Каким образом эхинакозид, эффективный ингредиент Cistanche Deserticola, способствует росту клеток аденокарциномы поджелудочной железы?

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com

Эхинакозид подавляет рост клеток аденокарциномы поджелудочной железы, индуцируя апоптоз посредством митоген-активируемого протеинкиназного пути.

ВЭЙ ВАН, ДЖИНБИНЬ ЛУО, ИНХУЙ ЛЯН и СИНФЭН ЛИ

Абстрактный.

Клиническое применение натуральных продуктов, полученных из традиционной китайской медицины, привлекло внимание в химиотерапии рака.Эхинакозид(ECH), один из фенилэтаноидов, выделенный из стеблейЦистанхесальса (китайское лекарственное средство на травах) оказывает тканезащитное и антиапоптотическое действие на центральную нервную систему. Однако остается в значительной степени неясным, является лиЭхинакозид обладает опухолесупрессивной активностью. В настоящем исследовании было продемонстрировано, чтоЭхинакозидможет заметно ингибировать пролиферацию клеток аденокарциномы поджелудочной железы, индуцируя выработку активных форм кислорода и нарушение потенциала митохондриальной мембраны и, таким образом, запускаяапоптоз. Кроме того, выяснилось, чтоЭхинакозидподавляет рост опухолевых клеток за счет модуляции активности МАРК. В заключение, это исследование раскрывает новую функцию ЭХГ в предотвращении развития рака и подразумевает, что использованиеЭхинакозид может быть потенциальной химиотерапевтической стратегией для лечения рака.

Эхинакозид в цистанхе для снижениярост клеток аденокарциномы поджелудочной железы

Введение

Рак является опасным для жизни заболеванием и одной из ведущих причин смертности во всем мире. Раковые клетки характеризуются ингибированиемапоптоз, неконтролируемый рост и пролиферация и метастазирование (1). Развитие рака, часто инициируемое генетическими изменениями, представляет собой сложный процесс, включающий взаимодействие между онкогенными белками и опухолевыми супрессорами, образующими сложную сигнальную сеть. Например, было обнаружено, что онкоген Myc амплифицируется или сверхэкспрессируется при различных типах рака, а кодируемый Myc онкопротеин может способствовать онкогенезу, стимулируя прогрессирование клеточного цикла, стимулируя рост клеток и индуцируя ангиогенез (2). Однако онкогенные сигналы, запускаемые Myc, могут активировать путь супрессора опухоли p53 посредством индукции супрессора опухоли, ARF, который смягчает опосредованную онкогенной Е{5}}лигазой мышиную двойную минуту (MDM)2-опосредованную деградацию р53. 3). Это саморегулирующийся самозащитный механизм, который предотвращает злокачественную трансформацию клеток. Примечательно, что p53 может подавлять активность Myc, активируя транскрипцию, например, miR-145, которая нацеливается на мРНК Myc для подавления трансляции (4,5), таким образом формируя регуляторную петлю с отрицательной обратной связью.

Наиболее простой и эффективной стратегией лечения рака является уничтожение раковых клеток. Показано, что широко используемые противораковые препараты, такие как цисплатин (6), актиномицин D (7) и адриамицин (8), ингибируют рост опухоли, стимулируя апоптоз. В последнее время появляется все больше данных о том, что ряд натуральных продуктов и производных растений, особенно лекарственных растений, используемых в традиционной китайской медицине (ТКМ), обладают противоопухолевой функцией, вызывая апоптоз раковых клеток, и имеют потенциал для клинического применения. в терапии рака (9). Например, природный антрахинон эмодин, выделенный из ТКМ, Radix rhizome Rhei, может подавлять рост многочисленных типов раковых клеток (10,11). Камптотецин, полученный из китайского «счастливого дерева», Camptotheca acuminate, является ценным природным продуктом, который ингибирует лигирование ДНК после опосредованных topo I разрывов нити (12). В другом ретроспективном популяционном когортном исследовании, включавшем в общей сложности 729 пациентов с распространенным раком молочной железы, было высказано предположение, что ТКМ может способствовать лечению рака. Из этой когорты 115 пациентов применяли ТКМ, а 614 пациентов не использовали ТКМ. Многофакторный анализ показал, что по сравнению с теми, кто не употреблял ТКМ, использование ТКМ было связано со значительно сниженным риском смертности от всех причин (13). Все вышеупомянутые результаты показали, что ТКМ является важной дополнительной и альтернативной медициной, которую можно использовать при лечении рака.

