Устойчивый цитотоксический ответ мононуклеарных клеток периферической крови у невакцинированных лиц, поступивших в отделение интенсивной терапии из-за критического состояния COVID-19, необходим для предотвращения фатального исхода

Абстрактный: Основная цель этого исследования состояла в том, чтобы определить влияние цитотоксической активности мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС) на исход невакцинированных лиц с критическим состоянием COVID-19, поступивших в отделения интенсивной терапии. Образцы крови у 23 человек собирали при поступлении, а затем каждые 2 недели в течение 13 недель до смерти (группа выхода) (n=13) или выписки (группа выживания) (n=10). Мы не обнаружили существенных различий между группами в социально-демографических, клинических или биохимических данных, которые могли бы повлиять на летальный исход. Однако прямая клеточная цитотоксичность РВМС от лиц из группы Exitus против псевдотипированных клеток Vero E6, инфицированных SARS-CoV-2-, была значительно снижена при поступлении (-2,69-раз; p= 0). 0234) и через 4 недели пребывания в отделении интенсивной терапии (-5,58- раз; р=0,0290) по сравнению с выжившими лицами, и во время госпитализации ситуация не улучшилась. In vitro обработка этих клеток IL-15 не восстанавливала эффективную цитотоксичность ни в какой момент времени вплоть до фатального исхода, а повышенная экспрессия маркеров иммунного истощения наблюдалась в NKT, CD4+ и CD. 8+ Т-клетки. Однако обработка IL-15 РВМС индивидуумов из группы выживания значительно увеличивала цитотоксичность на неделе 4 (6,18- раз; p=0.0303). Следовательно, иммуномодулирующее лечение, которое может преодолеть иммунное истощение и вызвать устойчивую и эффективную цитотоксическую активность, может иметь важное значение для выживания во время госпитализации из-за критического состояния COVID-19.

Ключевые слова: SARS-CoV-2; КОВИД-19; иммунная реакция; цитотоксический ответ; Иллинойс-15

цистанхе трубчатой ​​– улучшает иммунную систему

1. Введение

В декабре 2019 года было выявлено несколько случаев атипичной вирусной пневмонии, связанной со вспышкой на рынке морепродуктов в городе Ухань (провинция Хубэй, Китай). Быстро появился новый коронавирус, названный коронавирусом тяжелого острого респираторного синдрома 2 (SARS-CoV-2). распространился по всему миру, вызвав пандемию коронавирусной болезни 2019 года (COVID-19) [1]. С тех пор во всем мире было зарегистрировано около 626 миллионов случаев заболевания COVID-19 и 6,5 миллионов связанных с ним смертей (обновлено на октябрь 2022 г.) [2]. Различные факторы риска и сопутствующие заболевания могут влиять на прогрессирование COVID-19 среди людей, что повлияло на сравнение клинических данных между пострадавшими странами с начала пандемии [3]. Однако было установлено, что клинические проявления COVID-19 могут варьироваться от бессимптомной инфекции до острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС) [4]. Среди различных факторов риска, которые были связаны с более высокой вероятностью развития тяжелой формы COVID-19, являются старость, мужской пол и предыдущие сопутствующие заболевания, такие как диабет, гипертония и/или ожирение [5,6]. Тяжелая и критическая форма COVID-19 также связана с цитопенией, в основном CD4+ Т-лимфоцитов, а также с чрезмерным истощением естественных киллеров (NK) и CD8+ Т-клеток, которые приводит к состоянию ослабленного иммунитета, при котором инфекция не может быть устранена, а также к развитию серьезных осложнений, таких как цитокиновый шторм и тромботические явления [7]. Основной причиной развития тяжелой формы заболевания и смерти пациентов с COVID-19 считают чрезмерную воспалительную реакцию, которая может способствовать развитию шока и/или гиперцитокинемии с полиорганной дисфункцией [4]. Этот синдром известен как цитокиновый шторм [8] и похож на заболевание гемофагоцитарного лимфогистиоцитоза (сГЛГ), которое представляет собой состояние гипервоспаления, вызванное вирусной инфекцией [9,10]. Это может быть связано с тем, что SARS-CoV-2 использует рецептор ангиотензинпревращающего фермента 2 (ACE2) для заражения клеток-мишеней. Связывание SARS-CoV-2 с рецептором ACE2, широко экспрессируемым клетками различных тканей [11], приводит к повышению уровня ангиотензина II, который активирует ядерный фактор-κB (NF-κB). Активация этого важного фактора транскрипции стимулирует экспрессию провоспалительных цитокинов, хемокинов и молекул адгезии [12]. Несмотря на эту чрезмерную воспалительную реакцию, удаление инфекции, по-видимому, неэффективно и из-за активации Т-клеток может закончиться апоптозом [13]. Этот цитокиновый шторм может быть ответственен за лимфопению [12,14], а также за снижение уровней NK и CD8+ Т-клеток с истощенным фенотипом и повышенной экспрессией ингибирующих рецепторов, таких как NKG2A, в NK-клетках и PD{{47 }} в CD8+ Т-клетках [15,16]. Более того, экспрессия маркеров дегрануляции, таких как CD107a, обычно снижается на поверхности этих клеток [15], что доказывает существование нарушения способности элиминировать инфицированные клетки у людей с тяжелым и критическим течением COVID-19 [17 ]. Несмотря на быструю глобальную реакцию на разработку и внедрение эффективных вакцин, появление новых вариантов, которые могут избежать иммунного ответа, вызванного вакциной, привело к быстрому снижению защиты от симптоматических заболеваний [18]. Следовательно, необходимо продолжить исследования эффективных методов лечения COVID-19. Было протестировано несколько методов лечения для улучшения состояния людей, госпитализированных из-за тяжелого и критического заболевания, но пока не доказано, что ни один из них не специфичен для уничтожения инфицированных клеток или снижения уровня инфекции [15,19]. Таким образом, поддерживающее лечение, такое как кислородная и жидкостная терапия, по-прежнему остается одной из наиболее важных стратегий, применяемых для ведения этих людей [2,4,16,20]. Неспецифическое лечение, такое как кортикостероиды, также помогло контролировать и уменьшить чрезмерную воспалительную реакцию [21,22]. Недавно FDA одобрило несколько препаратов для лечения людей с легкой и умеренной формой COVID-19, таких как молнупиравир, нирмарелвир и ритонавир, но только в случае крайней необходимости для людей с высоким риском. прогрессировать до тяжелого заболевания [23–26]. Молнупиравир демонстрирует противовирусную активность широкого спектра благодаря своей способности индуцировать мутагенез РНК путем взаимодействия с несколькими вирусными РНК-зависимыми РНК-полимеразами (RdRp), включая RdRp, используемый SARS-CoV-2 для репликации и транскрипции его Геном РНК [27]. Также было продемонстрировано, что комбинация нирмарелвира и ритонавира способна остановить распространение инфекции на животных моделях путем ингибирования основной вирусной протеазы 3CLpro SARS-CoV-2- 2 [28]. Однако эти противовирусные препараты необходимо назначать в сочетании с другими мерами, такими как вакцины, чтобы вызвать мощный цитотоксический иммунный ответ, способный уничтожить инфицированные клетки. Большинству клеток с цитотоксической активностью, таких как CD8+ Т-лимфоциты и NK- и NKT-клетки, требуется присутствие интерлейкина-15 (IL-15) для их функции и гомеостатической регуляции [29]. IL-15 запускает CD8+ Т-клетки для их активации специфическими антигенами, а также улучшает цитотоксичность и пролиферацию NK-клеток. Следовательно, IL-15 может усиливать как врожденный, так и адаптивный клеточный иммунный ответ против инфицированных клеток [22,25]. IL-15 также предотвращает апоптоз NK- и Т-клеток за счет повышения регуляции антиапоптотических факторов, таких как Bcl-2, и подавления проапоптотических факторов, таких как GSK-3 [26], тем самым избегая цитопении. Соответственно, IL-15 был предложен в качестве нового иммуномодулирующего цитокина в иммунотерапии рака и считается адъювантом в схемах вакцинации [26,30]. Клинические испытания фазы 1 с болюсной внутривенной инфузией человеческого IL-15 (rhIL-15) или суперагониста IL-15 N-803 продемонстрировали, что этот цитокин может вызывать значительное расширение и/или активацию. CD4+, CD8+ и эффекторных клеток NK in vivo, поэтому его применяют для лечения рака или вирусных инфекций, таких как ВИЧ [31–35]. Следовательно, использование иммуномодулирующих агентов, таких как ИЛ-15, которые могут восстановить цитотоксическую активность у лиц, госпитализированных из-за критического состояния COVID-19, может быть полезно для выведения вируса из организма. В этом наблюдательном продольном исследовании мы охарактеризовали эволюцию цитотоксического иммунного ответа против SARS-CoV-2 в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMC), выделенных от людей с диагнозом COVID-19, поступивших в отделение интенсивной терапии. отделении интенсивной терапии (ОРИТ) из-за тяжелых осложнений, а также влияние этой реакции на конечный результат по сравнению с другими существенными факторами риска. Мы также оценили способность этих клеток реагировать на лечение ИЛ-15 и усиливать их цитотоксический противовирусный ответ. Результаты, полученные в этом исследовании, могут способствовать лучшему пониманию роли цитотоксического ответа в фатальном исходе COVID-19 и продвижению к разработке эффективных иммуномодулирующих методов лечения, способствующих клиренсу вируса.

