Каков процесс развития от волчаночного нефрита до почечного фиброза?
Mar 19, 2022
Контактное лицо: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Электронная почта:audrey.hu@wecistanche.com
Сюевэй Дин1,2, Йи Рен1,2,3и Сяоцзе Хэ1,2*
волчаночный нефрит(ВН) является частым осложнением системной красной волчанки (СКВ) и основным фактором риска заболеваемости и смертности. Большое количество бесклеточных нуклеиновых кислот (ДНК/РНК) у пациентов с СКВ, особенно двухцепочечная ДНК, является ключевым веществом в патогенезе СКВ и ВН. Отложение ДНК/РНК-иммунных комплексов (ДНК/РНК-ИК) в клубочках вызывает ряд воспалительных реакций, которые приводят к резидентным нарушениям почечных клеток и, в конечном итоге, к почечной недостаточности.фиброз. Внеклеточная ДНК/РНК является наиболее эффективным индуктором интерферонов I типа (IFN-I). Резидентные почечные клетки (а не инфильтрирующие иммунные клетки) являются основным источником IFN-I в организме.почка. IFN-I, в свою очередь, повреждает резидентные почечные клетки. Не только резидентные почечные клетки становятся жертвами, но и участниками этой войны за иммунитет. Однако механизм образования IFN-I у резидентовпочечныйклетки и патологический механизм IFN-I, способствующий почечной недостаточности.фиброздо конца не выяснены. В этой статье рассматривается новейшая эпидемиология ВН и процесс его развития, обсуждается механизм образования IFN-I в резидентных почечных клетках и роль IFN-I в патогенезе ВН, что может открыть новые перспективы для лечения ВН.
Ключевые слова: фиброз, IFN-I, волчаночный нефрит, сенсоры нуклеиновых кислот, патогенез,почечныйрезидентные клетки
Cistanche tubulosa предотвращает заболевание почек, нажмите здесь, чтобы получить образец
ВВЕДЕНИЕ
Системная красная волчанка (СКВ) представляет собой аутоиммунное заболевание, при котором иммунные комплексы (ИК) образуются и откладываются во многих органах.почкаявляется одним из основных органов-мишеней.волчаночный нефрит(ВН) присутствует по крайней мере у 30-60% пациентов с СКВ, и почти у всех пациентов имеется патологическое поражение почек. Заболеваемость СКВ и ВН широко варьирует между регионами мира и между этническими группами (1). Хотя СКВ чаще встречается у женщин, чем у мужчин во всех возрастных группах и популяциях, несколько исследований показали, что мужчины с волчанкой чаще получают ВН, чем женщины с волчанкой, а пациенты с ВН моложе, в основном африканской, азиатской и латиноамериканской расы/этнической принадлежности. (2–5). Уровень смертности от ВН в шесть раз выше, чем у населения в целом (6). ВН является основным фактором риска смертности от СКВ, при этом у 10% пациентов с ВН развивается терминальная стадия почечной недостаточности (ТХПН) (1, 7). По сравнению с пациентами с СКВ без ВН у пациентов с ВН была более высокая стандартная смертность ({10}},8 против 2,4) и более раннее время смерти (6, 8–10). В последние годы ранняя диагностика, стандартизированное лечение и новые иммунодепрессанты, такие как микофенолата мофетил, моноклональные антитела к CD20, белимумаб и другие препараты, значительно улучшили прогноз ВН. Однако смертность в 5- лет у пациентов с тяжелым рефрактерным ВН остается высокой (1, 3, 11, 12). Следовательно, выяснение его патогенеза может обеспечить теоретическую основу для скрининга эффективных терапевтических мишеней для ВН.
IFN-I является центральным фактором возникновения и развития СКВ. Недавние исследования предполагают, что IFN-I может играть роль на уровне терминальных органов при СКВ, особенно при ВН. IFN-I является ответом на активацию большинства иммунных клеток. В настоящее время исследования взаимосвязи между IFN-I и LN в основном сосредоточены на иммунных клетках в сыворотке ипочки. Резидентные почечные клетки также выполняют иммунные функции и участвуют в иммунной войне. Предыдущая литература показала, что резидентные почечные клетки (а не инфильтрирующие иммунные клетки) являются основным источником IFN-I в организме.почкаи что IFN-I может вызвать повреждение почек. Тем не менее, существует несколько исследований продукции IFN-I в почках и повреждения IFN-I резидентных почечных клеток. В этой статье рассматривается взаимосвязь между IFN-I и резидентными почечными клетками лимфатического узла и исследуются связанные пути IFN-I, способствующие патогенезу лимфатического узла.
ПАТОГЕНЕЗ ЛН
IC показания
Воздействие нуклеиновых кислот, продукция нефрогенных патогенных антител и образование ICs являются ключевыми звеньями, ведущими к ВН. Было предложено три механизма образования или отложения ICs в клубочках, и они включают (1) отложение предварительно сформированных циркулирующих иммунных комплексов (CICs) в почках, (2) образование in-situ ICs в клубочках и ( 3) связывание антител против двухцепочечной ДНК с перекрестно-реактивными антигенами, присутствующими либо на поверхности резидентных почечных клеток, либо во внеклеточной среде (13–17).
Циркулирующие аутоантигены и антитела образуют ЦИК, которые откладываются в почках. Из-за неправильного клиренса некротических, апоптотических клеток и/или аномального увеличения гибели клеток у больных СКВ в кровоток высвобождаются недеградированные нуклеосомы (комплексы ДНК и гистонсодержащие пары гистоновых пептидов), увеличивая циркулирующие аутоантигены и последующие антитела, которые формируют ЦИК. Они уклоняются от распознавания иммунной системой и откладываются в почках.
IC также могут образовываться in situ. Электронно-плотные структуры (EDS), связанные с базальной мембраной клубочков (GBM) и мезангиальным матриксом, представляют собой основную мишень для южных антител как у мыши, так и у человека.волчаночный нефрит. Нуклеосомы и фрагменты хроматина накапливаются из-за потери активности интраренальной и экстраренальной дезоксирибонуклеазы 1 (Дназы -1). Затем нуклеосомы и фрагменты хроматина легко стимулируют TLR9 в инфильтрирующих макрофагах и дендритных клетках, запуская секрецию локальных MMPs (18, 19). MMP разрушают мембранный барьер, позволяя нуклеосомам и фрагментам хроматина связываться с GBM (20, 21). Воздействие гломерулярного хроматина in situ индуцирует антитела против хроматина (анти-дцДНК и антинуклеосомы), которые становятся нефрогенными и патогенными, вторичными по отношению к образованию ICs in situ (15).