Эхинакозид(ECH) представляет собой фенилэтаноид, выделенный из стеблейЦистанхисальса, китайское растительное лекарственное средство, которое является важным сырым лекарством, используемым в качестве антисыворотки и средства против усталости (14). Было обнаружено, что некоторые фенилэтаноиды обладают свойствами удаления свободных радикалов и защищают от токсических повреждений, вызванных окислительным стрессом (15). Кроме того, больше биологических свойствЭхинакозидс тех пор были выяснены. Например, ЭХГ может снизить повышенный уровень воспалительных цитокинов и улучшить гистопатологические аномалии легких у мышей с острым повреждением легких (16,17). Также,Эхинакозид было показано, что он оказывает защитное действие на нервную ткань и улучшает поведенческие расстройства у мышиных моделей болезни Паркинсона (18). Примечательно, что было обнаружено, что ЭХГ способствует пролиферации клеток и ингибируетапоптозв эпителиальных клетках MODE-K кишечника мышей (19). Однако до сих пор меньше внимания уделялось потенциальной роли ЭХГ в профилактике рака.

В этом исследовании было изучено, является лиЭхинакозид лечение влияет на рост и пролиферацию опухолевых клеток и влияет лиЭхинакозидиндуцирует апоптоз, повышает выработку активных форм кислорода (АФК) и снижает потенциал митохондриальной мембраны (ММП) и, следовательно, подавляет рост опухолевых клеток. Кроме того, настоящее исследование было направлено на выявление молекулярных механизмов, ответственных за ингибирование роста клеток, опосредованное ЭХГ.

материалы и методы

Клеточная линия, реагент и антитела.

Клетки аденокарциномы поджелудочной железы SW1990 (ATCC, Манассас, Вирджиния, США) культивировали в среде Игла, модифицированной Дульбекко, с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки, 50 ЕД/мл пенициллина и 0,1 мг/мл стрептомицина при 37°C в увлажненная атмосфера с 5-процентным содержанием CO2.Эхинакозидбыл приобретен у Jrdun Biotechnology Corp. (Шанхай, Китай). Антитела против AKT, P-AKT, ERK, P-ERK, JNK, p-JNK, P38, p-P38 и GAPDH были приобретены у Cell Signaling Technology (Danvers, MA, USA); анти-Bax и анти-Bcl-2 были приобретены у Santa Cruz Biotechnology Inc. (Санта-Круз, Калифорния, США); а антикаспаза-3 была приобретена у Abcam (Шанхай, Китай).

Анализ жизнеспособности клеток.

Для оценки скорости роста опухолевых клеток использовали набор для подсчета клеток{{0}} (CCK-8; Dojindo Molecular Technologies, Rockville, MD, USA) в соответствии с инструкциями производителя. Суспензию клеток высевали по 5 000 клеток на лунку с обработкой ЭХГ в течение 0, 12, 24, 48 или 72 ч в культуральные планшеты с 96- лунками. Ингибирование роста клеток определяли путем добавления реагента WST-8 из набора CCK-8 в конечной концентрации 10 процентов в каждую лунку, а оптическую плотность образцов измеряли при 450 нм с помощью устройства для считывания микропланшетов (Multiskan MK3; Thermo Fisher Scientific, Inc., Уолтем, Массачусетс, США).

Окраска Hoechst 33342.

