4.6. Вещества, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой (TBAR)

Содержание TBAR использовали в качестве показателя липопероксидации. В ткань головного мозга добавляли 50 мМ фосфатный буфер (рН 7,4) до концентрации 25 мг/мл (масса/объем) и гомогенизировали суспензию ультразвуком в течение 10 с. К 30 мкл гомогената добавляли 250 мкл 1-процентной фосфорной кислоты и 75 мкл 0,6-процентной тиобарбитуровой кислоты (ТБК). Смесь реагентов инкубировали при 100°С на водяной бане в течение 45 мин, после чего охлаждали на бане со льдом, а затем центрифугировали при 3000×g в течение 10 мин при 4°С. Из каждого образца отбирали по 150 мкл супернатанта. Флуоресценцию измеряли с помощью устройства для считывания микропланшетов FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ортенберг, Баден-Вюртемберг, Германия) с фильтром возбуждения, установленным на 485 нм (ширина полосы 5 нм), и фильтром излучения, установленным на 530 нм (ширина полосы 5 нм). Калибровочную кривую строили с использованием малонового диальдегида (МДА) в качестве стандарта. Результаты выражали в пмоль МДА/мг белка.

Гликозид цистанхе также может повышать активность СОД в тканях сердца и печени и значительно снижать содержание липофусцина и МДА в каждой ткани, эффективно удаляя различные активные кислородные радикалы (ОН-, Н₂О₂ и др.) и защищая от повреждения ДНК, вызванного ОН-радикалами. Цистанхефенилэтаноидные гликозиды обладают сильной акцепторной способностью свободных радикалов, более высокой восстановительной способностью, чем витамин С, улучшают активность СОД в суспензии сперматозоидов, снижают содержание МДА и оказывают определенное защитное действие на функцию мембран сперматозоидов. Полисахариды цистанхе способны усиливать активность СОД и GSH-Px в эритроцитах и ​​тканях легких экспериментально стареющих мышей, вызванную D-галактозой, а также снижать содержание МДА и коллагена в легких и плазме, повышать содержание эластина, хороший очищающий эффект на DPPH, продлевает время гипоксии у стареющих мышей, улучшает активность SOD в сыворотке и задерживает физиологическую дегенерацию легких у экспериментально стареющих мышей Эксперименты с клеточной морфологической дегенерацией показали, что Cistanche обладает хорошей антиоксидантной способностью и потенциально может стать лекарством для профилактики и лечения заболеваний кожи, вызывающих старение. В то же время эхинакозид в цистанхе обладает значительной способностью улавливать свободные радикалы DPPH и обладает способностью улавливать активные формы кислорода и предотвращать вызванную свободными радикалами деградацию коллагена, а также оказывает хорошее восстанавливающее действие на повреждение свободных радикалов тимина.

Нажмите «Где я могу купить Цистанхе».

【Для получения дополнительной информации:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

4.7. Ферментативная активность основных антиоксидантных ферментов

Для определения активности ферментов в ткани головного мозга в к концентрация 50 мг/мл (масса/объем). Затем суспензию обрабатывали ультразвуком в течение 30 с на бане со льдом, а гомогенат центрифугировали при 10,000×g в течение 15 мин при 4 ◦C. Супернатанты собирали для определения ферментативной активности антиоксидантных ферментов.

Активность супероксиддисмутазы (СОД) измеряли по ингибированию автоокисления пирогаллола при 420 нм [69]. Одна единица фермента определялась как количество фермента, необходимое для ингибирования скорости автоокисления пирогаллола на 50 процентов. Ферментативную активность СОД выражали в международных единицах (МЕ)/мг белка. Активность каталазы (CAT) измеряли в супернатантах, обработанных Тритоном-X-100 (1%, об./об.), по исчезновению перекиси водорода (H2O2) при 240 нм [70], а ферментативную активность регистрировали как субстрат ( мкмоль H2O2) трансформируется/мин·мг белка. Общую глутатионпероксидазу (ГПх) определяли после окисления НАДФН при 340 нм в присутствии избытка ГР, GSH и гидропероксида кумола [71]. Активность GPx выражали в виде субстрата (нмоль NADPH) трансформированного белка/мин мг белка. Активность глутатионредуктазы (ГР) анализировали после окисления НАДФН при 340 нм в присутствии GSSG [72] и выражали в виде трансформируемого субстрата (нмоль НАДФН/мин·мг белка). Активность GR и обеих GPx была скорректирована на спонтанную реакцию в отсутствие биологических образцов (в отсутствие фермента).

