Индукция иммунитета слизистых оболочек путем введения в легкие наночастиц, нацеленных на клетки

АБСТРАКТНЫЙ

Ранее мы обнаружили, что наночастица, сконструированная из антигена, хлорида бензалкония (BK) и c-полиглутаминовой кислоты (c-PGA), показала высокую иммунную индукцию Th1 и Th2-типа после подкожного введения. Однако для профилактики респираторных инфекций следует индуцировать иммунитет слизистых оболочек. В этом исследовании мы исследовали влияние легочного введения наночастиц, содержащих овальбумин (OVA) в качестве модельного антигена, BK и c-PGA, на индукцию слизистого иммунитета в легких и сыворотке.

Комплекс сильно поглощался клетками RAW264.7 и DC2.4. После легочного введения задержка в легких была более длительной для комплекса OVA/BK/c-PGA, чем для одного OVA. OVA-специфический сывороточный иммуноглобулин (Ig)G сильно индуцировался комплексом. Высокие уровни IgG и IgA также индуцировались в жидкости бронхоальвеолярного лаважа, и in vivo токсичности не наблюдалось. В заключение, мы эффективно и безопасно индуцировали иммунитет слизистой путем легочного введения комплекса OVA/BK/c-PGA.

В последние годы все больше и больше исследований показывают, что иммунитет слизистых оболочек играет важную роль в иммунной системе организма. Иммунитет слизистых оболочек относится к иммунной системе на основе слизистых оболочек в организме человека, и ее защитные возможности в основном направлены на инвазию патогенов в слизистые оболочки человека, такие как дыхательные пути, пищеварительный тракт и репродуктивный тракт.

Мукозальный иммунитет сам по себе не делает организм более иммунным, но может помочь нашему организму более эффективно справляться с вторжением чужеродных патогенов. Постоянно стимулируя иммунитет слизистых оболочек, наш организм вырабатывает больше антител, что повышает наш иммунитет.

Итак, как можно стимулировать мукозальный иммунитет? Вот несколько предложений:

1. Получайте достаточное количество витамина С. Витамин С является природным антиоксидантом, который повышает функцию иммунных клеток, что помогает бороться с инфекциями. Фрукты и зеленые листовые овощи, такие как лимоны, апельсины и клубника, богаты витамином С.

2. Увеличьте потребление молочнокислых бактерий. Молочнокислые бактерии могут способствовать балансу кишечной флоры и подавлять рост вредных бактерий. Обычные продукты с молочнокислыми бактериями включают йогурт, квашеную капусту, кимчи и т. д.

3. Практикуйте глубокое дыхание. Глубокое дыхание увеличивает поступление кислорода и вентиляцию легких, что может помочь удалить накопленные патогены из легких.

Короче говоря, стимуляция иммунитета слизистых оболочек является важным средством повышения иммунитета. Мы должны сделать все возможное, чтобы улучшить иммунитет слизистой оболочки с помощью диеты и образа жизни, чтобы защитить свое здоровье. С этой точки зрения нам необходимо повышать иммунитет. Цистанхе может значительно повысить иммунитет, поскольку зола мяса содержит множество биологически активных компонентов, таких как полисахариды, два гриба и хуан ли, которые могут стимулировать иммунную систему. Различные типы клеток повышают их иммунную активность.

Нажмите Цистанхе пустынная добавка

1. Введение

Острые респираторные инфекции почти наверняка являются основной причиной смерти детей в возрасте до 5 лет в развивающихся странах (Williams et al., 2002). Для респираторных инфекций было разработано несколько вакцин, в том числе вакцин против гриппа, коклюша и пневмококка (White, 1988; Pittman, 1991; Chen et al., 2020). Большинство этих вакцин вводят внутримышечно и подкожно, что может эффективно индуцировать сывороточный иммуноглобулин (Ig)G. Однако другие пути более полезны для стимуляции иммунитета слизистых оболочек для предотвращения острых респираторных инфекций. Сообщалось, что введения через слизистые оболочки, такие как интраназальное и легочное, эффективно индуцируют IgA слизистых оболочек и предотвращают респираторные инфекции (Giri et al., 2005; Ainai et al., 2017).

