Часть Ⅰ: Возможная значимость растворимого рецептора лютеинизирующего гормона в процессе развития и взросления у мальчиков и мужчин
Apr 06, 2023
Простое резюме
Репродуктивные гормоны лютеинизирующий гормон (ЛГ) и хорионический гонадотропин человека (ХГЧ), оба агонисты рецептора лютеинизирующего гормона (LHCGR), необходимы для мужской репродукции во время развития и взрослой жизни. lHCGR экспрессируется и стимулирует выработку тестостерона тестикулярными клетками Лейдига. В этом исследовании показано, что растворимый LHCGR присутствует в крови, моче и сперме здоровых мальчиков и мужчин, а также у пациентов с аберрациями половых хромосом. Мы показываем, как циркулирующие уровни sLHCGR коррелируют с половым развитием, функцией яичек и качеством спермы, и демонстрируем, что LHCGR высвобождается из негонадной ткани плода человека. ХГЧ высвобождается в сыворотку через яички и другие органы, что указывает на возможную внесогонадную роль ЛГ или ХГЧ у мальчиков и мужчин.
Абстрактный
Лютеинизирующий гормон (ЛГ) и хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) являются агонистами рецептора лютеинизирующего гормона (ЛГХГ), регулирующего мужскую репродуктивную функцию. lHCGR может выделяться в жидкости организма. Мы хотели определить, является ли растворимый LHCGR маркером функции половых желез. Поперечные, продольные и интервенционные исследования были проведены на 195 здоровых мальчиках и мужчинах и 396 мужчинах с бесплодием, дефицитом или синдромом Клайнфельтера (СК), чтобы связать LHCGR, измеренный в сыворотке, сперме, моче и печеночных / почечных артериях, с функцией гонад. . lHCGR измеряли in vitro и in vivo в моделях тканей яичек человека и клеточных линий, моделях ксенотрансплантатов на мышах, а результаты вестерн-блоттинга человека показали, что фрагменты LHCGR обнаруживались в сыворотке и тканях половых желез одинакового размера с использованием трех разных антител. Даже после ксенотрансплантатов человека LHCGR-ELISA не показал межвидовой перекрестной реактивности или неспецифических реакций в сыворотке мыши. Напротив, sLHCGR высвобождается в культуральную среду после культивирования почек и надпочечников плода человека. Уровень sLHCGR в сыворотке был значительно ниже у здоровых мальчиков в период полового созревания (p=0.0001). У здоровых мужчин sLHCGR в сыворотке отрицательно коррелировал с соотношением ингибин B/FSH ({9}},004, p=0,027). У мужчин с бесплодием sLHCGR в сперме отрицательно коррелировал с ФСГ в сыворотке (0,006, p=0,009), концентрацией сперматозоидов ({17}},5, p=0,003) и общим количеством сперматозоидов. ( -3.2, стр=0.007). Инъекция ХГЧ снижала уровень sLHCGR в сыворотке и моче здоровых мужчин (p<0,01). В заключение, sLHCGR высвобождается в жидкости организма и связан с половым развитием и функцией половых желез. Циркулирующий sLHCGR у самцов орхидей предполагает, что sLHCGR в сыворотке может возникать в негонадных тканях и может функционировать в негонадных тканях. (Клинические испытания: NTC01411527, NCT01304927, NCT03418896).
