Лян Цинсон 1,2,4, Пань Инцзе 2,4, Чен Цзыин 2,4, Чжан Ин 1,3, У Мэнхуа 1,3, Цао Хуэй 1,3, Ма Чжиго 1,3*

(1. Фармацевтический факультет Цзинаньского университета, Гуанчжоу 510632, Гуандун; 2. Guangdong Yifang Pharmaceutical Co., Ltd., Фошань 528244, Гуандун; 3. Линнаньский исследовательский центр традиционной китайской медицины, Цзинаньский университет, Гуанчжоу 510632, Гуандун; 4. Ключевая лаборатория предприятия по производству гранул традиционной китайской медицины провинции Гуандун, Фошань 528244, Гуандун)

Абстрактный: Цель Приготовить стандартный отвар цистанхе пустынной и обеспечить надежный метод контроля его качества. Методы В соответствии с требованиями к приготовлению стандартного отвара было приготовлено 14 партий стандартного отвара цистанхе пустынной. Содержание эхиназида и пилозида в стандартном отваре определяли с помощью ВЭЖХ, рассчитывали скорость переноса, измеряли скорость экстракции и значение pH отвара, а также определяли УЭЖХ-отпечаток стандартного отвара Cistanche Deserticola. Результаты. Средние показатели переноса эхиназида и пилозида в 14 партиях стандартного отвара цистанхе пустынной составили 22,99% и 17,{{2{0}}9% соответственно. Степень извлечения колебалась от 25,1 до 56,6 процента, а значение pH колебалось от 4,30 до 5,15. В отпечатке пальца есть 6 общих пиков, и среди них пик № 1 идентифицирован как гликозид эхинацеи, пик № 3 идентифицирован как ангиоцианин А, пик № 4 идентифицирован как пилозид, а пик № 5 идентифицирован как гликозид эхинацеи. пик идентифицируется как изопилозид. Было оценено сходство 14 партий стандартного отвара цистанхе пустынного, и сходство колебалось от 0,789 до 0,999. Заключение Приготовление стандартного отвара цистанхе пустынного стандартизировано, с хорошей общей однородностью, контролируемым качеством, хорошей точностью, стабильностью и воспроизводимостью метода определения, а также высоким сходством отпечатков пальцев, что может служить эталоном для контроля качества стандартного отвара цистанхе пустынного. .

Ключевые слова: Цистанхе пустынная; Стандартный отвар;Эхинакозид; пилозид; отпечаток пальца; Оценка качества

«Cistanche Deserticola — это сухой, чешуйчатый, мясистый стебель рода Cistanche из Orobaceae или Cistanche tubulosa ma. Он обладает эффектом тонизирующего Ян почек, благотворно влияет на эссенцию крови, увлажняет кишечник и облегчает запоры. Он широко используется при импотенции. , бесплодие, болезненность в пояснице и коленях, мышечная и костная слабость, сухость кишечника и запоры».

Польза для здоровья порошка цистанхе — тонизирующая почки

Нажмите здесь, чтобы просмотреть продукты Cistanche для лечения заболеваний почек

【Ask for more】 Email: xue122522@foxmail.com /  Whats App:  0086 18599088692 /  Wechat:  18599088692

В основном он содержит фенилэтаноидные гликозиды, бензиловые спиртовые гликозиды, иридоиды и их гликозиды, лигнин и его гликозиды и другие соединения. Среди них,фенилэтаноидные гликозидысчитаются основными эффективными компонентами Cistanche Deserticola ma.

Гликозид фенилэтанола является основным активным компонентом Cistanche Deserticola.

