Гао-Цзы-Яо улучшает функции обучения и памяти у старых крыс со спонтанной гипертензией. Часть 2

Экспериментальные животные

Двенадцатимесячные и восьминедельные самцы крыс со спонтанной гипертензией (SHR) были приобретены в Нанкинском модельном центре животных.

Существует сильная связь между 8-самцами недельного возраста и памятью. В этот период мозг существа мужского пола быстро развивается, и связи между его нейронами постепенно увеличиваются, что, в свою очередь, влияет на развитие его памяти.

Исследования показывают, что память самцов с возрастом продолжает улучшаться. Это не только оказывает существенное влияние на их выживание и размножение, но и помогает им лучше адаптироваться к окружающей среде и справляться с новыми задачами.

Поэтому мы должны активно поощрять молодых мужчин участвовать в различных полезных занятиях, таких как решение головоломок, изучение новых навыков и исследование новых областей. Эти занятия стимулируют их мозг, позволяя им быстрее развиваться и улучшать способности памяти.

В то же время мы также должны обеспечить подходящую среду и атмосферу для молодых существ мужского пола. Если дать им почувствовать себя в безопасности и близости, это может способствовать развитию их мозга и улучшению памяти.

Короче говоря, мы должны сделать все возможное, чтобы помочь молодым мужчинам улучшить свою память, чтобы они стали умнее, увереннее и способнее. Это способствует не только их личному развитию, но и процветанию и выживанию всего вида. Видно, что нам необходимо улучшать память, а Cistanche Deserticola может значительно улучшить память, поскольку Cistanche Deserticola обладает антиоксидантным, противовоспалительным и омолаживающим действием, что может помочь уменьшить окислительные и воспалительные реакции в мозге, тем самым защищая здоровье нервной системы. Кроме того, Cistanche Deserticola может также способствовать росту и восстановлению нервных клеток, тем самым улучшая связь и функцию нейронных сетей. Эти эффекты могут помочь улучшить память, скорость обучения и мышления, а также предотвратить развитие когнитивной дисфункции и нейродегенеративных заболеваний.

Нажмите «Знайте добавки для улучшения памяти»

В этой модели гипертония начинает развиваться к 4-месячному возрасту, а к 6-месячному возрасту появляются связанные с гипертензией изменения в микроциркуляторном русле головного мозга [37].

Крыс содержали в оптимальных условиях с соблюдением стандартных гигиенических условий, содержали при температуре 25 градусов с циклом света/темноты 12/12 и кормили стандартным крысиным кормом и водой без ограничений.

Все процедуры были одобрены и выполнены в соответствии с рекомендациями по уходу и использованию животных, установленными Университетом Сучжоу, что соответствует нашему предыдущему отчету[35].

Эксперименты проводились в соответствии с Руководством Национального института здравоохранения по использованию лабораторных животных (NIH, номер публикации 85–23, пересмотрено в 1996 г.). О настоящем исследовании сообщается в руководстве ARRIVE.

Восьминедельный SHR применяли для контроля старения (SHR-Young, n=10). Двенадцатимесячным крысам вводили дистиллированную воду с Гао-Цзы-Яо или без него (старый SHR-C, n=10), низкую дозу (старый SHR-L, n=10), среднюю дозу. (Старый SHR-M, n=10), высокая доза (Старый SHR-H, n=10) при кормлении через желудок.

Дозировки низких, средних и высоких Гао-Цзы-Яо равны 1/2-, 1-, тройные дозы для применения у клинических пациентов, рассчитанные в соответствии с площадью поверхности тела. Перед применением Гао-Цзы-Яо растворяли в 5 мл дистиллированной воды и принимали молочные продукты однократно в течение 4 недель.

Артериальное давление и частоту сердечных сокращений контролировали каждую неделю методом хвостовой манжеты, а также еженедельно контролировали массу тела, как и в предыдущем нашем наблюдении [35].

Через 4 недели проводили эксперимент с водным лабиринтом Морриса, крыс забивали под анестезией пентобарбиталом натрия (50 мг/кг внутрибрюшинно), ткань гиппокампа собирали для дальнейшего анализа. Все протоколы экспериментов были одобрены комитетом по этике лицензирования Университета Сучжоу.