Ключевые слова
рецептор ЛГ; половое созревание; разработка; бесплодие;Преимущества Цистанхе; внегонадные эффекты; гонадотропины; почка плода; надпочечники плода; ТКАМ2; NTera2
Нажмите здесь, чтобы купитьТравяной экстракт цистанхе
Введение
Лютеинизирующий гормон (ЛГ) и хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) являются агонистами рецептора лютеинизирующего гормона (LHCGR), который необходим для мужской репродукции во время развития и взросления [1]. HCG представляет собой рецептор, связанный с G-белком, который, как известно, экспрессируется в клетках Лейдига, гранулярном лютеине и мембранных клетках и является мощным регулятором продукции половых стероидов [1]. ХГЧ является мощным и стойким агонистом, но физиологически важен только во время развития плода [2]. За исключением некоторых видов рака зародышевых клеток и рака поджелудочной железы, ХГЧ не вырабатывается во взрослом возрасте, хотя более раннее исследование показало низкую пульсирующую секрецию ХГЧ гипофизом у взрослых мужчин и женщин. ХГЧ используется у женщин для индукции овуляции во время лечения бесплодия, у мужчин для стимуляции синтеза тестостерона и потенциального сперматогенеза у мужчин с гипогонадизмом или в качестве диагностического теста на выработку эндогенного тестостерона [4]. Удаление мышиного рецептора ЛГ (LHCGR) приводит к резкому снижению уровня тестостерона и качества спермы [5], и несколько исследовательских групп идентифицировали мутации и SNP в LHCGR, демонстрируя его важность для репродуктивной функции человека [6-8].
Ген LHCGR расположен на хромосоме 2 и состоит из 11 экзонов, из которых экзоны 1-10 кодируют внеклеточные структурные домены, а экзон 11 кодирует 7 трансмембранных и внутриклеточных структурных доменов [9]. Существует несколько изоформ LHCGR, одна из которых считается секретируемой из-за отсутствия трансмембранного якоря [10]. Другая возможность заключается в том, что высвобождение LHCGR в жидкости организма зависит от ферментативного расщепления белков на клеточной мембране, таких как ADAM, MMP и другие известные расщепляемые трансмембранные белки. Действительно, было показано, что ХГЧ специфически активирует MMP-2 и MMP-9 [11,12], а несколько исследований показали посттранскрипционную регуляцию LHCGR [13,14]. Растворимый LHCGR (LHC) был измерен в женской сыворотке и фолликулярной жидкости с помощью платформы ELISA [15,16]. Специфичность антител, используемых в анализе ELISA, была подтверждена экспрессией различных фрагментов LHCGR в клетках CHO для локализации эпитопа и обнаружения экспрессии в плаценте человека [15-17]. sLHCGR был обнаружен в сыворотке методом ЖХ-МС/МС [18]. сывороточные концентрации sLHCGR у женщин были связаны с лечением бесплодия, преэклампсией, преждевременными родами и беременностью у детей с частотой имплантации синдрома Дауна [15,16], но на сегодняшний день не были подтверждены другими исследовательскими группами. Насколько нам известно, sLHCGR никогда не был описан в биологических жидкостях здоровых мужчин, развивающихся мальчиков-подростков или мужчин с аберрациями половых хромосом. sLHCGR может функционировать в мужском кровотоке как маркер функции половых желез посредством высокоаффинного транспорта связывания или изменения активности ЛГ или ХГЧ.
Материалы и методы
1. Когорты
Молодые люди из общего населения
В Дании все здоровые молодые люди старше 18 лет должны пройти медосмотр для определения их годности к военной службе. С 1996 года около 300 призывников, представляющих население в целом, ежегодно проверяются на качество спермы. Все они предоставили образцы спермы, заполнили анкету, сделали ультразвуковое исследование яичек и взяли образцы крови. В настоящее исследование были включены образцы сыворотки и спермы из биобанка, а также ультразвуковые оценки и информация об ИМТ и возрасте 148 мужчин, опрошенных в 2013 и 2014 годах (одобрение Комитета по этике: H-KF-289428).
Здоровые мальчики до и после полового созревания
Копенгагенское подростковое исследование представляет собой комбинированное поперечное и продольное исследование здоровых датских детей [20]. Из случайно выбранных государственных школ к участию были приглашены 6203 ребенка. Общее количество участников составило 2020 детей. Продольное наблюдение за 209 детьми (101 мальчик) проводилось каждые 6 месяцев и включало физикальное обследование, оценку стадий полового созревания по Таннеру, а также образцы крови и мочи. В это исследование были включены 36 мальчиков с длительным наблюдением для оценки sLHCGR в период полового созревания (клиническое исследование: NTC01411527).