Стандартный отвар ломтиков традиционной китайской медицины (т. е. стандартный отвар) представляет собой отдельный отвар ломтиков традиционной китайской медицины, приготовленный с помощью стандартизированных процессов, руководствуясь теорией традиционной китайской медицины и основанный на клиническом применении со ссылкой на современные методы экстракции. В связи с тем, что стандартный отвар не имеет вспомогательных веществ и не подвергается процессу сушки, он совместим с традиционным отваром для клинического применения, и его можно легко протестировать в различных идеальных концентрациях посредством приготовления ломтиков или экстрактов. Таким образом, стандартный отвар ломтиков традиционной китайской медицины в качестве стандарта качества для классических препаратов Мин Фан и стандартного эталона для измерения частиц формулы традиционной китайской медицины в настоящее время является эффективной формой обеспечения безопасности, эффективности и стабильности традиционной китайской медицины. для достижения постоянства клинической эффективности. В настоящее время в литературе отсутствуют сообщения об изучении стандартного отвара цистанхе пустынной, кусочки отвара.В ходе этого эксперимента был приготовлен соответствующий стандартный отвар для 14 партий цистанхе пустынного и проведено исследование стандартного отвара цистанхе пустынного с целью определения основных образцов маркеров качества цистанхе пустынного, что обеспечило экспериментальную основу для разработки формульных гранул цистанхе пустынного. .

Цистанхе порошок

1.Аппаратура и материалы

1.1 Инструменты и оборудование

Высокоэффективная жидкостная хроматография Waterse2695 (Waters); весы ME204E 1/10000 (Mettler Toledo); миллионная шкала XP26 (Mettler Toledo); Ультравысокоэффективная жидкостная хроматография WatersAcquire UPLC (WATSCH); Ультразвуковой очиститель KQ-500E (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.).

1.2 Реагенты и материалы

Эхинакозидэталонное вещество (номер партии: S-003-190403),антоцианЭталонное вещество (номер партии: G-066-181216),актеозидэталонное вещество (номер партии: M-011-181106) иизопилозидэталонное вещество (номер партии: Y{{0}}) были приобретены у Chengdu Ruifensi Biotechnology Co., Ltd. с чистотой более 98,0%. хроматографически чистая муравьиная кислота, Tianjin Kemio Chemical Reagent Co., Ltd; хроматографически чистый метанол, Merck Co., Ltd; Экспериментальная вода представляет собой лабораторную систему сверхчистой воды, Merck Co., Ltd; Остальные реагенты имеют аналитическую чистоту. В ходе этого исследования на рынке было собрано в общей сложности 14 партий подготовленных кусочков цистанхе пустынной, которые профессор Ма Чжиго из Цзинаньского университета идентифицировал как высушенные, чешуйчатые, мясистые стебли рода цистанхе пустынной или цистанхе трубчатой, растения род Cistanche семейства Orobaceae. Образец информации (см. Таблицу 1).

Эхинозид, основной химический компонент цистанхе пустынной.

2 .Методы и результаты

2.1 Приготовление стандартного отвара и испытуемого раствора

2.1.1 Приготовление стандартного отвара цистанхе пустынной:

В соответствии с Положением об управлении дегустационными залами традиционной китайской медицины в медицинских учреждениях, Техническими требованиями к контролю качества и стандартной рецептуре гранул для рецептур традиционной китайской медицины и Стандартному супу традиционной китайской медицины, возьмите 100 г приготовленных ломтиков цистанхе пустынной. , поместите их в электрическую керамическую кастрюлю, дважды добавьте воды для отвара, добавьте в 9 раз больше воды в первый раз, замочите на 30 минут, нагрейте и кипятите с помощью Wuhuo (500 Вт), держите их слегка кипящими при умеренном огне (200 Вт), продолжайте отварить в течение 60 минут и профильтровать отварную жидкость через сито 350 меш, пока она горячая. Во второй раз добавить в 7 раз больше воды, нагреть ее на теплом огне и довести до кипения. Переключите на слабый огонь и держите его слегка кипящим. Продолжайте варить 40 минут. Отфильтруйте отвар через сито 350 меш, пока он горячий, и соедините два отвара. Перелейте отвар в круглодонную колбу на 2000 мл, используйте роторный испаритель для снижения давления и концентрируйте при низкой температуре (температура: 60 ​​градусов; степень вакуума: - 0.10 МПа) до постоянного объема 500 мл и хорошо встряхните. .

