Влияет ли общий гликозид цистанхе на обоняние?

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Влияние суммарных гликозидов цистанхе на клетки обонятельной оболочки крысы и секрецию ими нейротрофических факторов

Ли Чуанфэн, Го Цзиньюй, Чжан Сюй, Лю Юньнань

Травма спинного мозга (ТСМ) – серьезное повреждение центральнойнервная система, что составляет {{0}},2 процента -0,5 процента от общей травмы. При переломах позвоночника от 16 до 40 процентов осложняются повреждением спинного мозга, нередко оставляя тяжелую инвалидность, приводя к Трудностям в повседневной жизни, сказывающимся на качестве жизни больных, ложащимся тяжелым бременем на семью и общество.обонятельныйобволакивающие клетки (OECs) представляют собой особый тип нервного клея. Плазматические клетки могут мигрировать в головной мозг собонятельныйнервных аксонов и могут секретировать многие факторы роста, такие как NGF, GDNF, BDNF, NT-3, нейропептид-Y и S-100. Благодаря этим характеристикамобонятельныйПокрывающие клетки, OECs считаются одними из перспективных исходных клеток для трансплантации клеток для восстановления SCI. В настоящее время лечение ТСМ в области восстановительной медицины в основном базируется на комплексной реабилитации. Для того, чтобы найти более эффективный метод, было проведено следующее исследование влиянияцистанхеобщийгликозидына ОЭС:

Общий гликозид цистанхе для обонятельных клеток оболочки

1 Материал и методы

1.1 Экспериментальные материалы

крыса Вистар (предоставлена ​​Центром животных Университета Внутренней Монголии);цистанхеобщийгликозиды, среда DMEM/F12, фетальная телячья сыворотка (FCS), поли-D-лизин, арабинозид (Ara-C), трипсин, раствор D-Хэнкса, анти-p75NGFR кролика (Santa Cruz), набор ELISA (Promega), клеточный инкубатор (Thermo-HEPA Class 100), инвертированный фазово-контрастный микроскоп (Olympus CKX41, Япония), сверхчистое рабочее место (Suzhou Antai Air Technology Co., Ltd.) Компания SW-CJ-2FD), фермент анализатор меток (Wellscan MKH), проточный цитометр и др.

1.2 Методы исследования

1.2.1 Культивирование, очистка и идентификация ОЕС. Крыс Wistar умерщвляли путем декапитации и вымачивали в вине в течение 5 минут. Передняя часть черепа была вскрыта, чтобы обнажитьобонятельныйлампочка. Дваобонятельныйлуковицы полностью удаляли под препаровальным микроскопом. Промыть в растворе D-Hanks; отрежьобонятельныйгрушу с микрохирургическими ножницами, добавить 2 мл панкреатина 0.25% и инкубировать при 37°С в течение 20 минут; добавить культуральную среду D MEM/F12, содержащую 10% телячьей сыворотки, в центрифужную пробирку объемом 2 мл. Расщепление прекращали в середине; автобусной пипеткой аспирировали не полностью переваренную ткань при 800 об/мин и центрифугировали в течение 5 мин, отбрасывали супернатант; наконец, использовали кондиционированную среду (20 процентов FCS плюс 20 мкл, моль/л форсколина плюс 20 мкг/мл BPE плюс DMEM/F12). Превратите ее в суспензию одиночных клеток объемом 107 мл, инокулируйте ее в колбу для культивирования клеток, покрытую полилизином, поместите в инкубаторе при температуре 37 градусов и 5 процентах CO2, а затем добавить Ar-c. Очистка проводилась через 36 часов. Используйте кроличье анти-p75E и FITC-меченое козье анти-кроличье вторичное антитело IgG для иммуногистохимической идентификации клеток и наблюдения под флуоресцентным микроскопом.

1.2.2 Используйте МТТ и проточную цитометрию для определения эффектацистанхе общие гликозидынаобонятельныйобволакивающие клетки: инокулировать культивированные и очищенныеобонятельныйинкапсуляция клеток в 96-луночный планшет при 1X106 и добавлениецистанхе общие гликозиды(действующие концентрации составляют 1 мкг/мл, 10 мг/мл, 100 мг/мл), измерьте значение OD и измерьте проточную цитометрию клеток через 24 часа действия. Настройте группу управления иЦистанхе общие гликозидыразличные группы концентрации: Группа A (Контрольная группа): культуральная среда, содержащая сыворотку, используется в качестве отрицательного контроля; Группа Б (цистанхе общие гликозидыгруппа с низкой концентрацией: мкг/мл); Группа C (группа средних концентраций общих гликозидов цистанхе: L10jxg/MK); Группа Д (цистанхе общие гликозидыгруппа с высокой концентрацией: 100 мкг/мл): 15 крыс в каждой группе.