цистанхе трубчатой ​​– улучшает иммунную систему

Нажмите здесь, чтобы просмотреть продукты Cistanche Enhance Immunity

【Запросить дополнительную информацию】 Электронная почта:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692

2. Материалы и методы

2.1. Предметы исследования

Для этого исследования были привлечены двадцать три человека с критическим состоянием COVID-19, поступивших в отделение интенсивной терапии Университетской больницы Рамон-и-Кахаль (Мадрид, Испания) с октября 2020 года по апрель 2021 года. Этот период охватывал как вторую, так и третью волны пандемии COVID-19 в Испании (с июня по декабрь 2020 г. и с декабря 2020 г. по март 2021 г. соответственно). Участники были случайным образом набраны при госпитализации в соответствии со следующими критериями: информированное письменное или устное согласие на участие в исследовании, госпитализация в отделение интенсивной терапии в связи с критическим состоянием COVID-19, положительный результат на SARS-CoV-2 Анализ RT-qPCR в мазках из носоглотки, выполненный при поступлении в больницу в соответствии с внутренними утвержденными протоколами, старше 18 лет и невакцинирован против SARS-CoV-2 на момент заражения. Образцы периферической крови и клинические данные собирали каждые 2 недели в течение 13 недель, а образцы крови обрабатывали и криоконсервировали до момента анализа. Этот период был рассчитан с учетом того, что продолжительность пребывания в больнице в Испании во время первых волн пандемии оценивалась в среднем в 35 дней [36], поэтому мы могли провести как минимум два полных цикла набора и последующего наблюдения. Через 13 недель участники были разделены на две группы по окончательному исходу: летальный исход (n=13), в дальнейшем Выход; или выписка из больницы (n=10), в дальнейшем Выживание.

2.2. Этическое заявление

Лица, принявшие участие в этом исследовании, были набраны из Университетской больницы Рамон-и-Кахаль (Мадрид, Испания). Все они дали информированное письменное согласие на участие в исследовании или засвидетельствовали устное согласие с письменным согласием представителя, чтобы избежать обращения с зараженными документами. Действующие испанские и европейские законы о защите данных обеспечили конфиденциальность и анонимность всех участников. Протокол этого исследования (CEI PI 32_2020-v2) был подготовлен в соответствии с Хельсинкской декларацией и ранее рассмотрен и одобрен комитетами по этике Института спасения Карлоса III (IRB IORG0006384) и участвующей больницы.

2.3. Клетки

Пять миллилитров цельной крови собирали в пробирки Vacutainer с ЭДТА (Becton Dickinson, Мадрид, Испания) и немедленно обрабатывали для выделения ПМК и плазмы с помощью центрифугирования в градиенте плотности Ficoll-Hypaque (Pharmacia Corporation, Норт-Пипак, Нью-Джерси, США), а затем анализировали. криоконсервирован до анализа. Жизнеспособность клеток после оттаивания оценивали методами оптической микроскопии и проточной цитометрии. Клеточная линия Vero E6 (почка африканской зеленой мартышки) (ECACC 85020206) была любезно предоставлена ​​доктором Антонио Алками (CBM Северо Очоа, Мадрид, Испания), и эти клетки культивировались в среде DMEM с добавлением 10% FCS, 2 мМ L- глютамин, пенициллин и стрептомицин по 100 ед/мл (Lonza, Базель, Швейцария).

Польза цистанхе для мужчин – укрепление иммунной системы

2.4. Псевдотипированный анализ на инфекцию SARS-CoV-2

Цитотоксическую активность против SARS-CoV-2 РВМС участников анализировали с использованием клеток Vero E6, инфицированных одноцикловым псевдотипированным вирусом pNL4-3∆env_SARS CoV-2-S. ∆19(G614)_Рен. Этот вирус кодирует спайковый гликопротеин SARS-CoV-2 с мутацией D614G в геноме ВИЧ-1, а также ген люциферазы Renilla, сгенерированный, как описано ранее [37,38]. Варианты SARS-CoV-2, содержащие мутацию D614G в белке-шипе (S), начали циркулировать в начале пандемии и быстро стали доминировать во многих регионах [39,40]. Вкратце, монослой Vero E6 был инфицирован pNL4-3∆env_ SARS-CoV-2-S∆19(G614)_Ren (100 нг p24 Gag/лунка ) в течение 48 часов. Затем клетки промывали и совместно культивировали в течение 1 часа с РВМС участников (соотношение 1:1), ранее обработанных или не обработанных IL-15 (13 нг/мл) в течение 48 часов. Доза IL-15, использованная в данном исследовании, была выбрана с учетом ранее описанной дозы, вызывающей наибольший эффект на пролиферацию NK (10–25 нг/мл) [41], а также преимущественное расширение цитотоксичности памяти. CD8+ Т-клетки (меньше или равно 5 нг/мл) [42]. Цитотоксическую активность РВМС на монослое Vero E6 определяли после удаления супернатанта с клетками в суспензии и диссоциации клеток Vero E6 с планшета раствором трипсин-ЭДТА (Sigma Aldrich-Merck, Дармштадт, Германия) и последующее количественное определение активности каспазы-3 в отслоившихся клетках по люминесценции с использованием системы анализа Caspase-Glo 3/7 (Promega, Мэдисон, Висконсин, США). Чтобы определить, какие популяции цитотоксических клеток ответственны за эту активность, РВМС собирали из супернатанта и затем анализировали с помощью проточной цитометрии.

2.5. Анализ проточной цитометрии

Для окрашивания маркеров фенотипирования клеточной поверхности использовали следующие конъюгированные антитела: CD{{0}}PE, CD8-APC-H7, CD56-FITC и CD1{{24 }}7a-PE-Cy7, приобретено у BD Biosciences (Сан-Хосе, Калифорния, США). Для окрашивания маркеров истощения использовали следующие конъюгированные антитела: CD3-BV510, CD8-APC-H7, CD56-FITC и PD1-BV650, приобретенные у компании BD Biosciences, а также CD4-PE, приобретенные у Immunostep SL (Саламанка, Испания) и TIGIT-AlexaFluor700, приобретенные у Thermo Fisher (Уолтем, Массачусетс, США). Образцы были получены с помощью проточного цитометра BD LSRFortessa X-20 с программным обеспечением FACS Diva версии 6.0 (BD Biosciences, Франклин Лейкс, Нью-Джерси, США), а затем проанализированы с использованием программного обеспечения FlowJo версии 10.0.7 (Tree Star Inc., Эшленд, Орегон). , США).

2.6. Обнаружение РНКемии SARS-CoV-2

Тотальную РНК экстрагировали из образцов плазмы с использованием набора вирусов QIAamp MinElute (Qiagen Iberia, Мадрид, Испания) в автоматическом экстракторе QIAcube (Qiagen, Хильден, Германия). Обнаружение РНК SARS-CoV-2 осуществлялось с помощью анализа RT-qPCR с мишенями в генах оболочки (E) и нуклеокапсида (N), как описано ранее [43], что является частью Временного руководства Всемирной организации здравоохранения. Организация (ВОЗ) по диагностическому тестированию SARS-CoV- 2 [44]. Образцы считались положительными для анализа, когда значение цикла количественного определения (Cq) было ниже 45 циклов.

Польза цистанхе для мужчин – укрепление иммунной системы

2.7. Статистический анализ

Весь статистический анализ и графики были выполнены с использованием программного обеспечения GraphPad Prism версии 8.4.3 (GraphPad Software Inc., Сан-Диего, Калифорния, США). Групповые сравнения проводились с использованием U-критерия Манна-Уитни, критерия знаковых рангов сопоставленных пар Уилкоксона, однофакторного дисперсионного анализа и критерия множественных сравнений Тьюки. Точный тест Фишера использовался для оценки различий в клинических характеристиках между двумя группами. Значения p < 0.{{10}}5 (двусторонние) считались статистически значимыми. Среднее значение и стандартное отклонение использовались для расчета d-статистики Коэна с помощью калькулятора размера эффекта Excel [45]. Размер эффекта 0.2, 0,5, 0,8 или больше или равный 1,2 был показателем малого, среднего, большого и очень большого размера эффекта соответственно [46].

