Идентификация EST, чувствительных к перекиси водорода, участвующих в биосинтезе фенилэтаноидных гликозидов в культуре клеток Cistanche Salsa

Контактное лицо: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Электронная почта:audrey.hu@wecistanche.com

Дж. ЧЕН и др.

Абстрактный
Пероксид водорода является эффективным абиотическим элиситором, который может индуцировать биосинтез вторичных метаболитов в растениях. Показано, что в клеточной суспензионной культуре солеустойчивого лекарственного растенияЦистанхесальса, производство биоактивных компонентовфенилэтаноидгликозиды(PeGs) увеличилось после обработки H2O2. Идентифицировать гены, связанные с ПЭГ(фенилэтаноидгликозиды)биосинтеза, на который влияет H2O2, мы построили библиотеку подавления субтрактивной гибридизации генов, чувствительных к H2O2, используяЦистанхесальсаклеточной линии и идентифицировали 105 тегов экспрессируемых последовательностей (EST) и 85 генов. Функциональная аннотация библиотеки EST и анализ онтологии генов показали гены, связанные с различными реакциями на стресс, биосинтезом вторичных метаболитов и регуляцией транскрипции. Среди них мы идентифицировали два гена, связанных с ПЭГ.(фенилэтаноидгликозиды)путь биосинтеза (4-кумарат-кофермент А-лигаза и циннамат 4-гидроксилаза) и два транскрипционных фактора типа WRKY. Экспрессию выбранных генов после обработки H2O2 анализировали с помощью RT-qPCR. Ранняя повышенная транскрипция PeG(фенилэтаноидгликозиды)гены пути биосинтеза после лечения показали, что H2O2 индуцирует PeGs(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез за счет активации его ключевых генов.
Дополнительные ключевые слова: циннамат-4-гидроксилаза, 4-кумарат-коэнзим А-лигаза, подавление субтрактивной гибридизации.Цистанхесальса. фенилэтаноидгликозиды.

Введение

Цистанхесальсаявляется многолетним растением, паразитирующим на корнях Haloxylos ammodendrun и произрастающим в пустынных районах западного Китая. На века,Цистанхевиды использовались в качестве традиционной фитотерапии (Wang et al. 2012). Биоактивными компонентами являютсяфенилэтаноидгликозиды(ПЭГ), которые оказывают заметное влияние на клиренс активных форм кислорода (АФК), радиационную защиту, повышение иммунитета и замедление старения (Nan et al. 2013). ПЭГ(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез вЦистанхеинициируется из фенилаланина (рис. 1 Приложение), а синтезированная кофейная кислота далее гликозилируется с образованием различных ПЭГ.(фенилэтаноидгликозиды)(Ванг и др., 2012). Три основных PEG(фенилэтаноидгликозиды), эхинакозид, актеозид и 2'-ацетилактеозид считаются наиболее активными компонентами вЦистанхе(Кобаяши и др., 1984). Для повышения их содержания вЦистанхекультуре клеток были протестированы различные элиситоры, включая хитозан, путресцин, Ag plus и осмотический стресс (Ouyang et al. 2005a,b, Cheng et al. 2005, 2006, Liu et al. 2007, Liu and Cheng 2008). Однако гены, участвующие в PEG(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез вЦистанхе, в основном гены пути метаболизма фенилаланина, идентифицируются редко. Только ген, кодирующий фенилаланин-аммоний-лиазу (PAL), был недавно идентифицирован у Cistanche Deserticola (Hu et al. 2011). Другие гены, кодирующие, например, циннамат-4-гидроксилазу (C4H), которая может катализировать превращение циннамата в кумаровую кислоту, и 4-кумарат-кофермент A-лигазу (4CL), важный ген лигнина и флавоноидов. биосинтеза не обнаруженоЦистанхе.
Мы использовали культуру клетокЦистанхесальсаизучать ПЭГ(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез и экспрессия родственных генов. Мы также исследовали влияние эффективного элиситора H2O2 на ПЭГ.(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез. Кроме того, чтобы найти ранние чувствительные гены, участвующие в PEGs(фенилэтаноидгликозиды)биосинтеза, мы провели супрессивную субтрактивную гибридизацию (SSH) для создания библиотеки кДНК H2O2-чувствительных генов.