1.2.3 Определение содержания нейротрофического фактора в супернатанте методом ИФА: инокулировать культивированные и очищенныеобонятельныйобшивки клеток в 6-луночном планшете при 1x106, добавитьцистанхе общие гликозиды(та же концентрация, что и выше) через 24 часа и действуют в течение 24 часов, и супернатант собирают отдельно, сохраняют при -80 дл. Содержание факторов роста нервов в жидкости определяли методом ИФА.

1.3 Статистический анализ

Данные в этом исследовании обрабатываются как данные измерений, а полученные данные выражаются как среднее значение ± стандартное отклонение, а для статистического анализа используется статистическое программное обеспечение SPSS 11.0. Полученные данные анализируются методом дисперсионного анализа, и P<0.05 indicates="" that="" there="" is="" a="" significant="">

2 результатов

2.1 Влияниецистанхеобщие гликозиды наобонятельныйобволакивающие клетки

2.1.1 Результаты определения методом метилоксазолилтетразола (МТ): Группа A: 0,617±0,149; Группа B: 0,589±0,147; Группа C: 0,761±0,138; Группа D: 0,732±0,234. Сравнение междуЦистанхе общие гликозиды group (B) and Control group (A), P>0.05, разница незначительна;Цистанхе общие гликозидыГруппа с концентрацией 10 мг/мл, 100 мг/мл (C, D) по сравнению с контрольной группой (A) P<0.05, the="" difference="" is="">

2.1.2 Результат определения методом проточной цитометрии показан на рисунке 1. По сравнению с контрольной группой,цистанхе общие гликозидыбыла выше, чем в контрольной группе, а процент апоптотических клеток был ниже, чем в контрольной группе.

2.2 Результаты твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА)

Результаты испытаний показали, что содержание нейротрофического фактора глиальной линии (GDNF): до введения дозы: 302,1±16,6 пг/мл, группа А: 340,5±13,2 пг/мл; группа В: 333,2±23,6 пг/мл; Группа С: 355,2±17,6 пг/мл; Группа Д; 379,2±15,3 пг/мл. По сравнению с предварительным введением содержание GDNF было значительно увеличено; по сравнению с контрольной группой (А) содержание GDNF вЦистанхе общие гликозидыГруппа с концентрацией 100 мг/мл (D) была значительно повышена.

3 Обсуждение

Трудность регенерации аксонов является одной из основных причин, по которым трудно восстановиться после травмы спинного мозга. OEC играют роль в регенерации аксонов центральных нейронов, которую трудно заменить другими типами клеток. В последние годы исследованияобонятельныйобволакивающие клетки стали горячей точкой.обонятельныйобволакивающие клетки представляют собой особый тип глиальных клеток, обладающих характеристиками шванновских клеток и астроцитов. Они происходят изобонятельныйбазальной мембране и широко распространены на поверхностиобонятельныйслизистая оболочка,обонятельныйнерв, иобонятельныйлампочка. Он обладает способностью делиться и регенерировать на протяжении всей жизни и может сопровождатьобонятельныйнервные аксоны мигрируют в головной мозг. Аксоныобонятельныйнерв может проходить через соединение между периферической нервной системой и центральной нервной системой каждые 30-60 дней, повторно врастать вобонятельныйоболочки и установить синаптические связи 4.обонятельныйклетки оболочки могут секретировать многие факторы роста, такие как NGF, BDNF, GDNF, NT-3, нейропептид-Y и S-100. Исследования показали, что фактор роста нервов (NGF) может предотвратить атрофию нейронов красного ядра позвоночника и укрепить кортикоспинальный тракт, а также способствовать регенерации нервного пути красного ядра спинного мозга; как мозговой нейротрофический фактор (BDNF), так и нейротрофин -3 (NT-3) могут предотвращать апоптоз клеток красного ядра спинного мозга у взрослых крыс с аксотомическим повреждением и спасать умирающие нейроны и способствовать регенерации аксонов P. Кроме того,обонятельныйПокрывающие клетки также экспрессируют на своих клеточных мембранах другие факторы, такие как фактор адгезии нервных клеток (N-CAM), которые участвуют в клеточной адгезии и росте аксонов. Благодаря этим характеристикамобонятельныйПокрывающие клетки, OECs считаются одними из перспективных исходных клеток для трансплантации клеток для восстановления SCI.