3. Результаты

3.1. Характеристики участников

В это обсервационное продольное исследование были включены 23 пациента с диагнозом COVID-19, которые были госпитализированы в отделение интенсивной терапии из-за тяжелых осложнений. Образцы крови собирали каждые 2 недели в течение в общей сложности 13 недель или до окончательного результата. Сообщалось, что ни один из участников этого исследования не был вакцинирован против COVID-19 на момент заражения и госпитализации. Основные социально-демографические и клинические характеристики всех участников обобщены в таблице 1.

Таблица 1. Демографические и клинические данные всех участников из группы выхода и группы выживания, которые были набраны для этого исследования.

Средний возраст группы «Выход» составил 65,0 лет (IQR 62.0–69.0), тогда как средний возраст группы «Выживание» составил 63.{{7} } лет (IQR 59.0–68,5). Большинство участников (73,9%) были мужчинами, а у 65,2% было хотя бы одно сопутствующее заболевание. Основными сопутствующими заболеваниями были дислипидемия (52,2%), артериальная гипертензия (39,1%) и сахарный диабет (26,1%). Большинство пациентов получали кортикоиды (82,6%), антибиотики (82,6%) и антикоагулянты (82,6%) в качестве стандартного лечения. Они также получали другие виды лечения, такие как тоцилизумаб (17,4%) и ремдесивир (8,7%). Наиболее распространенными признаками и симптомами были пневмония (100%), кашель и отхаркивание (87,0%), одышка (87,0%) и лихорадка (87,0%). Во время пребывания в отделении интенсивной терапии 12 пациентам (92,3%) из группы «Выход» и 10 пациентам (100%) из группы «Выживание» потребовалась инвазивная искусственная вентиляция легких. Мы не обнаружили существенных различий между обеими группами в социально-демографических и клинических данных. Мы также проанализировали данные биохимии крови на исходном уровне (первый образец) между обеими группами и также не обнаружили существенных различий между группами. Более подробная информация о клинических данных, данных госпитализации и биохимии крови каждого участника представлена ​​в дополнительных таблицах S1 и S2.

3.2. Продолжительность пребывания в больнице и отделении интенсивной терапии

Средняя продолжительность пребывания в больнице составила 59.0 (IQR 36.0–100.0) дней в группе Exitus и 73. 0 (IQR 44,5–90.{{20}}) дней в группе выживания (рис. 1А). Средняя продолжительность пребывания в отделении интенсивной терапии составила 49,0 (IQR 25,5–82,0) дней в группе выхода и 44,0 (IQR 25,0–66,5) дней в группе выживания (рис. 1B). Достоверных различий по этим параметрам между обеими группами обнаружено не было.

Рисунок 1. Продолжительность пребывания в больнице и отделении интенсивной терапии. Продолжительность пребывания в стационаре (А) и отделении интенсивной терапии (Б) (дни) у лиц с критическим состоянием COVID-19, которые были разделены на две группы в зависимости от окончательного исхода: летальный исход, группа выхода (закрашенные точки); или выздоровление и выписка из больницы, группа выживания (пустые точки). Каждая точка соответствует одному человеку, а вертикальные линии представляют среднее значение ± стандартная ошибка среднего (SEM). Статистическую значимость между группами рассчитывали с использованием U-критерия Манна-Уитни.

3.3. Уровни лимфоцитов периферической крови

У лиц из группы Exitus наблюдалась лимфопения (<1000 cells/mm3 ) only at the time of hospitalization (t = 0), but at Week 2, all participants showed levels of lymphocytes above the threshold for lymphopenia (Figure 2). Lymphocyte count was 1.54 (p = 0.0318; Cohen's d = 1.00)- and 1.71 (p = 0.0030; Cohen's d = 3.17)-fold higher in patients from the Survival group in comparison with the Exitus group at baseline and after 4 weeks of hospitalization, respectively. Although both groups showed an increase in the levels of lymphocytes in peripheral blood during hospitalization, they remained on average 1.54-fold higher in individuals of the Survival group in comparison with the participants of the Exitus group for at least 10 weeks. In the Survival group, the lymphocyte counts steadily increased until Week 6 of hospitalization and then decreased until Week 10.

Рисунок 2. Количество лимфоцитов периферической крови во время госпитализации в связи с критическим состоянием COVID-19. Количество лимфоцитов (клеток/мм3) определяли каждые 2 недели в течение в общей сложности 13 недель или до окончательного результата в образцах крови участников групп «Выход» (закрашенные точки) и «Выживание» (пустые точки). Порог лимфопении показан на уровне 1000 клеток/мм3 пунктирной линией. Каждая точка соответствует среднему значению данных, а вертикальные линии представляют SEM. Статистическую значимость между группами рассчитывали с использованием U-критерия Манна-Уитни, а внутри групп использовали U-критерий Уилкоксона.

3.4. Цитотоксическая активность РВМС в отношении клеток Vero E6, инфицированных псевдотипированным SARS-CoV-2

Мы оценили цитотоксическую активность РВМС госпитализированных пациентов в продольных образцах путем количественного определения активации каспазы-3 в монослое клеток Vero E6, инфицированных псевдотипированным SARS-CoV-2, после совместного культивирования в течение 1 часа ( соотношение 1:1). Цитотоксическая способность МПК, выделенных от лиц группы «Экзитус», существенно не менялась за время госпитализации и оставалась стабильно низкой вплоть до летального исхода (рис. 3). Эта цитотоксическая активность существенно не увеличивалась, когда эти клетки стимулировали IL-15 в течение 48 часов. В группе «Выживание» цитотоксическая активность РВМС была увеличена в 2,69- раза (p=0.0234; d=1.12 Коэна) в базальном образце (t {{17} }) по сравнению с группой «Выход» и стабильно увеличивалась до 6-й недели госпитализации. Это увеличение показало статистическую значимость при сравнении между группами на 4-й неделе (5,58- раз; p=0,0290; d Коэна=1,28). Начиная с 6-й недели цитотоксическая активность снижалась в группе выживания до выписки из больницы, что соответствовало снижению количества лимфоцитов на той же неделе госпитализации (см. Рисунок 2). Лечение IL-15 увеличивало в среднем в 2,30- раза цитотоксическую активность РВМС индивидуумов из группы выживания во всех образцах в течение периода наблюдения. Через 4 недели госпитализации цитотоксическая активность, индуцированная IL-15-, увеличилась в 6,18- раз (p=0.0303; d=1.05 Коэна) в РВМС особи из группы «Выживание».

Рисунок 3. Прямая клеточная цитотоксичность РВМС, выделенных от госпитализированных пациентов с критическим состоянием COVID-19. Цитотоксическую способность РВМС индивидуумов из групп «Выход» (закрашенные точки) и «Выживание» (пустые точки) измеряли путем количественного определения активности каспазы -3 в монослое клеток Vero E6, инфицированных псевдотипированным SARS-CoV-2 после совместного культивирования (1:1) в течение 1 часа в базальных условиях (серые линии) или после обработки IL-15 в течение 48 часов (черные линии). Каждая точка соответствует среднему значению данных, а вертикальные линии представляют SEM. Статистическую значимость между группами рассчитывали с использованием U-критерия Манна-Уитни, а внутри групп использовали U-критерий Уилкоксона.

3.5. Уровни NK- и NKT-клеток

Уровни клеток с цитотоксическими фенотипами анализировали в РВМС, которые совместно культивировали с клетками Vero E6, инфицированными псевдотипированным SARS-CoV-2. Мы не обнаружили существенных различий между уровнями клеток с NK-фенотипом (CD3-CD56+) между обеими группами людей даже после лечения IL-15 (рис. 4А). Экспрессия маркера дегрануляции CD107a на поверхности этих клеток у лиц группы Exitus оставалась неизменной. Хотя эта экспрессия стабильно увеличивалась с 4-й недели до выписки из больницы в группе «Выживание», эта разница не достигла статистической значимости по сравнению с группой «Выход» (рис. 4B). Обработка IL-15 существенно не изменила экспрессию CD107a в этих клетках. Начиная с 4-й недели, в РВМС лиц обеих групп наблюдалось увеличение уровня клеток с NKT-фенотипом (CD3+CD56+), которое было в 4,17-раз выше в РВМС из особи группы Exitus на 6 неделе, хотя эта разница не достигла значимости (p=0.0571; d Коэна=3.15) (рис. 5А). Это увеличение было немного выше, когда клетки обрабатывались IL-15 в обеих группах, хотя данные также не достигли статистической значимости (рис. 5А). Экспрессия CD107a существенно не изменилась между обеими группами или после лечения IL-15 (рис. 5B).