Помимо связывания с фрагментами ДНК, они также связываются с перекрестно-реактивными антигенами на поверхности почечных клеток, чтобы активировать клеточную пролиферацию, апоптоз, воспаление ифиброзпути (13, 14, 17). Антитела к дцДНК связываются с мезангиальными клетками почек (RMC) путем перекрестной реакции с аннексином II клеточной поверхности (22), а-актинином (23, 24) и рибосомным Р-белком (25). Антитела к дцДНК связываются с эндотелиальными клетками клубочков (ГЭК) путем перекрестной реакции с мембранными белками с молекулярной массой 30–35, 44, 68, 110 и 180 кДа (26). Антитела к дцДНК связываются с эпителиальными клетками почечных канальцев (TEC) посредством перекрестной реакции с полипептидами A и D SnRNP (27). Полиреактивность антител против двухцепочечной ДНК может быть связана со структурным/конформационным сходством молекулярного моделирования (28). При связывании с клеточной поверхностью антитела к дцДНК мигрируют в цитоплазму и/или ядро, способствуя росту и пролиферации клеток или, в свою очередь, индуцируя апоптоз (29). Недавние исследования показали, что экстракт RG2 из кишечной симбиотической бактерии R. gnavus перекрестно реагирует с антителами против двухцепочечной ДНК, вызывая или усугубляя иммунный патогенез ВН (30, 31).
В зависимости от типа, продолжительности и тяжести ВН ИК могут быть обнаружены в субэндотелиальной, субэпителиальной, мезангиальной и тубулоинтерстициальной областях (рис. 1). Распределение, количество и провоспалительные свойства СК в почечной паренхиме определяют активацию комплемента, воспаление, пролиферацию клеток и тяжесть гломерулярных и тубулоинтерстициальных повреждений (3, 5, 32, 33).
Потеря клубочков
ИК в основном откладываются в клубочках. Основным медиатором IC-индуцированного повреждения клубочков является система комплемента, особенно образование мембраноатакующего комплекса C5b-9. C5b-9 встраивается в гломерулярную мембрану в очень малых количествах, превращая нормальные клетки в воспалительные эффекторные клетки (34). Иммуностимулирующие гломерулярные клетки продуцируют большое количество провоспалительных цитокинов (35, 36), ускоряющих повреждение/старение клеток, что может быть одним из механизмов гломерулярного повреждения при ВН (37).
Первоначальное IC-опосредованное повреждение клубочков зависит от места отложения IC. Субэндотелиальное отложение ИЦ приводит к накоплению провоспалительных клеток, вызывая пролиферативное заболевание и полулуние клубочков (38). ГЭК и поверхностный слой ГЭК (также известный как гликокаликс) являются первыми точками контакта с компонентами циркулирующей иммунной системы. Т-клетки рекрутируются в клубочки посредством прямого связывания их CD44 с компонентом гиалуроновой кислоты (HA) гликокаликса GEC (39). ICs изменяют морфологию клеток, усиливают экспрессию активной каспазы-3', ингибируют ангиогенез и увеличивают продукцию NO в GECs (40). Аутофагия — это консервативный метаболизм, который играет защитную роль во многих типах клеток и заболеваниях. IC ингибируют аутофагическую активность GEC через Akt/mTOR-зависимый путь (41). Антитела к LN способствуют повышенной секреции эндотелина -1 GEC, что приводит к нарушению плотных межклеточных контактов (42). Субэпителиальное отложение ИК приводит к повреждению подоцитов и различной степени протеинурии. Повреждение подоцитов характеризуется сглаживанием отростков стопы (FPE), потерей специфических для подоцитов маркеров и отслоением клеток (43). Подоциты также способствуют образованию полулуний клубочков. Дедифференцированные подоциты мигрируют в клеточные полулуния. Повреждение подоцитов в конечном итоге приводит к активации и пролиферации париетальных эпителиальных клеток (PECs) через путь JAK/STAT, продукции HB EGF и IL -6 и/или отсутствию (мотив CXC) лиганда (CXCL) 12 , совместно способствуя формированию гломерулярного полулуния (43). LN IgG стимулирует перестройку клеточного цитоскелета и снижает уровни фактора роста эндотелия сосудов (VEGF) в подоцитах (42). Мезангиальное отложение IC приводит к пролиферации RMC и увеличению мезангиального матрикса. Воспалительная среда лимфатического узла побуждает RMC продуцировать провоспалительные цитокины, которые привлекают лейкоциты (44); способствует экспрессии RMCs более высоких уровней белков матрикса и регулированию ферментов деградации матрикса, что приводит к отложению мезангиального матрикса (44, 45); регулируют клеточный цикл и способствуют пролиферации RMC (46).
Подоциты, GECs и RMCs в клубочках взаимодействуют и поддерживают друг друга. Подоциты продуцируют VEGF, необходимый для выживания GEC (47, 48); GEC продуцируют тромбоцитарный фактор роста (PDGF), необходимый для выживания RMC; RMC выделяют потенциальный трансформирующий фактор роста-b (TGF-b), тем самым защищая GEC от апоптоза (49). Прогрессирующее повреждение одного типа клеток может в конечном итоге привести к повреждению других типов клеток. Активация, дедифференцировка или пролиферация клеток клубочков приводит к потере структурной целостности кластера клубочков и, в конечном счете, к гибели клубочков.
