Почечная ось гепсидин/ферропортин контролирует реабсорбцию железа и определяет величину почечной и системной перегрузки железом

Контактное лицо: emily.li@wecistanche.com

Горан Мохаммад1, Афина Матакиду2, Питер А. Роббинс1 и Самира Лахал-Литтлтон1

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА:ферропортин; гемохроматоз; гепсидин; утюг; перегрузка железом;почечныйканальцы

Ферропортин (FPN) является единственным известным экспортным белком железа млекопитающих. Он опосредует высвобождение железа в кровоток из энтероцитов двенадцатиперстной кишки и ретикулоэндотелиальных макрофагов селезенки, соответствующих мест всасывания и рециркуляции железа.1,2 Опосредованное FPN высвобождение железа противодействует гормону гепсидину, также известному как антимикробный пептид гепсидина (HAMP). Вырабатываемый в основном в печени, гепсидин связывается с FPN и индуцирует интернализацию, тем самым ограничивая высвобождение железа в кровоток и его доступность для периферических тканей. гомеостаз железа.

Почки являются местом реабсорбции железа. Как несвязанное с трансферрином, так и связанное с трансферрином железо может проникать в гломерулярный фильтрат. 5 Подавляющее большинство этого железа возвращается обратно в канальцевый эпителий. В этом обратном захвате участвуют несколько транспортеров, в том числе мультилигандный комплекс рецепторов мегалин-кубилин, рецептор трансферрина 1, транспортер двухвалентного металла 1, транспортер цинка ZIP8 и транспортер цинка ZIP14.5–10.

Однажды впочечныйэпителий, железо реабсорбируется в кровоток. FPN в изобилиипочкаи участвует в реабсорбции железа.11-14 Однако остается неизвестным, регулируется ли почечный FPN эндогенным HAMP в нормальных физиологических условиях, и если да, то важна ли такая регуляция для системного и/или почечного гомеостаза железа.

Чтобы ответить на эти вопросы, мы создали новую модель мыши с индуцируемымпочечныйтрубочка–специфический нокаут fpnC326Y, который кодирует устойчивый к HAMP белок FPNC326Y. Кроме того, чтобы подтвердить ранее сообщавшуюся роль FPN в реабсорбции железа, мы также создали модель мыши с индуцируемымпочечныйтрубочка– специфическая делеция гена fpn. Наши результаты показывают, что эндогенный HAMP напрямую регулирует абсорбцию железа, опосредованную FPN, и что эта регуляция важна как дляпочечныйи системный гомеостаз железа, особенно в условиях избыточной доступности железа.

Это исследование является первым, в котором мышей с почечно-специфической потерей чувствительности к HAMP использовали для формального определенияважностьпринадлежащийпочечныйОсь HAMP/FPN. Это дает новое представление о роли реабсорбции железа в определении степени почечной и внепочечной перегрузки железом при гемохроматозе.

МЕТОДЫ

Мыши

Все процедуры с животными соответствовали Закону Великобритании о домашних служебных животных (научные процедуры) 1986 года и были одобрены Комитетом по этике отдела медицинских наук Оксфордского университета.

Условные аллели fpnflfl и fpnC326Yflfl были созданы, как описано ранее.15,16

Мыши, несущие трансген Pax8.CreERT2þ, были подарком доктора Афины Матакиду из Кембриджского института исследования рака Великобритании, Кембриджский университет. Эти мыши были созданы, как описано ранее.17 Все мыши были на фоне C57BL/6.

Диеты

Если не указано иное, животных кормили стандартным кормом для грызунов, содержащим 200 частей на миллион (ppm) железа. В экспериментах по манипулированию железом мышам давали диету, богатую железом (5000-ppm железа; Teklad TD.140464), или соответствующую контрольную диету (200- ppm железа; Teklad TD.08713) с момента отлучения от груди в течение 3 лет. месяцы.

Количественное определение железа и индексы железа 

Уровни железа и ферритина в сыворотке определяли с помощью системы ABXPentra (Horiba Medical). Значения гемоглобина определяли с помощью микрокювет HemoCue Hb 201 Hemoglobin. Уровни эритроферрона в сыворотке измеряли с помощью твердофазного иммуноферментного анализа (Intrinsic Lifesciences). Определение общего элементарного железа в тканях выполняли с помощью масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой, как описано ранее. г, 1 нг/г, 10 нг/г, 20 нг/г и 100 нг/г железа добавляли к повторам выбранного образца. Внешний стандарт железа (раствор высокочистых стандартов ICP-MS-68-A) был разбавлен и измерен для подтверждения достоверности калибровки. В каждую холостую пробу, стандарт и образец также добавляли родий в качестве внутреннего стандарта в концентрации 1 нг/г. Для количественного определения железа в моче у мышей собирали мочу в течение 24 часов и подвергали масс-спектрометрии с индуктивно-связанной плазмой. Уровни креатинина в тех же образцах измеряли с помощью набора для колориметрического анализа креатинина (Abcam; ab65340), а значения железа нормализовали к концентрации креатинина.

Иммуногистохимия 

Флуоресцентное иммуноокрашивание проводили на фиксированных формалином и залитых в парафин срезах тканей с использованием антител к FPN (Novus Biologicals; NBP1-21502) в соотношении 1:100 и антитела к прогепсидину (AA 39-59) в соотношении 1:50. (Антитела онлайн; ABIN350367). Специфичность антител к FPN и гепсидину была подтверждена с использованием животных Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и животных Hamp–/– в качестве отрицательного контроля соответственно (дополнительная фигура S1). Маркеры почечного сегмента идентифицировали с использованием антител к аквапорину-1 в разведении 1:200 (Biotechne; NB600- 749), антител к аквапорину-2 в разведении 1:200 (Biotechne; NBP1-70378), или антитело кальбиндину в соотношении 1:100 (Abcam; ab82812). Вторичными антителами были антикроличьи IgG Alexa Fluor-488 (Abcam; ab150073), антиослиные IgG Cy3 (Abcam; ab6949) и антимышиные IgG Alexa568 (Abcam; ab175473). Слайды визуализировали с помощью микроскопа FV1000 Olympus.