Таблица 1 Образец информации о Herba Cistanche

2.1.2 Приготовление испытуемого раствора отвара цистанхе пустынной кусочки:

Возьмите около 1 г порошка цистанхе пустынного (просеянного через четвертое сито), точно взвесьте его, поместите в коричневую мерную колбу вместимостью 1{9}}0 мл, аккуратно добавьте 50 мл 50-процентного метанола, закройте крышку, хорошо встряхните. , взвесьте груз, замочите на 30 минут, обработайте ультразвуком в течение 40 минут (мощность: 250 Вт, частота: 35 кГц), охладите, снова взвесьте вес, добавьте 50 процентов метанола, чтобы компенсировать потерянный вес, хорошо встряхните, дайте постоять, примите полученный супернатант и разбавляют его микропористой мембранной фильтрацией 0,22 мкМ.

2.1.3 Приготовление испытуемого раствора стандартного отвара цистанхе пустынной:

Возьмите стандартный суп цистанхе, хорошо встряхните, точно отмерьте от 5 мл до 50 мл в мерной колбе, добавьте безводный этанол для разбавления по шкале, хорошо встряхните и разбавьте с помощью фильтрации через микропористую мембрану 0,22 мкМ.

2.1.4 Приготовление эталонного раствора:

Возьмите соответствующее количество контрольного образца гликозида эхинацеи и контрольного образца у бассейна, точно взвесьте их, поместите их в коричневую мерную колбу вместимостью 10 мл, растворите их в 50 процентах метанола и разбавьте до нужной шкалы, хорошо встряхните и приготовьте раствор с концентрациями 0,0200 и 0,02100 мг · мл - 1 для двух вышеуказанных компонентов соответственно, чтобы получить смешанный контрольный раствор.

Актеозид, основной химический компонент цистанхе пустынной.

2.2 Содержание компонентов эхинозида и пилозида

Метод определения содержания цистанхе пустынного в томе I Китайской фармакопеи (издание 2{7}}15) выполняли с использованием хроматографической колонки Agilent ZORBAXB-C18 (4,6 × 15 мм, 5 мкм) с использованием метанола. в качестве подвижной фазы А и 0,1% раствор муравьиной кислоты в качестве подвижной фазы В, проводили градиентное элюирование (от 0 до 17 мин, 26,5% А; от 17 до 20 мин, 26,5% → 29,5% А; 20 до 27 мин, 29,5% А); Скорость потока: 1,0 мл · мин-1; Температура колонки: 30 градусов; Длина волны обнаружения: 330 нм; Количество теоретических тарелок, рассчитанное на основе пика эхинацеи, должно быть не менее 3000. Определяли содержание гликозида эхинацеи и пулзида в приготовленных кусочках цистанхе пустынной и их стандартном отваре, результаты приведены в таблице 2.

2.3 Определение оценочных характеристических параметров стандартного отвара кусочков отвара цистанхе пустынной

Таблица 2. Результаты анализа качества травы цистанхе и ее стандартного отвара (n=2)

2.3.1 Выход пасты:

Стандартный суп Cistanche Deserticola, приготовленный в соответствии с 2.1.1, хорошо встряхнуть, аккуратно отсосать 100 мл, поместить в чашку для выпаривания постоянного веса (вес: m1), выпарить на водяной бане, высушить в духовке при температуре 105 градусов в течение 3 часов, принять вынуть, поместить в сушилку для охлаждения и просушки на 30 мин, взвесить, записать массу как м2, а массу лекарственного сырья как М. По формуле «Выход сливок=(м2 м1 )" × 500/(100 × M) × Рассчитайте скорость вставки как «100 процентов» и возьмите среднее значение после 2 параллельных копий каждого образца. Результаты (см. Таблицу 2).

2.3.2 Скорость передачи:

На основании приведенных выше результатов измерения содержания гликозидов и пилозидов эхинацеи были рассчитаны скорости переноса гликозидов и пилозидов эхинацеи по формуле скорости переноса (скорость переноса=качество индикаторных компонентов в стандартном отваре цистанхе пустынной/качество индикаторных компонентов в отварах штук × 100%), по 2 параллельных экземпляра на каждую пробу. Результаты (см. Таблицу 2).

2.3.3 значение рН:

Равномерно встряхните стандартный отвар цистанхе пустынного, приготовленный в соответствии с 2.1.1, возьмите соответствующее количество, измерьте значение рН с помощью рН-метра и возьмите среднее значение. Каждый образец делится на две части параллельно. Результаты (см. Таблицу 2).