Рис. 1. Относительная экспрессия генов, определенная с помощью RT-qPCR после обработки H2O2. Фактор транскрипции CsWRKY1 - WRKY (Contig07), CsC4H1 -циннамат4-гидроксилаза (Contig09), Cs4CL1 - 4-кумарат: лигаза (Contig03), белок теплового шока CsHSP1 - 70 кДа (Contig 01) и супероксиддисмутаза CsSOD1 - (Contig16). Клетки обрабатывали 80 мкг дм-3 H2O2 в жидкой среде в течение 2 ч и экспрессию сравнивали с контролем, обработанным водой. Средство плюс - СД трех биологических повторений; * - Р < 0,05,="" **="" -="" р=""><>

материалы и методы

Клеточная линия CS2001 была получена из лепестковЦистанхесальса(К.А. Мей.) Бек, собранный в провинции Нэймэнгу и субкультивированный. Метод культивирования был аналогичен протоколу, опубликованному ранее (Liu et al. 2007). Как правило, твердая среда Мурасиге и Скуга (1962; MS) использовалась для пересева, а жидкая среда - для ПЭГ.(фенилэтаноидгликозиды)биосинтеза (модифицированная среда МС с добавлением 30 г дм-3 глюкозы и 2,0 мг дм-3 индол-3-уксусной кислоты). Для обработки H2O2 5,0 ± 0,2 г клеток в период быстрого роста, обычно через 20–30 дней после их пересева в твердую среду, инокулировали в 50 см3 жидкой среды в колбе Эрленмейера объемом 250 см3. и культивировали в темноте с различной концентрацией H2O2 или без нее. Пеги(фенилэтаноидгликозиды)содержание после 10-дневной индукции H2O2 анализировали в соответствии с ранее опубликованным методом (Liu et al. 2007), основанным на обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с градиентным элюированием метанолом.

Через 2 ч после обработки H2O2 клетки собирали из среды фильтровальной бумагой с помощью воронки Бюхнера, затем замораживали в жидком азоте и измельчали ​​в порошок. Каждые 2 г клеточного порошка лизировали смесью 1 см3 2-меркаптоэтанола, 1 см3 200 г дм{{1{1{32}}}} саркозила, и 8 см3 буфера GTC (5 М изотиоцианата гуанидиния, 62,5 мМ Трис-HCl, рН 8,0, 6,25 мМ ЭДТА, рН 8,0, 5 мМ тиомочевины и 10 мМ дитиотреитола). Затем клетки инкубировали на льду в течение 15 мин, затем добавляли 1/3 объема 8,5 М CH3COOK, pH 6,0, и клетки инкубировали на льду в течение 15 мин, а затем центрифугировали при 15 000 g в течение 15 мин. . Супернатант добавляли к равному объему изопропанола для осаждения суммарной РНК. Суммарную РНК дополнительно очищали с помощью мини-набора RNeasy (Qiagen, Hilden, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Матричную РНК выделяли из тотальной РНК с использованием миди-набора для мРНК Oligotex (Qiagen).