Цистанхе может защититьпочкафункция

Вестерн-блоттинг

Ткани быстро замораживали в жидком азоте, измельчали ​​и затем лизировали с использованием RIPA Lysis Buffer System (Santa Cruz; sc-24948) в соответствии с инструкциями производителя. Тканевые лизаты очищали центрифугированием при 15 000g в течение 10 минут при 4°C. Концентрацию белка в лизатах измеряли с помощью анализа белка BCA (Pierce; 23225) и нормализовали до одной и той же концентрации для каждой партии. Затем лизаты разводили в невосстанавливающем буфере для образцов с додецилсульфатом натрия Лэммли и нагревали при 95°С в течение 5 минут. Белок (30–50 мг) загружали в гели Mini-PROTEAN TGX (Biorad; 4561096). После электрофореза белок переносили на поливинилидендифторидную мембрану с помощью системы BioRad Translotter, и мембраны блокировали в течение часа блокирующим буфером, содержащим 5% бычьего сывороточного альбумина. Затем мембраны окрашивали в течение ночи при 4°С кроличьим поликлональным антителом против FPN мыши (NBP1-21502; Novus Biologicals) в соотношении 1:1000 или антителом против b-актина, конъюгированным с пероксидазой хрена (Proteintech; HRP{{18}). }) в масштабе 1:5000. Блоты проявляли с использованием набора для первичной детекции ECL (RPN2232; VWR International). Интенсивность сигнала была количественно определена с помощью ImageJ, и соотношение между сигналами FPN и β-актина было рассчитано для получения нормализованной интенсивности.

Окраска Перлса, усиленная диаминобензидином (DAB)

Фиксированные формалином и залитые парафином срезы тканей депарафинизировали с помощью ксилола, а затем регидратировали в этаноле. Затем предметные стекла окрашивали в течение 1 часа 1-процентным раствором феррицианида калия в буфере 0,1 моль/л HCl. Активность эндогенной пероксидазы подавляли, а затем предметные стекла окрашивали хромогенным субстратом DAB и докрашивали гематоксилином. Их визуализировали с помощью стандартного светлопольного микроскопа.

Количественная полимеразная цепная реакция

Экспрессию генов измеряли с использованием зондов для анализа экспрессии TaqMangene Applied Biosystems для Hamp и бактина гена домашнего хозяйства (Life Technologies). Значение порогового цикла (CT) для представляющего интерес гена сначала нормализовали путем вычитания значения CT для β-актина для получения значения DCT. Значения DCT испытуемых образцов далее нормализовали к среднему значению DCT для контрольных образцов для получения значений DDCT. Затем рассчитывали относительные уровни экспрессии генов как 2-DDCT.

Статистика

Значения показаны как среднее значение SEM. Парные сравнения проводили с использованием t-критерия Стьюдента. Множественные сравнения были проведены с использованием дисперсионного анализа. Апостериорные тесты использовали поправку Бонферрони.

Рисунок 1|Ось гепсидин/ферропортин (FPN) в почечных канальцах контролирует реабсорбцию железа и важна для гомеостаза железа в почках.у самок мышей. (а)Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания FPN, аквапорина 1 (AQP1), аквапорина 2 (AQP2) и кальбиндина (CalD) в почках мышей дикого типа. Стержни=200 мм, исходное увеличение 10. Концевая панель, полоса=25 мм, исходное увеличение 60. (b) Вестерн-блот для FPN впочкисамок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreER T2+ и контролей FpnC326Yflfl/flfl через 1 неделю после лечения тамоксифеном. Количественная оценка интенсивности сигнала показана на нижней панели. (c) Вестерн-блоттинг для FPN в почках самок и самцов мышей Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных Fpnflfl/flfl через 1 неделю после лечения тамоксифеном. Количественная оценка интенсивности сигнала показана на нижней панели. ( d ) Уровни железа в почках у женщин и мужчин FpnC326Y.^ffl/^fflМыши ,Pax8.CreERT2+ и контроли FpnC326Yflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после лечения тамоксифеном. ( e ) Репрезентативные изображения усиленного диаминобензидином (DAB) окрашивания железом Перлса в области коры почек соответствующих животных через 3 месяца после индукции тамоксифена. Столбцы ¼ 200 мм, исходное увеличение 10. (f) Уровни железа в почках у самок и самцов мышей Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных Fpnflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после индукции тамоксифеном. ( g ) Репрезентативные изображения окрашивания железом Перлса с усилением DAB в области коры почек соответствующих животных через 3 месяца после индукции тамоксифеном. (продолжение)

Рисунок 1 |(Продолжение) Столбики ¼ 200 мм, исходное увеличение 10. (h) Уровни железа в сыворотке у самок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после лечения тамоксифеном. (i) Уровни железа в сыворотке у самок и самцов мышей Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных Fpnflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после индукции тамоксифеном. Значения показаны как среднее значение SEM. *P <0,05, **p=""><0,01 и="" ****p=""><0,0001. б-акт,="" б-актин;="" продолжение,="" контроль;="" dapi,="" 40,="" 6-диамидино-2-фенилиндол;="" ppm,="" частей="" на="" миллион.="" чтобы="" оптимизировать="" просмотр="" этого="" изображения,="" ознакомьтесь="" с="" онлайн-версией="" этой="" статьи="" на="" сайте="">

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

Ось гепсидин/FPN в почечных канальцах контролирует реабсорбцию железа и важна для гомеостаза железа в почках у самок мышей.

Сначала мы попытались установить точный сайт экспрессии FPN впочка. С этой целью мы разделили почки мышей на ФПН и сегмент-специфические маркеры аквапорин 1 (маркер проксимальных извитых канальцев и тонкого нисходящего колена Хенли), аквапорин 2 (маркер собирательных трубочек и соединительных канальцев) и кальбиндин (маркер дистальных извитых канальцев и кортикальных соединительных и собирательных трубочек). Мы обнаружили, что FPN сильно экспрессируется в коре, локализуясь вместе с аквапорином 1 в проксимальных извитых канальцах. Было некоторое количество FPN во внутреннем мозговом веществе, совместно локализованном с аквапорином 2 в собирательных трубочках мозгового вещества. Колокализации FPN с кальбиндином не было (рис. 1а; увеличенная панель показана на дополнительном рисунке S2). Эти результаты подтверждают, что FPN наиболее распространен в кортикальной области в проксимальных извитых канальцах.

