Исследование влияния экстракта фенилэтаноидных гликозидов из рушонгронга (Cistanche Deserticola) на липидный обмен в печени ApoE-/- мышей с диетой с высоким содержанием жиров на основе регуляции экспрессии ACOX1 - CPT2

АННОТАЦИЯ Цель:Чтобы изучитьЭффекты экстракта фенилэтаноидных гликозидовотЦистанхе пустынная(PGCD) на метаболизм липидов в печени ApoE-/- мышей, индуцированный диетой с высоким содержанием жиров. Методы: 70 самцов ApoE-/- мышей, получавших диету с высоким содержанием жиров, были разделены на 5 групп: модельная группа (MOD), группа мышей положительного контроля получала аторвастатин [20 мг/(кг·сут)] + эзетимиб [20 мг/(кг) ·d)](A + E), группам с низкой, средней и высокой дозой PGCD давалиПГДД[250, 500, 1000 мг/(кг·сут)]; еще 14 мышей-самцов C57BL/6J, получавших диету ачоу, были включены в группу нормального контроля (CON). На 12-е выходные определяли содержание ТГ, активность АЛТ и АСТ в сыворотке крови и ткани печени согласно инструкции по эксплуатации. Свежую ткань печени гомогенизировали и определяли содержание синтазы жирных кислот (FAS), длинноцепочечной ацил-КоА-дегидрогеназы (LCAD) и глутатионпероксидазы (GSH-Px),супероксиддисмутаза (СОД)активность проверяли методом ИФА, при этом содержание малонового диальдегида (МДА) и перекиси липидов (ПОЛ) определяли кид-методом. Экспрессия мРНК ацил-коэнзима А-оксидазы 1 (ACOX1) и карнитинпальмитоилтрансферазы 2 (CPT2) была обнаружена с помощью экспериментов RT-PCR.

НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ УЗНАТЬ 80%ФЕНИЛЭТАНОИДНЫЕ ГЛИКОЗИДЫНАТУРАЛЬНЫЙ ОРГАНИЧЕСКИЙ ЭКСТРАКТ ЦИСТАНШИ

Служба поддержки Wecistanche-крупнейшего экспортера цистаншей в Китае:

Электронная почта:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Телефон:+86 15292862950

Магазин для получения дополнительных технических характеристик:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Полученные результаты:В отличие от модельной группы,все три дозы PGCD снижали уровень ТГв печени и сыворотке дозозависимым образом и снижало активность АЛТ и АСТ в сыворотке. Все три дозы PGCD дозозависимо снижали содержание FAS и значительно повышали содержание LCAD в печени.PGCD продвинутактивность GSH-Px и СОД и значительно снижала содержание МДА и ПОЛ в печени. Эксперименты RT-PCR показали, что PGCD повышает уровни мРНК ACOX1 и CPT2 в ткани печени.

Заключение:PGCD может улучшить липидный обмен и реакцию на окислительный стресс, а также уменьшить отложение липидов в ткани печени путем регулирования экспрессии мРНК ACOX1 и CPT2.

Ключевые слова:Экстракт фенилэтаноидных гликозидов Cistanche Deserticola; АСOX1; КПТ2;липидный обмен;окислительный стресс; ApoE-/- мыши

Неалкогольная жировая болезнь печени(НАЖБП) — одно из наиболее распространенных заболеваний печени в мире, распространенность которого среди населения в целом составляет почти 30%. Жировая болезнь печени в Китае растет со скоростью 0,594% в год [1]. Возникновение и развитие НАЖБП тесно связано с чрезмерным потреблением калорий организмом. Диета с высоким содержанием жиров приводит к чрезмерному накоплению жира в печени и индуцирует НАЖБП[2], а начальным этапом ее патогенеза является отложение триацилглицерина (ТГ) в клетках печени[2] 3). На сегодняшний день не существует специфических терапевтических препаратов, воздействующих на патогенез НАЖБП. Поиск безопасных, эффективных препаратов с четкими механизмами профилактики и лечения НАЖБП стал важной задачей исследователей. Cistanche Deserticola YC Ma — паразитическое растение рода Cistanche семейства Orobanchaceae. Его основной компонент – фенилэтаноидные гликозиды – обладает функциями усиления иммунной функции организма, антивозрастным, антирадиационным, антиоксидантным и гепатопротекторным и другими эффектами[4-5]. Целью данного исследования является проведение предварительного изучения механизмаФенилэтаноидные гликозиды из Cistanche Deserticola(PGCD) в улучшении липидного обмена.

1 Экспериментальные материалы

1.1 Экспериментальные препараты

Мясистые стебли Cistanche Deserticola (содержание влаги 8,5%) были приобретены у Hotan Dichen Pharmaceutical Co., Ltd.; эталонные вещества фенилэтаноидных гликозидов (основные компоненты вербаскозид и эхинацеазид) (чистота обоих >98%) были приобретены у Manster, Чэнду, Sichuan Biotechnology Co., Ltd.; Аторвастатин: Pfizer Shanghai; Эзетимиб: Merck Pharmaceuticals Co., Ltd.