фенилэтаноидгликозидывЦистанхеСальса

Библиотека SSH была создана из контрольных и 30-процентных H2O2-выявленных образцов клеток через 2 часа после выявления с использованием набора для вычитания кДНК PCR-select (Clontech, Mountain View, USA). Для создания библиотеки продукты очищали отдельно с использованием набора для очистки геля (Qiagen) и клонировали в вектор pGEM с использованием набора для клонирования ТА (Tiangen, Пекин, Китай). Плазмиды из независимых клонов выделяли и секвенировали с использованием праймера Т7. Все последовательности тегов экспрессированных последовательностей (EST) из библиотеки (с удаленными векторными последовательностями) использовали для сборки контигов с CAP3 (http://doua.prabi.fr/software/cap3). EST были сгруппированы в контиги и синглетоны; их использовали для поиска гомологии с использованием программы BLASTx в NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov). Затем последовательности аннотировали, анализировали и классифицировали в соответствии с терминами генной онтологии (GO) с использованием Blast2GO (http://www.blast2go.com).
Количественную полимеразную цепную реакцию в реальном времени (RT-qPCR) проводили в соответствии с Bustin et al. (2009). Образцы кДНК синтезировали с использованием набора реагентов PrimeScript RT (Takara, Dalian, China) из 0,5 мкг тотальной РНК. RT-qPCR проводили с использованием наборов SYBR Premix Ex Taq II и ROX plus (Takara) на системе ПЦР в реальном времени ABI 7300 (Applied Biosystems, Фостер-Сити, США) с тремя техническими повторами. Праймеры были разработаны с использованием онлайн-программного обеспечения Primer3 в соответствии с инструкциями, предоставленными Takara; праймеры, использованные в этом исследовании, перечислены в Таблице 1 Приложения. Экспрессию генов нормировали на 18S РНК, экспрессия которой была стабильной во всех образцах.

Результаты анализировали с помощью R версии 3.1.1, достоверность различий проверяли с помощью t-критерия Стьюдента.

Полученные результаты

Перекись водорода индуцировала биосинтез всех трех основных ПЭГ.(фенилэтаноидгликозиды)вЦистанхесальсасуспензии клеток (таблица 1), но без явного влияния на рост клеток (рис. S2). Содержание эхинакозида увеличивалось уже после обработки 10 мкг дм-3 H2O2 (P < 0.05),="" более="" высокий="" рост="" был="" зарегистрирован="" после="" обработки="" 20="" мкг="" дм-3="" -3="" обработка="" h2o2="" (p=""><0,01), и="" самый="" высокий="" рост="" был="" после="" обработки="" 40,="" 80="" и="" 160="" мкг="" дм="" -3="" h2o2.="" аналогичные="" результаты="" показаны="" для="" актеозида,="" но="" его="" содержание="" достигает="" пика="" после="" обработки="" 80="" мкг="" дм="" -3="" h2o2.="" биосинтез="" 2'-ацетилактеозида="" был="" менее="" чувствителен="" к="" обработке="" h2o2;="" значительное="" увеличение="" его="" содержания="" (p="">< 0,05)="" было="" при="" концентрациях="" h2o2="" более="" 40="" мкг/дм-3.="" после="" обработки="" 80="" мкг="" дм-3="" h2o2="" количество="" всех="" трех="" основных="">(фенилэтаноидгликозиды)значительно увеличился (P < 0,01)="" по="" сравнению="" с="" контролем.="" поэтому="" эту="" концентрацию="" использовали="" в="" дальнейших="">
Чтобы создать библиотеку, обогащенную ранними чувствительными генами, которые активируются H2O2, мы использовали кДНК изЦистанхесальсасуспензию клеток обрабатывали 80 мкг дм-3 H2O2 в течение 2 ч. Однопроходное секвенирование 129 рекомбинантных клонов в библиотеке SSH дало 105 чистых EST после исключения векторной последовательности. Эти прозрачные EST использовались для сборки с помощью CAP3, и было сгенерировано 18 контигов и 67 одиночных клеток (таблица 2). Таким образом, в этой библиотеке было выделено 85 генов. Средняя длина чистых 105 EST составила 527 п.н., что достаточно для функциональной классификации на основе сходства последовательностей.