С другой стороны, вакцины для интраназального и легочного введения не должны содержать адъювантов, которые, как сообщалось, вызывают воспалительные реакции и изъязвление в месте введения (Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). Другой подход к повышению эффективности вакцин без адъювантов заключается в разработке системы, которая может эффективно доставлять вакцины в антигенпрезентирующие клетки (АРС) слизистой оболочки.

В предыдущем исследовании мы разработали новый вектор доставки вакцины, состоящий из антигена, хлорида бензалкония (BK) и c-полиглутаминовой кислоты (c-PGA). Комплекс, включающий овальбумин (OVA) в качестве модельного антигена, BK и c-PGA (комплекс OVA/BK/c-PGA), эффективно доставлял OVA в дендритные клетки и улучшал индукцию OVA-специфического сывороточного IgG после подкожного введения мышам (Kurosaki et al. ., 2012). Настоящее исследование было направлено на изучение влияния легочного введения комплекса OVA/BK/c-PGA на индукцию слизистого иммунитета в легких и сыворотке.

2. Материалы и методы

2.1. Химикаты

OVA был приобретен у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США). БК был получен от Nacalai Tesque, Inc. (Киото, Япония). c-PGA был предоставлен Yakult Pharmaceutical Industry Co., Ltd. (Токио, Япония). OVA, меченный изотиоцианатом флуоресцеина (FITC-OVA), и OVA, меченный Alexa Fluor 647- (Alexa 647- OVA), были получены от Invitrogen (Carls, CA, USA). Фетальную бычью сыворотку (FBS) приобретали у Biological Industries Ltd. (кибуц Бейт Хаемек, Израиль). OPTI-MEM I был получен от GIBCO BRL (Гранд-Айленд, штат Нью-Йорк, США), а раствор премикса антибиотиков, содержащий пенициллин, стрептомицин и L-глутамин, был получен от Wako Pure Chemical Industries, Ltd. (Осака, Япония). Модифицированная по Дульбекко среда Игла (DMEM) и среда RPMI1640 были получены от Nissui Pharmaceutical Co., Ltd. (Токио, Япония).

2.2. Комплексный препарат

Ранее мы сконструировали комплекс OVA/BK/c-PGA при массовом соотношении 1:0.2:0.2 (Куросаки и др., 2012). Для приготовления комплекса OVA/BK соответствующее количество раствора BK (pH 5.0), растворенного в 5-процентной глюкозе, смешивали с раствором OVA (pH 7.0), растворенным в 5-процентной глюкозе, и оставляли на 15 минут при 4°С. Для покрытия комплекса OVA/BK c-PGA к комплексу OVA/BK добавляли раствор c-PGA (pH 7,0), растворенный в 5% глюкозе, и оставляли еще на 15 минут при 4C. Размер частиц и f-потенциал каждого комплекса измеряли с использованием Zetasiser Nano ZS (Malvern Instruments, Ltd., Малверн, Великобритания).

2.3. Клетки

Использовали клеточную линию мышиных макрофагов RAW264.7 и дендритную клеточную линию DC2.4. Клетки RAW264.7 выращивали в среде DMEM с добавлением 10% FBS и антибиотиков. Клетки DC2.4 выращивали в среде RPMI1640 с добавлением 10% FBS, антибиотиков, 1 мМ заменимых аминокислот и 1 нМ 2-меркаптоэтанола. Эти клетки оценивали во влажной атмосфере с 5-процентным содержанием СО2 в воздухе при 37°С.