Рисунок 4. Уровни NK-клеток в РВМС у лиц, госпитализированных с критическим состоянием COVID-19. (A) Общие уровни NK-клеток (CD3-CD56+) и (B) экспрессия маркера дегрануляции CD107a в этих клетках оценивалась в РВМС в базальных условиях (серые линии) или после обработки IL-15 в течение 48 часов (черные линии) после совместного культивирования (1:1) с клетками Vero E6, инфицированными псевдотипированным SARS-CoV-2, в течение 1 часа. Каждая точка соответствует среднему значению данных, а вертикальные линии представляют SEM. Статистическую значимость между группами рассчитывали с использованием U-критерия Манна-Уитни, а внутри групп использовали U-критерий Уилкоксона.

Рисунок 5. Уровни NKT-клеток в РВМС у лиц, госпитализированных с критическим состоянием COVID-19. Общие уровни NKT-клеток (CD3+CD56+) (А) и экспрессию маркера дегрануляции CD107a в этих клетках (Б) оценивали в базальных условиях (серые линии) или после обработки IL{ {5}} в течение 48 часов (черные линии) после совместного культивирования (1:1) в течение 1 часа с клетками Vero E6, инфицированными псевдотипированным SARS-CoV-2. Каждая точка соответствует среднему значению данных, а вертикальные линии представляют SEM. Статистическую значимость между группами рассчитывали с использованием U-критерия Манна-Уитни, а внутри групп использовали U-критерий Уилкоксона.

3.6. Уровни CD8+ Т-клеток

Количество CD8 было увеличено в 2,07- раза (p=0,0409; d Коэна=0,94) в базальном образце (t=0) группы Exitus по сравнению с группой «Выживание», и эти уровни оставались стабильными до фатального исхода (рис. 6А). IL-15 не оказывал существенного положительного влияния на уровень этой популяции клеток. В группе «Выживание» количество CD8+ Т-клеток было уменьшено в среднем в 1,51- раза по сравнению с группой «Выход» (рис. 6А). Экспрессия CD107a снизилась в 1,53-раз (p= 0.0313) на 4-й неделе в CD8+ Т-клетках индивидуумов группы Exitus и оставалась неизменной до фатального исхода. исход. Лечение IL-15 показало небольшое улучшение экспрессии этого маркера дегрануляции, но эта разница не была значимой (рис. 6B). В группе «Выживание» также наблюдалось снижение экспрессии CD107a в CD8+ Т-клетках на 4-й неделе, а затем наблюдалось увеличение и далее, но значимости не было достигнуто до или после лечения IL{{26 }} (рис. 6Б).

Рисунок 6. Уровни CD8+ Т-клеток в РВМС у лиц, госпитализированных с критическим состоянием COVID-19. (A) Общие уровни CD8+ Т-клеток (CD3+CD8+) и (B) экспрессия маркера дегрануляции CD107a в этих клетках оценивалась в РВМС в базальных условиях (серый цвет). линий) или после обработки IL-15 в течение 48 часов (черные линии) после совместного культивирования (1:1) с клетками Vero E6, инфицированными псевдотипированным SARS-CoV-2, в течение 1 часа. Каждая точка соответствует среднему значению данных, а вертикальные линии представляют SEM. Статистическую значимость между группами рассчитывали с использованием U-критерия Манна-Уитни, а внутри групп использовали U-критерий Уилкоксона.

3.7. Уровни маркеров истощения

Уровни экспрессии маркеров иммунного истощения PD-1 (белок запрограммированной гибели клеток) и TIGIT (иммунорецептор Т-клеток с доменами Ig и ITIM) были проанализированы методом проточной цитометрии в CD4+ Т-клетках и цитотоксических клетках из все участники. Были проанализированы образцы, полученные во время госпитализации (t=0) до 6-й недели госпитализации, из-за отсутствия образцов после этого времени. CD4+ и CD8+ Т-клетки от лиц из группы Exitus показали уровни PD-1, которые были значительно увеличены на 1,72 (p=0.0095; d {{ Коэна). 11}}.87)- и в 2,92- раза (p=0.0317; d Коэна=2.07) после 4 недель госпитализации соответственно по сравнению с лицами из группы Группа выживания (рис. 7А, Б, левые графики). В NKT-клетках уровни TIGIT значительно повышались с момента поступления в стационар до 6 недель госпитализации у лиц из группы Exitus, причем эти уровни были повышены в 1,76-раз (p= 0.0357 ; Коэна=0.33) после 2 недель госпитализации по сравнению с группой выживания (рис. 7C, правый график).

Никаких существенных различий между группами не наблюдалось в уровнях экспрессии этих маркеров истощения в NK-клетках (рис. 7D).

Рисунок 7. Уровни экспрессии маркеров истощения в РВМС у лиц, госпитализированных с критическим состоянием COVID-19. Уровни экспрессии PD-1 и TIGIT в CD4+ Т-клетках (А), CD8+ Т-клетках (Б), NKT-клетках (С) и NK-клетках (D). Каждая точка соответствует среднему значению данных, а вертикальные линии представляют SEM. Статистическую значимость между группами рассчитывали с использованием U-критерия Манна-Уитни, а внутри групп использовали ANOVA.

3.8. Количественное определение РНКемии SARS-CoV-2 в плазме

Наличие РНК SARS-CoV-2 анализировали в плазме всех лиц в базальной выборке (t=0), ни у одного участника не было получено положительных результатов, при этом значения Cq были ниже предельного. положительного обнаружения 45 циклов.

4. Дискуссия

Инфекция SARS-CoV-2 может вызывать несколько клинических проявлений COVID-19, которые варьируются от бессимптомной инфекции до тяжелого, критического или даже смертельного заболевания [4]. Хотя всеобщая вакцинация населения значительно снизила количество тяжелых форм заболевания, появление новых вариантов SARS-CoV-2 приводит к увеличению числа людей, у которых развивается критический COVID-19 и которые нуждаются в лечении. госпитализированы из-за прорывной инфекции [47,48]. Поэтому по-прежнему приоритетной задачей является разработка профилактических и терапевтических стратегий, которые позволят избежать развития критических форм COVID-19 и летальных исходов у госпитализированных пациентов. Было описано, что пожилые люди с сопутствующими заболеваниями представляют более высокий риск развития тяжелого и критического заболевания COVID{{1{{30}}}} [49]. В Испании наиболее значимыми независимыми предикторами смерти от COVID-19 являются мужчины старше 50 лет с сопутствующими заболеваниями, такими как гипертония и диабет [36]. В нашем исследовании большинство участников обеих групп представили эти характеристики без существенных различий между ними по социально-демографическим, клиническим или биохимическим данным, которые могли бы повлиять на тяжесть заболевания или летальный исход. Фактически, в обеих группах наблюдались повышенные уровни биохимических параметров, которые были связаны с более высоким риском неблагоприятного исхода COVID-19, таких как С-реактивный белок (СРБ) и лактатдегидрогеназа (ЛДГ) [50–56]. ]. С другой стороны, хотя сообщалось, что у людей с тяжелой формой COVID-19 может быть выявляемая РНКанемия SARS-CoV-2 [54], что связано с повышенным риском смертности [55], ни у одного из участников нашего исследования не было обнаружено обнаруживаемой РНК в сыворотке, поэтому мы не смогли установить корреляцию между обнаруживаемой виремией и летальным исходом. Наконец, COVID-19 демонстрирует более высокую продолжительность пребывания в больнице и уровень смертности по сравнению с другими инфекционными заболеваниями, требующими госпитализации в отделения интенсивной терапии, такими как внебольничная пневмония (ВП) или сепсис [56], и это было оценено в 35 дней в среднем для тех людей, которые были госпитализированы в Испании во время первых волн пандемии [36]. В нашем исследовании средняя продолжительность пребывания в больнице была одинаковой в группах выхода и выживания (59,0 и 73,0 дней соответственно), и 50% всех участников оставались в отделении интенсивной терапии более 40 дней. Следовательно, для объяснения фатального исхода в группе «Выход» и выздоровления в группе «Выживание» необходимо учитывать другие дифференциальные факторы.