фенилэтаноидгликозидывЦистанхеСальса

Все 85 генов, полученных в библиотеке, были извлечены с помощью BLASTx из базы данных неизбыточных белков GenBank на предмет сходства последовательностей (значение E меньше или равно 0.001). Двадцать один ген не нашел совпадений в базе данных, возможно, они специфичны дляЦистанхесальса. Результаты с BLASThits были импортированы в программное обеспечение Blast2GO для дальнейшего анализа обогащения путей GO и KEGG. Из 64 генов с попаданием BLAST 50 были аннотированы по описанию гомологичных генов других видов. Аннотированные гены были названы в соответствии с описанием хитов BLAST. Анализ GO (рис. 3, приложение) показывает, что среди этих 50 генов было 14 генов, участвующих в ответах на стимулы, и более 30 генов, связанных с метаболическими процессами (таблицы 1 и 2). Среди этих генов, как и ожидалось, были выделены два гомолога гена пути биосинтеза PeG: 4-кумарат-кофермент-лигаза A (названная Cs4CL1: Contig03) и циннамат-4-гидроксилаза (названная CsC4H1: Contig14). Кроме того, была проведена RT-qPCR для подтверждения индуцированной экспрессии генов из библиотеки после обработки H2O2.

Чтобы подтвердить, что основные гены, идентифицированные из библиотеки SSH, реагировали на обработку H2O2, экспрессия двух PeGs(фенилэтаноидгликозиды)гены, связанные с путем биосинтеза (Cs4CL1, CsC4H1), два гена, индуцируемых АФК (CsSOD1: Contig 16, CsHSP1: CISTH099), и один ген, подобный фактору транскрипции семейства WRKY (CsWRKY1: Contig 07), были измерены с помощью RT-qPCR после лечения. с H2O2 (рис. 1). Экспрессия CsC4H1, Cs4CL1, CsSOD1 и CsWRKY1 активировалась более чем в 15-кратно, 3-кратно, 45-кратно и 4-кратно, соответственно, через 2 ч после введения H2O2. лечение. Экспрессия CsHSP1 изменялась только в 1,8 раза после обработки H2O2.
Динамика экспрессии CsWRKY1, CsC4H1 и Cs4CL1 после обработки H2O2 была дополнительно проанализирована с помощью RT-qPCR (рис. 2). Экспрессия CsC4H1 и Cs4CL1 была сильно повышена (более чем в 80- раз и 50- раз соответственно) после 16- ч обработки, а затем снижалась через 32 ч. Экспрессия CsWRKY1 увеличивалась более чем в 20- раз через 4 часа, а затем снижалась через 8 часов (рис. 2).

Рис. 2. Относительная экспрессия CsWRKY1 (A), CsC4H1 (B) и Cs4CL1 (C) в разные сроки после обработки 80 мкг дм-3 H2O2. Выражения нормализовали к контролю; (обработка водой). Средство плюс - СД трех биологических повторений; * - Р < 0,05,="" **="" -="" р=""><>

Обсуждение

Перекись водорода является хорошо известным элиситором растений, оказывающим различное воздействие на растения. Как и АФК, он может индуцировать систему очистки от АФК, состоящую из супероксиддисмутазы, каталазы, пероксидазы и т. д., и служит сигналом последующего солевого, осмотического и дегидратационного процессов.

стрессы (Wi et al. 2006, Kar 2011, Furlan et al. 2013, Sathiyaraj et al. 2014). Высказано предположение, что генерация H2O2 в растениях сопровождается индуцированным биосинтезом вторичных метаболитов вЦистанхесальсакультура клеток. Как и ожидалось, наши результаты показывают, что ПЭГ(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез вЦистанче сальсакультуру клеток индуцировали после обработки H2O2 (табл. 1). Содержание трех основных ПЭГ(фенилэтаноидгликозиды)увеличивается после обработки H2O2, что указывает на его ключевую роль в биосинтезе ПЭГ. Гены, обогащенные библиотекой SSH, также предполагают ее влияние на ПеГ.(фенилэтаноидгликозиды)индукция биосинтеза вЦистанче сальса.