Бесплодные мужчины без серьезных сопутствующих заболеваний
Исследование Copenhagen-Bone-Gonad Study — это когортное исследование 307 бесплодных мужчин без тяжелых сопутствующих заболеваний, которые посещали нашу мужскую клинику с 2011 по 2015 год, включая в общей сложности 1427 мужчин [21,22]. Все мужчины были направлены в нашу клинику из-за низкого качества спермы и желания стать родителями. Все прошли медицинский осмотр, включая УЗИ яичек, взяли образцы крови и предоставили образцы спермы. Специалист получил их подробные истории болезни. Исследователи наблюдали за мужчинами в течение 150 дней и принимали витамин D или плацебо, как описано ранее. Все данные, представленные в этом исследовании, были получены при первоначальном посещении перед вмешательством, и все включенные переменные были предварительно определены (клиническое исследование: NCT01304927).
Стандартизированный цистанхе
Мужчины и мальчики с синдромом Клайнфельтера и пациенты с анорхией
Мы выявили 64 мальчика и мужчин с синдромом Клайнфельтера (СК), 47 постпубертатных и 16 препубертатных, определенных в соответствии со стадией Таннера, из нашей мужской клиники. У нас были точные хромосомные аберрации, история болезни, статус начала полового созревания и информация о сыворотке, доступная для всех. 7 мальчиков проходили динамическое наблюдение с регулярным клиническим обследованием и забором крови до и во время начала полового созревания.
Мы также включили 8 мужчин с нормальным числом хромосом, которым удалили яички с двух сторон по поводу предшествующих заболеваний: герминогенной карциномы яичка (n=4), диффузного рака предстательной железы (n=1), двустороннего крипторхизма и педиатрической орхиэктомии ( n=1), двусторонняя неоплазия зародышевых клеток in situ (n=1) и распространенный рак яичка после удаления оставшихся яичек из-за травмы (n=1).
Взрослые, проходящие измерение скорости кровотока по органу внутренних органов
Мы включили трех мужчин и трех женщин в постменопаузе с нормальной функцией печени, которые были госпитализированы с подозрением на мезентериальную ишемию и направлены на измерение висцерального кровотока, но не показали мезентериальной ишемии. Образцы крови брали одновременно из печени, почки, бедренной вены и соответствующей артерии (одобрение Комитета по этике: H.18048245).
Интервенционное исследование: здоровые мужчины, подвергшиеся воздействию хорионгонадотропина человека
Одиннадцать здоровых мужчин были набраны для участия в клиническом вмешательстве через объявление датского Rigshospitalet. Добровольцев лечили 5000 МЕ хорионического гонадотропина человека, и их максимальное производство эндогенного тестостерона измеряли путем сравнения исходных образцов крови и мочи с последующими образцами, собранными через 8, 24 и 72 часа после инъекции ХГЧ (клинические испытания: NCT03418896).
2. Мыши, ткани человека и клеточные линии
Два штамма клеток рака яичка человека NTera-2 и TCam-2, представляющие собой эмбриональную карциному и семиному соответственно, использовали и культивировали, как описано ранее [23].
Сыворотки собирали у голых мышей без опухолей (WT) и голых мышей с ксенотрансплантатом TCam-2, обработанных вектором, ЛГ или ХГЧ соответственно (Инспекция экспериментов на животных, Копенгаген, Дания, номер лицензии: 2012-15-2934-00051). .
Ткани плода человека первого триместра были собраны из донорских тканей женщин после плановых абортов. Почку плода и ткань надпочечников плода культивировали в моделях с каплями суспензии, как описано ранее, и собирали среду для анализа [24, 25] (одобрение Комитета по этике: H-1-2012-007).