Тубулоинтерстициальный фиброз
Кровоснабжение почечных тубулоинтерстиций обеспечивается клубочковым оттоком. Потеря клубочков влияет на тубулоинтерстициальную выживаемость. Изменения, возникающие в результате потери канальцевой интерстициальной жизнеспособности, такие как канальцевая атрофия,фибрози интерстициальная инфильтрация. Повреждение эпителиальных клеток почечных канальцев (ТЭК) является важной причиной почечной недостаточности.фиброз(50, 51). Тяжесть и частота повреждения ТИК определяют, приводит ли этот механизм репарации к выздоровлению или к прогрессированию фиброза (52). TEC выполняют механизм восстановления для восстановления нормальной функции, когда травма незначительна или на короткое время. TEC испытывают неадаптивное восстановление, когда тяжелая и стойкая травма превышает нормальный механизм восстановления. Дезадаптивная репарация проявляется в двух аспектах: остановке клеточного цикла в фазе G2/M, которая характеризуется экспрессией p53, p21 и p16INK4a; ассоциированные со старением секреторные фенотипы, характеризующиеся секрецией провоспалительных факторов и факторов профиброза, включая TGF-b1, фактор роста соединительной ткани (CTGF), CXCL1, IL-6, IL{{15} } (50, 53–56). Эти факторы способствуют хронической воспалительной микросреде, благоприятной для фиброзной ткани (53). ТИК секретируют провоспалительные цитокины для рекрутирования и активации различных воспалительных клеток. И эти рекрутированные клетки дополнительно продуцируют цитокины, которые управляют трансформацией ТИК, фибробластов и перицитов в тип миофибробластов (50, 57, 58). В конце концов, ТИК, фибробласты и перициты экспрессируют α-гладкомышечный актин (a-SMA) и способствуют отложению внеклеточного матрикса (ECM), способствуя окончательному процессу почечного фиброза.
Хотя ИК преимущественно выявляются в клубочках, влияя на гломерулярную и тубулоинтерстициальную способность, около 70% пациентов с ВН также имеют агрегаты ИК вдоль базальной мембраны канальцев, что приводит к тубулоинтерстициальному воспалению ифиброз. Исследование биопсии лимфатического узла показало, что канальцевые IC не зависят от циркуляторных и гломерулярных IC (59). Было показано, что антитела против дцДНК связывают SnRNP A и D в TEC, вызывая их интернализацию и транспортировку в цитоплазматические и ядерные субклеточные компартменты, или они могут оставаться на клеточной поверхности, где взаимодействие с комплементом приводит к лизису клеток (27). . Связывание анти-дцДНК антител с ТИК индуцирует фенотипические изменения в ТИК, которые могут способствовать эпителиально-мезенхимальному переходу (ЭМП) (60). Другое исследование показало, что антитела к дцДНК индуцируют секрецию ТЭК растворимого фибронектина и увеличивают нижестоящий синтез TGF-b1 и коллагена за счет предварительной активации ERK, p38 MAPK, JNK, PKC-a и PKC-bII (61).
Перициты являются потенциальными источниками миофибробластов (50, 57, 58). Потеря перицитов приводит к истончению капилляров. Истончение капилляров вызывает аноксию в ТИК, что увеличивает интерстициальный окислительный стресс. Поврежденные или гипоксические ТИК секретируют индуцирующий гипоксию фактор -1а (HIF- 1а) и последующий VEGF, чтобы способствовать выживанию и пролиферации эндотелиальных клеток (ЭК), увеличивая плотность периваскулярных капилляров (62, 63). Однако избыточное производство VEGF способствует образованию негерметичных и нефункциональных сосудов, что приводит к гипоксической и сильно окислительной среде (64). Кроме того, VEGF может использоваться как провоспалительный фактор, усугубляющийфиброзответ (64). Было показано, что гипоксия способствует ЭМП как важному фактору микросреды (65–68). Повышенная прочность матрикса также усугубляет тубулярную гипоксию и прогрессирование ЕМТ. Вышеуказанные факторы образуют порочный круг.
Почечные микрососудистые поражения
Почечные микрососудистые поражения часто встречаются при ВН и все чаще признаются маркером ВН. Было предложено пять патологических типов почечных микрососудистых поражений лимфатических узлов: отложения иммунных комплексов в сосудах (ICD), атеросклероз (AS), тромботическая микроангиопатия (TMA), невоспалительная некротизирующая васкулопатия (NNV) и истинный почечный васкулит (TRV). 69). До трети пациентов с ВН имеют одновременно два или более сосудистых поражения. Хотя каждый тип поражения может иметь свои уникальные факторы, существуют некоторые общие механизмы для различных сосудистых поражений. Поврежденные ТИК вызывают потерю перицитов, что приводит к истончению капилляров (50, 57, 58, 62–64). Активация и дисфункция сосудистых ECs, а также дисфункция иммунной системы являются ключевыми механизмами микрососудистых поражений LN почек, особенно индуцированного IC воспаления сосудов и тромботических событий, связанных с антифосфолипидными антителами (APL) (69). Связывание аутоантител с ЭК сосудов и отложение ЦИК на микрососудах приводит к изменению связей между ЭК, что приводит к активации комплемента, увеличению экспрессии молекул адгезии, воспалительных цитокинов и хемокинов, увеличению проницаемости ЭК. Активация и дисфункция ЭК дополнительно рекрутируют моноциты через молекулы адгезии и хемокины, которые индуцируют агрегацию тромбоцитов, что приводит к прокоагулянтной активности и микротромбозу (70, 71). Индуцированные APL тромботические явления являются важным механизмом ТМА почечных ЛУ (72). Пациенты с ТМА имели худшие почечные исходы (73). Микроваскулярные поражения почек отрицательно влияют на отдаленные почечные исходы и могут определять выбор тактики лечения (73, 74) (рис. 2).
МЕХАНИЗМЫ ГЕНЕРАЦИИ IFN-I В ПОЧКАХ
Клинические исследования показали, что у пациентов с ВН наблюдается гиперэкспрессия IFN-I, а активность IFN-I тесно связана с воспалением ВН (75–77). Экспериментальные исследования на животных показали, что воздействие IFN-I на мышей NZB/W или C57BL/6J ускоряет развитие гломерулонефрита, гломерулярного полулуния и интерстициального нефрита почечных канальцев (78–80); снижение биологической активности IFN-I у мышей NZB/W облегчало почечную патологию и повышало выживаемость (81). Хотя исследование показало, что опосредуемый Toll-подобным рецептором 7 (TLR7) ВН не зависит от передачи сигналов IFN-I, этого недостаточно, чтобы замаскировать конечную роль IFN-I в ускорении нефрита (82). IFN-I включает IFN-a и IFN-b, которые играют биологическую роль, связываясь с рецепторами интерферона типа I (IFNAR).