Чтобы определить, регулируется ли почечный FPN с помощью HAMP, мы использовали мышей, несущих нокаут-трансген Pax8.CreERT2+, который управляет тамоксифен-индуцируемой экспрессией рекомбиназы Cre под контролем парного промотора pax8 парного гена box 8 в проксимальных и дистальных канальцах и в собирательные трубочки. 17 Мы скрестили Pax8.CreERT2+ с мышами, имеющими условный нокаут flloxed аллель FpnC326Y, который кодирует устойчивый к гепсидину FPN. Кроме того, чтобы подтвердить ранее сообщавшуюся роль почечного FPN в реабсорбции железа, мы скрестили мышей Pax8.CreERT2+ с мышами, несущими аллель Fpnflfl/flfl. Через одну неделю после введения тамоксифена для индуцирования трансгена Pax8.CreERT2 уровни почечного FPN повышались у самок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ по сравнению с контрольными FpnC326Yflfl/flfl (рис. 1b), демонстрируя, что почечный FPN подлежит регуляции с помощью эндогенного HAMP в нормальных физиологических условиях и, кроме того, подтверждая эффективность трансгена Pax8.CreERT2+. Напротив, уровни FPN в почках были снижены у самок и самцов мышей Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ по сравнению с контрольными Fpnflfl/flfl, что еще раз подтверждает эффективность трансгена Pax8.CreERT2+ (рис. 1c). Специфичность этого трансгена Pax8.CreERT2+ была также подтверждена наличием делеционного аллеля (DFpn) впочкано не в печени или селезенке мышей Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ (дополнительная фигура S2A).

Затем мы решили определить, контролирует ли почечная ось HAMP/FPN реабсорбцию железа. С этой целью мы измерили уровни железа в почках и сыворотке через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после лечения тамоксифеном. Мы обнаружили, что почечное железо

Содержание было ниже у самок FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+, чем у контрольных самок FpnC326Yflfl/flfl во все моменты времени (рис. 1d). Содержание железа в почках у самцов не различалось в зависимости от генотипа (рис. 1г). Окрашивание железом Perl с усилением DAB также подтвердило снижение уровня железа в проксимальных канальцах FpnC326Yflfl/flfl, самок Pax8.CreERT2+ (рис. 1e; увеличенная панель показана на дополнительном рисунке S2). И наоборот, мы обнаружили, что содержание железа в почках было выше у самок Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+, чем у контрольных самок Fpnflfl/flfl, начиная с 1 месяца (рис. 1f). Содержание железа в почках у самцов не различалось в зависимости от генотипа (рис. 1е). Окрашивание железом Перлса, усиленное DAB, также подтвердило накопление железа в проксимальных канальцах самок Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ (рис. 1g; увеличенная панель показана на дополнительном рисунке S2).

Уровни железа в сыворотке были временно повышены как у самцов, так и у самок мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ по сравнению с контрольной группой FpnC326Yflfl/flfl в момент времени 1-месяц (рис. 1h). Наоборот, уровни железа в сыворотке были снижены у самок Fpnflfl/ffl, Pax8.CreERT2+ по сравнению с контрольными самками Fpnflfl/flfl в момент времени 1-месяц, тогда как они оставались сопоставимыми у самцов разных генотипов во все моменты времени (рис. 1i). ). Восстановление уровня железа в сыворотке до уровней, наблюдаемых у контрольных животных в возрасте 3 месяцев, не может быть связано с восстановлением нормальных уровней почечного FPN. Действительно, Pax8.CreERT2þ-индуцированные изменения уровня почечного FPN все еще сохранялись через 3 месяца после лечения тамоксифеном (дополнительные рисунки S2B и C). Сниженное содержание железа в почках и повышенные уровни железа в сыворотке у самок FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ демонстрируют, что FPN-зависимая реабсорбция железа в проксимальных канальцах регулируется HAMP в нормальных физиологических условиях. Повышенное содержание железа в почках и сниженный уровень железа в сыворотке у самок Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ подтверждают предыдущие данные о том, что почечный FPN способствует реабсорбции железа. Кроме того, в нормальных физиологических условиях контроль реабсорбции железа почечной осью HAMP/FPN оказывается более важным у самок, чем у самцов, по крайней мере, у штамма C57BL/6.

Цистанхе может улучшить функцию почек

Почечная ось HAMP/FPN способствует, но не является необходимой для нормального системного гомеостаза железа в условиях нормальной доступности железа.

Затем мы решили определить вклад почечной оси HAMP/FPN в системный гомеостаз железа. Мы обнаружили, что у самок FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ наблюдалось временное повышение уровня ферритина в сыворотке (рис. 2а), содержания железа в печени (рис. 2b) и содержания железа в селезенке (рис. 2с) через 1- мес. по сравнению с контрольными самками FpnC326Yflfl/flfl. Их уровни гемоглобина оставались сопоставимыми с контрольными во все моменты времени (рис. 2d). Ни один из этих параметров не отличался между самцами FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и их контролями FpnC326Yflfl/flfl (рис. 2a–d). Уровни эритроферрона не различались в зависимости от генотипа (дополнительная фигура 3А). И наоборот, мы обнаружили, что самки Fpnflfl/ffl,Pax8.CreERT2+ имеют более низкие уровни ферритина в сыворотке в моменты времени 1- и 3-месяцев (рис. 2e), более низкое содержание железа в печени в 3- и 6-месячные периоды времени (рис. 2f), а также более низкое содержание железа в селезенке в 1- и 3-месячные периоды времени (рис. 2g) по сравнению с контрольными самками Fpnflfl/flfl. У них также наблюдалось временное и умеренное снижение уровня гемоглобина через 3-месяц (рис. 2h). Ни один из этих параметров не отличался между самцами Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и их контролями Fpnflfl/flfl (рис. 2e–h). Уровни эритроферрона также не менялись в зависимости от генотипа (дополнительная фигура 3B). В совокупности эти данные демонстрируют, что в нормальных физиологических условиях почечная ось HAMP/FPN вносит вклад в системные уровни железа, но сама по себе не является существенной для поддержания нормального системного гомеостаза железа.

