Исследование разделения и иммунокомпетентности водного экстракта полисахарида из Cistanche Tubulosa

для получения дополнительной information:ali.ma@wecistanche.com

Айладан· Маймайтиайли1,ЛИ Ян1,ЯО Цзюнь1,ЮАНЬ Цзе2

（1. Школа фармации, Синьцзянский медицинский университет, Урумчи 830011, Китай;2. Коллаж Хоубо, Синьцзянского медицинского университета, Синьцзян Кламайи 834000, Китай)

ЦЕЛЬ АННОТАЦИИ:Изолировать водный экстрактполисахариды из Cistanche tubulosaи исследовать их иммунокомпетентность in vitro. МЕТОДЫ: Макропористая адсорбционная смола AB-8 использовалась для обесцвечивания полисахарида C. tubulosa. Процесс обесцвечивания был оптимизирован с помощью ортогонального теста со скоростью удержания и скоростью обесцвечивания полисахарида в качестве комплексного балла и с использованием скорости адсорбции, времени обесцвечивания, концентрации образца в качестве факторов. Были проведены проверочные испытания. Ионообменная колонна DEAE-650M использовалась для отделения водного экстракта обесцвеченного полисахарида C. tubulosa. Анализ CCK-8 использовался для выявления влияния различных концентраций полисахарида (6,25-100 мкг/мл) до и после выделения на скорость пролиферации макрофага мышей RAW264.7. Метод Грисса и ИФА-анализ были приняты для выявления влияния низкой, средней и высокой концентрации полисахарида (12,5,25,50 мкг/мл) на высвобождение NO,IL-6 и TNF-α в клетках RAW264.7, индуцированных LPS. РЕЗУЛЬТАТЫ: В оптимальном процессе обесцвечивания макропористой адсорбционной смолы AB-8 скорость потока адсорбции составляла 1,2 БВ/ч, время обесцвечивания составляло 9 ч, а концентрация образца составляла 25 мг/мл. Полные баллы 3-х раз проверочных тестов составили 63,43%, 63,29% и 63,34% соответственно, со средним показателем 63,35% (RSD = 0,11%, n = 3). Один нейтральный полисахарид (CTZ) и 5 кислот полисахаридов (CT1, CT2, CT3, CT4, CT5) были выделены из полисахарида C. cistanche, содержание которых составляло 299,2,168,0,123.2,121.6,54.4,11.2 мг/г. По сравнению с контрольной группой, 6,25-100 мкг/мл CTZ (за исключением 6,25 μ г/мл),CT2,CT4,CT5 и 6,25 μ г/мл CTC (полисахарид до разделения) может значительно увеличить скорость пролиферации клеток RAW264.7 (P<0,05), в="" то="" время="" как="" 6,25-100="" мкг/мл="" ct1,ct3="" и="" 50="" мкг/мл="" ctc="" могут="" снизить="" скорость="" пролиферации="" клеток="" raw264.7=""><0,05). по="" сравнению="" с="" группой="" лпс="" высвобождение="" no="" было="" значительно="" снижено="" в="" группах="" с="" низкой,="" средней="" и="" высокой="" концентрацией="" ctc,="" ct2,="" ct3="" и="" ct5,="" ctz="" группы="" низких="" концентраций=""><0,05), в="" то="" время="" как="" было="" значительно="" увеличено="" в="" группах="" с="" высокой="" концентрацией="" ct1="" и="" ct4=""><0,05). высвобождение="" il-6="" (за="" исключением="" группы="" высокой="" концентрации="" ct1="" и="" группы="" низкой="" концентрации="" ct5)="" и="" tnf-α="" (за="" исключением="" группы="" средней="" концентрации="" ct1)="" было="" значительно="" снижено="" в="" группах="" с="" низкой,="" средней="" и="" высокой="" концентрацией=""><0,05). выводы:="" оптимизированная="" технология="" обесцвечивания="" макропористой="" адсорбционной="" смолы="" стабильна="" и="" осуществима="" в="" исследовании.="" один="" нейтральный="" полисахарид="" и="" 5="" кислых="" полисахаридов="" могут="" быть="" выделены="" из="" водного="" экстракта="" полисахаридов="" c.="" tubulosa,="" среди="" которых="" полисахарид="" ct2="" обладает="" более="" сильной="" противовоспалительной="">