4.8. Тест активности BACE1

Протокол теста BACE1 включает использование специфичного для секретазы субстрата (пептида), который конъюгирован с двумя репортерными молекулами, а именно EDANS и DABCYL, что приводит к высвобождению флуоресцентного сигнала [73,74]. Активность BACE1 измеряли как в лизатах коры, так и в гиппокампе. Реакцию проводили при 37°С в течение 1 ч с использованием 10 мкМ субстрата в 50 мМ натрий-ацетатном буфере (рН 4,5). Измерения интенсивности флуоресценции проводились с использованием устройства для считывания микропланшетов FLUOSTAR (BMG LABTECH, Ортенберг, Баден-Вюртемберг, Германия) с фильтром возбуждения, установленным на 360 нм (ширина полосы 5 нм), и фильтром излучения, установленным на 530 нм (ширина полосы 5 нм). Уровень секретазной ферментативной активности пропорционален флуорометрической реакции, и данные выражены в виде увеличения флуоресценции в х раз по сравнению с фоновым контролем (реакция в отсутствие субстрата или ткани). Активность BACE1 нормализовалась по концентрации белка. Активность BACE1 мышей, получавших кверцетин или рутин, выражали в процентах от активности контрольных мышей TgAPP.

4.9. Экспрессия гена RT-PCR основных антиоксидантных ферментов, APP, BACE1, ADAM10, каспазы -3 и каспазы -6 и воспалительных цитокинов

4.9.1. Общая экстракция РНК и очистка

Мы проанализировали различные области мозга, а именно кору и гиппокамп, хранящиеся при температуре -80 ◦C. К известному количеству ткани головного мозга добавляли лизирующий буфер Triomol® в соотношении 1:10 (масса/объем). Образцы гомогенизировали в течение 30 с с помощью беспроводного мотора (пестик Pellet, Sigma-Aldrich) и инкубировали в течение 5 мин при 25°C, чтобы обеспечить полную диссоциацию нуклеопротеиновых комплексов. Затем добавляли 0,2 мл хлороформа на каждый мл использованного лизирующего буфера Triomol®. Пробирки энергично встряхивали в течение 15 с и инкубировали при 25°С в течение 3 мин. Затем их центрифугировали при 11,000×g в течение 15 мин при 4 ◦C. После центрифугирования получали три фазы с РНК в верхней фазе.

Для выделения РНК верхнюю фазу переносили в другую пробирку и осаждали добавлением 0,5 мл изопропанола. После тщательного перемешивания изопропанола и водного раствора инверсией смесь инкубировали при комнатной температуре в течение 10 мин для ускорения осаждения и центрифугировали при 12,000×g в течение 10 мин при 4 ◦C. Супернатанты удаляли, осадки промывали 75%-ным этанолом и центрифугировали при 7500×g в течение 5 мин при 4°С. Осадки высушивали при комнатной температуре и растворяли в 50 мкл воды, обработанной ДЭПК. Для удаления следов ДНК добавляли 2,5 мкл ДНКазы (без РНКазы) и инкубировали при 37°С в течение 30 мин. Наконец, образцы инкубировали при 64°С в течение 5 мин для инактивации ДНКазы.

Затем концентрации РНК измеряли на спектрофотометре UV-VIS (BMG LABTECH, Ортенберг, Баден-Вюртемберг, Германия) при 260 нм, а чистоту оценивали с учетом коэффициента поглощения при 260 и 280 нм (А260/А280).

Определение целостности и чистоты РНК проводили электрофорезом в 1% агарозном геле, окрашенном GelRed и визуализируемом в УФ-свете, где, если РНК была интактной, две верхние полосы, соответствующие рибосомной РНК (28S и 18S), и две нижние полосы соответствующие транспортной РНК (тРНК) и 5S рибосомной РНК должны были наблюдаться.

4.9.2. Синтез комплементарной ДНК (кДНК)

кДНК гораздо более стабильна, чем РНК, и, следовательно, обеспечивает более удобное и безопасное обращение с образцами. кДНК синтезировали из мРНК путем ретротранскрипции с использованием набора для синтеза кДНК первой цепи для RT-qPCR (Fermentas Life Sciences).

Для проведения ретротранскрипции для синтеза кДНК к 2 мкг РНК добавляли 11 мкл воды, обработанной DEPC, и 1 мкл праймеров 10X Random. Затем смесь инкубировали при 65°С в течение 10 мин для денатурации РНК. По истечении этого времени пробирки сразу доводили до 4 ◦C на 5 мин, чтобы избежать ренатурации РНК. Смесь реагентов для синтеза кДНК показана в таблице S1 (дополнительные данные).

К каждому образцу добавляли по 8 мкл реакционной смеси. Весь объем переносили на дно пробирок и инкубировали при 42°С в течение 60 мин. Наконец, реакцию останавливали, инактивируя обратную транскриптазу нагреванием ее при 70°С в течение 10 мин.

4.9.3. ПЦР в реальном времени

Главной особенностью ПЦР в реальном времени является то, что анализ продуктов происходит в процессе амплификации путем определения флуоресценции. Таким образом, процессы амплификации и детекции происходят одновременно в одной и той же пробирке или флаконе без необходимости каких-либо дополнительных действий. Для ПЦР в реальном времени используются термоциклеры, которые могут одновременно амплифицировать и регистрировать флуоресценцию. Мы использовали термоциклер реального времени LightCycler (Roche Diagnostics, Мангейм, Германия).