Рисунок 2|Ось почечного антимикробного пептида гепсидина/ферропортина (FPN) способствует, но не является необходимой для нормального системногогомеостаз железа в условиях нормальной доступности железа. (объявление)Системные показатели железа у самок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после лечения тамоксифеном, включая (а) ферритин сыворотки, (б) содержание железа в печени , (c) содержание железа в селезенке и (d) гемоглобин. (e–h) Системные показатели железа у самок и самцов мышей Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных Fpnflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после индукции тамоксифеном, включая (e) сывороточный ферритин, ( f) содержание железа в печени, (g) содержание железа в селезенке и (h) гемоглобин. Значения показаны как среднее значение SEM. *P < 0.05,="" **p=""><0.01 и="" ***p=""><0,001. ppm,="" частей="" на="">

Рисунок 3|Ось почечного антимикробного пептида гепсидина (HAMP)/ферропортина (FPN) определяет величину почечной и системной перегрузки железом в условиях избыточной доступности железа. (а – е)Индексы внепочечного железа у самок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl обеспечивали либо контрольную диету (200 частей на миллион [ppm]), либо диету с высоким содержанием железа (5000 ppm) в течение 3 месяцев. (продолжение)

Рисунок 3 |(Продолжение) Показатели включают (а) сывороточное железо, (б) сывороточный ферритин, (в) содержание железа в селезенке, (г) содержание железа в сердце, (д) ​​содержание железа в легких и (е) содержание железа в печени. (g) Содержание железа в почках у самок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl, получавших либо контрольную диету (200 ppm), либожелезныйдиета (5000 частей на миллион) в течение 3 месяцев. (h, i) Репрезентативные изображения усиленного диаминобензидином (DAB) окрашивания железом Перлса в печени и критической области почек соответствующих животных. Столбцы ¼ 200 мм, исходное увеличение 10. (j) Относительная экспрессия гена hamp в печени соответствующих животных. Значения показаны как среднее значение SEM. *P <0,05, **p=""><0,01, ***p=""><0,001, ****p=""><0,0001, *****p=""><0,00001 и="" ******p=""><0,000001. чтобы="" оптимизировать="" просмотр="" этого="" изображения,="" ознакомьтесь="" с="" онлайн-версией="" этой="" статьи="" на="" сайте="">

Почечная ось HAMP/FPN определяет величину почечной и системной перегрузки железом в условиях избыточной доступности железа. 

Затем мы решили определить роль почечной оси HAMP/FPN в условиях перегрузки железом. С этой целью животных FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl индуцировали тамоксифеном, а затем давали либо контрольную диету, содержащую 200 частей на миллион железа, либо диету, богатую железом, содержащую 5000 частей на миллион железа, в течение 3 месяцев. . Мы обнаружили, что обеспечение богатой железом диеты увеличивает содержание сывороточного железа, сывороточного ферритина и железа в тканях у мужчин и женщин обоих генотипов. Однако у животных FpnC326Yflfl/flfl,Pax8.CreERT2+ было большее увеличение сывороточного железа (рис. 3а), сывороточного ферритина (рис. 3b) и содержания железа в селезенке (рис. 3с), сердце (рис. 3d), легких (рис. 3д). и печень (рис. 3f), чем контрольные FpnC326Yflfl/flfl. Напротив, у них было более низкое увеличение содержания железа в почках (рис. 3g). Различия между генотипами в степени загрузки железом в проксимальных канальцах и в печени также были очевидны при окрашивании железом Перлса с усилением DAB (рис. 3h и i; более крупные панели показаны на дополнительном рисунке S4). В соответствии с большей системной перегрузкой железом у животных FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ также наблюдалось большее увеличение экспрессии гена hamp в печени по сравнению с контрольными животными FpnC326Yflfl/flfl (рис. 3j). На уровни гемоглобина не влияли ни диета, ни генотип, и в соответствии с этим уровни эритроферрона в сыворотке также оставались неизменными (дополнительные фигуры 4A и B). Эти данные демонстрируют, что в условиях избыточной доступности железа контроль реабсорбции железа почечной осью HAMP/FPN снижает системную перегрузку железом, увеличивая при этом почечную перегрузку железом.

Почечная ось HAMP/FPN определяет характер перегрузки тканей железом при гемохроматозе. 

Затем мы приступили к изучению роли почечной оси HAMP/FPN в контексте наследственного гемохроматоза, генетического состояния перегрузки железом, вызванной дефектами продукции гепсидина или чувствительностью к гепсидину. дом, несущий гетерозиготный повсеместный нокаут аллеля fpnC326Y (Fpnwt/C326Y). Ранее мы показали, что у этих мышей развивается фенотип перегрузки железом, характерный для наследственного гемохроматоза.перегрузка железому этих мышей с тем, что наблюдается у мышей дикого типа, получавших обогащенную железом диету после отлучения от груди в течение 3 месяцев. Как у мышей Fpnwt/C326Y, так и у мышей дикого типа, получавших диету, богатую железом,

повышенное содержание железа в печени, сердце и легких по сравнению с их соответствующими контролями (рис. 4а и б). Содержание железа в почках у мышей Fpnwt/C326Y было нормальным в возрасте 3 месяцев (рис. 4а) и увеличивалось только на 32 процента по сравнению с контролем в возрасте 6 месяцев (дополнительная фигура 5А). Напротив, у животных дикого типа, получавших диету, богатую железом, содержание железа в почках увеличилось на 260% по сравнению с животными, получавшими обычную диету (рис. 4b). Относительные различия в перегрузке железом почек и печени между двумя моделями также были очевидны при окрашивании железом DABenhanced Perls (рис. 4c и d; более крупные панели показаны на дополнительном рисунке S5). Величина внепочечной перегрузки железом была сопоставима между двумя моделями, тогда как величина почечной перегрузки была значительно выше у животных дикого типа, получавших диету, богатую железом, чем у мышей Fpnwt/C326Y (рис. 4e). FPN был увеличен в коре головного мозга как у мышей Fpnwt / C326Y, так и у мышей дикого типа, получавших диету, богатую железом (рис. 4f и g; более крупные панели показаны на дополнительном рисунке S5). Более тщательное изучение места экспрессии FPN в проксимальных канальцах показало, что она локализуется как внутриклеточно, так и на базолатеральной мембране у мышей Fpnwt/C326Y. Напротив, FPN, по-видимому, локализовался в основном в цитоплазме, апикальной мембране и, что удивительно, в ядре у мышей, обеспечивающих диету, богатую железом (рис. 4f и g, нижние панели). Паттерн локализации FPN, возникающий в результате обеспечения богатой железом диеты, был дополнительно подтвержден с использованием животных Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+, Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ в качестве отрицательного контроля (дополнительная фигура S5B). Эти наблюдения вместе с предыдущими выводами о том, что животные FpnC326Yflfl/flfl,Pax8.CreERT2+ имеют более низкую почечную нагрузку железом, чем контрольная группа, после предоставленияжелезныйдиеты, демонстрируют, что потеря действия HAMP на почечный FPN защищаетпочкаот нагрузки железом на фоне наследственного гемохроматоза.