Клетки (слияние 60%) обрабатывали Hoechst 33342 (Институт биотехнологии Beyotime, Хаймэнь, Китай) в конечной концентрации 1 мкг/мл, инкубировали в инкубаторе при 37°C в течение 15 мин, дважды промывали фосфатно-солевым буфером, фиксировали. в 4-процентном параформальдегиде в течение 30 мин при комнатной температуре и наносят на предметные стекла. Морфологические изменения ядер клеток наблюдали под флуоресцентным микроскопом (Olympus BX51, Melville, NY, USA). Нормальные ядра были круглыми и окрашивались в светло-голубой цвет, в то время как апоптотические ядра сморщились и окрашивались в ярко-синий цвет.

Анализы сортировки клеток с активированной флуоресценцией (FACS).

Для оценкиапоптоз, изотиоцианат флуоресцеина (FITC)-аннексин VапоптозНабор для обнаружения (BD Biosciences, Шанхай, Китай) использовали в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, клетки 5x104 промывали ледяным PBS, ресуспендировали в 0,1 мл буфера для связывания (Beyotime Institute of Biotechnology) и окрашивали 10 мл FITC-конъюгированного аннексина V (10 мг/мл) и 10 мл пропидия йодида (ИП) (50 мг/мл). После инкубации в течение 15 минут при комнатной температуре в темноте и добавления 400 мл буфера для связывания клетки анализировали с помощью проточного цитометра (C6; BD Biosciences, Шанхай, Китай).

Измерение активных форм кислорода (АФК).

Для оценки продукции АФК использовали набор для анализа реактивных форм кислорода (Vigorous Biotechnology, Пекин, Китай) в соответствии с инструкциями производителя. Вкратце, клетки (слияние 80 процентов) собирали и промывали PBS перед окрашиванием раствором дигидроэтидия (DHE) (Институт биотехнологии Beyotime). Затем клетки анализировали методом проточной цитометрии.

Измерение митохондриального мембранного потенциала (ММП).

Набор для анализа метилового эфира тетраметилродамина (TMRM) (ImmunoChemistry Technologies, Блумингтон, Миннесота, США) использовали для обнаружения изменений в MMP. Вкратце, клетки (слияние 80 процентов) собирали, промывали PBS и окрашивали TMRM в течение 15-20 минут в инкубаторе при 37°C. Затем клетки однократно промывали PBS и подвергали анализу с помощью проточной цитометрии.

Иммуноблоттинговые анализы.

Клетки (80 процентов слияния) собирали и лизировали в буфере RIPA (Jrdun Biotechnology), состоящем из 50 мМ Tris-HCl, pH 7,4; 150 мМ NaCl, 1 мМ ЭДТА, 1 процент NP-40, 1 процент дезоксихолевой кислоты натрия и 0,1 процента SDS, а также свежедобавленные ингибиторы протеасом. Равные количества лизата прозрачных клеток использовали для иммуноблоттинга, как описано ранее (20).

Статистический анализ.

Количественные данные выражены как среднее ± стандартное отклонение. Статистические различия оценивали с помощью непарного критерия Стьюдента с использованием статистического программного обеспечения SPSS 15.0. п<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Полученные результаты

Эхинакозид подавляет рост опухолевых клеток. Хотя сообщалось, чтоЭхинакозид выполняет защитную функцию, ингибируяапоптози воспалительные сигналы в соматических клетках, таких как нейрональные и кишечные эпителиальные клетки (16-19), остается неясным, контролирует ли ЭХГ рост и пролиферацию раковых клеток. Чтобы проверить это, был проведен анализ выживаемости клеток путем обработки клеток SW1990, полученных из аденокарциномы поджелудочной железы II степени, титрованными дозами ЭХГ, как показано на рис. 1. Примечательно, что было продемонстрировано, что ЭХГ значительно замедляет пролиферацию опухолевых клеток в дозе -зависимым образом в течение 5-дневного периода культивирования (рис. 1).