Образцы яичек взрослых были получены от мужчин с раком яичка после овариэктомии (одобрение Комитета по этике: H{{0}}). Перитуморальную ткань, содержащую незлокачественные участки, хранили при - 80°С или фиксировали в течение ночи при 4°С в формалине или модифицированном фиксаторе Стева (200 мл 37-процентного формальдегида, 40 мл уксусной кислоты в 1 л 0,05 М фосфата). буфер, рН 7,4).
3. Биохимические анализы
Обнаружение общего sLHCGR в сыворотке, сперме, моче и различных культуральных средах было выполнено в процессе валидации с использованием наборов ELISA от New Dutch Biomarker Catalyst Laboratory (NBCL) с использованием антитела LHR029 против человеческого LHCGR и измерения всех из них неоднократно. анализ ELISA имел предел обнаружения 0,01 пмоль/мл и максимальный уровень 15,55. У шести мужчин из общей популяции с уровнями sLHCGR выше верхнего предела обнаружения были разведены и повторно измерены образцы, показывающие уровни до 30 пмоль/мл. производительность платформы ELISA была подробно описана ранее [15-17].
Цистанхе добавки
Мы также настроили два разных внутренних ИФА, настроенных нашими лаборантами, и все дополнительные реагенты были предоставлены Origin Biomarkers Ltd, Великобритания, в соответствии с их предложенной установкой [26]. Во-первых, циркулирующий sLHCGR, связанный с ХГЧ, был обнаружен с использованием наборов для сэндвич-ИФА с антителами 5A10C9 (ProMab) и am0{{2{0}}904pun ( OriGene), направленные против LHCGR и hCG соответственно. Во-вторых, мы аналогичным образом использовали внутренний ИФА для определения общего количества образцов печени, почек и нижних конечностей, артерий и вен от шести взрослых sLHCGR, где мы использовали то же антитело LHR029 (NBCL Holland) против sLHCGR. Были протестированы два разных протокола. Все измерения sLHCGR, описанные в этой статье, были выполнены с использованием NBCL ELISA, за исключением комплекса hCG-sLHCGR и образцов артерий/вен из органов, описанных выше. Тестостерон у здоровых мальчиков анализировали с использованием набора для РИА с покрытием DPC (Diagnostic Products, Лос-Анджелес, Калифорния) с пределом обнаружения (LOD) 0,23 нмоль/л и коэффициентом вариации 8,6% с использованием иммунофлуоресценции с временным разрешением. (Delfia; Wallac, Турку, Финляндия), предел обнаружения составил 0,20 нмоль/л при коэффициенте вариации 6,4%. Тестостерон и глобулин, связывающий половые гормоны (ГСПГ), у взрослых анализировали с помощью иммунохемилюминесцентного анализа (Access, Beckman Coulter, США) с LOD 0,35 нмоль/л и 0,33 нмоль/л соответственно. Уровни ФСГ и ЛГ в сыворотке и моче измеряли с помощью иммунофлуоресценции с временным разрешением (Delfia; Wallac, Турку, Финляндия) с пределами обнаружения 0,06 и 0,05 МЕ/л соответственно, а также CV и lt; оба по 5 процентов. Анализ на ингибин В проводили с использованием специфического билатерального иммуноферментного анализа (ингибин В genII, Beckman Coulter, США) CV <11 процентов. Для AMH мы использовали иммуноферментный анализ Beckman Coulter (Immunotech, Beckman Coulter, Марсель, Франция) и CV <8 процентов. Наконец, IGF1 и IGF-BP3 определяли с помощью хемилюминесцентного анализа иммунодиагностической системы IDS-iSYS с CV 10% и 9% соответственно. Свободный эстрадиол рассчитывали по константе Мазера, а свободный тестостерон (СТ) рассчитывали по формуле Вермюлена [27,28].