2.4. Эксперимент по клеточному поглощению in vitro

Клетки RAW264.7 и клетки DC2.4 высевали на 24-луночные планшеты (Corning, NY, USA) с плотностью 2,0 104 клеток/лунку и культивировали в 50{ {21}} мл питательной среды. Через 24-ч преинкубации среду заменяли на среду OPTI-MEM I и клетки инкубировали с 5 мг FITC-OVA и комплексом, содержащим 5 мг FITC-OVA, в течение 2 ч. После инкубации эти клетки промывали PBS и наблюдали под флуоресцентным микроскопом (BIOREVO BZ-9000; Keyence Co., Осака, Япония). После наблюдения эти клетки лизировали в 300 мкл буфера для лизиса (рН 7,8 и 0,1 М Трис/HCl-буфер, содержащий 0,05% тритона X-100 и 2 мМ ЭДТА). Лизаты помещали в 96-луночные планшеты и измеряли флуоресценцию FITC-OVA при длине волны испускания 530 нм с длиной волны возбуждения 480 нм с использованием флуорометрического считывателя микропланшетов (Infinite-200Pro M-Plex, Tecan Japan Co., Ltd., Канагава, Япония). Содержание белка в лизате определяли методом Бредфорда с использованием BSA в качестве стандарта. Поглощение измеряли с помощью устройства для считывания микропланшетов при 570 нм. Поглощение FITC-OVA было указано в мг на мг белка.

2.5. Животные

Уход за животными и экспериментальные процедуры проводились в соответствии с Руководством по экспериментам на животных Университета Нагасаки с одобрения Институционального комитета по уходу за животными и их использованию. Самцов мышей C57BL/6N (возраст 5 недель) приобретали у Japan SLC (Shizuoka, Japan). После транспортировки мышам давали возможность акклиматизироваться в новой среде в течение 1 дня перед экспериментами. Легочное введение (40 мл) осуществляли с помощью депрессора языка со светом при спонтанном дыхании у мышей, анестезированных ингаляцией изофлюрана (Horiguchi et al., 2015).

2.6. Накопление комплекса в легких

Для изучения накопления OVA мышам легочным путем вводили 40 мг Alexa647-OVA и комплекс, содержащий 40 мг Alexa647- OVA в объеме 40 мл на мышь. Через шесть дней после введения мышей умерщвляли и вскрывали легкие. Интенсивность флуоресценции Alexa647-OVA в легком мыши наблюдали с помощью системы Xenogen IVIS Lumina System в сочетании с программным обеспечением Living Image для сбора данных (Xenogen, Co, Almeda, CA, USA). После наблюдения эти легкие гомогенизировали с буфером для лизиса, а гомогенаты центрифугировали при 15000 об/мин (Kubota-3500, Kubota Corporation, Токио, Япония) в течение 5 минут, и флуоресценция Alexa647 в этих супернатантах определяли с помощью лидера микропланшета при длине волны возбуждения и излучения 640 и 670 нм соответственно.

2.7. Иммунизация

Мышей иммунизировали 5-процентным раствором глюкозы, 40 мг OVA, пустым комплексом из 8 мг BK и 8 мг c-PGA (носитель) и комплексом OVA/BK/c-PGA, содержащим 40 мг OVA, путем легочного введения 4 раза. еженедельно. Через две недели после последней иммунизации получали жидкость бронхоальвеолярного лаважа (БАЛ) и сыворотку. БАЛ и сыворотку использовали для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA).

2.8. Определение индукции OVA-специфических антител

Для покрытия OVA в каждую лунку планшета для ELISA добавляли 100 мл раствора OVA (10 мг/мл в 1 М гидрокарбонате натрия) (Thermo Fisher Scientific Inc., Уолтем, Массачусетс, США). и инкубировали в течение ночи при 4°С. Планшеты трижды промывали фосфатно-солевым буфером, содержащим 0,05% Tween-20 (PBST), 200 мл блокирующего реагента N 102 (Nichiyu, Co., Ltd., Токио, Япония). ) добавляли для блокирования неспецифического связывания, а затем инкубировали в течение 6 ч при 4°С. Планшеты дважды промывали PBST. Затем в каждую лунку добавляли аликвоты по 100 мл 1000-кратно разбавленной сыворотки и неразбавленных образцов ЖБАЛ и инкубировали в течение ночи при 4°С. - мышиные IgG, IgA, IgM, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 (1:10,000) (Abcam, Cambridge, UK) – добавляли в каждую лунку и инкубировали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем пять раз промывали PBST. Использовали раствор TMB One (Promega, WI, USA), приготовленный в соответствии с инструкциями производителя. Затем реакцию останавливали через 15 минут добавлением 1 н. соляной кислоты. Поглощение измеряли при 450 нм с помощью ридера для микропланшетов.