Эхинакозид запускает апоптоз. Как потеряапоптозявляется одним из основных причинных механизмов, лежащих в основе неконтролируемой пролиферации клеток рака поджелудочной железы (21), в настоящем исследовании был проведен ряд экспериментов, чтобы определить, вызывает ли ЭХГ апоптоз. Во-первых, путем окрашивания ядер опухолевых клеток красителем Hoechst 33342 было показано, что ЭХГ приводит капоптоздозозависимым образом (рис. 2А). Кроме того, были проведены анализы FACS с использованием окрашивания аннексином V/PI для дальнейшего подтверждения апоптотического эффекта ty.Эхинакозид (рис. 2Б). Средний процент апоптотических клеток составлял 1,1 процента в нормальных условиях культивирования, в то время как этот процент значительно увеличивался до 10,6, 21,4 и 51,3 процента в ответ на обработку ЭХГ дозозависимым образом (рис. 2C). Эти результаты вместе с анализом жизнеспособности клеток, показанным на рис. 1, демонстрируют, чтоЭхинакозидлечение подавляет пролиферацию опухолевых клеток, вызываяапоптоз.

Эхинакозид стимулирует выработку активных форм кислорода (АФК). Было показано, что несколько противоопухолевых химиотерапевтических препаратов, таких как доксорубицин и цисплатин, являются мощными генераторами АФК, которые играют решающую роль в индукции апоптоза при физиологических и патологических состояниях (22). Таким образом, было исследовано, может ли обработка ЭХГ также регулировать продукцию АФК. Чтобы проверить это, в этом исследовании для оценки продукции АФК использовали ДГЭ, который может быть окислен с образованием этидия, интеркалирующего с ДНК. Было обнаружено, что, как и другие противоопухолевые препараты,Эхинакозид также стимулирует выработку АФК дозозависимым образом, о чем свидетельствует повышенная интенсивность флуоресценции при обработке ЭХГ (рис. 3).

Эхинакозидснижает ММП. Было показано, что митохондриальная дисфункция участвует в индукции апоптоза. Было показано, что открытие митохондриальной поры перехода проницаемости вызывает деполяризацию трансмембранного потенциала и высвобождение проапоптотических факторов (23). Поэтому было проверено, является лиЭхинакозид может индуцировать потерю ММР в опухолевых клетках путем проведения анализа TMRM, который является хорошо зарекомендовавшим себя подходом, поскольку интенсивность флуоресценции TMRM пропорциональна мембранному потенциалу. Было продемонстрировано, чтоЭхинакозид лечение значительно снижает ММР дозозависимым образом (рис. 4).

Эхинакозид контролирует рост опухолевых клеток с помощью сигналов митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK), но не AKT. Для дальнейшего изучения молекулярной основыЭхинакозид-опосредованная гибель опухолевых клеток, была исследована активность нескольких жизненно важных сигнальных путей, таких как MAPK и AKT (24,25), которые контролируют выживание и гибель клеток. МАРК представляют собой эволюционно консервативные пролин-направленные протеинкиназы Ser/Thr, в том числе киназы, регулируемые внеклеточными сигналами (ERK), c-Jun NH2-терминальную киназу (JNK) и членов семейства p38, которые активируются посредством трех -уровневые сигнальные каскады киназы (26,27). В этом исследовании оценивали экспрессию МАРК и АКТ, а также их активированных фосфорилированных форм, и было выявлено, чтоЭхинакозид заметно подавляет активность JNK и ERK1/2, но усиливает активность p38 (рис. 5). Примечательно, что было продемонстрировано, что активность AKT, которая также имеет решающее значение для пролиферации клеток, не зависит от обработки ЭХГ (рис. 5). Кроме того, было показано, что обработка ЭХГ повышает экспрессию Bax и каспазы-3, одновременно снижая экспрессию Bcl-2 (рис. 5), что согласуется с рис. 2. Таким образом, результаты показывают, чтоЭхинакозидзапускает апоптоз опухолевых клеток по пути МАРК.

цистанхеэхинакозидк антиапоптозу

Обсуждение

Насколько нам известно, это первое исследование, показывающее, чтоЭхинакозид обладает противоопухолевой функцией, вызываяапоптоз(рис. 2), способствуя продукции АФК (рис. 3) и вызывая деполяризацию потенциала митохондриальной мембраны (рис. 4), что, следовательно, приводит к ингибированию роста опухолевых клеток (рис. 1). Кроме того, было показано, что молекулярная основа ECH-опосредованной гибели опухолевых клеток происходит за счет регуляции сигнальных путей MAPK (Fig. 5). Эти результаты демонстрируют новую функцию ЭХГ в предотвращении онкогенеза и, таким образом, позволяют предположить, что он может быть агентом-кандидатом для лечения рака.