Преимущества цистанхе трубчатой-укрепить иммунную систему

Лимфопения также считается фактором риска тяжести заболевания, что связано с более длительным пребыванием в больнице [57]. В нашем исследовании у 73,9% участников групп «Выход» и «Выживание» наблюдалось низкое количество лимфоцитов. Однако уровень общих лимфоцитов в среднем был выше у участников группы «Выживание», по сравнению с группой «Выход». Это согласуется с предыдущим наблюдением о том, что у людей, умерших из-за COVID-19, со временем развивается более тяжелая лимфопения по сравнению с теми, кто выжил [58] и что эти лимфоциты обычно демонстрируют истощенный фенотип, что приводит к постепенный иммунодефицит [15,16]. Поскольку эффективный цитотоксический противовирусный ответ необходим для контроля вирусных инфекций, включая SARS-CoV-2 [17], восстановление иммунитета имеет решающее значение для выздоровления от COVID-19. Ускорение восстановления иммунитета во многом зависит от гомеостатического периферического расширения лимфоцитов, что может быть хорошей стратегией для улучшения исходов у людей, госпитализированных из-за тяжелого течения COVID-19 [58]. IL-15 представляет собой цитокин, необходимый для функционирования и гомеостаза CD8+ Т-клеток, NK- и NKT-клеток [29], и он был предложен в качестве нового иммуномодулирующего лечения нескольких заболеваний, таких как рак. и ВИЧ-инфекция [26,30,35,59]. Таким образом, в этом исследовании мы оценили, может ли лечение IL -15 in vitro улучшить цитотоксический ответ в РВМС госпитализированных лиц с тяжелым и критическим течением COVID-19 по мере прогрессирования инфекции, чтобы определить его достоверность. в качестве кандидата для стимуляции восстановления иммунитета во время COVID-19. При анализе дозы мы наблюдали общее усиление цитотоксического ответа против клеток-мишеней, инфицированных псевдотипированным SARS-CoV-2 в РВМС тех людей, которые пережили COVID-19, в среднем через 44 дня после госпитализации в отделение интенсивной терапии. Этот цитотоксический ответ эффективно увеличивался в среднем в 2,3-раза при лечении ИЛ-15 во всех образцах, собранных в ходе наблюдения, причем 6-я неделя госпитализации стала поворотным моментом, начиная с которого подсчитывалось количество лимфоцитов. и цитотоксическая активность начала снижаться вплоть до выписки из стационара. Несмотря на схожие социально-демографические, клинические и биохимические характеристики и нахождение в больнице почти одинакового времени (всего 59 дней, из которых 49 дней в отделении интенсивной терапии), группа людей, которые не пережили COVID,{{34} } показали, что РВМС не реагировали в присутствии инфицированных клеток-мишеней, даже когда их стимулировали IL-15. У лиц этой группы со 2-й недели госпитализации общий уровень лимфоцитов был выше порога лимфопении. Однако эти уровни существенно не увеличивались во время госпитализации, и не было обнаружено эффективного противовирусного ответа даже в присутствии IL-15 в анализируемой дозе. Отсутствие ответа на IL-15 было описано для других хронических инфекций, таких как вирус иммунодефицита человека (ВИЧ), вирус гепатита С (HCV), вирус гепатита B (HBV) и Т-лимфотропный вирус человека (HTLV). при котором иммунное истощение может влиять на экспрессию специфического рецептора IL-15, CD122, в CD8+ Т-клетках [60], делая их невосприимчивыми к этому гомеостатическому стимулу. Иммунное истощение, характерное для COVID-19, наблюдалось не только в CD8+ Т-клетках, но и в других типах цитотоксических клеток, таких как NK- и NKT-клетки [15,16]. Следовательно, отсутствие ответа на IL-15 в РВМС из группы Exitus может быть связано с повышенным иммунным истощением, которое нельзя преодолеть только лечением IL-15 в исследуемой дозе. Это также наблюдалось в клинических исследованиях фазы I, в которых монотерапия IL-15 была неэффективной, несмотря на огромное увеличение цитотоксических клеток [31,32]. Следовательно, для индукции эффективного ответа у этих людей потребуются другие костимулирующие методы лечения, такие как ингибиторы иммунологических контрольных точек или моноклональные антитела, нацеленные на инфицированные клетки, для усиления антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC).

Мы также определили типы клеток, которые в основном участвовали в развитии этого усиленного цитотоксического ответа в группе людей, переживших COVID-19. Было продемонстрировано, что наличие функциональных CD8+ Т-клеток необходимо для защиты животных моделей от развития тяжелого заболевания COVID-19 [61,62]. Более того, отсутствие эффективного цитотоксического ответа, опосредованного CD8-, было названо важным фактором повышенной восприимчивости пожилых людей к развитию тяжелого или критического заболевания COVID-19 [63]. Удивительно, но уровни CD8+ Т-клеток были в 2,07- раза (p=0.0409) выше в группе Exitus на момент госпитализации (t=0). , и оставались повышенными до фатального исхода по сравнению с группой «Выживание». Хотя у лиц из группы Exitus количество лимфоцитов было немного выше порога лимфопении, эти уровни оставались практически неизменными на протяжении всего времени их госпитализации. Более того, было описано, что лимфопения может привести к модели одновременного подавления и активации, при которой происходит периферическая потеря Т-клеток одновременно с интенсивной пролиферацией пула CD8+ Т-клеток [64,65]. Это могло бы объяснить несколько повышенные уровни CD8+ Т-клеток, наблюдаемые в РВМС участников из группы Exitus, начиная с 6-й недели госпитализации, несмотря на то, что общие уровни лимфоцитов остаются неизменными и превышают порог лимфопении. также указывает на потенциальное снижение CD4+ Т-клеток. Однако эти CD8+ Т-клетки проявляли низкую цитотоксическую активность, что определялось по низкой экспрессии маркера дегрануляции CD107a на поверхности клеток, тогда как экспрессия этого маркера возрастала в CD8+ Т-клетках из участники группы «Выживание» начиная с 4-й недели. Экспрессия CD107a считается биомаркером для оценки цитотоксической способности [66], и было описано, что она снижается на поверхности клеток, изолированных от людей с COVID-19, по сравнению с неинфицированными здоровыми донорами [15 ].

Следовательно, повышенная экспрессия CD107a на поверхности CD8+ Т-клеток может, по крайней мере, частично объяснить вклад этих клеток в повышенную цитотоксическую активность, наблюдаемую в РВМС участников из группы «Выживание». Кроме того, мы наблюдали повышенную экспрессию маркера истощения PD-1 как в CD4+, так и CD8+ Т-клетках у лиц из группы Exitus, что также может способствовать снижению цитотоксичности. активность и ответ на IL-15 этих клеток. Другие популяции клеток могут быть вовлечены в цитотоксическую активность против псевдотипированных клеток, инфицированных SARS-CoV-2-, таких как NK- и NKT-клетки. Как и при других тяжелых острых инфекциях, NK-клетки могут рекрутироваться в место заражения SARS-CoV-2 [67], что объясняет снижение количества циркулирующих NK-клеток, наблюдавшееся у всех участников. Более того, цитокиновый шторм, развивающийся во время тяжелого и критического COVID-19, может привести к дисфункциональному статусу NK-клеток, которые будут экспрессировать высокие уровни ингибирующих рецепторов контрольных точек, таких как NKG2A или PD-1 [68]. В нашем исследовании уровни NK-клеток были одинаковыми в обеих группах до 6-й недели, на которой у участников группы «Выживание» наблюдалось прогрессивное увеличение до выписки из больницы. Это коррелировало с повышенной экспрессией CD107a, которая была связана в NK-клетках с усиленной секрецией цитокинов и улучшенным лизисом клеток-мишеней [7,69], хотя было описано, что процент NK-клеток, экспрессирующих маркеры активации, такие как CD107a, ниже у людей с COVID-19 по сравнению со здоровыми людьми из контрольной группы [70]. И наоборот, хотя уровни NKT-клеток были значительно повышены в группе выживания, начиная с 6-й недели, экспрессия CD107a оставалась почти неизменной, в то время как они демонстрировали повышенные уровни маркера истощения TIGIT на поверхности клеток, которые стабильно увеличивались до 6-й недели госпитализации. . Одним из наиболее важных ограничений нашего исследования был уменьшенный размер выборки. Тем не менее, между группами была достигнута статистическая значимость по нескольким основным параметрам, которые также показали большую или очень большую величину эффекта при расчете объединенных различий между группами.