Многие известные H2O2-чувствительные гены, такие как аскорбатпероксидаза (CISTH069, Karyotou and Donaldson, 2005), h-хиноноксидоредуктаза (CISTH125, Bello, et al., 2001), CsSOD1, CsHSP1 (Baruah et al., 2014), и гены ответа на устойчивость к болезням (Contig10, Nanda, et al. 2010) были обогащены библиотекой SSH (таблица 3, таблица 2 приложения). Некоторые из этих типичных генов, чувствительных к АФК, с индуцированной экспрессией после обработки H2O2, были дополнительно подтверждены с помощью RT-qPCR (рис. 1 и 2), что указывает на то, что здесь была сконструирована квалифицированная библиотека SSH. Два гена пути биосинтеза ПЭГ, CsC4H1 и Cs4CL1, также были обнаружены в этой библиотеке, и экспрессия этих двух генов индуцировалась обработкой H2O2 в зависимости от времени (рис. 2). Это предполагает, что обработка H2O2 индуцирует PEGs.(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез на генетическом уровне посредством регуляции генов пути PAL. Однако PAL и другие гены биосинтеза PeGs ниже по течению (Wang et al. 2012) не были идентифицированы в библиотеке SSH; это может быть связано с тем, что библиотека недостаточно секвенирована. Связь между экспрессией, индуцированной CsC4H1 и Cs4CL1, и повышенным биосинтезом ПЭГ после обработки H2O2 должна быть выяснена дальнейшим анализом.

В дополнение к генам пути PAL, индуцированным обработкой H2O2, в библиотеке SSH были обнаружены два фактора транскрипции семейства WRKY (CsWRKY1, CsWRKY2) (таблица 3 и таблица 2 приложения), а индуцированная CsWRKY1 экспрессия была подтверждена с помощью RT-qPCR. . Его экспрессия реагировала на обработку H2O2 раньше, чем экспрессия двух генов пути PAL, Cs4CL1 и CsC4H1 (рис. 2). Из предыдущих исследований у риса наблюдалась коэкспрессия некоторых факторов транскрипции WRKY и генов пути PAL (Gupta et al. 2012). Более того, экспрессия гена PAL повышается у мутанта со сверхэкспрессией OsWRKY03 (Liu et al. 2005). Вышеупомянутые два фактора транскрипции семейства WRKY также могут быть вовлечены в PEG.(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез вЦистанхесальса. Интересно, что EST, связанные с обезвоживанием (CISTH067, CISTH064), были обнаружены в библиотеке SSH, что может свидетельствовать о том, что обработка H2O2 была связана с экспрессией генов, чувствительных к обезвоживанию, вЦистанхесальсакак это наблюдается у других растений (Schmidt et al. 2013, Zhou et al. 2013). Один ген, связанный с передачей сигналов гиббереллина (GA), gid1b-подобный рецептору гиббереллина (CISTH092), был идентифицирован в библиотеке SSH, что указывает на связь передачи сигналов GA и обработки H2O2 вЦистанхесальса, о котором также сообщалось в ячмене (Bahin et al. 2011). Однако необходимы дополнительные исследования, чтобы подтвердить, связаны ли эти гены с ПЭГ.(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез. Помимо генов, упомянутых выше, созданная здесь библиотека SSH также содержит гены с совпадениями BLAST или без них. Это улучшает наше понимание влияния H2O2 на C. salsa и, во-первых, дает информацию о ее генах, участвующих в биосинтезе ПЭГ.

В заключение мы оценили влияние H2O2 на ПЭГ.(фенилэтаноидгликозиды)индукция вЦистанхесальсакультура клеток. Библиотека SSH была сконструирована после обработки H2O2, и экспрессия выбранных генов была подтверждена с помощью RT-qPCR. Были идентифицированы два гена, связанных с путями биосинтеза ПЭГ, и другие гены, чувствительные к H2O2-. Эти результаты расширят наше понимание H2O2-индуцированных ПЭГ.(фенилэтаноидгликозиды)биосинтез вЦистанхесальсана молекулярном уровне, предоставляя информацию для генных манипуляцийЦистанхесальсаклеточные культуры для улучшения PEG(фенилэтаноидгликозиды)производство.