Большинство противоопухолевых препаратов могут вызывать апоптоз опухолевых клеток, старение и/или остановку клеточного цикла, что приводит к ингибированию роста и пролиферации опухолевых клеток. Остановка клеточного цикла представляет собой клеточный ответ на слабые сигналы стресса, которые позволяют клеткам восстанавливать поврежденную ДНК до начала репликативного синтеза ДНК или митоза, тогда как апоптоз и старение (постоянная остановка клеточного цикла) происходят в ответ на сигналы стресса, которые устраняют непоправимые или злокачественные клетки. 28,29). Следовательно, только апоптотический эффектЭхинакозид в этом исследовании оценивали воздействие на опухолевые клетки, поскольку уничтожение раковых клеток является основным критерием для оценки эффективности противоопухолевого агента. Примечательно, что было продемонстрировано, что ECH индуцирует экспрессию Bax (Fig. 5), проапоптотического гена, транскрипционно активируемого опухолевым супрессором p53 (30). Таким образом, стоит проверить,Эхинакозид может активировать сигнальный путь р53. Если это так, ЭХГ также может вызывать p53-зависимую остановку клеточного цикла, старение, апоптоз или аутофагию. В этом исследовании была выяснена противоопухолевая функция ECH в клеточной линии аденокарциномы поджелудочной железы SW1990. Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования, в которых наблюдают больше клеточных линий рака поджелудочной железы. Было показано, что мутации в онкогенном белке RAS и опухолевом супрессоре p53 связаны с развитием рака поджелудочной железы (31); однако клеточная линия SW1990 не несет никакой мутации p53, согласно базе данных p53 IARC.Эхинакозид может влиять на рост и пролиферацию других клеточных линий рака поджелудочной железы с различными мутациями p53. Кроме того, было бы интересно определить, способен ли ЭХГ способствовать апоптозу и ингибировать рост других типов опухолей.

Повышение АФК и снижение ММП, которые были вызваныЭхинакозид лечение, как было показано, необходимы дляапоптозиндукция (22). Кроме того, было обнаружено, что АФК могут индуцировать окисление митохондриальных пор, способствуя высвобождению цитохрома с, промежуточного продукта апоптоза, из-за разрушения ММР (22). Таким образом, еще предстоит определить, разрушает ли ЭХГ ММП опосредованно через индукцию АФК. Кроме того, было показано, что вызванный АФК окислительный стресс участвует в модулировании множества сигналов, контролирующих рост клеток, включая p53, NF-κB, HIF и PI3K (32). Остается определить, регулирует ли ЭХГ эти важные сигнальные пути, и если да, то как. Примечательно, что окислительный стресс вызывает различные нейродегенеративные заболевания из-за высокого потребления кислорода, слабых антиоксидантных систем и характеристик терминальной дифференциации центральной нервной системы (33). Однако несколько исследований показали, чтоЭхинакозидоказывает защитное и антиапоптотическое действие на нервную ткань. В связи с этим разумно предположить, что ЭХГ может снижать продукцию АФК в терминально дифференцированных нервных клетках. Поэтому еще предстоит определить, зависит ли регуляция продукции АФК с помощью ЭХГ от статуса клеточной дифференцировки. Следовательно, настоящие результаты вместе с другими исследованиями показывают, что ЭХГ, широко используемая ТКМ, может быть важной химиотерапевтической стратегией не только для лечения нейродегенеративных заболеваний, но и злокачественных карцином.

В последнее время все большее внимание уделяется использованию ТКМ в лечении рака. Потенциал натуральных продуктов из лекарственных растений, используемых в традиционной китайской медицине, был признан научным сообществом даже в западном мире (9). Необходимы усилия для выяснения основных механизмов действия этих натуральных продуктов, что в конечном итоге может привести к разработке эффективных и безопасных лекарств для лечения рака.