цистанхе трубчатой ​​– улучшает иммунную систему

5. Выводы

В заключение следует отметить, что наиболее важным вкладом этого исследования в борьбу с иммунопатологией, вызванной инфекцией SARS-CoV-2, является подтверждение того, что нарушение противовирусной способности РВМС оказывается критическим фактором в развитии смертельного заболевания COVID-2. {2}}, даже выше других социально-демографических, клинических и биохимических факторов. Таким образом, использование иммуномодулирующих методов лечения, которые могут повысить цитотоксичность, может способствовать положительному результату во время госпитализации из-за критического состояния COVID-19. Повышенная цитотоксическая активность, опосредованная IL-15 у людей из группы «Выживание», вероятно, зависит не от повышенного уровня цитотоксических клеток, а от иммунокомпетентности этих клеток реагировать на такой стимул. Таким образом, мониторинг экспрессии маркеров истощения и реакции этих клеточных популяций на гомеостатические стимулы, такие как IL-15, у госпитализированных лиц может быть полезен в качестве предиктора фатального исхода, чтобы инициировать дополнительные меры по предотвращению это. Следовательно, это обсервационное исследование является подтверждением концепции о том, что использование ИЛ-15 у лиц, госпитализированных с COVID-19, может улучшить противовирусный иммунный ответ, хотя сам по себе этот стимул не будет эффективен у лиц с невосприимчивым к нему вирусом. клеток из-за иммунного истощения или нарушения сигнального пути IL-15R, что важно для предотвращения истощения [71], даже если у них количество лимфоцитов превышает порог лимфопении. Необходимы дополнительные исследования с более широкой популяцией для оценки комбинаций возрастающих доз IL-15 с другими иммуномодулирующими агентами, такими как ингибиторы иммунных контрольных точек или моноклональные антитела, нацеленные на инфицированные клетки, чтобы помочь восстановить и усилить противовирусный ответ во время критических форм COVID. -19.

Рекомендации

1. Ацродт, К.Л.; Макноджиа, И.; Маккарти, РДП; Олдфилд, ТМ; По, Дж.; Та, КТЛ; Степп, HE; Клементс, Т.П. Руководство по COVID-19: глобальная пандемия, вызванная новым коронавирусом SARS-CoV-2. ФЕБС Дж. 2020, 287, 3633–3650. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

2. Информационная панель ВОЗ по коронавирусу (COVID-19). Доступно онлайн: https://covid19.who.int/ (по состоянию на 18 октября 2022 г.).

3. Капальбо, К.; Асети, А.; Симмако, М.; Бонфини, Р.; Рокко, М.; Риччи, А.; Наполи, К.; Рокко, М.; Альфонси, В.; Тегги, А.; и другие. Экспоненциальная фаза пандемии COVID-19 в центральной Италии: комплексный подход к оказанию медицинской помощи. Межд. Дж. Энвайрон. Рез. 2020, 17, 3792. [CrossRef] [PubMed]

4. Хуан, К.; Ван, Ю.; Ли, Х.; Рен, Л.; Чжао, Дж.; Ху, Ю.; Чжан, Л.; Фан, Г.; Сюй, Дж.; Гу, Х.; и другие. Клинические особенности пациентов, инфицированных новым коронавирусом 2019 года, в Ухане, Китай. Ланцет 2020, 395, 497–506. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

5. Хейбар, Х.; Каземня, К.; Рахим, Ф. Основные хронические заболевания и инфекция COVID-19: современный обзор. Джундишапур Дж. Хроник Дис. Уход 2020, 9, е103452. [CrossRef] 6. Хамед, С.М.; Эльхатиб, ВФ; Хайралла, А.С.; Нореддин, А.М. Глобальная динамика клад SARS-CoV-2 и их связь с эпидемиологией COVID-19. наук. Отчет 2021, 11, 8435. [CrossRef]

7. Эрдинч, Б.; Сахни, С.; Готлиб В. Гематологические проявления и осложнения COVID-19. Адв. Клин. Эксп. Мед. 2021, 30, 101–107. [Перекрестная ссылка]

8. Ху, Б.; Хуанг, С.; Инь, Л. Цитокиновый шторм и COVID-19. Дж. Мед. Вирол. 2021, 93, 250–256. [Перекрестная ссылка]

9. Рамос-Казалс, М.; Брито-Зерон, П.; Лопес-Гильермо, А.; Хамашта, Массачусетс; Бош, X. Гемофагоцитарный синдром взрослых. Ланцет 2014, 383, 1503–1516. [Перекрестная ссылка]

10. Мехта, П.; Маколи, DF; Браун, М.; Санчес, Э.; Таттерсолл, РС; Мэнсон, Джей-Джей; от имени HLH Across Specialty Collaboration, Великобритания. По специальности. COVID-19: рассмотрите синдром цитокинового шторма и иммуносупрессию. Ланцет 2020, 395, 1033–1034. [Перекрестная ссылка]

11. Ли, М.-Ю.; Ли, Л.; Чжан, Ю.; Ван, Х.-С. Экспрессия гена ACE2 клеточного рецептора SARS-CoV-2 в самых разных тканях человека. Заразить. Дис. Бедность 2020, 9, 45. [CrossRef]

12. Цзян Ю.; Рубин, Л.; Пэн, Т.; Лю, Л.; Син, X .; Лазарович, П.; Чжэн, В. Цитокиновый шторм при COVID-19: от вирусной инфекции к иммунным реакциям, диагностике и терапии. Межд. Ж. Биол. наук. 2022, 18, 459–472. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

13. Жан Ю.; Кэррингтон, EM; Чжан, Ю.; Хайнцель, С.; Лью, А.М. Жизнь и смерть активированных Т-клеток: чем они отличаются от наивных Т-клеток? Передний. Иммунол. 2017, 8, 1809. [CrossRef] [PubMed]

14. Хуан И.; Праната, Р. Лимфопения при тяжелой коронавирусной болезни-2019 (COVID-19): систематический обзор и метаанализ. J. Интенсивная терапия 2020, 8, 36. [CrossRef] [PubMed]

15. Чжэн, М.; Гао, Ю.; Ван, Г.; Песня, Г.; Лю, С.; Сан, Д.; Сюй, Ю.; Тиан, З. Функциональное истощение противовирусных лимфоцитов у пациентов с COVID-19. Клетка. Мол. Иммунол. 2020, 17, 533–535. [Перекрестная ссылка]

16. Ра, М.-С.; Чон, HW; Ко, Ж.-Х.; Чой, С.Дж.; Сео, И.-Х.; Ли, Дж. С.; Са, М.; Ким, Арканзас; Джу, Э.-Дж.; Ан, JY; и другие. PD-1-экспрессирующие SARS-CoV-2-специфические CD8+ Т-клетки не истощены, но функционируют у пациентов с COVID-19. Иммунитет 2021, 54, 44–52. [Перекрестная ссылка]

17. Вигон, Л.; Фуэртес, Д.; Гарсиа-Перес, Х.; Торрес, М.; Родригес-Мора, С.; Матеос, Э.; Корона, М.; Саес-Марин, Эй Джей; Мало, Р.; Наварро, К.; и другие. Нарушение цитотоксического ответа в РВМС у пациентов с COVID, поступивших в отделение интенсивной терапии: биомаркеры для прогнозирования тяжести заболевания. Передний. Иммунол. 2021, 12, 665329. [CrossRef]

18. ВОЗ. Промежуточное заявление о вопросах принятия решений по использованию обновленных вариантов вакцин против COVID-19. Доступно в Интернете: https://www.who.int/news/item/17-06-2022-interim-statement-on-decision-making-considerations-for-the-use-ofvariant-updated-covid{{15} }вакцины (по состоянию на 15 августа 2022 г.).