2.4 Установление UPLC-отпечатка стандартного отвара Cistanche Deserticola

2.4.1 Хроматографические условия:

Использование колонки WatersHSST3 (2,1 × 100 мм, 1,8 мкм); Используя метанол в качестве подвижной фазы А и 0,1% раствор муравьиной кислоты в качестве подвижной фазы В, проводили градиентное элюирование (0 до 4 мин, 34% А; от 4 до 10 мин, 34% → 40 % А; 10–15 мин, 40 % → 46 % А; 15–17 мин, 46 % → 34 % А; 17–20 мин, 34 % А); Скорость потока: 0,3 мл·мин-1; Температура колонки: 30 градусов; Длина волны обнаружения: 330 нм; Объем введения эталонного раствора 1 мкл 50. Объем введения исследуемого раствора 0,4 мкл.

2.4.2 Приготовление эталонного раствора:

Берут соответствующее количество контрольных веществ эхинацетин, ангиозид А, пилозид и изопилозид, точно взвешивают, помещают в коричневую мерную колбу вместимостью 10мл, растворяют в 50 % метаноле, разбавляют до шкалы, хорошо встряхните и приготовьте растворы с концентрацией вышеуказанных четырех компонентов 0.196, 0.234, 0,228 и 0,213 мг·мл - 1 соответственно, для получения смешанного контрольного раствора.

2.4.3 Приготовление испытуемого раствора такое же, как в п. 2.1.3.

2.4.4 Проверка точности:

Возьмите тестовый раствор той же партии стандартного отвара цистанхе пустынного (GH{{0}}) и впрыскивайте его шесть раз непрерывно в соответствии с хроматографическими условиями, указанными в 2.4.1. Используя у бассейна (пик 4) в качестве эталонного пика, рассчитайте, что относительное стандартное отклонение относительного времени удерживания каждого общего пика составляет менее 0,2 процента, а относительное стандартное отклонение относительной площади пика составляет менее 5,0 процента. указывает на то, что прибор имеет хорошую точность.

Экспериментальное исследование цистанхе пустынной

2.4.5 Испытание на стабильность:

Возьмите тестовый раствор той же партии стандартного отвара цистанхе пустынного (GH{{0}}) и введите его в точки 0, 2, 4, 8, 12, 16, 20, 24 и через 28 часов после приготовления согласно хроматографическим условиям 2.4.1. Используя у бассейна (пик 4) в качестве эталонного пика, рассчитайте, что ОСО относительного времени удерживания каждого общего пика составляет менее 0,3 процента, а ОСО относительной площади пика составляет менее 4,8 процента, что указывает на то, что испытуемый раствор имеет хорошая стабильность в течение 28 часов.

2.4.6 Испытание на повторяемость:

Взять ту же партию стандартного отвара цистанхе пустынной (GH{{0}}), приготовить параллельно 6 частей раствора по методике п. 2.1.3, провести анализ по хроматографическим условиям п. 2.4. 1, запишите хроматограмму и рассчитайте, что относительное стандартное отклонение относительного времени удерживания каждого общего пика составляет менее 0,2 процента, а относительное стандартное отклонение относительной площади пика составляет менее 3,8 процента. Результаты показывают, что повторяемость метода хорошая.

2.4.7 Установление отпечатка пальца:

Приготовьте тестовый раствор из 14 партий стандартного отвара цистанхе пустынного в соответствии с пунктом 2.1.3 и введите образец для определения в соответствии с условиями хроматографии, указанными в пункте 2.4.1, чтобы получить UPLC-отпечаток 14 партий стандартного отвара цистанхе пустынного. Хроматограммы отпечатков пальцев UPLC 14 партий испытуемого раствора были импортированы в программное обеспечение «Chinese Medicine Chromatographic Fingerprint аналогичности Evaluation System» (версия 2{{10}}}12), используя SI в качестве эталонной хроматограммы, совпадение пиков было выполнено с временной шириной 0.1, а медианный метод был использован для создания эталонного отпечатка R стандартного супа Cistanche Deserticola (см. рисунок 1). При этом было рассчитано сходство и получены результаты (см. табл. 3). Из соответствующей карты видно, что в стандартном отваре цистанхе пустынной есть 6 общих пиков. В соответствии с площадью пика и временем удерживания шести распространенных пиков относительное время удерживания (номер пика (среднее относительное время удерживания) было рассчитано как пик 1 (0,434), пик 2 (0). 0,643), пик 3 ({{40}}},919), пик 4 (1,000), пик 5 (1,635) и пик 6 (1,858) соответственно; относительный пик площади, [число пиков (средняя относительная площадь пика)]: пик 1 (6,340), пик 2 (0,890), пик 3 (0,295), пик 4 ( 1.000), пик 5 (0,674) и пик 6 (0,0190) соответственно. Среди них пик 1 идентифицирован как гликозид эхинацеи, пик 3 идентифицирован как антоцианин А, пик 4 идентифицирован как бассейн, и пик 5 был идентифицирован как изопилозид Анализ подобия показал, что сходство между 14 партиями стандартного отвара и контрольной картой составляло от 0,789 до 0,999 (см. Фигуру 2).

Таблица 3    14 Сходство UPLC-отпечатков стандартной партии Цистанхе пустынного отвара

Рис. 1. Хроматограммы УЭЖХ смешанного эталонного раствора (А), стандартного отвара цистанхе пустынной (В) и стандартного отвара цистанхе трубчатой ​​(С)

1. эхинозид; 3. Антоцианин А; 4. Гликозиды физалиса; 5. Изопилозид

Рисунок 2    14 UPLC-отпечаток партии стандартного отвара Cistanche Deserticola

3 .Обсуждение

3.1 Приготовление стандартного отвара

В качестве стандарта качества стандартный отвар ломтиков традиционной китайской медицины стандартизирует различные клинические лекарственные формы, что в настоящее время является одной из горячих точек исследований в области традиционной китайской медицины. Приготовление стандартного отвара требует, чтобы источник кусочков отвара был подлинным и репрезентативным. Таким образом, Китайская фармакопея включает 9 серий приготовленного цистанхе пустынного и 5 серий приготовленного цистанхе пустынного. Перед приготовлением подготовленные срезы были протестированы, и все они соответствовали требованиям издания 2015 года Китайской фармакопеи.

3.2 Исследование количества вводимого испытуемого раствора

В тесте по определению содержания индексных компонентов в стандартном отваре объем вводимой пробы испытуемого изделия составлял 10 мк л, на хроматограмме стандартного отвара Cistanche Deserticola не было пика пулсайда, за исключением гликозид эхинацеи. Хотя и гликозид эхинацеи, и гликозид эхинацеи присутствовали на стандартной хроматограмме отвара цистанхе пустынной, площади пиков как гликозида эхинацеи, так и гликозида эхинацеи были небольшими, и было обнаружено, что высокий пик появился в положении пика растворителя на хроматограмме тестируемого продукта. Причина анализа заключается в том, что постоянный объем испытуемого образца представляет собой безводный этанол без воды, и он несовместим с приготовлением растворителя контрольного образца, 50-процентного метанола, что приводит к значительному эффекту растворителя, что приводит к отсутствию удержания эхинацеи. и у бассейна. Отдельные образцы имеют пики эхинацеи и выделяются за счет их относительно высокого содержания и частичного удержания. Соответственно отрегулируйте количество впрыскиваемого образца для испытаний до 5 и 3 мкл. Изучите эффект устранения эффекта растворителя, и результат показывает, что количество вводимого образца для образца для испытаний составляет 3 мкл при л, эффект растворителя может быть устранен, и пик эхинацеи может быть нормальным, поэтому объем впрыскиваемого образца испытуемого изделия устанавливается равным 3 мкл. Точно так же эффект растворителя, возникающий во время определения отпечатков пальцев стандартного отвара, был устранен путем исследования количества вводимого испытуемого раствора, и было определено, что оптимальный объем инъекции составляет 0,4 мкл.