2.9. Токсичность комплекса OVA/BK/c-PGA in vivo

OVA и комплекс OVA/BK/c-PGA вводили мышам легочным путем. БАЛ получали через 3 и 24 ч после введения от мышей. Через 24 часа после введения также рассекали легкое. Активность лактатдегидрогеназы (ЛДГ) в ЖБАЛ измеряли с использованием набора QuantiChromTM Lactate Dehydrogenase Kit (BioAssay Systems, CA, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Образцы легких фиксировали в 4-процентном буферном растворе фосфата параформальдегида. Изготовление срезов и окрашивание гематоксилин-эозином (HE) было поручено компании GenoStaff (Токио, Япония). Окрашенные HE срезы легких исследовали под микроскопом при 20-кратном увеличении.

2.10. статистический анализ

Статистическую значимость различий между двумя группами оценивали с помощью t-критерия Стьюдента. Множественные сравнения между группами были выполнены с помощью теста Тьюки. Значения p < 0,05 считались показательными для статистической значимости.

3. Результаты

3.1. Физико-химические свойства комплекса

Мы сконструировали анионный комплекс OVA/BK/c-PGA при весовом соотношении 1:0,2:0,2. Покрытый c-PGA комплекс имел размер частиц примерно 105,4 нм и f-потенциал примерно 35,5 мВ.

3.2. Клеточное поглощение комплекса

Клетки RAW264.7 и клетки DC2.4 обрабатывали FITC-OVA и комплексом FITC-OVA/BK/c-PGA, и визуализировали поглощение FITC-OVA клетками, как показано на рисунке 1. FITC-OVA/BK/ Комплекс c-PGA сильно поглощался клетками RAW264.7 и клетками DC2.4, и наблюдалась сильная зеленая флуоресценция FITC-OVA (рис. 1 (A, B) соответственно). В то же время в обеих клетках, обработанных FITC-OVA, наблюдалось небольшое количество FITC-OVA.

Клеточное поглощение FITC-OVA было количественно определено в клетках RAW264.7 и клетках DC2.4 (рис. 1(C)). Комплекс FITC-OVA/BK/c-PGA показал значительно более высокое поглощение, чем FITC-OVA, в обеих клетках (p < 0,01).

3.3. Накопление Alexa647-OVA в легких после легочного введения

Alexa647-OVA и комплекс Alexa647-OVA/BK/c-PGA вводили мышам легочным путем для определения накопления в легких Alexa647-OVA в качестве антигена. Через 6 дней после введения легкие рассекали и визуализировали интенсивность их флуоресценции с использованием системы Xenogen IVIS Lumina. Флуоресцентное изображение ex-vivo показано на рисунке 2(A). Высокая интенсивность флуоресценции наблюдалась во всем легком через 6 дней после легочного введения, хотя в селезенке, сердце, почках и печени интенсивность флуоресценции отсутствовала (данные не представлены). Накопление в легких было выше для комплекса Alexa647-OVA/BK/c-PGA, чем для Alexa647-OVA на 6-й день. Как показано на рисунке 2(B), накопление в легких было значительно выше для Alexa Комплекс 647-OVA/BK/c-PGA, чем для Alexa647- OVA (p < 0,05).

3.4. OVA-специфические антитела в сыворотке после легочного введения комплекса

5-процентный раствор глюкозы, комплекс BK/c-PGA (носитель), OVA и комплекс OVA/BK/c-PGA вводили мышам легочным путем четыре раза, а затем сывороточные OVA-специфические IgG, IgA, IgM, и IgE определяли с помощью ELISA, как показано на фиг. 3. Легочное введение OVA и комплекса OVA/BK/c-PGA повышало уровни IgG у мышей, хотя OVA-специфический IgG не обнаруживался у мышей, которым вводили 5% глюкозы и носитель. Кроме того, продукция IgG и IgA была значительно выше после введения комплекса OVA/BK/c-PGA, чем после введения OVA (p < 0,05 или 0,01). С другой стороны, OVA-специфические IgM и IgE не индуцировались ни OVA, ни комплексом OVA/BK/c-PGA.