19. Мишра, СК; Трипати, Т. Последние новости о пандемии COVID-19 за год: где мы сейчас? Акта Троп. 2021, 214, 105778. [CrossRef] 20. Ли, X.; Гэн, М.; Пэн, Ю.; Мэн, Л.; Лу, С. Молекулярно-иммунный патогенез и диагностика COVID-19. Дж. Фарм. Анальный. 2020, 10, 102–108. [Перекрестная ссылка]

21. Группа ТРК. Дексаметазон у госпитализированных пациентов с COVID-19. Н. англ. Дж. Мед. 2021, 384, 693–704. [Перекрестная ссылка]

22. Чжоу, X.; Ю, Дж.; Ченг, X.; Чжао, Б.; Маньям, GC; Чжан, Л.; Шлунс, К.; Ли, П.; Ван, Дж.; Вс, С.-К. Деубиквитиназа Otub1 контролирует активацию CD8+ Т-клеток и NK-клеток путем регулирования опосредованного IL-15- прайминга. Нат. Иммунол. 2019, 20, 879–889. [Перекрестная ссылка]

23. Парумс, Д.В. Современное состояние пероральных противовирусных препаратов при инфекции SARS-CoV-2 у негоспитализированных пациентов. Мед. наук. Монит. 2022, 28, е935952-1. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

24. Кузен-Франкель, Дж. Противовирусные таблетки могут изменить ход пандемии. Являюсь. доц. Адв. наук. 2021, 12, 799–800. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

25. Мунтаселл, А.; Очоа, MC; Кордейро, Л.; Берраондо, П.; де Серио, Ал-Д.; Кабо, М.; Лопес-Ботет, М.; Мелеро, И. Нацеливание на контрольные точки NK-клеток для иммунотерапии рака. Курс. Мнение. Иммунол. 2017, 45, 73–81. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

26. Патидар, М.; Ядав, Н.; Далай, С.К. Интерлейкин 15: ключевой цитокин для иммунотерапии. Цитокиновый фактор роста, ред. 2016, 31, 49–59. [Перекрестная ссылка]

27. Кабингер Ф.; Стиллер, К.; Шмитцова, Ю.; Динеманн, К.; Кокич, Г.; Хиллен, HS; Хёбартнер, К.; Крамер, П. Механизм мутагенеза SARS-CoV-2, индуцированного молнупиравиром. Нат. Структура. Мол. Биол. 2021, 28, 740–746. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

28. Хунг, Ю.-П.; Ли, Ж.-К.; Чиу, C.-W.; Ли, CC; Цай, П.-Дж.; Сюй, И.-Л.; Ко, В.-К. Пероральная терапия COVID-11 нирмарелвиром/ритонавиром-19: рассвет во тьме? Антибиотики 2022, 11, 220. [CrossRef]

29. Го, Ю.; Луан, Л.; Патил, Северная Каролина; Шервуд, Э.Р. Иммунобиология комплекса IL-15/IL-15R как противоопухолевого и противовирусного средства. Цитокиновый фактор роста, ред. 2017, 38, 10–21. [Перекрестная ссылка]

30. Чжан С.; Чжао, Дж.; Бай, X.; Хэндли, М.; Шан, Ф. Биологическое воздействие IL-15 на иммунные клетки и его потенциал для лечения рака. Межд. Иммунофармакол. 2021, 91, 107318. [CrossRef]

31. Вальдманн, Т.А.; Дюбуа, С.; Милькович, доктор медицинских наук; Конлон, KC IL-15 в комбинированной иммунотерапии рака. Передний. Иммунол. 2020, 11, 868. [Перекрестная ссылка]

32. Дюбуа, СП; Милькович, доктор медицинских наук; Флейшер, Т.А.; Питталуга, С.; Сюй-Альберт, Дж.; Брайант, БР; Петрус, Миннесота; Перера, LP; Мюллер-младший; Ши, Дж. Х.; и другие. Короткий курс IL-15, вводимый в виде непрерывной инфузии, привел к массовому увеличению эффективных NK-клеток: значение комбинированной терапии с противоопухолевыми антителами. Дж. Иммунотер. Рак 2021, 9, e002193. [Перекрестная ссылка]

33. Конлон, К.К.; Поттер, Эл.; Питталуга, С.; Ли, К.-ЧР; Милькович, доктор медицинских наук; Флейшер, Т.А.; Дюбуа, С.; Брайант, БР; Петрус, М.; Перера, LP; и другие. IL15 путем непрерывной внутривенной инфузии взрослым пациентам с солидными опухолями в исследовании фазы I, индуцировавшим драматическую подгруппу NK-клеток. Клин. Рак Рез. 2019, 25, 4945–4954. [Перекрестная ссылка]

34. Роми, Р.; Кули, С.; Берриен-Эллиотт, ММ; Вестервельт, П.; Вернерис, MR; Вагнер, Дж. Э.; Вайсдорф, диджей; Блазар, БР; Устун, Ц.; ДеФор, Т.Э.; и другие. Первое клиническое исследование фазы 1 суперагонистического комплекса IL-15 ALT-803 на людях для лечения рецидивов после трансплантации. Кровь Ам. Дж. Гематол. 2018, 131, 2515–2527. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

35. Миллер, Дж. С.; Дэвис, ЗБ; Хельгесон, Э.; Рейли, К.; Торкельсон, А.; Андерсон, Дж.; Лима, Северная Каролина; Йорстад, С.; Харт, GT; Ли, Дж. Х.; и другие. Безопасность и вирусологическое воздействие суперагониста IL-15 N-803 на людей, живущих с ВИЧ: исследование фазы 1. Нат. Мед. 2022, 28, 392–400. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

36. Беренгер, Дж.; Райан, П.; Родригес-Баньо, Дж.; Харрин, И.; Карратала, Дж.; Пачон, Дж.; Иллескас, М.; Арриба, младший; Муньос, Э.А.; Гил Дивассон, П.; и другие. Характеристики и предикторы смерти среди 4035 последовательно госпитализированных пациентов с COVID-19 в Испании. Клин. Микробиол. Заразить. 2020, 26, 1525–1536. [Перекрестная ссылка]

37. Гарсия-Перес, Ж.; Санчес-Паломино, С.; Перес-Ольмеда, М.; Фернандес, Б.; Алками, Дж. Новая стратегия, основанная на рекомбинантных вирусах, как инструмент для оценки чувствительности к лекарствам вируса иммунодефицита человека типа 1. J. Med. Вирол. 2007, 79, 127–137. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

38. Оу, Х.; Лю, Ю.; Лей, X.; Ли, П.; Ми, Д.; Рен, Л.; Го, Л.; Го, Р.; Чен, Т.; Ху, Дж.; и другие. Характеристика шипового гликопротеина SARS-CoV-2 при проникновении вируса и его иммунная перекрестная реактивность с SARS-CoV. Нат. Коммун. 2020, 11, 1–12. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

39. Волц Э.; Хилл, В.; МакКроун, Джей Ти; Прайс, А.; Йоргенсен, Д.; О'Тул, А.; Саутгейт, Дж.; Джонсон, Р.; Джексон, Б.; Насименто, ФФ; и другие. Оценка влияния спайковой мутации SARS-CoV-2 D614G на трансмиссивность и патогенность. Ячейка 2021, 184, 64–75. [Перекрестная ссылка]

40. Корбер, Б.; Фишер, ВМ; Гнанакаран, С.; Юн, Х.; Тайлер, Дж.; Абфальтерер, В.; Хенгартнер, Н.; Георгий, Э.Э.; Бхаттачарья, Т.; Фоли, Б.; и другие. Отслеживание изменений в пике SARS-CoV-2: доказательства того, что D614G повышает инфекционность вируса COVID-19. Ячейка 2020, 182, 812–827. [Перекрестная ссылка]

41. Нандагопал Н.; Али, АК; Комаль, А.К.; Ли, С.-Х. Критическая роль пути IL-15-PI3K-mTOR в эффекторных функциях естественных клеток-киллеров. Передний. Иммунол. 2014, 5, 187. [CrossRef]

42. Розенталь Р.; Грепер, К.; Браччи, Л.; Адамина, М.; Федер-Менгус, К.; Заяк, П.; Иецци, Г.; Болли, М.; Вебер, В.П.; Фрей, DM; и другие. Дифференциальная чувствительность к цитокинам общей рецепторной цепи IL-2, IL-7 и IL-15 антигенспецифическими антигенспецифическими Т-клетками периферической крови, наивными или цитотоксическими CD8+ Т-клетками памяти здоровых доноров и Пациенты с меланомой. Дж. Иммунотер. 2009, 32, 252–261. [Перекрестная ссылка]

43. Корман В.М.; Ландт, О.; Кайзер, М.; Моленкамп, Р.; Мейер, А.; Чу, DKW; Блейкер, Т.; Брюнинк, С.; Шнайдер, Дж.; Шмидт, МЛ; и другие. Обнаружение нового коронавируса 2019 года (2019-nCoV) с помощью RT-PCR в реальном времени. Eurosurveillance 2020, 25, 2000045. [CrossRef] [PubMed]

44. ВОЗ. Диагностическое тестирование на SARS-CoV-2: Временные рекомендации, 11 сентября 2020 г.; Всемирная организация здравоохранения: Женева, Швейцария, 2020 г.

45. Беккер, Л.А. Размер эффекта (ES); Университет Колорадо, Колорадо-Спрингс: Колорадо-Спрингс, Колорадо, США, 2000 г.