ОБСУЖДЕНИЕ

Наиболее важным открытием настоящего исследования является то, что эндогенный HAMP контролирует реабсорбцию железа, опосредованную FPN. В предыдущих исследованиях сообщалось о регуляции FPN экзогенным HAMP в культивируемых почечных клетках и об обратной зависимости между уровнями HAMP и FPN в клетках почек.почкапосле односторонней окклюзии мочеточника.12,13 Однако это первая демонстрация того, что такая регуляция действует in vivo в нормальных физиологических условиях и таким образом, что нарушает почечный и системный гомеостаз железа. Особым преимуществом этого исследования является использование новых мышей, созданных собственными силами, с почечной специфичной потерей чувствительности к HAMP. Этот подход позволяет изучать почечную ось HAMP/FPN без мешающих эффектов измененного системного гомеостаза железа, в противном случае наблюдаемых в повсеместно встречающихся моделях животных.

Рисунок 4|Почечный антимикробный пептид/ферропортин гепсидин (FPN) определяет характер перегрузки тканей железом при гемохроматозе. (а)Уровни железа в почках, печени, сердце и легких животных Fpnwt/C326Y и контрольных животных Fpnwt/wt в возрасте 3 месяцев. (b) Уровни железа впочка, печень, сердце и легкие у диких животных получали либо контрольную диету (200 частей на миллион [ppm]), либо диету, богатую железом (5{{4{{ 42}}}}00 частей на миллион) от отъема в течение 3 месяцев. ( c ) Репрезентативные изображения усиленного диаминобензидином (DAB) окрашивания железом Перлса в коре почек и печени животных Fpnwt / C326Y и контрольных животных Fpnwt / wt в возрасте 3 месяцев. Бар ¼ 200 мм, оригинальное увеличение 10. ( d ) Репрезентативные изображения окрашивания железом Перлса с усилением DAB в корковом веществе почек и печени животных дикого типа, получавших либо контрольную диету (200 частей на миллион), либо диету, богатую железом (5000 частей на миллион), после отлучения от груди в течение 3 месяцев. Полоса=200 мм, исходное увеличение 10. (e) Сравнение степени насыщения тканей железом у животных Fpnwt/C326Y и животных дикого типа, получавших диету, богатую железом. Значения, показанные для каждого животного, нормализованы к среднему значению соответствующей контрольной группы. ( f ) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания FPN в коре почек животных Fpnwt / C326Y и контролей Fpnwt / wt в возрасте 3 месяцев. Верхняя панель, столбцы=200 мм, исходное увеличение 10. Нижняя панель, столбцы=25 мм, исходное увеличение 60. (g) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания FPN в коре почек животных дикого типа, получавших либо контрольную диету (200 ppm) или диета, богатая железом (5000 ppm) после отлучения от груди в течение 3 месяцев. Верхняя панель, столбцы=200 мм, исходное увеличение 10. Нижняя панель, столбцы=25 мм, исходное увеличение 60. Значения показаны как среднее значение SEM. *P <0,05, **p=""><0,01, ***p=""><0,001 и="" ****p=""><0,0001. чтобы="" оптимизировать="" просмотр="" этого="" изображения,="" ознакомьтесь="" с="" онлайн-версией="" этой="" статьи="" на="" сайте="">

Второй важный вывод настоящего исследования заключается в том, что почечный HAMP/FPN определяет величину как почечной, так и системной перегрузки железом (рис. 5). Действительно, потеря чувствительности HAMP в почечных канальцах увеличивала величину перегрузки железом печени, селезенки, сердца и легких, в то же время уменьшая величину перегрузки почек железом после обеспечения диеты, насыщенной железом. В соответствии с этим наблюдалась более высокая перегрузка почек железом после предоставления богатой железом диеты животным дикого типа (у которых почечная ось HAMP/FPN интактна), чем у мышей с гемохроматозом (у которых также нарушена почечная ось HAMP/FPN). нарушен) (графический реферат). Это открытие может объяснить клиническое наблюдение, чтопочкаобычно не поражается у пациентов с наследственным гемохроматозом.19

Рисунок 5|Роль оси почечного антимикробного пептида гепсидина (HAMP)/ферропортина (FPN) в условиях перегрузки железом.Предоставление богатой железом диеты увеличивает доступность железа в сыворотке крови и уровень железа в клубочковом фильтрате, а также увеличивает выработку и высвобождение гепсидина (HAMP) печенью. Повышенный уровень HAMP в сыворотке ингибирует реабсорбцию железа, блокируя FPN в почечных канальцах. Ингибирование реабсорбции железа приводит к задержке железа в почках, одновременно снижая его системную доступность и, следовательно, снижая перегрузку печени железом. У мышей FpnC3326Yflfl/flfl,Pax8.CreERT2+ потеря чувствительности HAMP в почечных канальцах вызывает нерегулируемую реабсорбцию железа. Это, в свою очередь, предотвращает задержку железа в почках, увеличивая системную доступность железа и, следовательно, увеличивая перегрузку печени железом.