1.2 Экспериментальные животные

Самцы мышей C57BL/6J в возрасте от 6 до 8 недель и мышей ApoE-/-, масса тела (20 ± 2) г, приобретены у Changzhou Cavins Experimental Animal Co., Ltd., номер лицензии: SCXK (Su) 2016-0010 , световой цикл 12 ч/12 ч, температура (22 ± 1) градус, влажность 50–60 %, свободный прием пищи и воды. Перед экспериментом мышей кормили стандартной диетой в течение 1 недели для адаптации. Весь уход за животными и проведение экспериментов соответствуют правилам Комитета по этике экспериментальных животных Первого медицинского университета Шаньдуна (этический номер: W202107080303).

1.3 Экспериментальное повторениеагенты

Высокожировые корма: Харлан Теклад; Наборы ТГ, АЛТ, АСТ: Beijing Solebao Biotechnology Co., Ltd.; Комплекты FAS, LCAD: Shanghai Langton Biotechnology Co., Ltd.; Комплект GSH-Px: Шанхайская компания Jining Biotechnology Co., Ltd.; Наборы SOD, MDA, LPO, BCA: Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Набор Тризол: Invitrogen, Карловы Вары, Калифорния; Праймеры ACOX1 и CPT2: разработаны Sangon Bioengineering (Shanghai) Co., Ltd.

1. 4 экспериментальных прибора Hei – роторный испаритель VAP Expert: Германия

Гейдольф; Многофункциональный микропланшетный ридер Varioskan LUX: ThermoFisher; Вакуумная сублимационная сушилка FD8508: Ильшин, Южная Корея; Гомогенизатор F6/10: Shanghai Fluoroco; Высокоэффективный жидкостный хроматограф Agilent1260, УФ-спектрофотометр Cary 3500: Agilent Technologies Ltd.; Quant studio5RT — прибор для ПЦР: Thermo Fisher Biochemicals, Inc.

2.3.1 Масса тела и печеночный индекс

В конце 12-й недели мышей голодали и взвешивали. Мышей анестезировали пентобарбиталом натрия и умерщвляли. Печень собирали для расчета печеночного индекса.

2.3.2 Обнаружение индикатора сыворотки

Возьмите сыворотку и определите активность аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминотрансферазы (АЛТ) в сыворотке последовательно в соответствии с работой набора; БЦА определяет содержание белка в сыворотке и обнаруживает содержание ТГ.

2.3.3. Выявление факторов, связанных с липидным обменом в ткани печени.

При температуре 4 градуса взвесьте соответствующее количество свежей печени и гомогенизируйте ее в PBS, центрифугируйте (радиус центрифуги 7,5 см, 3 000 об/мин) гомогенат в течение 1 минуты, возьмите надосадочную жидкость и измерьте содержание белка в ткани печени с помощью BCA. Содержание ТГ в ткани, метод ИФА для определения содержания синтазы жирных кислот (FAS) и длинноцепочечной ацил-КоА-дегидрогеназы (LCAD) в ткани печени.

2.3.4 Обнаружение окислительных факторов, связанных с тканью печени

В условиях 4 градусов взвесьте соответствующее количество свежей печени и гомогенизируйте ее в PBS, центрифугируйте гомогенат (радиус центрифуги 7,5 см, 3 000 об/мин) в течение 15 минут, возьмите надосадочную жидкость и измерьте содержание белка в ткань печени с БЦА. Следуйте инструкциям по использованию реагентов. Инструкции на упаковке определяют активность супероксиддисмутазы (SOD) и глутатионпероксидазы (GSH-Px) и одновременно определяют уровни малонового диальдегида (MDA) и перекиси липидов (LPO).

2. 3. 5 Обнаружение RT-PCR

Экспрессия мРНК ACOX1/CPT2 в ткани печени: возьмите необходимое количество свежей ткани печени, используйте набор Trizol для извлечения общей мРНК ткани печени, используйте обратную транскриптазу MuLV для синтеза кДНК и используйте кДНК в качестве матрицы для количественного измерения флуоресценции в реальном времени. ПЦР (Qpcr) обнаружение. Условия реакции были следующими: предварительная денатурация при 95° в течение 2 мин; денатурация при 95 градусах в течение 10 с, отжиг: 60 градусов в течение 30 с, удлинение при 72 градусах в течение 35 с, 34 цикла и, наконец, удлинение при 72 градусах в течение 5 минут и количественный анализ в реальном времени с помощью автоматического анализатора. Экспрессия мРНК ACOX1 и CPT2. Программное обеспечение Rotor-gen Q. 1.7 (Qiagen) использовали для анализа данных, а метод 2-△△Ct использовали для подсчета относительных уровней мРНК и GAPDH. Каждую группу экспериментов проводили параллельно >3 раза. Последовательности праймеров следующие: GAPDH, выше: 5'- GCCACCC AGAAGACTGTG - 3', ниже: 5'- ATGTAGGCCATGAGGTCCAC - 3'; ACOX1, выше по течению: 5'-CGCCACCTT CAATCC AGAGT - 3' ниже по ходу: 5'-TCTGCGATGCCAAATTCCCT - 3'; CPT2, выше по течению: 5'- TCCTCCTACTC AGGACGCAA - 3' ниже по течению: TTGGGATCTTCCGCTCACAC.

2.4 Статистические методы

Для анализа данных использовалось статистическое программное обеспечение SPSS 20.0. Данные измерений выражали как (x ± s). Для сравнения между группами использовался односторонний дисперсионный анализ. P <0,05 считалось статистически значимой разницей.