование линейной зависимости

Добавьте 70% метанол к смешанному эталонному раствору, разбавьте 5 раз, 10 раз, 25 раз, 50 раз, 100 раз и 250 раз соответственно, введите и измерьте в соответствии с хроматографическими условиями, указанными в разделе «2.1». Стандартные кривые были построены с массовой концентрацией каждого эталона по горизонтальной оси (x) и соответствующей площадью хроматографического пика по вертикальной оси (y). Результаты показаны в таблице 2, что указывает на то, что каждый компонент имеет хорошую линейную зависимость в соответствующем диапазоне массовой концентрации.

1. реманниозид D; 2. леонурид; 3. эхинакозид; 4. кастанозид А;5. актеозид

Рисунок 1. Хроматограммы исследования специфичности.

Таблица 2. Линейная зависимость 5 компонентов в Semen Rehmanniae

2.3.3 Прецизионное исследование

Возьмите испытуемый раствор (образец SX1) согласно «2.2.2» и проведите инжекционный тест в соответствии с хроматографическими условиями, указанными в «2.1». Вводят образец непрерывно 6 раз, записывают площадь пика каждого компонента и вычисляют среднее стандартное отклонение площади пика ремании клейкой D, гликозида пустырника, гликозида эхинацеи, гликозида цистанхе А и вербаскозида в тестируемом образце как 0. 46%, 0.12%, 0.85%, 0.48% и 0.82% соответственно, что указывает на хорошую точность прибора.

2.3.4 Исследование повторяемости

Шесть образцов одного и того же образца корня ремании (SX1) готовили параллельно в соответствии с методом «2.2.2», вводили и определяли в соответствии с хроматографическими условиями, указанными в «2.1». RSD содержания гликозида D корня ремании, гликозида пустырника, гликозида эхинацеи, гликозида А цистанхе и вербаскозида в шести образцах составили 0,46%, 0,69%, 1,42%, {{ 12}},48% и 1,58% соответственно, что указывает на хорошую повторяемость метода.

2.3.5 Исследование стабильности

Возьмите тестируемый раствор (образец SX1) согласно «2.2.2», введите его и измерьте в соответствии с хроматографическими условиями, указанными в «2.1», через 0 ч, 2 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 1{{ 15}} ч, 12 ч, 18 ч и 24 ч соответственно. Среднее стандартное отклонение площадей пиков ремании клейкой D, гликозида пустырника, эхинакозида, гликозида А цистанхе и вербаскозида составляло 0,94%, 1,04%, 0,73%. , 0,83% и 0,71% соответственно, что указывает на хорошую стабильность тестируемого раствора в течение 24 часов.

2.3.6 Скорость восстановления пробы

{{0}}.5 г образца корня ремании (SX1) с известным содержанием 5 компонентов аккуратно взвешивали в конической колбе с пробкой, добавляли 6 параллельных порций и добавляли 5 эталонных растворов определенных концентраций. соответственно. Пробы готовили в соответствии с методом «2.2.2», образцы вводили и измеряли в соответствии с хроматографическими условиями, указанными в «2.1». Был рассчитан коэффициент извлечения, результаты показаны в таблице 3. Средний коэффициент извлечения каждого компонента в образце составил 96,5–98,6%, а среднее стандартное отклонение составило 0,73–1,52%, что указывает на хорошую точность метода.