Эксперимент с водным лабиринтом Морриса

Эксперимент с водным лабиринтом Морриса (BW-MWM101, Shanghai Bio-will Co., Ltd., Шанхай, Китай) проводили, как описано ранее, с некоторыми модификациями [38]. Тест был запланирован на 6 дней, дни с 1 по 5 были периодом обучения, а день 6 - результатами тестирования.

Крыс обучали молочному кормлению в течение 2 минут, записывая время посадки на платформу как латентное время. На 6 день платформу удалили. Крыс помещали в самый дальний квадрант и записывали траекторию плавания в течение 2 минут.

Параметры обучения и памяти рассчитывались с помощью программного обеспечения.

Измерение сывороточных уровней NO и воспалительных факторов с помощью ELISA

Уровни NO в сыворотке (Каталог: S0023), IL-1 (Каталог: A301BH80153), IL-2 (Каталог: A31038348), IL-6 (Каталог: A30681042), и TNF- (номер по каталогу: A38280855) измеряли с использованием коммерчески доступных наборов ELISA (BiotechnologyCo., Ltd. Шанхайские исследования ферментов. Шанхай, Китай). Все этапы выполняли в соответствии с инструкциями производителя.

Окраска по Нисслю

Ткань гиппокампа крысы выделяли, фиксировали, заливали в парафин, затем инкубировали в 1% растворе для окрашивания толуидиновым синим в течение 5–10 мин при комнатной температуре. Десять срезов промывали дистиллированной водой, замачивали в 95%-ном этаноле на 5–30 мин и обезвоживали в 100%-м этаноле.

После обезвоживания срез помещали в ксилол и накрывали покровным стеклом, используя смоляную среду. Количество нейронов в областях CA1, CA2 и зубчатой ​​извилины (DG) гиппокампа наблюдали и анализировали с помощью программы анализа ImageJ.

Вестерн-блоттинг белков, связанных с обучением и памятью

Вестерн-блоттинг белков, связанных с обучением и памятью, проводился, как описано в нашем предыдущем отчете, с некоторыми модификациями [39].

Ткани гиппокампа гомогенизировали с помощью буфера RIPA (50 ммтрис, 150 мМ NaCl, 1% Triton-X-100, pH 7,0), содержащего фенилментансульфонилфторид (R&D Systems Inc., Миннеаполис, США). Гомогенаты центрифугировали при 12,000×g в течение 10 мин при 4 градусах.

Клеточные белки разделяли с помощью электрофореза в ДСН-ПААГ и переносили на мембраны из ПВДФ (Hybond TM-ECL; AmershamPharmacia Biotech, Inc.). Мембраны блокировали в 5% обезжиренном молоке в PBS и 0,1% твине-20 при комнатной температуре.

Затем блоты инкубировали с первичными антителами: антиглутаматным рецептором 1 (1:1000, Abcam, Inc., каталожный номер: ab183797), антителом AntiNMDAR2B (1:1000, Abcam, Inc., каталожный номер: ab28373), анти-фосфо -Антело CaMKII (1:1000, Abcam, Inc., каталожный номер: ab171095), антифосфо-CREB антитело (1:1000, Abcam, Inc., каталожный номер: 32096) или анти-GAPDH (Santa Cruz Biotech, Inc., Каталожный номер: sc-47724).

Далее мембраны инкубировали в течение 1 ч со вторичным антителом (HRP-конъюгированный антикроличий Ig-G, 1:2000, Abcam, Inc., каталожный номер: ab205718). Затем мембраны трижды промывали в течение 15 минут с использованием TBS-T для удаления избытка антител перед инкубацией в течение 1 минуты с хемилюминесцентными реагентами (ECL, R&D Systems Inc., Миннеаполис, Миннесота, США).

Кроме того, иммунореактивные полосы обнаруживали с помощью системы анализа геля-электрофореза (GL2200 Pro, Crestream Inc., США). Интенсивность полос анализировали с помощью программного обеспечения Image J. Количество целевых белков нормализовали по экспрессии GAPDH [39].