Химические компонентыЦистанхев основном включают фенилэтаноидные гликозиды, иридоиды, летучие компоненты, лигнаны, полисахариды и алкалоиды. Исследование показало, чтоЦистанхеи его химические компоненты обладают нейропротекторным действием. Денг и др. изучали влияние Tubulosa B на апоптоз нейронов SH-SY5Y, индуцированный фактором некроза опухоли (TNF). Результаты показали, что после 100 мкг/мкг нейроны SH-SY5Y после 36 часов обработки TNF L демонстрировали типичные характеристики апоптоза, в то время как обработка тубулином B в течение 2 часов могла значительно уменьшить апоптоз, вызванный TNF. Кроме того, исследования также показали, что фенилэтаноидные гликозиды могут ингибировать апоптоз зернистых клеток мозжечка крыс путем ингибирования каспазы -3 и каспазы -8, а также против черных мышей C57, вызванных метилфенилтетрагидропиридином (MPTP). Повреждение качественных дофаминергических нейронов оказывает защитное действие. Не только это, ноЦистанхетакже может облегчить различные повреждения, такие как ишемия-реперфузия нервной системы. Эксперимент с ишемией головного мозга на мышах показывает, что диапазон инфаркта через 24 часа и 48 часов после ишемии в группе церебральной ишемии-реперфузии составляет в среднем 72,98 процента и 60,45 процента. Напротив,цистанхеобщее количество гликозидов большой, средней и низкой групп доз (250.0мг·кг/день; 125,0 мг·кг/день; 62,5 мг·кг/день) соответственно может сделать мозг мышей после церебральной ишемии-реперфузии через 24 часа размер инфаркта уменьшился до 25,94%, 25,81% и 31,13%, а размер церебрального инфаркта уменьшился до 22,14%, 20,06% и 22,27% через 48 часов. Между ними была значительная разница, показывающая значительный ингибирующий эффект на апоптоз нейронов.

В этом исследовании различные концентрациицистанхе общие гликозидыбыли применены к ОЭС. Метод МТТ и измерение проточной цитометрии подтвердили, что 10 мг/мл100 мг/млцистанхе общие гликозидыможет способствовать размножениюобонятельныйобволакивающие клетки. Результаты проточной цитометрии показали, чтоцистанхе общие гликозидыможет способствовать размножениюобонятельныйобволакивающие клетки. Он в основном способствует пролиферации цикла G1обонятельныйсперматозоидов и значительно снижает апоптотические клетки. Следовательно,Цистанхе общие гликозидыможет не только способствовать распространениюобонятельныйобволакивая клетки, но также усиливают клеточную активность и ингибируют их апоптоз. Иммуноферментный анализ доказывает, чтоЦистанхе общие гликозидыможет значительно способствовать секреции GDNFобонятельныйобволакивающие клетки. Вышеуказанные результаты обеспечивают экспериментальную основу для клинического примененияЦистанхе общие гликозиды.

использованная литература

[1] Цю Вэйхун, Чжу Хунсян, Чжан Байсян и др. Факторы, влияющие на качество жизни пациентов с позвоночно-спинномозговой травмой в период реабилитации [J]. Китайский журнал реабилитационной медицины, 2009 г., 4(24): 313.

[2] Richter MW, Fletcher PA, Liu J, et al. Собственная пластинка иобонятельныйобволакивающие клетки быка проявляют дифференциальную интеграцию и миграцию и способствуют прорастанию деферентных аксонов в пораженном спинном мозге [J]. J Neurosci, 2005. 25 (46): 10700 -10711.

[3] Fairless R, Bamet SC. клетки обонятельной оболочки: их роль в восстановлении центральной нервной системы [J.Int J Biochem Cell Biol. 2005, 37(4):693-699.

[4] Chen X, Fang H. Schwob JE. Мультипотентность очищенного. трансплантированные глюкозные базальные клетки вобонятельныйэпителий [J]. J Comp Neurol, 2004, 46914): 457–474.

[5] Ла П., Джонс Л.Л. Тушинский МХ. BDNF-экспрессирующие маростромальные клетки; поддерживают экстенсивный рост аксонов в местах повреждения спинного мозга [J]. Exp Neurol, 2005, 191(2):344—360.

[6] Deng M, Zhao JY, Ju XD и др. Защитный эффект Tubulosa B на TNF-индуцированный апоптоз в нервных клетках [J]. Acta Pharmacol Sin, 2004, 25(102 1276

[7] Тянь Сюэ-Фэй, Пу Сяо-Пин.фенилэтаноидгликозидыизЦистанхиsalsa ингибирует апоптоз, вызванный ионами 1-метил-4-фенилпиридиния в нейронах[J]. J Этнофармакол, 2005, 97 (1): 59.

[8] Geng X, Song L.Pu X и ​​др. Нейропротекторный эффект