Механизмы образования IFN-I
Внеклеточная нуклеиновая кислота (ДНК/РНК) является наиболее эффективным индуктором IFN-I. Они распознаются внутриклеточными сенсорами нуклеиновых кислот, которые активируют сигнальный путь, продуцирующий IFN-I (рис. 3). Сенсоры ДНК включают эндосомный TLR9, ДНК-зависимый активатор IFN-регуляторных факторов (DAI), интерферон-индуцируемый белок 16 (IFI16) и циклическую GMP-AMP (cGAMP) синтазу (cGAS). РНК-сенсоры включают TLR3, TLR7, TLR8, ген I, индуцируемый ретиноевой кислотой (RIG-I), и белок 5, ассоциированный с дифференцировкой меланомы (MDA5). Связывание TLR7/8 с одноцепочечной РНК, а связывание TLR9 с ДНК CpG активирует нижестоящие сигнальные пути — адапторный белок MyD88 и факторы транскрипции, такие как IRAKs, TRAF6 и IRF7, что затем приводит к секреции IFN-α (83, 84). Связывание TLR3 с двухцепочечной РНК индуцирует IFN-b в основном через сигнальный путь TRIF-TBK1-IRF3. cGAS (85, 86), DAI (87), IFI16 (88) распознают двухцепочечную ДНК и затем активируют сигнальный путь стимулятора генов интерферона (STING)-TANK-связывающая киназа 1 (TBK1)-IRF3 для регуляции транскрипции IFN-b и IFN-индуцированные гены. RIG-I и MDA5 узнают dsRNA и претерпевают конформационные изменения, чтобы индуцировать митохондриальную противовирусную сигнализацию (MAVS), затем активируют IRF3/7 с помощью TRAF6/3, что приводит к продукции IFN-I (89).
Пациенты с СКВ богаты хроматином или бесклеточными нуклеиновыми кислотами, особенно двухцепочечной ДНК, из-за дефектного клиренса апоптотических и некротических клеток и увеличения нейтрофильных внеклеточных ловушек (НЭО). Эти бесклеточные ДНК/РНК-кислоты активируют вышеуказанные сигнальные пути через внутриклеточные ДНК/РНК-сенсоры, вызывая выработку IFN-I (90). Исследования показали, что существует несколько локусов генов предрасположенности к СКВ в вышеуказанных сигнальных путях, и их генные варианты способствуют продукции IFN-I и прогрессированию ВН (таблица 1).
Основные продуценты IFN-I в почках
Система IFN-I при СКВ находится в состоянии длительной активации. Все типы ядерных клеток могут продуцировать IFN-I во время патогенной инфекции. На фоне СКВ происходит аномальная активация иммунных клеток. Например, плазмацитоидные дендритные клетки (pDC) массово продуцируют IFN-α (103); нейтрофилы секретируют IFN-I на ранних стадиях заболевания (104). Ранние В-клетки Т1 при СКВ продуцируют IFN-I, особенно IFN-b (105). Предыдущее исследование показало, что резидентные почечные клетки (а не инфильтрирующие иммунные клетки) были основным источником IFN-I в почках.почка(80). Помимо циркулирующей бесклеточной нуклеиновой кислоты и нуклеинового компонента ЦИК важным источником патогенной нуклеиновой кислоты являются почечные иммуностимулирующие нуклеиновые кислоты. Крупные фрагменты хроматина впочкаподвергаются воздействию из-за избирательного подавления активности Dnase1 в почках (16, 106, 107). Волчаночные нефрогенные аутоантитела проникают в почечные клетки, повреждая клеточную структуру, усиливая расщепление ДНК и вызывая гибель клеток (29, 108). Другим потенциальным источником почечных иммуностимулирующих нуклеиновых кислот являются NET, высвобождаемые нейтрофилами в клубочках и почечных канальцах, которые не полностью расщепляются и состоят из ДНК, гистонов и белков нейтрофилов (109–111). NET активируют путь cGAS-STING или путь TLR9 для продукции IFN-I (111, 112). Подтип IFN-I, секретируемый почечными резидентными клетками, и экспрессия рецепторов ДНК/РНК в почечных резидентных клетках различались (таблица 2).
Подоцит
ДНК/РНК-ИК индуцируют продукцию IFN-b в подоцитах. Подоциты, обработанные лигандом TLR3 - polyIC, экспрессировали IFN-I. А подоциты экспрессируют TLR1-6 и TLR9 (113). Масум М.А. и соавт. обнаружили, что TLR9 избыточно экспрессируется в подоцитах у мышей с аутоиммунным гломерулонефритом (AGN), который связан с повреждением гломерулярных подоцитов (114). Однако Machida H et al. обнаружили, что TLR9 экспрессировался только в подоцитах пациентов с активным ВН и исчезал во время ремиссии (115). cGAS и IFI16 являются основными сенсорами ДНК в подоцитах и запускают экспрессию IFN-b, активируя путь cGAS/IFI16-STING, тем самым способствуя прогрессированию ВН у пациентов с СКВ (116). Кроме того, Kimura J et al. проанализировали мышей с моделью волчанки BXSB/MPJ-YAa и обнаружили, что экспрессия TLR8 и его нижестоящих цитокинов была значительно повышена у мышей с волчанкой, а TLR8 был локализован в подоцитах (117).
РМЦ
ДНК/РНК-IC индуцируют продукцию IFN-b в RMC. В контексте СКВ РМЦ экспрессируют TLR1-4 и TLR6, особенно TLR3 с высокой экспрессией (118). TLR3 принадлежит к подгруппе TLR, специфичной к нуклеиновым кислотам, которая активирует продукцию IFN-b путем распознавания дцРНК (119). Однако RMCs не экспрессируют другие члены подгруппы TLR — TLR7-9 (118, 119). Кроме того, РМЦ пациентов с ВН демонстрируют высокие уровни экспрессии MDA5 (120). dsRNA индуцирует RMC к высвобождению IFN-a/b с помощью MDA5 (а не RIG-I); IFN-a/b может активировать RMC в аутокринно-паракринной петле (121). Хотя RMC не экспрессируют TLR9 (118, 119), DNA-IC также индуцируют активацию RMC. Цин X и др. обнаружили, что антитела IgG против двухцепочечной ДНК активируют провоспалительные гены RMC у мышей MRL/LPR (122). Аллам Р. и соавт. обнаружили, что вирусная дцДНК стимулирует RMC к продукции IFN-b и IFN-индуцированных генов, которые не зависят от DAI (123).