статистический анализ

Для статистического анализа использовалось программное обеспечение SPSS 18.0. Данные представлены в виде среднего значения ± стандартная ошибка среднего. Сгруппированные данные были проанализированы с использованием одностороннего дисперсионного анализа с последующим критерием Стьюдента-Ньюмана-Кейлса. Значение P < 0,05 считалось статистически значимым, как указано в предыдущем отчете [35].

Полученные результаты

Систолическое артериальное давление (САД), частота сердечных сокращений и масса тела между молодыми SHR и старыми SHR.

Yong SHR показал более низкое САД в первые две недели по сравнению со старым SHR, а затем увеличилось до отсутствия различий между двумя группами в последующие три недели (рис. 2А).

Напротив, в первые две недели частота сердечных сокращений не отличалась между двумя группами, затем молодые SHR заметно увеличивались по сравнению со старыми SHR в последующие три недели (рис. 2B). Молодые SHR демонстрировали меньшую массу тела по сравнению со старыми SHR в течение всего периода наблюдения (рис. 2В).

Параметры водного лабиринта Морриса между молодым SHR и старым SHR

Чтобы определить обучение и память, зависящие от гиппокампа, был проведен эксперимент с водным лабиринтом Морриса. У старых SHR наблюдался более длительный латентный период побега в первые четыре дня по сравнению с молодыми SHR (рис. 3А).

Время пересечения целевого квадранта было меньше у старых SHR, чем у молодых SHR (рис. 3Б).

Процент времени в квадранте целевой платформы был короче у старых SHR по сравнению с молодыми SHR (рис. 3C). Процент длины пути в квадранте также был короче у старого SHR по сравнению со старым SHR (рис. 3D). Эти результаты позволяют предположить, что у старых SHR наблюдаются нарушения когнитивных функций.

Количество нейронов в гиппокампе между молодыми SHR и старыми SHR

Количество нейронов в различных областях гиппокампа подсчитывали методом окраски по Нисслю. Результаты показали, что в регионах CA1, CA2 и DG старых SHR меньше нейронов по сравнению с молодыми SHR (рис. 4).

Экспрессия белков, связанных с обучением и памятью, в гиппокампе между молодыми SHR и старыми SHR

Результаты вестерн-блоттинга показали, что экспрессия белков, связанных с обучением и памятью (GluR1, NMDAR 2B, фосфорилированный-CaMK II и фосфорилированный-CREB) в старом гиппокампе SHR была ниже, чем в молодом гиппокампе SHR (рис. 5).

Влияние Гао-Цзы-Яо на САД, частоту сердечных сокращений и массу тела у старых SHR

Проанализировано влияние Гао-Цзы-Яо на САД. Лечение низкими дозами Гао-Цзы-Яо заметно снижало САД у старых SHR со второй по четвертую неделю по сравнению с контрольной группой старых SHR, средние и высокие дозы Гао-Цзы-Яо заметно снижали САД у старых SHR с первой недели до четвертой недели. четвертая неделя по сравнению с контрольным старым SHR (рис. 6А). Эти результаты показывают, что Гао-Цзы-Яо оказывает антигипертензивный эффект на старый SHR.

Мы также сравнили данные о влиянии Гао-Зи-Яуна на частоту сердечных сокращений и массу тела. Наши данные показали, что достоверной разницы в частоте сердечных сокращений и массе тела между всеми группами в течение всего периода наблюдения не было (рис. 6Б, В).

Влияние Гао-Цзы-Яо на уровни NO, IL-1, IL-2 и TNF- в сыворотке крови у старых SHR

Лечение средними и высокими дозами GAO-ZIYAO увеличивало уровни NO в сыворотке по сравнению с уровнями в контрольной группе SHR (рис. 7А). Лечение всеми протестированными дозами GAO-ZI-YAO снижало уровни IL-1, IL-2 в сыворотке крови по сравнению с уровнями в контрольной группе SHR (фиг. 7B, C); однако только высокая дозировка GAO-ZI-YAO подавляла уровни TNF- в сыворотке (рис. 7D).

Эти результаты показывают, что GAO-ZI-YAO может регулировать окислительный стресс и воспаление.

For more information:1950477648nn@gmail.com