В заключение, настоящее исследование продемонстрировало ингибирующую опухоль функциюЭхинакозид а также разрабатывает молекулярную основуЭхинакозидопосредованное подавление опухоли, что предполагает потенциальное клиническое применениеЭхинакозид в терапии рака.

эхинакозидв цистанхе

Благодарности

Это исследование финансировалось и поддерживалось Ключевой программой научных исследований FMU (грант № 09ZD014). Авторы благодарят компанию Biomedworld (Шанхай, Китай) за помощь в редактировании рукописи.

ИзЭхинакозидподавляет рост клеток аденокарциномы поджелудочной железы, индуцируяапоптозчерез путь митоген-активируемой протеинкиназы WEI WANG, JINBIN LUO, YING HUI LIANG и XINFENG LI

---МОЛЕКУЛЯРНАЯ МЕДИЦИНА ОТЧЕТЫ 13: 2613-2618, 2016 г. DOI: 10.3892/mmr.2016.4867

использованная литература

1. Ханахан Д. и Вайнберг Р.А. Признаки рака: следующее поколение. Ячейка 144: 646-674, 2011 г.

2. Олдертон Г.К.: Транскрипция: Транскрипционные эффекты MYC. Nat Rev Рак 14: 513, 2014.

3. Zindy F, Eischen CM, Randle DH, Kamijo T, Cleveland JL, Sherr CJ и Roussel MF: передача сигналов Myc через опухолевой супрессор ARF регулирует p53-зависимуюапоптози увековечивание. Гены Дев 12: 2424-2433, 1998.

4. Sachdeva M, Zhu S, Wu F, Wu H, Walia V, Kumar S, Elble R, Watabe K и Mo YY: p53 репрессирует c-Myc посредством индукции опухолевого супрессора miR-145. Proc Natl Acad Sci USA 106: 3207-3212, 2009.

5. Ляо Дж. М., Цао Б., Чжоу С. и Лу Х.: Новое понимание функций р53 через его микроРНК-мишени. J Mol Cell Biol 6: 206-213, 2014.

6. Zamble DB и Lippard SJ: Цисплатин и репарация ДНК при химиотерапии рака. Trends Biochem Sci 20: 435-439, 1995.

7. Kleeff J, Kornmann M, Sawhney H, and Korc M: Актиномицин D вызываетапоптози подавляет рост раковых клеток поджелудочной железы. Int J Рак 86 399-407, 2000.

8. Tacar O, Sriamornsak P и Dass CR: Доксорубицин: обновленная информация о противоопухолевом молекулярном действии, токсичности и новых системах доставки лекарств. J Pharm Pharmacol 65: 157-170, 2013.

9. Эфферт Т., Ли П.С., Конкималла В.С. и Кайна Б.: От традиционной китайской медицины к рациональной терапии рака. Тенденции Mol Med 13: 353-361, 2007.

10. Yim H, Lee YH, Lee CH и Lee SK: Эмодин, производное антрахинона, выделенное из корневищ Rheum palmatum, избирательно ингибирует активность казеинкиназы II в качестве конкурентного ингибитора. Планта Мед 65: 9-13, 1999.

11. Zhang L, Chang CJ, Bacus SS и Hung MC: Подавление трансформации и индуцированная дифференцировка HER-2/neu-сверхэкспрессирующих клеток рака молочной железы с помощью эмодина. Рак Res 55: 3890-3896, 1995.

12. Pommier Y: Ингибиторы топоизомеразы I: камптотецины и другие. Nat Rev Рак 6: 789-802, 2006.

13. Lee YW, Chen TL, Shih YR, Tsai CL, Chang CC, Liang HH, Tseng SH, Chien SC и Wang CC: дополнительная терапия традиционной китайской медицины улучшает выживаемость пациентов с распространенным раком молочной железы: популяционное исследование. Рак 120: 1338-1344, 2014 г.

14. Xiong Q, Hase K, Tezuka Y, Namba T и Kadota S: Актеозид ингибируетапоптозпри поражении печени, индуцированном D-галактозамином и липополисахаридом. Life Sci 65: 421-430, 1999.