ГЭЦ
ДНК/РНК-IC индуцируют продукцию IFN-b в GEC. GEC экспрессируют TLR1-6 (124). dsRNA активирует TLR3 и индуцирует GECs для экспрессии IFN-b (125, 126). Лю Кью и др. обнаружили, что дцРНК индуцирует экспрессию GECs RIG-I и MDA5 через сигнальный путь TLR3/IFN-b (127). В то же время dsRNA активирует GEC через RIG-I для секреции IFN-a/b, в то время как IFN-a/b не может активировать GEC в аутокринно-паракринной петле (128). В GEC отсутствует уникальный ДНК-специфический TLR — TLR9 (124). Однако Hagele H et al. стимулировали GEC с помощью вирусной двухцепочечной ДНК и обнаружили, что вирусная двухцепочечная ДНК проникает в GEC посредством эндоцитоза, а затем активирует GEC с образованием IFN-a/b независимым от TLR способом (129). IFN-b может индуцировать экспрессию DAI и фосфорилирование IRF3, но IFN-b не может активировать GEC в аутокринно-паракринной петле (129).
Другие
Резидентные почечные клетки также включают ТИК, почечные интерстициальные фибробласты и перитубулярные капиллярные эндотелиальные клетки (ПТК-ЭК). Кастеллано Г. и соавт. обнаружили, что TECs был основным производителем IFN-a (130). Недавние исследования показали, что TEC экспрессируют RIG-I, внутриклеточный рецептор распознавания образов, который участвует в продукции IFN-b путем распознавания РНК (131). Неизвестно, продуцируют ли почечные интерстициальные фибробласты IFN-I и экспрессию их внутриклеточных рецепторов ДНК/РНК. Уровень экспрессии TLR9 был значительно повышен в PTC EC у склонных к волчанке мышей с моделью AGN и был связан с перитубулярным капиллярным и интерстициальным повреждением почечных канальцев (132).
ПОВРЕЖДАЮЩИЕ ЭФФЕКТЫ ИФН-I ПРИ ЛН
Резидентные клетки почек являются основным источником IFN-I в организме.почка(80). IFN-I, индуцированный резидентными почечными клетками, в свою очередь, способствует воспалительному состоянию гломерулярных клеток, что приводит к почечной недостаточности.фиброз, рубцевание и потеря почек (80). Повреждение IFN-I проявляется в трех аспектах: (1) IFN-I индуцирует продукцию ядерного антигена и аутоантител, способствуя образованию ICs; (2) IFN-I рекрутирует лейкоциты, чтобы способствовать пролиферативным поражениям; (3) IFN-I действует на резидентные почечные клетки, что приводит к активации клеток, повреждению, апоптозу и прогрессированию почечной недостаточности.фиброз(Рисунок 4).
IFN-I способствует образованию ядерных антигенов и аутоантител
IFN-I способствует образованию ядерных антигенов. IFN-I может индуцировать экспрессию и мобилизацию фактора активации В-клеток (BAFF) (133, 134). BAFF способствует активации Т-клеток (135) и продукции NET (136). Гиперактивность Т-клеток СКВ приводит к гиперполяризации митохондрий, что в конечном итоге приводит к увеличению продукции активных форм кислорода (АФК) (137). АФК могут модифицировать клеточные компоненты и метаболиты, придавая им иммуногенность (138). АФК способствует формированию сетей (112). НЭО вызывают согласованную активацию TLR9 и рецептора В-клеток (BCR), что приводит к выработке аутоантител при волчанке (139). Фолликулярные хелперные Т-клетки (TFH) (140, 141), CXCR5-CXCR3 плюс PD1hiCD4 плюс Т-хелперные клетки (142) и периферические хелперные Т-клетки (TPH) (143) способствуют дифференцировке В-клеток и выработке антител в различных способы.
IFN-I способствует образованию аутоантител. BAFF является ключевым фактором созревания, выживания и функционирования патогенных для СКВ В-клеток (144, 145), которые отвечают за продукцию аутоантител. IFN-I не только напрямую мобилизовал BAFF (133, 134), но также косвенно регулировал путь BAFF, способствуя продукции факторов, ингибирующих макрофаги (MIF) (146-148). BAFF также способствует активации В-клеток интерфероном (149). Кроме того, связанные с СКВ аутоантитела и ИС могут индуцировать сильное высвобождение NET (150), увеличивая экспозицию нуклеиновых кислот.
Затем повышенные ядерные антигены и аутоантитела, индуцированные IFN-I, увеличивают вероятность образования IC и запускают LN.
IFN-I способствует инфильтрации лейкоцитов
IFN-I сильно индуцирует хемокин CXCL9/10/11, затем рекрутируя лейкоциты в очаг воспаления через сигнальный путь CXCR3A-Gi PI3K-MAPK (151, 152). Несколько исследований показали, что почечный IFN-I индуцирует попадание лейкоцитов в почки у пациентов с ВН. Повышенное рекрутирование лейкоцитов может быть действующим механизмом, при котором IFN-I вызывает иммуноопосредованный нефрит (80). Триантафиллопулу А. и соавт. индуцировали сверхэкспрессию IFN-b у мышей NZB/W с использованием лиганда TLR3 poly (I:C) и обнаружили, что IFN-b индуцирует макрофагальную инфильтрацию в почечной ткани (78). Йошикава М. и соавт. обнаружили, что IFN-b подавляет экспрессию CXCR5 в B-клетках, а IFN-g повышает экспрессию CXCR3 в B-клетках, что вызывает инфильтрацию B-клеток в почечной ткани у пациентов с ВН (153). Кроме того, IFN-I регулирует эти иммунные клетки. Кисимото Д. и соавт. обнаружили, что IFN-I ингибирует противовоспалительные свойства М2-подобных макрофагов в клубочках путем усиления экспрессии Bach1 и подавления экспрессии ho-1, тем самым способствуя воспалению клубочков (154).
IFN-I способствует повреждению почечной ткани
IFN-I способствует гломерулярному склерозу
Подоцит
Нарушение структуры подоцитов является одним из ранних симптомов повреждения клубочков и характерно для ВН (155–157). Подоциты представляют собой высокодифференцированные эпителиальные клетки, которые фиксируются на базальной мембране за счет расширения ножки и взаимодействуют с окружающими подоцитами, образуя щелевую диафрагму и, в конечном итоге, фильтрационный барьер. Щелевая диафрагма представляет собой уникальное клеточное соединение, образованное подоцин-специфичными белками, такими как нефрин и подоцин, которые взаимодействуют с актиновым цитоскелетом (158). Актиновый цитоскелет является основной структурой подоцитов. Нарушения актинового цитоскелета играют главную роль в СПЭ и митотической катастрофе, приводя к отслоению подоцитов и протеинурии (159-161).
