Истощение макрофагов снижает патологию при фактор H-зависимом иммуннокомплексно-опосредованном гломерулонефрите Ⅱ

3. Результаты

Мы индуцировали CSS у мышей путем повторной иммунизации апоферритином лошадиной селезенки. Животные генерируют активный гуморальный иммунный антиапоферритин IgG.ответ и отложение IgG в клубочках. Наши предыдущие исследования показали, что Mφ увеличивается.инфильтрация в почкив этой обстановке.

3.1. Экспрессия макрофагальных генов увеличивается в FH-зависимых ICGN почках. Чтобы оценить наличие Mφ в FH-зависимых ICGN почках, проводили qRT-PCR с маркерами макрофагов M2, CD204 (рецептор-мусорщик Mφ 1) и CD206 (маннозный рецептор Mφ 1) [21–24]. Экспрессия обоих генов в почках значительно повышалась после лечения апоферритином у мышей FHKO (рис. 1), что указывает наповышенное присутствие макрофагов в почках.

НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ НАТУРАЛЬНЫЙ ОРГАНИЧЕСКИЙ ЭКСТРАКТ ЦИСТАНШИ С 25% ЭХИНАКОЗИДА И 9% АКТЕОЗИДА ДЛЯ ФУНКЦИИ ПОЧЕК

Служба поддержки Wecistanche-крупнейшего экспортера цистаншей в Китае:

Электронная почта:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Телефон:+86 15292862950

Магазин для получения дополнительных технических характеристик:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

3.2. Изменения во времени при лечении хлодронатом инфильтрации почечных макрофагов у мышей FHKO, обработанных апоферритином. Чтобы определить эффективный метод снижения Mφ в FH-зависимых ICGN, мы истощили Mφ у fh-/- мышей.

Рисунок 3: Дополнительные данные. Приведены профили проточной цитометрии моноцитов F4/80+ от контрольных мышей и мышей, получавших клодронат. Клетки F4/80+ значительно уменьшаются, достигая менее 10% при лечении клодронатом. Каждый момент времени n=6.

3.4. Истощение макрофагов снижает клубочковый

Патология при FH-опосредованном ICGN. В конце эксперимента оценивали отложения иммунных комплексов в почках и гистопатологические особенности ICGN. Иммунофлуоресцентное окрашивание на C3 и IgG показало, что истощение Mφ не модулирует иммунные комплексы в этой ситуации. Репрезентативное иммунофлуоресцентное окрашивание и гистопатология показаны на рисунке 5. Основной гистопатологической особенностью была диффузная гиперклеточность пучков клубочков у fh-/- мышей с CSS, которая значительно уменьшалась при истощении Mφ.

3.5. Макрофаги модулируют цитокины в FH-зависимых ICGN.

Как только Mφsпроникнуть в почкуи подвергаются воспалительным раздражителям, они высвобождают цитокины. С помощью ELISA мы оценили циркулирующие уровни TNF и IL-6 в плазме и mCSF в почках у мышей FHKO, получавших физиологический раствор, апоферритин или апоферритин и клодронат. Уровни циркулирующего IL-6 были очень низкими у мышей дикого типа, увеличивались у мышей FHKO и снижались у мышей FHKO, получавших клодронат (рис. 6). Уровень трех цитокинов, TNF, IL-6 и mCSF, был значительно повышен у мышей, получавших апоферритин, по сравнению с контрольной группой, получавшей физиологический раствор. Истощение Mφ клодронатом значительно ограничивало рост цитокинов в этой ситуации.

3.6. Макрофаги модулируют профибротику

Молекулы и ламинин в FH-зависимых ICGN. Однаждыпочки заболеваютони имеют тенденцию становиться фиброзными. Mφ участвуют в фиброзном процессе, производя избыточное количество профибротических молекул. ПЦР в реальном времени выявила 75%-ное увеличение экспрессии мРНК трансформирующего фактора роста-бета1 (TGFbeta1), 100%-ное увеличение экспрессии металлопротеиназы -9 (MMP9) и 230%-ное увеличение мРНК ламинина. В соответствии с экспрессией мРНК, экспрессия белка ламинина значительно увеличивается у мышей fh-/- с CSS, которая снижается в отсутствие Mφ (рис. 7).