Анализ спермы
Здоровые молодые мужчины и бесплодные взрослые участники предоставили образцы спермы и получили информацию о продолжительности воздержания от эякуляции. Анализ спермы проводился обученными техниками, как описано ранее [19]. Объем спермы оценивали взвешиванием. Для оценки жизнеспособности сперматозоидов 10 мкл хорошо перемешанных повторов спермы помещали на предметные стекла и исследовали под микроскопом × 4{10}0x при нагретом срезе до 37 ◦ C. Сперматозоиды классифицировали как высокожизнеспособные (класс ВОЗ A плюс B), непрогрессивно жизнеспособные (класс C) или неактивные (класс D). Использовали среднее значение двух оценок жизнеспособности. Для оценки концентрации сперматозоидов образцы разводили в дистиллированном водном растворе 0,6 моль/л NaHCO3 и 0,4 процента (об./об.) формальдегида, а затем оценивали с помощью гемоцитометра Bürker-Türk, и использовали среднее значение оценок. Подсчитывали только сперматозоиды с хвостиками. Наконец, готовили мазки, окрашивали по Папаниколау и оценивали морфологию сперматозоидов строго по критериям [29].
Вестерн-блоттинг
Ткань яичка человека гомогенизировали в буфере для лизиса, разводили в буфере для загрузки SDS, а затем нагревали при 95 ◦ C в течение 5 мин. Образцы загружали в готовые полиакриламидные гели 4-20% (BioRad, номер по каталогу 456-8096) и подвергали воздействию 100 В в течение 1 ч для разделения белков. Для обнаружения sLHCGR в сыворотке альбумин и IgG удаляли с помощью набора для удаления альбумина/IgG Pierce (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA, кат. № 89875) перед нанесением образцов на гель. после гель-электрофореза белки переносили на поливинилидендифторидные мембраны с помощью промокательной бумаги (BioRad). Мембраны закрывали в трис-буферном солевом растворе и 5% обезжиренном сухом молоке на 1 час, затем инкубировали в течение ночи при 4°С с первичными антителами и в течение 1 часа при комнатной температуре со вторичными антителами. Мембраны промывали усиленной хемилюминесценцией (Thermo Scientific Super Signal West Femto Maximum Sensitive Substrate, № по каталогу 34095) и фотодетектором с системой визуализации chemiDoc MP (BioRad, № по каталогу 17001402). Для обнаружения LHCGR в тканях и сыворотке использовали три разных антитела: Aviva System Biology (OASG04237); NBCL Holland, то же антитело, что и в наборе ELISA для сыворотки (LHR029) и Santa Cruz Biotechnology (Даллас, Техас, США, Южная Каролина- 26341). В качестве контроля загрузки использовали -2 микроглобулин.
Иммуногистохимия
Иммуногистохимию проводили, как описано ранее [25]. Вкратце, срезы фиксировали модифицированным фиксатором Stiff, депарафинизировали и регидратировали. Экстракцию антигена проводили в автоклаве, содержащем цитратный буфер для экстракции (10 мМ, рН 6,0). Эндогенную пероксидазу блокировали 3-процентным (об./об.) H2O2 в метаноле в течение 30 мин. Между каждым этапом срезы промывали в TBS. Срезы инкубировали с 0,5% лошадиной сыворотки BSA в течение 30 минут, после чего инкубировали в течение ночи с двумя различными первичными антителами в течение 1 часа при комнатной температуре (LHR029 для WB/ELISA, Santa Cruz Biotechnology SC- 25828). Срезы инкубировали со вторичными антителами в течение 30 минут. Изображения визуализировали с помощью аминоэтилкарбазола (AEC, Invitrogen, Life Technologies/Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Отрицательные контроли были без первичных антител. Ни один из отрицательных контролей не был окрашен. Контрастное окрашивание проводили гематоксилином Майера, а монтаж выполняли акватексом. Срезы оценивали на микроскопе Nikon Microphot-FXA (Nikon Corporation, Мелвилл, штат Нью-Йорк, США). Окончательный анализ был выполнен с использованием программного обеспечения NDPview версии 1.2.36 (Hamamatsu Photonics, город Ивата, Япония.