3.5. OVA-специфические антитела в БАЛ после легочного введения комплекса

OVA-специфические IgG, IgA, IgM и IgE также определяли в ЖБАЛ, как показано на рисунке 4. Уровень IgG значительно повышался под действием OVA по сравнению с уровнями после введения контроля и носителя (p < 0,05 или .01). Тем не менее, комплекс OVA/BK/c-PGA значительно увеличивал не только IgG, но и IgA в ЖБАЛ (p < 0,01). Однако OVA-специфические IgM и IgE не индуцировались OVA или комплексом OVA/BK/c-PGA.

3.6. Подтипы IgG в сыворотке после легочного введения комплекса

Индукционные эффекты OVA-специфических подтипов IgG, таких как IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3, в сыворотке определяли, как показано на рисунке 5. По сравнению с контролем и носителем, OVA значительно увеличивал только IgG1 (p < 0,01). Уровни антител всех подтипов, индуцированные комплексом OVA/BK/c-PGA, были значительно выше, чем уровни, индуцированные контролем и носителем (p<0,05 или 0,01).

3.7. Подтипы IgG в БАЛ после легочного введения комплекса

OVA-специфические подтипы IgG, такие как IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3, также определялись в ЖБАЛ, как показано на рисунке 6. OVA значительно повышал только уровни IgG1 по сравнению с уровнями, индуцированными контролем и носителем (p < 0,01). . По сравнению с контролем, носителем и OVA комплекс OVA/BK/c-PGA индуцировал значительно более высокие уровни антител всех подтипов (p < 0,05 или 0,01).

3.8. Токсичность комплекса OVA/BK/c-PGA in vivo

Мышам вводили 5% раствор глюкозы, OVA и комплекс OVA/BK/c-PGA. Активность ЛДГ в ЖБАЛ определяли через 3 или 24 ч после введения (рис. 7). Введение OVA и комплекса OVA/BK/c-PGA мало влияло на уровень ЛДГ в ЖБАЛ.

Через двадцать четыре часа после введения у этих мышей вырезали легкие для гистологического анализа. Окрашенные HE срезы легких показаны на фигуре 8. У мышей, обработанных OVA и комплексом OVA/BK/c-PGA, гистологических аномалий не наблюдалось.

4. Дискуссия

Легкие контролируют дыхание и подвергаются воздействию многих патогенов, таких как вирусы и бактерии, вызывающие респираторные инфекции. Эти патогены инфицируют через слизистую оболочку легких, поэтому для защиты от респираторных инфекций необходимо индуцировать слизистый иммунитет. Предотвратите респираторные инфекции, иммунитет слизистых оболочек играет важную роль; однако внутрикожное и внутримышечное введение вакцины не может сильно стимулировать иммунитет слизистых оболочек (Ito et al., 2003; Amorij et al., 2007). Иммунная система слизистой оболочки, которая индуцирует секреторный IgA, развивается на поверхности слизистой оболочки. Сообщалось, что несколько APC, такие как дендритные клетки и макрофаги, расположены на поверхности слизистой оболочки (Kopf et al., 2015). Кроме того, бронхоассоциированная лимфоидная ткань (BALT) обнаруживается в слизистой оболочке бронхов и представляет собой лимфоидный фолликул, который играет центральную роль в иммунитете слизистой оболочки дыхательных путей (Bienenstock, 1980). Ожидается, что легочное введение вакцины будет эффективно стимулировать иммунную систему слизистых оболочек. Поэтому мы создали комплекс OVA/BK/c-PGA, чтобы оценить его полезность в качестве вакцины, вводимой легочным путем.

На фигуре 4 показана концентрация OVA-специфических антител в ЖБАЛ после легочного введения OVA и комплекса OVA/BK/c-PGA. Легочное введение OVA увеличивало IgG, но мало влияло на IgA в ЖБАЛ. С другой стороны, комплекс OVA/BK/c-PGA значительно индуцировал секрецию IgA в ЖБАЛ. Кроме того, индукция IgG в сыворотке была значительно выше после введения комплекса OVA/BK/c-PGA, чем после введения OVA (рис. 3). Сывороточный IgG важен для предотвращения обострения любых возникающих инфекций (Huber et al., 2006; Schroeder & Cavacini, 2010). Результаты показывают, что комплекс OVA/BK/c-PGA может предотвращать респираторные инфекции за счет высокой индукции IgA в слизистой оболочке и обострение респираторной инфекции за счет высокой индукции IgG в сыворотке. Кроме того, индукция IgE комплексом OVA/BK/c-PGA не наблюдалась, и этот результат указывает на небольшой риск аллергической реакции на комплекс OVA/BK/c-PGA.