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА:Полисахарид Cistanche tubulosa; Обесцвечивание;Разделение;Иммунокомпетентность

Цистанхе тубулозапредставляет собой сухой, мясистый стебель с чешуйчатыми листьямиЦистанче тубулоса (Шенк) Уайтсемейства Лидановые. Современные исследования показали, что Cistanche Tubula содержит гликозиды фенэтилового спирта, иридоидные гликозиды, лигнаны, полисахариды, алкалоиды и другие биологически активные вещества, обладающие афродизиакальными, слабительными, печеночно-защитными и омолаживающими свойствами. , противоутомляющий повышенный иммунитет и ноотропные эффекты [1-4], могут быть использованы для клинического лечения дефицита почек ян, дефицита эссенции и крови, импотенции и бесплодия, слабости талии и коленей, слабости мышц и костей, сухости кишечника, запоров [5].

Нажмите на продукты cistanche herba

Водный экстрактЦистанхе тубулоза полисахаридкоричневато-желтый. Предыдущий эксперимент нашей исследовательской группы показал, что в дополнение кЦистанхе тубулоза полисахарид, водный экстракт также содержит нецелевые компоненты, такие как водорастворимые пигменты и белки. Это способствует разделению и очистке полисахаридов. Исследования биологической активности вызвали большие трудности. Традиционная обработка обесцвечиванием органическим растворителем разрушит химическую структуру целевого компонента в сыром экстракте, а также снизит фармакологическую активность человека, а также введение вредных ингредиентов в организм человека [6]. Макропористая адсорбционная смола является распространенным материалом для обесцвечивания полисахаридов в экстрактах китайской медицины. Это экономичный полимерный адсорбционный материал со стабильными физико-химическими свойствами. Он может быть нацелен на его селективную адсорбцию и просеивание для пигментных компонентов. Для удаления пигментов в экстрактах традиционной китайской медицины, кроме того, его можно регенерировать путем маринования и промывки щелочью, поэтому его широко используют [7]. В этом исследовании предполагается использовать макропористую адсорбционную смолу для обесцвечивания водного экстракта полисахарида Cistanche Tubula и использовать ортогональный эксперимент для оптимизации условий обесцвечивания; после обесцвечивания экстракта, в соответствии с различной природой группы, переносимой полисахаридом, планируется использовать Метод ионообменной колоночной хроматографии дополнительно разделяет нейтральные и кислые полисахаридные компоненты в полисахаридеЦистанхе тубулоза.

Исследования показали, чтоцистанчевый заводполисахариды обладают иммуномодулирующим действием и являются естественными иммуномодуляторами, которые могут активировать систему комплемента и иммунные клетки, такие как Т/В-лимфоциты, макрофаги, естественные киллерные (NK) клетки, а также могут способствовать различному высвобождению цитокинов и способствовать выработке антител и т. д. [8-11]. Липополисахарид (ЛПС) может активировать воспалительный сигнальный путь макрофагов, индуцировать оксид азота (NO) и провоспалительные цитокины, такие как интерлейкин 6 (IL-6) и фактор некроза опухоли-альфа (TNF-α). Синтез и высвобождение, тем самым запуская ряд воспалительных реакций в организме [12]. Данное исследование направлено на создание модели воспаления макрофагов RAW264.7, индуцированной ЛПС, начиная с влияния полисахарида Cistanche Tubula на пролиферацию макрофагов, секрецию воспалительного фактора и выработку NO, и предварительную оценку его влияния на иммунную активность организма.Цистанхе тубулозаполисахарид и развитие его полисахаридных ресурсов.

Предварительные исследования показали, что когда полисахариды в Cistanche cistanche экстрагируются водой, больше водорастворимых веществ будет растворяться вместе, что влияет на чистотуцистанче цистанхе полисахариды. Поэтому дальнейшее разделение и очистка их может заложить основу для изучения основы полисахаридного материала и биологической активности. Метод макропористой адсорбционной смолы является широко используемым методом обесцвечивания [17-19]. Поскольку до сих пор неясно о составе пигмента вЦистанхе тубулозаПоэтому исследовательская группа использовала статические адсорбционные эксперименты для скрининга наиболее подходящей макропористой адсорбционной смолы AB-8 из макропористых адсорбционных смол различной полярности. Полисахарид Cistanche deserticola обладает хорошей удерживающей способностью. Чтобы достичь лучшего эффекта обесцвечивания, это исследование основано на предыдущих исследованиях и использовало ортогональные эксперименты для определения процесса обесцвечивания (промывка Скорость потока десорбции, время обесцвечивания и концентрация массы образца) были оптимизированы. В результате оптимальным методом обесцвечивания для полисахарида Цистанче тубулоса был расход элюирования 1,2 БВ/ч, время обесцвечивания 9 ч и массовая концентрация образца 25 мг/мл. Результаты проверочного эксперимента показывают, что метод обесцвечивания осуществим.