15. Гао Дж. Дж., Игараши К. и Нукина М.: Активность фенилпропаноидных гликозидов по удалению радикалов в Caryopteris incana. Biosci Biotechnol Biochem 63: 983-988, 1999.

16. Zhang Y, Xing J, Ai T, Wen T, Guan L и Zhao J: Защитаэхинакозидпротив острого повреждения легких, вызванного олеиновой кислотой у крыс. Free Radic Res 41: 798-805, 2007 г.

17. Li X, Gou C, Yang H, Qiu J, Gu T и Wen T:Эхинакозидулучшает острое повреждение печени, вызванное D-галактозамином и липополисахаридом, у мышей за счет ингибированияапоптози воспаление. Scand J Gastroenterol 49: 993-1000, 2014.

18. Чжао К., Гао Дж., Ли В. и Цай Д. Нейротрофические и нейрореанимационные эффектыЭхинакозидв подострой мышиной модели болезни Паркинсона MPTP. Мозг Res 1346: 224-236, 2010.

19. Цзя И, Гуан Ц, Го И и Ду Ц:Эхинакозидстимулирует пролиферацию клеток и предотвращает апоптоз клеток эпителия кишечника MODE-K за счет повышения экспрессии трансформирующего фактора роста-1. J Pharmacol Sci 118: 99-108, 2012.

20. Liao P, Wang W, Shen M, Pan W, Zhang K, Wang R, Chen T, Chen Y, Chen H, and Wang P: Петля положительной обратной связи между EBP2 и c-Myc регулирует транскрипцию рДНК, пролиферацию клеток, и туморогенез. Смерть клеток Dis 5: e1032, 2014.

21. Westphal S и Kalthoff H: Апоптоз: мишени при раке поджелудочной железы. Мол Рак 2: 6, 2003.

22. Саймон Х.У., Хай-Йехиа А. и Леви-Шаффер Ф. Роль активных форм кислорода (АФК) вапоптозиндукция.апоптоз5: 415-418, 2000.

23. Ly JD, Grubb DR и Lawen A: Потенциал митохондриальной мембраны (дельта psi (m)) при апоптозе; обновление.апоптоз8: 115-128, 2003.

24. Мунши А. и Рамеш Р.: Митоген-активируемые протеинкиназы и их роль в реакции на облучение. Гены Рака 4: 401-408, 2013.

25. Abraham AG и O'Neill E: PI3K/Akt-опосредованная регуляция p53 при раке. Biochem Soc Trans 42: 798-803, 2014.

26. Tournier C: Два аспекта передачи сигналов JNK при раке. Гены Рака 4: 397-400, 2013.

27. Koul HK, Pal M и Koul S: Роль передачи сигнала киназы p38 MAP в солидных опухолях. Гены Рака 4: 342-359, 2013.

28. Brady CA и Attardi LD: p53 с первого взгляда. J Cell Sci 123: 2527-2532, 2010.

29. Карвахал Л.А. и Манфреди Дж.Дж.: Еще одна развилка на пути принятия решения о жизни или смерти супрессора опухоли p53. EMBO, отчет 14: 414-421, 2013 г.

30. Miyashita T и Reed JC: опухолевой супрессор p53 является прямым активатором транскрипции гена Bax человека. Ячейка 80: 293-299, 1995 г.

31. Мортон Дж.П., Тимпсон П., Карим С.А., Риджуэй Р.А., Афинеос Д., Дойл Б., Джеймисон Н.Б., Ойен К.А., Лоуи А.М., Брантон В.Г. и др.: Мутантный р53 вызывает метастазирование и преодолевает остановку роста/старение при раке поджелудочной железы. Proc Natl Acad Sci USA 107: 246-251, 2010.

32. Schieber M и Chandel NS: функция ROS в окислительно-восстановительной передаче сигналов и окислительном стрессе. Curr Biol 24: R453-R462, 2014.

33. Li J, OW, Li W, Jiang ZG и Ghanbari HA: Окислительный стресс и нейродегенеративные расстройства. Int J Mol Sci 14: 24438-24475, 2013.