Клетки подоцитов индуцируются для продукции IFN-β, который, в свою очередь, стимулирует экспрессию подоцитов B7-1 и ремоделирование актина (162). IFN-b специфически способствует отслоению или гибели подоцитов, вызывая митотическую катастрофу в подоцитах. IFN-a предотвращает восстановление подоцитов, вызывая остановку клеточного цикла и ингибируя пролиферацию и миграцию PECs. И оба вышеупомянутых IFN подавляют дифференцировку почечных предшественников в зрелые подоциты, которые способствуют формированию фокального рубца, но не репарации клубочков (163). дцДНК индуцирует подоциты к секретированию IFN-b. Экспрессия IFN-b активирует IFNAR. Связанные с IFNAR киназы JAK1 и TYK2 затем фосфорилируют STAT1, что способствует транскрипции аполипопротеина L1 (APOL1). А активированный STAT1 активирует IFI16, что запускает механизм положительной обратной связи, способствующий экспрессии APOL1 (116). Сверхэкспрессия APOL1 в подоцитах очень токсична. Аллели APOL1 G1 и G2 являются факторами риска ВН и терминальной стадии почечной недостаточности, связанной сволчаночный нефрит(LN-ESRD) у афроамериканцев (164, 165). Наблюдаемое повреждение гломерулярных подоцитов при ВН позволяет предположить, что увеличение варианта риска APOL1 в подоцитах пациентов с СКВ может способствовать более быстрому прогрессированию ВН и ВН-ХПН (155–157). Недавние исследования показали, что IFN-α также связан с повреждением структуры и функции подоцитов. IFN-a оказывает значительное влияние на функцию фильтрационного барьера подоцитов. В то же время IFN-a ослабляет сигнал mTORC1 и индуцирует аутофагию подоцитов. Однако усиленная аутофагия улучшает индуцированное IFN-α повреждение подоцитов (166). Это, по-видимому, свидетельствует о защитной регуляции с отрицательной обратной связью.
ГЭЦ
ГЭК также являются компонентом барьера клубочковой фильтрации. Предыдущие исследования показали, что IFN-I, особенно IFN-α, опосредует дисфункцию эндотелия и вызывает апоптоз ЭК (167), что увеличивает проницаемость ГЭК и приводит к потере барьерной функции клубочковой фильтрации.
РМЦ
РМЦ являются ключевым фактором гломерулярного ВН.фиброзв ЛН. Они играют важную роль в гомеостазе, поддерживая клубочковую структуру, производя и поддерживая мезангиальный матрикс, регулируя площадь поверхности фильтрации и фагоцитируя апоптотические клетки или ICs (49). В ответ на отложение ICs и вызванное цитокинами повреждение RMCs способствуют гломерулярнойфиброзчерез гипертрофию и пролиферацию (168). PDGF-B является фактором роста, индуцирующим пролиферацию/миграцию, который индуцирует пролиферацию RMC при гломерулонефрите (169). TGF-b1 активирует нижестоящий сигнальный путь Smads аутокринно/паракринно, индуцируя продукцию PDGF-B. Аутокринная/паракринная петля IFN-b активирует Smad7, который ингибирует активацию Smad3/4 и предотвращает индукцию PDGF-B (170). Однако исследования показали, что стимуляция IFN-a/b увеличивает экспрессию TGF-b1 (44, 78), что может повышать экспрессию PDGF-B и способствовать пролиферации RMC. Более того, CXCL10, индуцированный IFN-I, не только рекрутирует лейкоциты, но также усугубляет пролиферацию RMC путем активации сигнального пути ERK (171).
В дополнение к сверхпролиферации, RMC являются одними из основных стромальных генерирующих клеток, секретирующих компоненты мезангиального матрикса, такие как коллаген I типа (COL I), коллаген III типа (COL III) и фибронектин (FN). Сигнальный путь TGF-b1/Smads играет основную роль в избытке внеклеточного матрикса (ECM) (172, 173). Во-первых, сигнальный путь TGF-b1/Smad повышал синтез белков матрикса, включая COL I и COL III. Во-вторых, сигнальный путь TGF-b1/Smad ингибирует деградацию матрикса. Добавление TGF-b1 к нормальным клубочкам значительно снижает активность активатора плазминогена (PA) и увеличивает синтез ингибитора активатора плазминогена 1 (PAI-1) (174). TGF-b1 регулирует экспрессию MMP-9 (44); основная функция MMP заключается в деградации компонентов ECM, поэтому, по-видимому, TGF-b1 усиливает деградацию матрикса. Однако большое количество исследований показало, что уровни ММП и тканевых ингибиторов металлопротеиназ (ТИМП) в сыворотке, моче и клубочках пациентов с ВН повышены, что сопровождается отложением мезангиального матрикса (78, 175–179). . Сверхэкспрессированные MMP взаимодействуют с TIMP, изменяя состав матрикса, что способствует расширению мезангиального матрикса (178). IFN-a/b индуцирует высокую экспрессию MMP-9 и TIMP-1 в почках (78). Кроме того, TGF-b1 изменяет экспрессию мезангиальных интегринов a1b1 и a5b1 и их лигандов (таких как ламинин, коллаген и FN), способствуя адгезии матрикса (180).
IFN-I может косвенно индуцировать экспрессию TGF-b1 в RMC. В дополнение к CXCL10, IFN-I индуцировал экспрессию RMC белков хемотаксиса моноцитов 1 (MCP-1/CCL2) и IL6. Повышенные уровни MCP-1 стимулируют образование TGF-b1 в почечных резидентных клетках (181) и индуцируют экспрессию мРНК Col IV, отложение коллагена и экспрессию FN (182). Роль IL-6 в почечнойфиброзостается спорным. Предыдущие исследования показали, что IL-6 не играет важной роли в развитии почечной недостаточности.фиброз(183). Недавние исследования показали, что сверхэкспрессия IL-6 и его рецептора снижает количество FN и Col IV в RMC (184); Трансдукция IL-6 может быть вовлечена в возникновение и развитие почечного фиброза (185). Это согласуется с теорией, согласно которой передача сигналов IL-6 опосредуется двумя основными путями. Противовоспалительная активность IL-6 опосредуется классическими сигнальными путями, тогда как провоспалительное свойство опосредуется транс-сигнальными путями (186). Более того, аутокринные/паракринные петли IFN-I в значительной степени вызывают гибель RMC (121). В целом IFN-I оказывает значительное повреждающее действие на RMC (187, 188).