3.3 Причины низкого сходства отпечатков пальцев стандартного отвара цистанхе пустынной

Сходство отпечатков пальцев 14 партий стандартного отвара цистанхе пустынной и цистанхе трубчатой ​​колебалось от 0,789 до 0,999. Партия с наименьшим сходством была RCR-9 со стандартным супом 0,789. Сходство других партий выше 0.98. По сравнению с другими образцами общее сходство стандартного супа RCR-9 невелико. Из дактилоскопической хроматограммы стандартного супа RCR-9 видно, что он имеет два очевидных пика по сравнению с другими образцами при временах удерживания 12,278 и 15,466. Из-за сложных химических компонентов в традиционной китайской медицине различия в среде выращивания, времени сбора урожая, методах обработки и т. д. приводят к различному накоплению материала и содержанию компонентов в приготовленных ломтиках. Низкое сходство стандартного супа RCR-9 может быть связано с различными факторами, из-за которых накопление материала в этой партии приготовленных ломтиков отличается от других партий.

3.4 Контроль качества стандартного отвара цистанхе пустынной

В этом эксперименте анализировали скорость экстракции, значение pH и скорость переноса эхинакозида и 14 партий стандартного отвара цистанхе пустынной. Степень извлечения 14 партий стандартного отвара Cistanche Deserticola варьировалась от 25,1 до 56,6 процента. Из-за низкого содержания сахара в приготовленных кусочках цистанхе пустынной по сравнению с приготовленными кусочками цистанхе пустынной степень извлечения стандартного отвара цистанхе пустынной была ниже, чем у стандартного отвара цистанхе пустынной. Значение рН 14 партий стандартного отвара цистанхе пустынного варьировалось от 4,30 до 5,15, что указывает на то, что значение рН стандартного отвара цистанхе пустынного было относительно стабильным. Средняя скорость переноса эхинацетина в 14 партиях цистанхе пустынной и стандартного отвара цистанхе пустынной составила 22,99%, а средняя скорость переноса у бассейна составила 17,09%. Среди них скорость передачи индексных компонентов в стандартном отваре, приготовленном из кусочков отвара цистанхе пустынной, была относительно стабильной, в то время как скорость переноса индексных компонентов в стандартном отваре, приготовленном из кусочков отвара цистанхе пустынной, была относительно высокой среди партий.

4.Заключение

В этом исследовании метод UPLC использовался для определения отпечатка стандартного отвара Cistanche Deserticola, который может всесторонне отражать и оценивать внутреннее качество стандартного отвара Cistanche Deserticola. Результаты скорости экстракции, скорости переноса индексных компонентов и анализа отпечатков пальцев стандартного отвара цистанхе показали, что общая однородность 14 приготовленных партий стандартного отвара цистанхе была хорошей, метод приготовления соответствовал клинической практике, а качество было удовлетворительным. контролируемый. Это помогает стандартизировать различные формы препарата цистанхе, обеспечить постоянство клинической эффективности препарата и устранить различия в качестве, вызванные различными производственными процессами и методами приготовления.

Цистанхе на травах Супермена

ссылка

〔1〕Отредактировано Национальной комиссией по фармакопее. Китайская фармакопея (Часть I) [S]. Пекин: China Pharmaceutical Science and Technology Press, 2015 г. 135

〔2〕Ли Чэнхуа, Лю Цзинхуэй, Сюй Чжэнься и др. Одновременное определение четырех гликозидов фенилэтанола в Cistanche tubulosa методом ОФ-ВЭЖХ. Журнал фармацевтического анализа, 2010, 30 (06): 1003-1006

〔3〕Дин Янь, Чжан Каймэй, Цан Сяоксин и др. Ход исследований химических компонентов и биологической активности Cistanche L. Журнал Даляньского технологического университета, 2016 г., 35 (06): 395-402

〔4〕Гао Янь, Го Линонг, Ма Шуанчэн и др. Сравнительное исследование трех видов цистанхе пустынной на основе карты характеристик UPLC и содержания основных компонентов ［ J ］. Китайский журнал традиционной китайской медицины, 2019 г., 44 (17): 3749-3757

〔5〕Чэнь Шилин, Лю Ань, Ли Ци и др. Стратегия исследования стандартного отвара кусочков традиционной китайской медицины ［ J ］. Китайский журнал традиционной китайской медицины, 2016 г., 41 (08): 1367-1375