Комплекс OVA/BK/c-PGA также может индуцировать не только IgG1 и IgG2b, но также IgG2a и IgG3 (рис. 5). IgG1 и IgG2b известны как иммуноглобулины Th2-типа, которые опосредуют гуморальный иммунный ответ, а IgG2a и IgG3 известны как иммуноглобулины Th1-типа, которые опосредуют клеточный иммунный ответ (Firacative et al., 2018). . Следовательно, комплекс OVA/BK/c-PGA может индуцировать как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ. Эти результаты предполагают, что эта система может быть полезна для вакцин против инфекций, а также против рака. Профилактический эффект, антиген-индуцированные ответы цитокинов Th1- и Th2-типа в индуцируемых BALT, популяции Treg и индукции IL-10 должны быть оценены с использованием реальных антигенов от инфекций или рака в будущем. исследования.

Сильная индукция комплексом OVA/BK/c-PGA иммунного ответа должна быть обусловлена ​​высоким удержанием комплекса в легких и эффективной доставкой OVA в APC в слизистой оболочке легких. Наши результаты подтвердили это, показав, что через 6 дней после введения комплекс Alexa647-OVA/BK/c-PGA оставался в легких и демонстрировал значительно более высокую флуоресценцию, чем Alexa647- OVA (рис. 2). Образование комплекса может предотвращать диффузию OVA и защищать OVA от деградации протеазами слизистой оболочки легких. Кроме того, комплекс OVA/BK/c-PGA способен эффективно доставлять OVA в макрофагальные клетки RAW264.7 и дендритные клетки DC2.4 (рис. 1). Эти результаты показали, что комплекс OVA/BK/c-PGA будет поглощаться альвеолярными APC и индуцировать сильный иммунный ответ после легочного введения. Сообщалось, что наночастицы, покрытые c-PGA, поглощались эндоцитотическим путем, опосредованным гамма-глутамилтранспептидазой (Du et al., 2015). Мы также подтвердили, что наночастицы, покрытые c-PGA, поглощаются c-PGA-специфическим эндоцитотическим путем (Kurosaki et al., 2009). Комплекс OVA/BK/c-PGA может поглощаться APC в легких с помощью тех же механизмов. Однако до сих пор неясно, какие клетки ответственны за поглощение OVA и последующую презентацию антигена при индукции специфического иммунитета. В будущем следует провести дальнейшие исследования механизмов индукции иммунитета.

Для повышения эффективности вакцин было разработано множество адъювантов; однако сообщалось, что адъюванты вызывают воспалительные реакции в месте инъекции (Tamura et al., 1988; McKee et al., 2007). Следовательно, введение адъювантов в легкие может вызвать серьезные побочные эффекты, такие как пневмония. После легочного введения комплекса OVA/BK/c-PGA уровни ЛДГ в БАЛ не повышались (рис. 7), а гистологические аномалии не наблюдались в окрашенном HE срезе (рис. 8). Сообщается, что c-PGA представляет собой биосовместимый и биоразлагаемый полимер, который не проявляет иммуновоспалительных реакций (Prodhomme et al., 2003; Ye et al., 2006). BK представляет собой безопасное соединение четвертичного аммония, которое широко используется в клинической практике в качестве противомикробной добавки (Marple et al., 2004). Эти отчеты также подтверждают безопасность комплекса OVA/BK/c-PGA. С другой стороны, более высокие уровни ЛДГ наблюдались через 3 часа после легочного введения, чем через 24 часа, даже в контрольной группе. Эти результаты указывают на то, что легкое раздражение было вызвано легочным введением. Перед клиническим применением комплекса OVA/BK/c-PGA необходимы дальнейшие исследования безопасности.

В настоящем исследовании мы продемонстрировали высокую индукцию иммунной системы слизистой оболочки новым вектором доставки вакцины, сконструированным с антигенным белком, BK и c-PGA после легочного введения. Система может быть использована для вакцин против различных респираторных инфекций.