4. Дискуссия

Наши недавние исследования показали, что в отсутствие СГ у мышей развивается диффузнаяпролиферативный гломерулонефрит(GN) с F4/80+ Mφ вокруг узлов ИК [10]. Кроме того, наши исследования показывают, что у мышей Cd11b-/- fh-/- наблюдаются обострения гломерулонефрита [26]. Учитывая, что наличие повышенного количества воспалительных макрофагов М1 и их устойчивая активация может вызвать патологию тканей, а их реполяризация в противовоспалительный фенотип поможет в разрешении патологии заболевания, настоящее исследование было предпринято для дальнейшего понимания роли Mφ в fh. -/- мыши с ICGN. Повышенное присутствие Mφ в почках и разрешение патологии заболевания за счет истощения макрофагов во время FH-опосредованного ICGN демонстрируют критическую роль Mφ в этой ситуации, и, следовательно, они могут служить важными терапевтическими мишенями в этой ситуации.

Рисунок 5: Истощение Mφs снижает гломерулярную патологию при FH-зависимом ICGN. Приведены репрезентативные изображения клубочков мышей с дефицитом FH, обработанных физиологическим раствором (a), обработанных апоферритином (b) и обработанных апоферритином + клодронатом. На (А) срезы окрашены C3 (зеленый) и IgG (красный), а (B) показаны срезы, окрашенные PAS. Отложения IgG, которые увеличились при лечении апоферритином, остались неизменными, в то время как клубочки выглядели ближе к норме при истощении макрофагов.

Отсутствие FH приводит к увеличению продукции C5a. C5a связывается с C5aR1, передавая Mos в почки, где они добавляются к воспалительной среде. Кроме того, наши исследования также показали, что в условиях избыточного образования C5a инактивация C5a, по-видимому, ограничивает заболевание [10]. Активация Mos приводит к их поляризации, но они остаются в состоянии континуума [27]. Наши результаты в этом исследовании показывают, что гломерулярная болезнь при CSS была снижена у мышей fh-/-, у которых Mφ были истощены, по сравнению с мышами fh-/- без истощения макрофагов. Таким образом, устранение Mφs, облегчающего ICGN, у fh-/- мышей снижает патологию заболевания. Тем не менее, Mφs также необходимы для процесса восстановления, и поскольку Mφs меняют состояния с про-воспалительных состояний на противовоспалительные и наоборот, нашей будущей попыткой будет понять, может ли изменение ландшафта Mφ без их истощения изменить патологию заболевания.

Mφ играют важную роль в инициировании и поддержании фиброза, а также участвуют в подавлении, разрешении и обращении фиброза [28]. Наши результаты показывают повышенную экспрессию маркеров CD204+ и CD206+ Mφ, что позволяет предположить их повышенное присутствие в этой ситуации. Поскольку эти Mφ являются основным источником профибротических молекул, наши результаты, показывающие увеличение TGF -1, а также MMP9, позволяют предположить, что эти Mφ могут вносить как прямой, так и косвенный вклад в фиброзные процессы при FH-опосредованном ICGN посредством различных механизмов ( 1,3,8,44). TGF -1 может изменять фиброз посредством цитокиновой регуляции. Кроме того, TGF -1 модулирует биосинтез и экспрессию C3 и фактора B в моноцитах [29], а изменение комплемента в иммунных клетках и клетках почек может способствовать фиброзу тканей [30]. Однако точные взаимодействия между макрофагами и комплементом, задействованные механизмы, их роль и компартментализация тканей должны быть расшифрованы [31]. Наши исследования показали снижение экспрессии ламинина у мышей с истощением Mφs по сравнению с мышами с достаточным количеством Mφ. Чтобы лучше понять, как FH регулирует фиброзный процесс, нам необходимо идентифицировать конкретные подмножества Mφ, которые присутствуют в FH-опосредованном ICGN, и выяснить вклад каждого подмножества популяции. Эти исследования важны, поскольку дополнительная терапия стала клинической реальностью. Ингибиторы разрабатывались и продолжают разрабатываться против различных мишеней в каскаде комплемента, которые будут блокировать последующие этапы пути активации. В настоящее время одним из ингибиторов комплемента, находящихся в клиническом использовании, является антитело против C5, Экулизумаб [32]. Поэтому выявление патогенных компонентов комплемента при заболевании и дополнение его регуляцией популяции Mφs не является тривиальной задачей.