Хотя как гемохроматоз, так и перегрузка железом с пищей увеличивали FPN в почечных канальцах, они, по-видимому, приводили к различным паттернам локализации в апикальных, внутриклеточных или базолатеральных компартментах. Аналогичные наблюдения были сделаны в двенадцатиперстной кишке крыс, где было обнаружено, что введение железа через желудочный зонд изменяет относительное распределение FPN между этими компартментами в дуоденальных энтероцитах. регуляторные белки железа) будут действовать для поддержания высокой общей продукции FPN в клетках почечных канальцев, тогда как увеличение HAMP в сыворотке будет снижать долю FPN, которая может локализоваться на базолатеральной мембране. Из этой интерпретации следует, что расхождения между предыдущими сообщениями о локализации FPN в проксимальных канальцах могут отражать различия в содержании железа в почечных канальцах и уровнях гепсидина в сыворотке между моделями животных, использованными в разных исследованиях.5,11–14,21 Альтернативно, это расхождение может отражать степень неспецифической реактивности, о которой сообщалось ранее в отношении коммерческих антител против FPN, включая тот, который используется в настоящем исследовании.14 Функциональное значение апикальной локализации FPN в почечных канальцах остается неясным, и мы не смогли обнаружить каких-либо изменений. в экскреции железа с мочой у мышей, нагруженных железом (дополнительная фигура 5C). Другое интересное наблюдение состоит в том, что некоторые FPN оказались локализованными в ядре в почечных канальцах мышей, нагруженных железом. Аналогичные наблюдения были сделаны другими исследователями в макрофагах, нагруженных железом, и в печени крыс. Последнее исследование показало, что ядерный FPN участвует в задержке железа в ядре как часть острофазового ответа.22,23 Для дальнейшего углубления нашего понимания роли необходимы подробные исследования субклеточной локализации FPN при различных состояниях железа и при различных патологиях. ФПН в почках.

Регуляция и функция почечного HAMP также до конца не изучены. Мы обнаружили, что экспрессия гена hamp в почках была увеличена у животных дикого типа после предоставления богатой железом диеты (дополнительная фигура 5E), но оставалась неизменной у мышей с гемохроматозом (дополнительная фигура 5D) и у тех, у кого есть почечные канальцы. специфическая потеря FPN или специфическая для почечных канальцев потеря чувствительности к HAMP (дополнительные рисунки S5F и G). Эти результаты не подтверждают мнение о том, что экспрессия почечного гена hamp регулируется локально уровнями железа в почках. С точки зрения функции почечного HAMP, предыдущее исследование на модели односторонней окклюзии мочеточника показало, что он участвует в контроле почечной FPN. Мы обнаружили, что почечный HAMP (обнаруженный с помощью антитела против пептида про-HAMP) колокализуется с кальбиндином (маркером дистальных извитых канальцев и кортикальных собирательных протоков и соединительных протоков) (дополнительная фигура S5H). С другой стороны, экспрессия FPN не локализуется совместно с кальбиндином даже у мышей с почечно-специфической потерей чувствительности к HAMP (рис. 1а и дополнительная фигура S5I). Эти результаты не согласуются с аутокринной ролью почечного HAMP в регуляции почечной FPN. Тем не менее, почечный HAMP может участвовать в паракринной регуляции почечного FPN. В будущем было бы интересно изучить паракринные функции почечных HAMP и количественно оценить относительный вклад почечных и печеночных HAMP в контроль реабсорбции железа.

Еще одно интересное наблюдение из настоящего исследования заключается в том, что в условиях нормальной доступности железа почечная ось HAMP/FPN не является существенной для поддержания нормального системного гомеостаза железа и вместо этого более важна для регуляции уровня почечного железа, по крайней мере, у самок мышей штамм C57BL/6. Действительно, хотя наблюдаемые изменения уровней железа в почках в результате потери FPN или чувствительности HAMP в почечных канальцах были стойкими, изменения системных показателей железа носили преходящий характер. Преходящий характер системных эффектов предполагает участие компенсаторных механизмов. Одним из возможных компенсаторных механизмов является модуляция абсорбции пищевого железа печеночным HAMP. Действительно, мы обнаружили, что у мышей с почечной специфической потерей чувствительности к HAMP экспрессия печеночного гена hamp увеличивалась после повышения уровня сывороточного железа в момент времени 1-месяц и оставалась повышенной в более поздние моменты времени. И наоборот, экспрессия печеночного гена hamp была подавлена ​​у мышей с почечно-специфической потерей FPN после снижения уровня железа в сыворотке через 1- месяц и оставалась подавленной в более поздние моменты времени (дополнительные рисунки S6A и B). Кроме того, повышенная экспрессия гена hamp в печени в первом случае сопровождалась снижением уровня FPN в кишечнике, тогда как снижение экспрессии гена hamp в печени во втором случае сопровождалось более высоким уровнем FPN в кишечнике (дополнительная фигура S6C и D). Эти результаты показывают, что действие печеночного HAMP на всасывание железа с пищей является активным компенсаторным механизмом, участвующим в поддержании нормального системного гомеостаза железа в условиях нарушенной реабсорбции железа в почках.

Цистанхе может восстановить функцию почек

Следует отметить, что в условиях нормальной доступности железа почечная ось HAMP/FPN оказывается более важной у самок мышей, чем у мышей-самцов, по крайней мере, у линии C57BL/6. Это наблюдение нельзя объяснить различиями между мужчинами и женщинами в активности трансгена Pax8.CreERT2+. Ранее у этой линии мышей сообщалось о половом диморфизме в уровнях и структуре транспортеров вдоль нефрона.24 В соответствии с этим мы обнаружили более высокую базальную экспрессию FPN впочкисамок, чем в почках однопометников мужского пола (дополнительная фигура S2D). В предыдущем исследовании с использованием другого трансгена рекомбиназы Cre, управляемого конститутивно активным промотором Nestin для удаления fpn во всем нефроне, также сообщалось об увеличении уровня железа в почках и снижении запасов железа в сыворотке и печени. Однако это исследование проводилось на другой линии мышей (129/SvEvTac) и не анализировало фенотип в зависимости от пола или времени.14

гемохроматоз и другие железодефицитные заболевания.