Польза экстракта цистанхе для почек
ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Дюфау, М.Л. Рецептор лютеинизирующего гормона. Анну. Преподобный Физиол. 1998, 60, 461–496.
2. Рао, К.В. Дифференциальные свойства связывания хорионического гонадотропина и лютеинизирующего гормона человека с плазматическими мембранами желтых тел крупного рогатого скота. Акта Эндокринол. 1979, 90, 696–710.
3. Оделл, У. Д.; Гриффин, Дж. Пульсирующая секреция хорионического гонадотропина человека у нормальных взрослых. Н. англ. Дж. Мед. 1987, 317, 1688–1691.
4. Банг, А. К.; Нордкап, Л.; Альмструп, К.; Прискорн, Л.; Петерсен, Дж. Х.; Райперт-Де Мейтс, Э.; Андерссон, А.-М.; Юул, А .; Йоргенсен, Н. Динамическое тестирование ГнРГ и ХГЧ: установление новых диагностических референтных уровней. Евро. Дж. Эндокринол. 2017, 176, 379–391.
5. Чжан, Ф.П.; Поутанен, М .; Уилбертц, Дж.; Хухтаниеми, И. Нормальное пренатальное, но задержанное постнатальное половое развитие мышей с нокаутом рецептора лютеинизирующего гормона (LuRKO). Мол. Эндокринол. 2001, 15, 172–183.
6. Брюстерс, М.; Кристин-Мэтр, С.; Верхуф-Пост, М.; Султан, К.; Оже, Дж.; Фожерон, И.; Ларю, Л.; Лумброзо, С.; Теммен, АПН; Bouchard, P. Новая мутация сплайсинга рецептора ЛГ ответственна за мужской гипогонадизм с субнормальной выработкой сперматозоидов в пропозите и бесплодие с регулярными циклами у больной сестры. Гум. Воспр. 2008, 23, 1917–1923.
7. Латронико, AC; Арнхольд, IJP Инактивирующие мутации рецептора лютеинизирующего гормона человека у обоих полов. Семин. Воспр. Мед. 2012, 30, 382–386.
8. Симони, М.; Тюттельманн, Ф .; Мишель, К.; Бёкенфельд, Ю.; Нишлаг, Э.; Громолл, Дж. Полиморфизмы гена рецептора лютеинизирующего гормона/хорионического гонадотропина: связь с неправильным опущением яичек и мужским бесплодием. Фармакогенет. Геном. 2008, 18, 193–200.
9. Асколи, М.; Фанелли, Ф .; Сегалофф, Д.Л. Рецептор лютропина/хориогонадотропина, перспектива 2002 г. Эндокр. 2002, 23, 141–174.
10. Тена-Семпере, М.; Чжан, Ф.П.; Huhtaniemi, I. Постоянная экспрессия укороченной формы рибонуклеиновой кислоты мессенджера рецептора лютеинизирующего гормона в семенниках крыс после селективного разрушения клеток Лейдига этиленметансульфонатом. Эндокринология 1994, 135, 1018–1024.
11. Флур, Х.; Бишоф-Ислами, Д.; Кренцер, С.; Лихт, П.; Бишоф, П.; Зигмунт, М. Хорионический гонадотропин человека стимулирует матриксные металлопротеиназы -2 и -9 в цитотрофобластных клетках и снижает тканевой ингибитор металлопротеиназ -1, -2 и -3 в децидуализированных эндометриальные стромальные клетки. Плодородный. Стерильно. 2008, 90, 1390–1395.
12. Лихт П.; Флур, Х .; Нойвингер, Дж.; Валвинер, Д.; Вильдт, Л. Участвует ли хорионический гонадотропин человека непосредственно в регуляции имплантации человека? Мол. Клетка. Эндокринол. 2007, 269, 85–92.
13. Ли, Ю.-Х.; Го, X .; Гулаппа, Т .; Менон, Б.; Menon, KMJ SREBP играет регулирующую роль в экспрессии мРНК рецептора ЛГ/ХГЧ в клетках гранулезы-лютеина человека. Дж. Клин. Эндокринол. Метаб. 2019.