Заявление о раскрытии информации

Автор(ы) не сообщал о потенциальном конфликте интересов.

Финансирование

Эта работа была поддержана Японским обществом содействия развитию науки (JSPS) KAKENHI в рамках грантов [JP20K12649 и JP20K07156].

Рекомендации

1.Айнаи А., Судзуки Т., Тамура С.И. и др. (2017). Интраназальное введение цельной инактивированной вирусной вакцины против гриппа как перспективного кандидата на противогриппозную вакцину. Вирусный иммунол 30:451–62.

2. Аморий Дж. П., Салуджа В., Петерсен А. Х. и соавт. (2007). Легочная доставка стабилизированной инулином противогриппозной субъединичной вакцины, приготовленной путем сушки распылением и замораживанием, индуцирует системный, слизисто-гуморальный, а также клеточно-опосредованный иммунный ответ у мышей BALB/c. Вакцина 25:8707–17.

3. Биненшток Дж. (1980). Ассоциированная с бронхами лимфоидная ткань и источник иммуноглобулинсодержащих клеток в слизистой оболочке. Перспектива охраны окружающей среды 35:39–42.

4. Чен Дж. Р., Лю Ю. М., Ценг Ю. С. и др. (2020). Улучшенные вакцины против гриппа: перспектива отрасли. J Biomed Sci 27:11.

5. Du X, Xiong L, Dai S, et al. (2015). Наночастицы мезопористого диоксида кремния, покрытые c-PGA, с ковалентно присоединенными пролекарствами для улучшенного клеточного поглощения и высвобождения внутриклеточного GSH. Adv Healthc Mater 4: 771–81.

6. Firacative C, Gressler AE, Schubert K, et al. (2018). Идентификация Т-хелперов (Th)1- и Th2-ассоциированных антигенов Cryptococcus neoformans в мышиной модели легочной инфекции. Научный отчет 8:14.

7. Гири П.К., Соболь С.Б., Верма И. и др. (2005). Сравнительная оценка интраназального и подкожного способов иммунизации для разработки мукозальной вакцины против экспериментального туберкулеза. FEMS Immunol Med Microbiol 45:87–93.

8. Хоригучи М., Ойсо Ю., Сакаи Х. и др. (2015). Легочное введение ингибитора фосфоинозитид 3-киназы является лечебным средством для лечения хронической обструктивной болезни легких путем альвеолярной регенерации. J Control Release 213:112–9.

9. Huber VC, McKeon RM, Brackin MN, et al. (2006). Различный вклад индуцированных вакциной иммуноглобулинов G1 (IgG1) и антител IgG2a в защитный иммунитет против гриппа. Clin Vaccine Immunol 13: 981–90.

10. Ито Р., Одзаки Ю.А., Йошикава Т. и др. (2003). Роль антигемагглютининовых антител IgA и IgG в различных участках респираторного тракта вакцинированных мышей в профилактике летальной гриппозной пневмонии. Вакцина 21: 2362–71.

11.Копф М., Шнайдер С., Нобс С.П. (2015). Развитие и функция резидентных в легких макрофагов и дендритных клеток. Нат Иммунол 16: 36–44.

12. Куросаки Т., Китахара Т., Фумото С. и др. (2009). Тройные комплексы пДНК, полиэтиленимина и гамма-полиглутаминовой кислоты для систем доставки генов. Биоматериалы 30:2846–53.

13. Куросаки Т., Китахара Т., Накамура Т. и др. (2012). Разработка эффективной противораковой вакцины с использованием системы нацеливания антигенного белка на АПК. Фарм Рез 29:483–9.

14. Марпл Б., Роланд П., Беннингер М. (2004). Обзор безопасности хлорида бензалкония, используемого в качестве консерванта в интраназальных растворах: обзор противоречивых данных и мнений. Отоларингол Head Neck Surg 130: 131–41.

15. Макки А.С., Манкс М.В., Маррак П. (2007). Как работают адъюванты? Важные соображения для адъювантов нового поколения. Иммунитет 27: 687–90.

For more information:1950477648nn@gmail.com