РАСКРЫТИЕ

Все авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

БЛАГОДАРНОСТИ

SL-L был получателем промежуточной постдокторской стипендии Британского фонда сердца (FS / 12/63/29895). GM финансировалсяБританский проект исследования почекгрант (RP_020_20160303), присужденный SL-L.

АВТОРСКИЙ ВКЛАД

SL-L задумал исследование. SL-L и GM провели эксперименты. SL-L проанализировал и интерпретировал результаты. SL-L написал рукопись. AM предоставил материалы. PAR прокомментировал рукопись.

ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ МАТЕРИАЛ

Дополнительный файл (PDF)

Рисунок S1. Подтверждение специфичности антител FPN и HAMP. (A) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания FPN в корковом веществе почек животных Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных животных Fpnflfl/flfl в возрасте 3 месяцев. Верхние панели, полоса=200 мм, исходное увеличение 10. Нижние панели, полоса=25 мм, исходное увеличение 60. (B) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания HAMP в корковом веществе почек Hamp-/- животных и контролей дикого типа на 3 месячного возраста. Верхние панели, полоса ¼ 200 мм, исходное увеличение 10. Нижние панели, полоса ¼ 25 мм, исходное увеличение 60.

Рисунок S2. Подтверждение активности и специфичности Pax8.CreERT2+. (A) Генотипирование мышей Fpnflfl/flfl и Fpnflfl/flfl,Pax8.CreERT2+ с использованием геномной ДНК, выделенной из печени, селезенки ипочкачерез 1 неделю после введения тамоксифена. (B) Вестерн-блот для FPN впочкисамок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контролей FpnC326Y через 3 месяца после лечения тамоксифеном. Количественная оценка интенсивности сигнала показана на нижней панели. (C) Вестерн-блоттинг для FPN в почках самок и самцов мышей Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных Fpnflfl/flfl через 3 месяца после лечения тамоксифеном. Количественная оценка интенсивности сигнала показана на нижней панели. (D) Вестерн-блоттинг для FPN в почках самок дикого типа и однопометников мужского пола в возрасте 3 месяцев. Количественная оценка интенсивности сигнала показана на нижней панели. (E-G) Увеличенные версии панелей на рис. 1a, g и e соответственно. Значения показаны как среднее значение SEM. *P < 0.05,="" ***p=""><>

Рисунок S3. Уровни эритроферрона в сыворотке не изменяются у мышей FpnC326Yflfl/flfl Pax8.CreERT2+ и Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2. (A) Уровни эритроферрона в сыворотке у самок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после лечения тамоксифеном. (B) Уровни эритроферрона в сыворотке у самок и самцов мышей Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных Fpnflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после индукции тамоксифеном. Значения показаны как среднее значение SEM.

Рисунок S4. Уровни гемоглобина и эритроферрона в сыворотке не изменились у FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+, получавших диету, богатую железом. (A) Уровни гемоглобина у самок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl, получавших либо контрольный рацион (содержащий 200 частей на миллион железа), либо рацион с высоким содержанием железа (содержащий 5000 частей на миллион железа) от отлучения от груди в течение 3 месяцев. . (B) Уровни эритроферрона в сыворотке у самок и самцов мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl, получавших либо контрольную диету (содержащую 200 ppm железа), либожелезосодержащая диета(содержащие 5000 частей на миллион железа) от отлучения от груди в течение 3 месяцев. Значения показаны как среднее значение SEM. (C, D) увеличенные версии панелей на рис. 3h и i соответственно.

Рисунок S5. Переработка железа в почках и экспрессия почечного хема в различных моделях мышей. (A) Уровни железа в почках у животных Fpnwt/C326Y и контрольных животных Fpnwt/wt в возрасте 6 месяцев. (B) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания FPN и AQP1 в корковом веществе почек животных Fpnflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных животных Fpnflfl/flfl, получавших богатую железом диету, содержащую 5{47}}00 ppm после отлучения от груди в течение 3 месяцев. Столбец ¼ 25 мм, исходное увеличение 60. (C) Уровни железа в моче (нормализованные по креатинину в моче) у животных дикого типа, получавших обогащенную железом диету, содержащую 5000 частей на миллион железа, или контрольную диету, содержащую 200 частей на миллион железа, после отъема в течение 3 месяцев. (D) Экспрессия гена hamp в почках у животных Fpnwt/C326Y и контролей Fpnwt/wt в возрасте 3 месяцев. (E) Экспрессия почечного гена hamp у животных дикого типа, получавших обогащенную железом диету, содержащую 5000 частей на миллион железа, или контрольную диету, содержащую 200 частей на миллион железа, после отлучения от груди в течение 3 месяцев. (F) Экспрессия почечного гена hamp у самок и самцов мышей FpnC326Yflflflfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflflflfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после лечения тамоксифеном. (G) Экспрессия почечного гена hamp у самок и самцов мышей Fpnflflfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных Fpnflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после индукции тамоксифеном. (H) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания HAMP и CalD в коре почек животных дикого типа в возрасте 3 месяцев. Полоса ¼ 25 мм, исходное увеличение 60. (I) Репрезентативные изображения иммунофлуоресцентного окрашивания FPN и CalD в корковом веществе почек животных FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ в возрасте 1 месяца. Полоса=25 мм, исходное увеличение 60. (J–M) Увеличенные версии панелей на рис. 4c, d, f и g соответственно. Значения показаны как среднее значение SEM. *Р <>

Рисунок S6. Экспрессия гена hamp в печени и уровни FPN в кишечнике изменяются у мышей с нокаутом fpn, специфичным для почечных канальцев, и у мышей с нокаутом fpnC326Y, специфичным для почечных канальцев. (A) Относительная экспрессия мРНК hamp в печени самок мышей FpnC326Yflfl/flfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных FpnC326Yflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после лечения тамоксифеном. (B) Относительная экспрессия мРНК hamp в печени самок мышей Fpnflflfl, Pax8.CreERT2+ и контрольных Fpnflfl/flfl через 1 неделю, 1 месяц, 3 месяца и 6 месяцев после лечения тамоксифеном. (C) Репрезентативные изображения иммунного окрашивания FPN в кишечнике самок мышей FpnC326Y fflflfl, Pax8.CreERT2+ и контролей FpnC326Yflfl/flfl через 1 месяц после лечения тамоксифеном. Бар ¼ 200 мм, исходное увеличение10. (D) Репрезентативные изображения иммунного окрашивания FPN в кишечнике самок мышей Fpnflflfl, Pax8.CreERT2+ и контрольной группы Fpnflfl/flfl через 1 месяц после лечения тамоксифеном. Полоса ¼ 200 мм, исходное увеличение 10. Значения представлены как среднее значение SEM. *P <0,05, **p=""><0,01 и=""><>

Цистанхе может облегчить инфекцию почек

ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

1. Донован А., Лима К.А., Пинкус Дж.Л. и соавт. Экспортер железа ферропортин/slc40a1 необходим для гомеостаза железа. Клеточный метаб. 2005; 1: 191–200.