Из: «Идентификация EST, чувствительных к перекиси водорода, участвующих в биосинтезе фенилэтаноидных гликозидов в культуре клеток Cistanche salsa».Дж. ЧЕН и соавт.

--- BIOLOGIA PLANTARUM 59 (4): 695-700, 2015 J. CHEN et al. DOI: 10.1007/с10535-015-0541-г

использованная литература

Bahin, E., Bailly, C., Sotta, B., Kranner, I., Corbineau, F., Leymarie, J.: Перекрестные помехи между активными формами кислорода и гормональными сигнальными путями регулируют покой зерна у ячменя. - Окружающая среда клеток растений. 34: 980-993, 2011.
Баруа, К., Норузиталлаб, П., Линаяти, Л., Соргелос, П., Босси, р. П.: Реактивные формы кислорода, генерируемые белком теплового шока (Hsp), индуцирующим продукт, способствуют выработке Hsp70 и Hsp{{1} } опосредованный защитный иммунитет Artemia franciscana против патогенных вибрионов. - Дев. Комп. Иммунол. 46: 470-479, 2014.
Белло, Р.И., Гомес-Диас, К., Наварро, Ф., Алкаин, Ф.Дж., Виллальба, Дж.М.: Экспрессия НАД(Ф)Н: хиноноксидоредуктазы 1 в клетках HeLa - роль перекиси водорода и фазы роста. - Ж. биол. хим. 276: 44379-44384, 2001.
Бастин, С.А., Вандесомпеле, Дж., Пфаффл, М.В.: Стандартизация количественной ПЦР и ОТ-количественной ПЦР. - Генет. англ. Биотехнолог. Новости 29: 40-43, 2009.
Cheng, XY, Wei, T., Guo, B., N, I W., Liu, CZ:Цистанхеклеточные суспензионные культуры пустыни:фенилэтаноидгликозидыбиосинтеза и антиоксидантной активности. - Процесс биохим. 40: 3119-3124, 2005.
Cheng, XY, Zhou, HY, Cui, X., Ni, W., Liu, CZ Улучшениефенилэтаноидгликозидыбиосинтез вЦистанхекультивирование суспензии клеток пустыни с помощью хитозанового элиситора. - Ж. Биотехнолог. 121: 253-260, 2006 г.
Фурлан, А., Льянес, А., Луна, В., Кастро, С.: Абсцизовая кислота опосредует выработку перекиси водорода в арахисе, вызванную водным стрессом. - биол. Завод. 57: 555-558, 2013.
Гупта, С.К., Раи А.К., Канвар, С.С., Чанд, Д., Сингх, Н.К., Шарма, Т.Р.: Единственный функциональный ген устойчивости к пирикуляриозу Pi54 активирует сложный защитный механизм у риса. - Дж. эксп. Бот. 63: 757-772, 2012.
Hu, GS, Jia, JM, Hur, YJ, Chung, YS, Lee, JH, Yun, DJ, Chung, WS, Yi, GH, Kim, TH, Kim, DH: Молекулярная характеристика гена фенилаланин-аммиак-лиазы изЦистанхепустыня - Мол. биол. Отчет 38: 3741-3750, 2011.
Кар, Р.К.: Реакция растений на водный стресс: роль активных форм кислорода. - Поведение сигналов растений 6: 1741-1745, 2011.
Кариоту, К., Дональдсон, Р.П.: Аскорбатпероксидаза, поглотитель перекиси водорода в глиоксисомных мембранах. - дуга ч. Биохим. Биофиз. 434: 248-257, 2005.
Кобаяши Х., Карасава Х., Миясе Т., Фукусима С.: Исследования составляющихцистанхеэто трава. 4. Выделение и структура двух новых фенилпропаноидных гликозидов, цистанозида-С и цистанозида-D. - Хим. фарм. Бык. 32: 3880-3885, 1984.