46. ​​Коэн, Дж. Статистический анализ мощности в поведенческих науках; Рутледж: Абингдон, Великобритания, 1988 г. [CrossRef]

47. Морено-Перес, О.; Рибес, И.; Бойкс, В.; Мартинес-Гарсия, М.; Отеро-Родригес, С.; Реус, С.; Санчес-Мартинес, Р.; Рамос, Дж. М.; Чико-Санчес, П.; Мерино, Э. Госпитализированные пациенты с прорывным заболеванием COVID-19: клинические особенности и плохие предсказатели исхода. Межд. Дж. Заразить. Дис. 2022, 118, 89–94. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

48. Ли, СМ; Ли, Э.; Парк, ВБ; Чоу, П.Г.; Песня, К.-Х.; Ким, ЕС; Парк, С.-В. Прорывная инфекция COVID-19 в период доминирования дельта-варианта: необходим индивидуальный уход в зависимости от статуса вакцинации. J. Корейская Мед. наук. 2022, 37, е252. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

49. Эджаз, Х.; Альсрани, А.; Зафар, А.; Джавед, Х.; Джунаид, К.; Абдалла, А.Е.; Абосалиф, КО; Ахмед З.; Юнас, С. COVID-19 и сопутствующие заболевания: пагубное воздействие на инфицированных пациентов. Дж. Заразить. Общественное здравоохранение 2020, 13, 1833–1839 гг. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

50. Азеведо, РБ; Ботельо, Б.Г.; де Холланда, JVG; Феррейра, LVL; де Андраде, LZJ; Оэй, ССМЛ; Мелло, TDS; Муксфельдт, ES COVID-19 и сердечно-сосудистая система: комплексный обзор. Дж. Хум. Гипертония. 2021, 35, 4–11. [Перекрестная ссылка]

51. Чжан, Джей-Джей; Ли, Канзас; Анг, LW; Лео, Ю.С.; Янг, Б.Е. Факторы риска тяжелого течения заболевания и эффективность лечения у пациентов, инфицированных COVID.-19: систематический обзор, метаанализ и метарегрессионный анализ. Клин. Заразить. Дис. 2020, 71, 2199–2206. [Перекрестная ссылка]

52. Кермали, М.; Халса, РК; Пиллаи, К.; Исмаил З.; Харки, А. Роль биомаркеров в диагностике COVID-19 – систематический обзор. Наука о жизни. 2020, 254, 117788. [CrossRef]

53. Малик, П.; Патель, У.; Мехта, Д.; Патель, Н.; Келкар, Р.; Акрма, М.; Габрилов, Дж.Л.; Сакс, Х. Биомаркеры и результаты госпитализаций по поводу COVID-19: систематический обзор и метаанализ. БМЖ Эвид. На базе Мед. 2021, 26, 107–108. [Перекрестная ссылка]

54. Ли, Ю.; Шнайдер, AM; Мехта, А.; Шаде-Фельдман, М.; Кейс, КР; Джентили, М.; Чарланд, Северная Каролина; Гонье, Алабама; Гуштерова И.; Ханна, Гонконг; и другие. Виремия SARS-CoV-2 связана с различными протеомными путями и предсказывает исходы COVID-19. Дж. Клин. Расследование. 2021, 131, е148635. [Перекрестная ссылка]

55. Родригес-Серрано, Д.А.; Рой-Валлехо, Э.; Круз, НДЗ; Рамирес, AM; Родригес-Гарсия, Южная Каролина; Аревалило-Фернандес, Н.; Гальван-Роман, Ж.М.; Гарсиа-Родриго, LF; Вега-Пирис, Л.; Ллано, MC; и другие. Обнаружение РНК SARS-CoV-2 в сыворотке связано с повышенным риском смертности у госпитализированных пациентов с COVID-19. наук. Отчет 2021, 11, 13134. [CrossRef]

56. Серафим, РБ; Повоа, П.; Соуза-Дантас, В.; Калил, AC; Саллух, Дж. И. Клиническое течение и исходы пациентов с инфекцией COVID-19 в критическом состоянии: систематический обзор. Клин. Микробиол. Заразить. 2021, 27, 47–54. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

57. Лю, Х.; Чжоу, Х.; Чжоу, Ю.; Ву, Х.; Чжао, Ю.; Лу, Ю.; Тан, В.; Юань, М.; Дин, X.; Цзоу, Дж.; и другие. Факторы риска, связанные с тяжестью заболевания и продолжительностью пребывания в больнице у пациентов с COVID-19. Дж. Заразить. 2020, 81, е95–е97. [Перекрестная ссылка]

58. Луо, XH; Чжу, Ю.; Мао, Дж.; Ду, RC Т-клеточная иммунобиология и цитокиновый шторм COVID-19. Скан. Дж. Иммунол. 2021, 93, е12989. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

59. Харвуд, О.; О'Коннор, С. Терапевтический потенциал IL-15 и N-803 при ВИЧ/ВИО-инфекции. Вирусы 2021, 13, 1750. [CrossRef] [PubMed]

60. Шин, Х.; Wherry, EJ. Дисфункция Т-клеток CD8 во время хронической вирусной инфекции. Курс. Мнение. Иммунол. 2007, 19, 408–415. [Перекрестная ссылка]

61. МакМахан, К.; Ю, Дж.; Меркадо, Северная Каролина; Лоос, К.; Тостаноски, Л.Х.; Чандрашекар, А.; Лю, Дж.; Питер, Л.; Атье, К.; Чжу, А.; и другие. Корреляты защиты от SARS-CoV-2 у макак-резус. Природа 2021, 590, 630–634. [Перекрестная ссылка]

62. Чжуан З.; Лай, X.; Сан, Дж.; Чен, З.; Чжан, З.; Дай, Дж.; Лю, Д.; Ли, Ю.; Ли, Ф.; Ван, Ю.; и другие. Картирование и роль Т-клеточного ответа у мышей, инфицированных SARS-CoV-2. Дж. Эксп. Мед. 2021, 218, е20202187. [Перекрестная ссылка]

63. Вестмайер, Дж.; Панискаки, ​​К.; Каракесе, З.; Вернер, Т.; Саттер, К.; Дольф, С.; Овербек, М.; Лиммер, А.; Лю, Дж.; Чжэн, X.; и другие. Нарушение цитотоксического ответа CD8+ Т-клеток у пожилых пациентов с COVID-19. МБио 2020, 11, е02243-20. [Перекрестная ссылка]

64. Лэнг, А.Г.; Лоренц, А.; дель Баррио, IDM; Дас, А.; Фиш, М.; Монин Л.; Муньос-Руис, М.; Маккензи, доктор медицинских наук; Хейдей, ТС; Франкос Кихорна, И.; и другие. Динамическая иммунная сигнатура COVID-19 включает ассоциации с плохим прогнозом. Нат. Мед. 2020, 26, 1623–1635. [Перекрестная ссылка]

65. Кури-Сервантес, Л.; Пампена, МБ; Мэн, В.; Розенфельд, AM; Иттнер, CAG; Вейсман, Арканзас; Агиекум, РС; Мэтью, Д.; Бакстер, А.Е.; Велла, Луизиана; и другие. Комплексное картирование иммунных нарушений, связанных с тяжелым течением COVID-19. наук. Иммунол. 2020, 5, eabd7114. [Перекрестная ссылка]

66. Актас Э.; Кучуксезер, Калифорнийский университет; Билгич, С.; Эртен, Г.; Дениз, Г. Связь между экспрессией CD107a и цитотоксической активностью. Клетка. Иммунол. 2009, 254, 149–154. [Перекрестная ссылка]

67. Бьёркстрем, Северная Каролина; Струнц, Б.; Юнггрен, Х.-Г. Естественные клетки-киллеры в противовирусном иммунитете. Нат. Преподобный Иммунол. 2022, 22, 112–123. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

68. Би, Дж. Дисфункция NK-клеток у пациентов с COVID-19. Клетка. Мол. Иммунол. 2022, 19, 127–129. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

69. Альтер Г.; Маленфант, Дж. М.; Альтфельд, М. CD107a как функциональный маркер для идентификации активности естественных клеток-киллеров. Дж. Иммунол. Методы 2004, 294, 15–22. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

70. Густин, Дж. Н.; Джонс, Д. Иммунопатология гипервоспаления при COVID-19. Являюсь. Дж. Клин. Патол. 2021, 191, 4–17. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

71. Он, К.; Чжоу, Ю.; Ли, З.; Фарук, Массачусетс; Аджмал, И.; Чжан, Х.; Чжан, Л.; Тао, Л.; Яо, Дж.; Ду, Б.; и другие. Совместная экспрессия IL-7 улучшает CAR Т-клеточную терапию на основе NKG2D при раке предстательной железы за счет усиления экспансии и ингибирования апоптоза и истощения. Рак 2020, 12, 1969. [CrossRef]