Чистота и тип природных полисахаридов являются важными факторами, влияющими на его активность. Поэтому актуальные исследования по методам выделения и очистки полисахаридов по-прежнему находятся в центре внимания научно-исследовательской работы природных активных полисахаридов. Широко используемые методы разделения полисахаридов включают осаждение, гель-хроматографию, анионообменную хроматографию, колоночную хроматографию макропористой смолы и ультрафильтрацию [20]. Из-за разного состава моносахаридов полисахариды обладают разными зарядовыми свойствами. Их можно разделить на нейтральные полисахариды и кислотные полисахариды. Нейтральные полисахариды представляют собой полимеры, состоящие из двух или более различных мономеров на основе сахара, которые не содержат органических кислот. Кислые полисахариды являются более сложными, чем нейтральные полисахариды с точки зрения состава и структуры, за исключением того, что содержат более двух мономеров на основе сахара. , Также содержит уроновую кислоту моно Тела [21]. Анионообменная колоночная хроматография использует разницу в заряде полисахаридов для отделения нейтральных полисахаридов от кислых полисахаридов [22]. По этой причине в этом исследовании использовалась колоночная хроматографическая колонка DEAE-650M для разделения полисахаридов Cistanche Tubula, и в общей сложности 1 нейтральный полисахарид и 5 кислых полисахаридов были разделены. Макрофаги являются иммунокомпетентными клетками, которые могут регулировать иммунитет, поглощая и убивая патогенные микроорганизмы. Исследования показали, что когда организм человека стимулируется патологическим или механическим повреждением, лекарственное вмешательство может активировать макрофаги для повышения фагоцитарной способности макрофагов, индуцированных ЛПС, тем самым ингибируя выработку NO и ряда воспалительных клеток, таких как секреция IL-6 и TNF-α фактора, тем самым защищая хозяина от патогенов [23]. С этой целью в этом исследовании было проверено влияние различных полисахаридов Cistanche tubulosa на скорость пролиферации клеток RAW264.7, а также влияние на индуцированные ЛПС макрофаги для высвобождения NO, IL-6 и TNF-α. В результате в диапазоне массовых концентраций 12,5, 25 и 50 мкг/мл он не только способствовал пролиферации клеток RAW264,7, но и значительно ингибировал пролиферацию клеток RAW264,7.

Темполисахарид Цистанче тубулозав клетках RAW264.7, индуцированных LPS с высвобождением NO, IL-6 и TNF-α являются CT2. Соответствующие исследования показали, что моносахаридный состав и молекулярная масса полисахаридов будут влиять на егоиммуномодулирующийактивность. Моносахариды, такие как галактоза, арабиноза, манноза и глюкоза, положительно коррелируют с иммунной активностью полисахаридов [24]. Полисахариды с большей молекулярной массой могут содержать более высокую структуру множественных повторяющихся узлов, могут перекрестно соединять поверхностные рецепторы плазматической мембраны многонаправленно и, в частности,усиливают иммуномодулирующийэффект [25]. Поэтому моносахаридная композиция кислого полисахарида CT2 в данном исследовании может содержать специальные моносахариды или множественные моносахариды, которые положительно связаны с иммунной активностью, а молекулярная масса может быть больше, чем у нейтральных полисахаридов и других кислых полисахаридов, но для подтверждения необходимы дальнейшие исследования. Таким образом, оптимизированный процесс обесцвечивания макропористой адсорбционной смолы в данном исследовании является стабильным и осуществимым; 1 нейтральный полисахарид и 5 кислых полисахаридов могут быть отделены от водного экстракта Cistanche cistanche cistanche, среди которых иммунологическая активность кислотного полисахарида CT2 Сильнее. Это исследование может заложить экспериментальную основу для разработки и использования полисахаридов Cistanche Tubula.