Рисунок 7: Отложение ламинина вПочки с дефицитом ФГс ICGN снижается за счет истощения Mφs. (а) qRT-PCR для TGFB, MMP9 и ламинина измРНК почеквыделен у мышей после 5 недель применения физиологического раствора и апоферритина и 3 недель приема клодроната. Выражение нормализовано к GAPDH (n=6/группа). ( б ) Репрезентативные микрофотографии IF окрашивания ламинина в почках тех же групп мышей. ∗P < 0:01.

Таким образом, здесь мы изучили роль Mφ в модели ICGN, зависящей от FH. Результаты также могут быть применены в условиях нерегулируемой активации комплемента иммунными комплексами, например, наблюдаемых при различных заболеваниях, включая волчаночный нефрит, IgA-нефропатию и мембранозную нефропатию. Мы показываем важность как регуляции комплемента с помощью FH, так и статуса Mφs при заболевании. Таким образом, фармакологическое воздействие на каскад комплемента и статус Mφs при IC-опосредованном ГН имеет потенциальную клиническую значимость.

Рекомендации

[1] Т. Мийович, А. Зейтуни и И. Колменья,"Аутоиммунная сенсоневральная тугоухость: интерфейс отологии и ревматологии." Ревматология, том. 52, нет. 5, стр. 780–789, 2013. [2] М. Абонгва, К.Е. Бабер, Р.Дж. Мартин и А.П. Робертсон,"Холиномиметик морантел как блокатор открытых каналов Ascaris suum ACR-16 nAChR," Нейронаука беспозвоночных, том. 16, нет. 4, 2016.

[3] А.С. Де Вризе, С. Сетхи, Дж. Ван Прает, К. А. Нат и ФК Фер Венца,"Заболевания почек, вызванные нарушением регуляции альтернативного пути комплемента: этиологический подход." Журнал Американского общества нефрологов, том. 26, нет. 12, стр. 2917– 2929, 2015. [4] Р. Дж. Куигг,"Комплемент и аутоиммунные заболевания клубочков," Современные направления в области аутоиммунитета, том. 7, стр. 165– 180, 2003. 

[5] MC Кэрролл,"Система комплемента в регуляции адаптивного иммунитета." Природная иммунология, том. 5, нет. 10, стр. 981– 986, 2004. [6] М.В. Кэрролл и Р.Б. Сим,"Дополнение в здоровье и болезни," Обзоры расширенной доставки лекарств, том. 63, нет. 12, стр. 965–975, 2011. 

[7] М. Норис и Г. Ремуцци,"Обзор активации и регуляции комплемента," Семинары по нефрологии, том. 33, нет. 6, стр. 479–492, 2013. 

[8] В.П. Феррейра, А.П. Герберт, К. Кортес и др.,"Связывание фактора Н с комплексом физиологических полианионов и C3b на клетках нарушается при атипичном гемолитико-уремическом синдроме." Журнал иммунологии, том. 182, нет. 11, стр. 7009–7018, 2009.

[9] Дж. Дж. Александер, М. К. Пикеринг, М. Хаас, И. Осаве и Р. Дж. Куигг,"Фактор комплемента h ограничивает отложение иммунных комплексов и предотвращаетэтвоспаление и рубцевание клубочков мышей с хронической сывороточной болезнью," Журнал Американского общества нефрологов, том. 16, нет. 1, стр. 52–57, 2005.

[10] Дж. Дж. Александер, Л. Чавес, А. Чанг и Р. Дж. Куигг,"Рецептор C5a играет ключевую роль в иммуннокомплексном гломерулонефрите в факторе комплемента H-de.фидревние мыши," Почки Интернешнл, том. 82, нет. 9, стр. 961–968, 2012. 

[11] К.В. Якубзик, Г.Дж. Рэндольф и П.М. Хенсон,"Моноциты диффэренциационная и антигенпрезентирующая функции," Обзоры природы. Иммунология, том. 17, нет. 6, стр. 349–362, 2017. 

[12] Ц. Цао, Ю. Ван и Д. К. Харрис,"Гетерогенность макрофагов, фенотипы и роль в почечнойфиброз," Почки Интернешнл. Добавка, том. 4, нет. 1, стр. 16–19, 2014.

[13] Цао Цао, Ю. Ван, XM Ван и др.,"Почечные мононуклеарные фагоциты F4/80+ CD11c+ проявляют фенотипические и функциональные характеристики макрофагов в норме и при адриамициновой нефропатии," Журнал Американского общества нефрологов, том. 26, нет. 2, стр. 349–363, 2015.