IFN-I способствует почечному интерстициальному фиброзу
Почечный интерстициальныйфиброзявляется следствием хронического воспалительного процесса. Во время хронического воспаления различные клеточные компоненты и сложные сигнальные сети взаимодействуют, что приводит к развитию почечных миофибробластов, что приводит к избыточному накоплению внеклеточного матрикса, что является основным и общим признаком различных хронических заболеваний почек. Возможное происхождение миофибробластов из почечных эпителиальных/эндотелиальных клеток, фибробластов или перицитов остается предметом дискуссий (189-195). ЛеБлю В.С. и соавт. показали, что пролиферативные миофибробласты составляют 50 процентов, полученных из резидентных фибробластов; непролиферативные миофибробласты образуются в результате дифференцировки из костного мозга (35 %), программы эндотелиально-мезенхимального перехода (EndMT) (10 %) и программы эпителиально-мезенхимального перехода (EMT) (5 %) (193). . TGF-b1 по-прежнему играет центральную роль во многих факторах фиброза (196). Во-первых, TGF-b1 способствует пролиферации фибробластов. фактор роста фибробластов 2 (FGF-2) является мощным митогеном фибробластов, способствующим аутокринному росту фибробластов (197). TGF-b1, PDGF-B и FGF-2 совместно способствуют пролиферации фибробластов (197–199). Во-вторых, TGF-b1 способствует превращению других клеток в миофибробласты. TGF-b1 индуцирует функциональную трансформацию TECs и GECs в миофибробласты, которые ответственны за отложение ECM (193, 200-204). MMP-9 участвует в EndMT и EMT посредством повышающей регуляции передачи сигналов Notch, и его активация локализуется ниже TGF-b1 (205, 206). FGF-2 также играет важную роль в ЕМТ (207–209). TGF-b1 также участвует в трансформации фибробластов в миофибробласты посредством фосфорилирования TGFR1 и последующего пути Smad2/3, опосредующего транскрипцию a-SMA и дифференцировку миофибробластов (210). TGF-b1 и PDGF трансформируют фибробласты в миофибробласты (211, 212), которые вместе с фибробластами продуцируют ECM (213, 214). В дополнение к пути передачи сигналов TGF-b1, передача сигналов PDGF индуцирует пролиферацию и дифференцировку перицитов в миофибробласты (64, 215-218). Кроме того, TGF-b1 регулирует PA, PAI-1, MMP-9 и интегрин, чтобы ингибировать деградацию матрикса и способствовать накоплению ECM и интерстициальномуфиброз(44, 174, 178, 180).
TGF-b1 в основном продуцируется ТИК. Еще неизвестно, индуцирует ли IFN-I TECs секретировать TGF-b1. IFN-α вызывает нестабильность барьера и апоптоз ТИК (219–221), что может активировать ТИК. В недавних исследованиях секвенирования одноклеточной РНК биоптатов почек пациентов с ВН экспрессия генов ответа IFN-I в ТИК пациентов с ВН была значительно выше, чем у здоровых лиц из контрольной группы (222), и коррелирует с клиническими показателями и с ответом к лечению (223). Активированные ТЭК секретируют ряд провоспалительных медиаторов и поглощают больше циркулирующих моноцитов в почечный тубулоинтерстиций; инфильтрированные моноциты становятся активированными макрофагами (224). IFN-I также привлекал макрофаги для инфильтрации (78). Активированные макрофаги секретируют PDGF, TGF-b1, MMP и TIMP, которые участвуют в регуляции ткани.фиброз(224). Точно так же IFN-I может усиливать процесс почечной интерстициальнойфиброзчерез MCP-1/CCl2 и IL-6 (181, 184, 185).
IFN-I способствует микрососудистым поражениям почек
Дисбаланс между повреждением эндотелия сосудов и восстановлением является ключевым событием при сосудистых поражениях. IFN-I нарушает этот баланс (225). Эндотелиальные клетки-предшественники (ЭПК) являются основным механизмом репарации. IFN-I индуцирует экспрессию CXCL9/10/11. CXCL9/10/11 активирует сигнальные пути хемокин-рецептор-3B (CXCR3B)-Gs-аденилатциклаза (AC)-циклический аденозинмонофосфат (цАМФ)-протеинкиназа A (PKA), непосредственно способствуя дисфункции ECs и EPCs ( 225). Он также активирует функцию других факторов дисфункции про-EPC (IL-18 (226), BAFF (133, 134, 227)) и подавляет функцию проангиогенных молекул (IL{{26}). }}b и VEGF (167)), что косвенно приводит к дисфункции EPC.
IFN-I способствует несовершенству сосудов, воздействуя на перициты. IFN-I регулирует экспрессию TGF-b1 и PDGF (44, 78, 170). Пути передачи сигналов TGF-b1 и PDGF индуцируют пролиферацию перицитов и их дифференцировку в миофибробласты (64, 215-218). Перициты прикрепляются к поверхности стенки капилляра и имеют общее происхождение с фибробластами. Нормальные перициты стабилизируют стенки кровеносных сосудов и поддерживают спокойствие и целостность сосудов. Активированные перициты отделяются от сосудистой стенки и трансформируются в миофибробласты (195, 228–232). Потеря перицитов приводит к образованию хрупких капилляров и нестабильных, патологических кровеносных сосудов, что в конечном итоге приводит к истончению почечных сосудов (233). Потеря капилляров вокруг почечных канальцев тесно связана с почечной недостаточностью.фиброз.
ВЫВОД
Накопление внеклеточной ДНК/РНК является начальной стадией волчанки и ВН. Внеклеточная ДНК/РНК и компоненты нуклеиновых кислот ICs запускают сенсоры ДНК/РНК в почечных резидентных клетках, тем самым активируя сигнальный путь для продукции IFN-I. IFN-I, в свою очередь, вызывает экспозицию нуклеиновых кислот и образование аутоантител. IFN-I действует на резидентные клетки почек и участвует во всем процессе повреждения почек, особенно в активации сигнального пути TGF-b1/Smads. Кроме того, IFN-I рекрутирует лейкоциты в почечные ткани через сигнальный путь CXCL9/10/11- CXCR3A-Gi-PI3K-MAPK, усиливая почечную недостаточность.фиброзотклик. Кроме того, IFN-I способствует поражению микрососудов почек, еще больше нарушая функцию почек. ИФН-I встречается практически во всех звеньях патогенеза ВН. Следовательно, IFN-I играет важную роль в патогенезе ВН. Нацеливание на системы IFN-I в почках оказывает потенциальное терапевтическое воздействие на преждевременное появление ВН у пациентов с СКВ. Это также предполагает, что иммунная функция почечных резидентных клеток выше, чем у почечных иммунных клеток при ВН, и почечные резидентные клетки являются доминирующим игроком и акцептором в возникновении и развитии ВН. Изучение резидентных клеток в почках еще больше углубит понимание ВН и внесет вклад в таргетную терапию ВН в будущем.