14. Менон, КМЖ; Менон, Б.; Ван, Л.; Гулаппа, Т .; Харада, М. Молекулярная регуляция экспрессии рецепторов гонадотропина: связь с метаболизмом стеролов. Мол. Клетка. Эндокринол. 2010, 329, 26–32.
15. Чемберс, А.Е.; Гриффин, К.; Наиф, ЮАР; Миллс, И.; Миллс, США; Сингелаки, А .; Николаидес, К.Х.; Banerjee, S. Количественные ИФА для растворимого в сыворотке LHCGR и комплекса hCG-LHCGR: потенциальная диагностика при скрининге беременности в первом триместре на предмет мертворождения, синдрома Дауна, преждевременных родов и преэклампсии. Воспр. биол. Эндокринол. 2012, 10, 113.
16. Чемберс, А.Е.; Наини, КП; Миллс, США; Локвуд, GM; Banerjee, S. Циркулирующий рецептор ЛГ/ХГЧ (LHCGR) может идентифицировать пациентов до лечения ЭКО с риском СГЯ и плохой имплантацией. Воспр. биол. Эндокринол. 2011, 9, 161.
17. Чемберс, А.Е.; Стэнли, ПФ; Рандева, Х .; Банерджи, С. Опосредованное микровезикулами высвобождение растворимого рецептора ЛГ/ХГЧ (LHCGR) из трансфицированных клеток и эксплантатов плаценты. Воспр. биол. Эндокринол. 2011, 9, 64.
18. Гао, Х.Дж.; Чен, Ю.Дж.; Цзо, Д .; Сяо, мм; Ли, Ю .; Го, Х .; Чжан, Н .; Чен, Р.Б. Количественный протеомный анализ для высокопроизводительного скрининга дифференциальных гликопротеинов в сыворотке гепатоцеллюлярной карциномы. Рак биол. Мед. 2015, 12, 246–254.
19. Прискорн, Л.; Нордкап, Л.; Банг, Аляска; Краузе, М.; Холмбо, ЮАР; Эгеберг Пальме, DL; Винг, СБ; Мёруп, Н .; Карлсен, Э.; Йонсен, ООН; и другие. Среднее количество сперматозоидов остается неизменным, несмотря на снижение курения матерей: результаты крупного перекрестного исследования с ежегодными исследованиями в течение 21 года. Гум. Воспр. 2018, 33, 998–1008.
20. Соренсен, К.; Аксглэде, Л.; Петерсен, Дж. Х.; Юул, А. Недавние изменения в сроках полового созревания у здоровых датских мальчиков: связь с индексом массы тела. Дж. Клин. Эндокринол. Метаб. 2010, 95, 263–270.
21. Бломберг Дженсен, М.; Лаветц, Дж. Г.; Петерсен, Дж. Х.; Юул, А .; Йоргенсен, Н. Влияние добавок витамина D на качество спермы, репродуктивные гормоны и коэффициент живорождения: рандомизированное клиническое исследование. Дж. Клин. Эндокринол. Метаб. 2018, 103, 870–881.
22. Бломберг Дженсен, М.; Гернер Лаветц, Дж.; Андерссон, А.-М.; Петерсен, Дж. Х.; Нордкап, Л.; Банг, Аляска; Экбом, П.; Йонсен, ООН; Преториус, Л.; Лундстрём, П.; и другие. Дефицит витамина D и низкий уровень ионизированного кальция связаны с качеством спермы и уровнем половых стероидов у бесплодных мужчин. Гум. Воспр. 2016, 31, 1875–1885.
23. Лоренцен, М.; Нильсен, Дж. Э.; Андреассен, CH; Юул, А .; Тофт, Б.Г.; Райперт-Де Мейтс, Э.; Даугард, Г .; Бломберг Дженсен, М. Рецептор лютеинизирующего гормона экспрессируется в опухолях зародышевых клеток яичка: возможные последствия для роста опухоли и прогноза. Рак 2020, 12, 1358.