Лю, CZ, Ченг, XY: Улучшениефенилэтаноидгликозидыбиосинтез в культурах клетокЦистанхеDeserticola под действием осмотического стресса. - Plant Cell Rep. 27: 357-362, 2008 г.
Liu, JY, Guo, ZG, Zeng, ZL: Улучшено накоплениефенилэтаноидгликозидывведением предшественника в суспензионную культуруЦистанхесальса. - Биохим. англ. Дж. 33: 88-93, 2007.
Liu, XQ, Bai, XQ, Qian, Q., Wang, XJ, Chen, MS, Chu, CC: OsWRKY03, активатор транскрипции риса, который функционирует в защитном сигнальном пути выше OsNPR1. - Сотовый Res. 15: 593-603, 2005.
Мурасиге, Т., Скуг, Ф.: Переработанная среда для быстрого роста и биоанализа с культурами тканей табака. - Физиол. Завод. 15: 473-497, 1962.
Нан, ЗД, Цзэн, КВ, Ши, С.П., Чжао, МБ, Цзян, Ю., Ту, ПФ:Фенилэтаноидгликозидыс противовоспалительным действием из стеблейЦистанхеDeserticola, выращенная в пустыне Тарим. - Фитотерапия 89: 167-174, 2013.
Нанда, А.К., Андрио, Э., Марино, Д., Поли, Н., Дюнан, К.: Активные формы кислорода во время ранних взаимодействий растений и микроорганизмов. - Дж. Интегр. биол. растений 52: 195-204, 2010.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Расширенное производствофенилэтаноид гликозидывведением предшественника в культуру клетокЦистанхепустыня - Процесс биохим. 40: 3480-3484, 2005а.
Ouyang, J., Wang, XD, Zhao, B., Wang, YC: Улучшение производствафенилэтаноидгликозидыпоЦистанхеDeserticola, культивированные в эрлифтном биореакторе с внутренней петлей и просеивающим стояком. - Фермент микробиол. Тех. 36: 982-988, 2005б.
Сальседо-Моралес, Г., Хименес-Апарисио, А.Р., Крус-Соса, Ф., Трехо-Тапия, Г.: Анатомическая и гистохимическая характеристика гаустория in vitro из корней Castilleja tenuiflora. - биол. Завод. 58: 164-168, 2014.
Сатьярадж, Г., Шринивасан, С., Ким, Й.Дж., Ли, О.Р., Парвин, С., Балусами, С.Р., Хоролрагчаа, А., Ян, Д.К.: Акклиматизация перекиси водорода повышает толерантность к соли путем активации белков, связанных с защитой в организме. Panax ginseng CA Мейер. - Мол. биол. Отв. 41: 3761-3771, 2014.
Шмидт Р., Миулет Д., Хуббертен Х.М., Обата Т., Хофген Р., Ферни А.Р., Фисан Дж., Сегундо Б.С., Гидердони Э., Шипперс Дж.Х.М., Мюллер-Робер, B.: SALTRESPONSIVE ERF1 регулирует передачу сигналов, зависящих от активных форм кислорода, во время начальной реакции на солевой стресс.
в рисе. - Растительная клетка 25: 2115-2131, 2013 г.
Ван, Т., Чжан, XY, Се, WY:ЦистанхеDeserticola YC Ma, «Пустынный женьшень»: обзор. - амер. Дж. подбородок. Мед. 40: 1123-1141, 2012.
Wi, SG, Chung, BY, Kim, JH, Lee, KS, Kim, JS Характер отложения перекиси водорода в оболочках листьев риса в условиях солевого стресса. - биол. Завод. 50: 469-472, 2006.
Zhou, XF, Jin, YH, Yoo, CY, Lin, XL, Kim, WY, Yun, DJ, Bressan, RA, Hasegawa, PM, Jin, JB: CYCLIN H1 регулирует реакцию на стресс при засухе и открытие устьиц, вызванное синим светом, путем ингибирование накопления активных форм кислорода в арабидопсисе. - Завод Физиол. 162: 1030-1041, 2013.