АВТОРСКИЙ ВКЛАД
XD и YR провели поиск литературы и подготовили статью. XH дал понять. XH пересмотрел статью. Все авторы внесли свой вклад в статью и одобрили представленную версию.
ФИНАНСИРОВАНИЕ
Работа выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая (№ 61562021 и № 81560275, № 81960885, № 81260139, № 81060073, № 30560161), Hainan Major Science and Technology Projects (ZDKJ2039010), Hainan Association за успехи в учебе Молодежная программа инноваций в науке и технологиях (201515), специальные проекты социального развития Хайнаня (ZDYF2018103 и 2015SF39).
БЛАГОДАРНОСТИ
Авторы поблагодарили Xiayang Chen за рецензирование и редактирование этой статьи.
ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Алмаани С., Меара А., Ровин Б.Х. Обновитьволчаночный нефрит. Clin J Am Soc Nephrol (2017) 12: 825–35.
2. Хэнли Дж.Г., О'Киф А.Г., Су Л., Уровиц М.Б., Ромеро-Диас Дж., Гордон С. и соавт. Частота и исход волчаночного нефрита: результаты международного исходного когортного исследования. Ревматол (Оксфорд) (2016) 55: 252–62.
3. Парих С.В., Алмаани С., Бродский С., Ровин Б.Х. Обновитьволчаночный нефрит: Основная учебная программа 2020. Am J Kidney Dis (2020) 76: 265–81.
4. Maningding E, Dall'Era M, Trupin L, Murphy LB, Yazdany J. Расовые и этнические различия в распространенности и времени появления проявлений системной красной волчанки: Калифорнийский проект по наблюдению за волчанкой. Arthritis Care Res (Hoboken) (2020) 72: 622–9.
5. Пинейро С., Диас Р.Ф., Фабиано Р., Араужо С.А., Сильва А. Детскаяволчаночный нефрит. Дж. Брас Нефрол (2019) 41: 252–65. дои
6. Яп Д.Ю., Тан С.С., Ма М.К., Лам М.Ф., Чан ТМ. Анализ выживаемости и причины смертности у пациентов с волчаночным нефритом. Трансплантация нефролового циферблата (2012) 27:3248–54.
7. Тектониду М.Г., Дасгупта А., Уорд М.М. Риск терминальной стадии почечной недостаточности у пациентов сволчаночный нефрит, 1971-2015: систематический обзор и байесовский метаанализ. Arthritis Rheumatol (2016) 68:1432–41.
8. FaurschouM,DreyerL,KamperAL,StarklintH,JacobsenS. Долгосрочная смертность и почечный исход в когорте из 100 пациентов сволчаночный нефрит. Arthritis Care Res (Hoboken) (2010) 62:873–80.
9. Леранг К., Гилбо И.М., Стейнар Т.Д., Гран Дж.Т. Смертность и потерянные годы потенциальной жизни при системной красной волчанке: популяционное когортное исследование. Волчанка (2014) 23:1546–52. дои:
10. Бернацкий С., Бойвин Дж. Ф., Джозеф Л., Манзи С., Гинзлер Э., Гладман Д. Д. и соавт. Смертность при системной красной волчанке. Ревматоидный артрит (2006) 54:2550–7.
11. Furie R, Rovin BH, Houssiau F, Malvar A, Teng Y, Contreras G, et al. Двухлетнее рандомизированное контролируемое исследование белимумаба при волчаночном нефрите. N Engl J Med (2020) 383: 1117–28.
12. Zhang H, Zhou M, Han X, Yang Y, Yu X. Микофенолата мофетил в лечении китайских пациентов сволчаночный нефрит: APRISMA-совместимый метаанализ. Мед (Балтимор) (2020) 99: e21121.
13. Юнг С, Чан ТМ. Аутоантитела и резидентные почечные клетки в патогенезеволчаночный нефрит: Знакомство с неизвестным. Клин Дев Иммунол (2012) 2012:139365.
14. Лех М., Андерс Х.Дж. Патогенезволчаночный нефрит. J Am Soc Nephrol (2013) 24:1357–66.
15. Мортенсен Э.С., Реквиг О.П. Нефритогенный потенциал анти-ДНК антител против некротических нуклеосом. J Am Soc Nephrol (2009) 20:696–704.
16. Фисмен С., Мортенсен Э.С., Реквиг О.П. Дефицит нуклеаз способствует терминальной стадииволчаночный нефритНо не нефритогенный аутоиммунитет у мышей (NZB × NZW) F1. Immunol Cell Biol (2011) 89:90 – 9.
17. Юнг С, Чан ТМ. Антитела к Dsdna и резидентные почечные клетки – их предполагаемая роль в патогенезе поражений почек уволчаночный нефрит. Клин Иммунол (2017) 185:40–50.
18. Lim EJ, Lee SH, Lee JG, Kim JR, Yun SS, Baek SH и другие. Зависимая от Toll-подобного рецептора 9 активация MAPK и NF-Kb необходима для экспрессии Cpgodn-индуцируемой матриксной металлопротеиназы-9. Exp Mol Med (2007) 39: 239–45.
19. Меррелл М.А., Ильвесаро Дж.М., Лехтонен Н., Сорса Т., Герс Б., Розенталь Э. и соавт. Агонисты Toll-подобного рецептора 9 способствуют клеточной инвазии за счет увеличения активности матриксной металлопротеиназы. Mol Cancer Res (2006) 4: 437–47.
20. Общий СМ. Молекулярные детерминанты субстратной специфичности металлопротеиназы: матричные металлопротеиназные субстратсвязывающие домены, модули и экзосайты. Мол Биотехнолог (2002) 22:51–86.