24. Элдруп, Э.; Тейлад, С .; Лоренцен, М.; Андреассен, CH; Поульсен, К. Х.; Нильсен, Дж. Э.; Хансен, Д.; Эль Фасси, Д.; Берг, Дж. О.; Баги, П.; и другие. Гиперкальциемия после инъекций косметического масла: расшифровка этиологии, патогенеза и степени тяжести. Дж. Боун Шахтер. Рез. 2020, 36, 322–333.
25. Йоргенсен, А.; Макдональд, Дж.; Нильсен, Дж. Э.; Килкойн, КР; Перлман, С.; Лундвалл, Л.; Лангхофф Туезен, Л.; Юул Хэйр, К.; Фредериксен, Х .; Андерссон, А.-М.; и другие. Узловая передача сигналов регулирует развитие зародышевых клеток и формирование семенных канатиков в семенниках плода человека. Cell Rep. 2018, 25, 1924–1937.e4.
26. Чемберс, А.Е.; Фэйрберн, К.; Годуэн, М .; Миллс, В.; Ву, я .; Пандиан, Р .; Станчик, Ф.З.; Чанг, К .; Банерджи, С. Растворимый рецептор ЛГ-ХГЧ и эстрадиол как предикторы беременности и живорождения при ЭКО. Воспр. Биомед. Онлайн 2019, 38, 159–168.
27. Вермёлен, А.; Вердонк, Л.; Кауфман, Дж. М. Критическая оценка простых методов оценки свободного тестостерона в сыворотке. Дж. Клин. Эндокринол. Метаб. 1999, 84, 3666–3672.
28. Мазер, Н.А. Новый метод электронных таблиц для расчета свободных концентраций тестостерона, дигидротестостерона, эстрадиола, эстрона и кортизола в сыворотке: с иллюстративными примерами мужского и женского населения. Стероиды 2009, 74, 512–519.
29. Менквельд, Р.; Стандер, ФС; Коце, Т.Дж.; Крюгер, ТФ; Ван Зил, Дж. А. Оценка морфологических характеристик сперматозоидов человека по более строгим критериям. Гум. Воспр. 1990, 5, 586–592.
Ли Джуэль Мортенсен1, Метте Лоренцен1, Энн Йоргенсен2, Якоб Альбретсен2, Нильс Йоргенсен2,Сёрен Мёллер3,4, Анна-Мария Андерссон2, Андерс Юул2,4и Мартин Бломберг Дженсен1,5
1. Группа скелетной, минеральной и гонадной эндокринологии, университетский факультет роста и репродукции, Rigshospitalet, 2100 Копенгаген, Дания; li.juel.mortensen@regionh.dk (LJM); mette.lorenzen.01@regionh.dk (ML)
2. Департамент роста и репродукции и Международный центр исследований и подготовки кадров в области эндокринных нарушений мужской репродуктивной функции и здоровья детей (EDMaRC), Rigshospitalet, Копенгагенский университет, Blegdamsvej 9, 2100 Копенгаген, Дания; Anne.Joergensen.02@regionh.dk (AJ); Jakob.Christian.Albrethsen@regionh.dk (ЮА); Niels.Joergensen@regionh.dk (Нью-Джерси); Анна-Maria.Andersson@regionh.dk (А.-М.А.); Anders.Juul@regionh.dk (ЭйДжей)
3. Центр функциональной и диагностической визуализации и исследований, отделение клинической физиологии и ядерной медицины 260, больница Хвидовре, 2650 Копенгаген, Дания; Soeren.Moeller@regionh.dk
4. Кафедра клинической медицины, факультет медицинских наук, Копенгагенский университет, 2200 Копенгаген, Дания.
5. Отдел исследований костей и минералов, Гарвардская школа стоматологической медицины/Гарвардская медицинская школа, Бостон, Массачусетс 02115, США