2. Ганц Т. Клеточное железо: ферропортин – единственный выход. Клеточный метаб. 2005; 1: 155–157.

3. Немет Э., Таттл М.С., Пауэлсон Дж. и др. Гепсидин регулирует отток клеточного железа, связываясь с ферропортином и индуцируя его интернализацию. Наука. 2004; 306:2090–2093.

4. Цяо Б., Сугианто П., Фунг Э. и др. Индуцированный гепсидином эндоцитоз ферропортина зависит от убиквитинирования ферропортина. Клеточный метаб. 2012;15:918–924.

5. Wareing M, Ferguson CJ, Green R, et al. In vivo характеристика почечного транспорта железа у анестезированных крыс. Дж. Физиол. 2000; 524: 581–586.

6. Кристенсен И., Бирн Х., Сторм Т. и др. Эндоцитарные рецепторы в проксимальных канальцах почек. Физиология. 2012; 27: 223–236.

7. Чжан Д., Мейрон-Хольц Э., Руо Т. Метаболизм железа в почках: доставка железа трансферрином и роль регуляторных белков железа. J Am Soc Нефрол. 2007; 18:401–406.

8. Canonne-Hergaux F, Gruenheid S, Ponka P, Gros P. Клеточная и субклеточная локализация переносчика железа Nramp2 в щеточной кайме кишечника и регуляция с помощью пищевого железа. Кровь. 1999; 93: 4406–4417.

9. Ван С., Дженкиткасемвонг С., Дуарте С. и др. ZIP8 является переносчиком железа и цинка, экспрессия которого на клеточной поверхности регулируется загрузкой клеточного железа. Дж. Биол. Хим. 2012; 287:34032–34043.

10. Martines A, Masereeuw R, Tjalsma H, et al. Метаболизм железа в патогенезе железоиндуцированного поражения почек. Нат Рев Нефрол. 2013;9:385–398.

11. Вольф Н., Лю В., Фентон Р. и соавт. Ферропортин 1 экспрессируется базолатерально в клетках проксимальных канальцев почек крыс, а избыток железа увеличивает его транспортировку через мембрану. J Cell Mol Med. 2011;15:209–219.

12. Пан С., Цянь З.М., Цуй С. и др. Местный гепсидин увеличивал внутриклеточную перегрузку железом за счет деградации ферропортина в почках. Biochem Biophys Res Commun. 2020; 522: 322–327.

13. Мулуэль Б., Хуамель Д., Делаби С. и др. Гепсидин регулирует внутрипочечный обмен железа в дистальном отделе нефрона. почки инт. 2013; 84: 756–766.

14. Ван С, Чжэн С, Чжан Дж и др. Физиологические функции ферропортина в регуляции почечной рециркуляции железа и остром ишемическом повреждении почек. Am J Physiol Renal Physiol. 2018; 315:F1042–F1057.

15. Лахал-Литтлтон С., Вольна М., Чанг Ю.Дж. и соавт. Важнейшая автономная роль гепсидина в сердечном гомеостазе железа. Элиф. 2016;5: e19804.

16. Лахал-Литтлтон С., Вольна М., Карр К.А. и соавт. Сердечный ферропортин регулирует гомеостаз клеточного железа и важен для сердечной функции. Proc Natl Acad Sci US A. 2015; 112:3164–3169.

17. Espana-Agusti J, Zou X, Wong K, et al. Создание и характеристика трансгенной линии Pax8-CreERT2 и нокаутной линии Slc22a6-CreERT2 для индуцируемых и специфических генетических манипуляций с эпителиальными клетками почечных канальцев. ПЛОС Один. 2016;11:e0148055.

18. Лахал-Литтлтон С., Кросби А., Фризе М. и др. Дефицит внутриклеточного железа в гладкомышечных клетках легочных артерий вызывает легочную артериальную гипертензию у мышей. Proc Natl Acad Sci US A. 2019; 116:13122–13130.

19. Камашелла С. Понимание гомеостаза железа посредством генетического анализа гемохроматоза и связанных с ним заболеваний. Кровь. 2005; 106: 3710–3717.

20. Нуньес М.Т., Тапиа В., Рохас А. и др. Обеспечение железом определяет распределение в апикальной/базолатеральной мембране транспортеров железа в кишечнике DMT1 и ферропортина 1. Am J Physiol Cell Physiol. 2010; 298:C477–C485.

21. Вюти Т., Д'Анна М.С., Рок М.Э. Роль почек в гомеостазе железа: почечная экспрессия прогепдина, ферропортина и DMT1 у мышей с анемией. Am J Physiol Renal Physiol. 2008; 295:F1213–F1221.

22. Наз Н., Малик И., Шейх Н. и др. Ферропортин -1 представляет собой «нуклеарно-негативный» белок острой фазы в печени крыс: сравнение с другими транспортными белками железа. Лаборатория Инвест. 2012; 92: 842–856.

23. Айдемир Ф., Дженкиткасемвонг С., Гулек С., Кнутсон М.Д. Загрузка железом увеличивает уровни гетерогенной ядерной РНК и мРНК ферропортина в мышиных макрофагах J774. Дж Нутр. 2009; 139: 434–438.

24. Veiras LC, Girardi ACC, Curry J, et al. Половой диморфизм почечных транспортеров и электролитный гомеостаз. J Am Soc Нефрол. 2017; 28: 3504–3517.