В таблице S2 (дополнительные данные) перечислены реагенты, необходимые для ПЦР в реальном времени с использованием специфичных для последовательности праймеров и ДНК-связывающего красителя (SYBR Green I, Roche Molecular Systems, Inc., Роткройц, Швейцария) в качестве системы обнаружения.

Для дизайна праймеров для различных количественных маркеров использовали биоинформационную программу Primer3Plus, для которой мы взяли последовательности кДНК интересующих генов из базы данных открытого доступа Medline. Праймеры поставлялись компанией Merck (Sigma-Aldrich). Температура гибридизации и последовательность различных используемых праймеров показаны в таблице S3 (дополнительные данные).

Условия реакции для амплификации интересующих генов показаны в таблице S4 (дополнительные данные).

Наконец, образцы подвергались плавлению по программе: 95 ◦C в течение 15 с, 65 ◦C в течение 30 с и до 98 ◦C со скоростью 0,1 ◦C/с с непрерывной регистрацией флуоресценции.

Для количественного определения уровней кДНК использовали метод сравнения порога цикла (Ct) [75] с использованием GADPH в качестве «экономки». Амплификацию экономки проводили параллельно с анализируемым геном. Значения Ct рассчитывали с использованием программного обеспечения 4.0, предоставленного LightCycler (Roche Diagnostics, Мангейм, Германия). Программное обеспечение позволяет различать флуоресценцию из-за усиления образца и фона. Были также записаны кривые плавления. Определение температуры плавления амплифицированного фрагмента позволило охарактеризовать амплифицированный продукт. Размер полос проверяли на 1,5% агарозном геле.

Вариацию экспрессии исследуемого гена при обработке кверцетином или рутином выражали в зависимости от контрольного TgAPP (мыши без обработки) и нормализовали эту экспрессию по уровням GADPH. Коэффициент изменения (2-∆∆Ct) представляет собой количество раз, когда интересующий ген модифицировался при определенном лечении контрольных мышей.

4.10. Статистический анализ

Все тесты проводились как минимум в двух повторах и в трех разных экспериментах. Полученные результаты выражены как среднее значение ± стандартная ошибка. Однофакторный дисперсионный анализ (ANOVA) был выполнен после того, как данные были проверены и продемонстрировано, что они соответствуют нормальному распределению. Были проведены апостериорные тесты множественных сравнений Ньюмена-Кеулса для изучения средних различий между группами. Значения p < 0.05 считались значимыми. Программное обеспечение SigmaPlot 11.0 использовалось для статистического анализа.

5. Выводы

Пищевые привычки и добавки могут влиять на окислительно-восстановительный статус клеток. Исходя из этого, мы стремились улучшить клеточный окислительно-восстановительный гомеостаз в модели мышей с БА с помощью флавоноидной диеты, содержащей кверцетин или рутин, для облегчения амилоидной патологии, учитывая взаимодействие между клеточным окислительно-восстановительным статусом и протеасомозависимыми амилоидными особенностями при бессимптомной БА. Наши наборы данных актуальны, поскольку эффекты флавоноидов, отображаемые в мышиной модели TgAPP, согласуются с теми, о которых сообщалось ранее в наших моделях in vitro и ex vivo.

В заключение, наши результаты показывают, что начало диетотерапии на бессимптомной стадии или при появлении симптомов, подобных БА, может восстановить окислительно-восстановительный статус клеток и физиологическую обработку АРР посредством одновременной регуляции экспрессии АРР и активности BACE1.

Хотя наши результаты трудно экстраполировать на состояние человека, они могут иметь широкое значение для реакции человека на будущие терапевтические средства. Из двух флавоноидов рутин с более выраженными эффектами in vivo кажется наиболее подходящим для включения в ежедневный рацион в качестве адъювантной терапии при БА, основанной на усилении внутриклеточного окислительно-восстановительного гомеостаза головного мозга.

Дополнительные материалы:На веб-сайте можно загрузить следующую вспомогательную информацию. Ссылка [76] цитируется в дополнительных материалах.

Вклад автора:ПБ-Б. и СМ-А. задумал идею и план эксперимента, помог в экспериментах, интерпретировал полученные результаты и написал рукопись. КЛЖ-А. провели эксперименты, провели анализ данных и интерпретировали полученные результаты. JB помог с анализом данных и пересмотром рукописи. Все данные были сгенерированы собственными силами, бумажная фабрика не использовалась. Все авторы соглашаются нести ответственность за все аспекты работы, обеспечивая целостность и точность. Все авторы прочитали и согласились с опубликованной версией рукописи.

Финансирование:Это исследование финансировалось Фондом медицинских исследований «Mutua Madrileña» (Четвертый выпуск грантов для проектов медицинских исследований), Министерством образования и науки Испании (Ref. AGL2008-04892-C03-02) и Министерство науки и инноваций Испании (Ref. CTQ2010-16170).

Заявление Институционального контрольного совета:Протоколы животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) Мадридского университета Комплутенсе и полностью соответствуют Европейской директиве 2010/63/о защите животных, используемых в научных целях, и испанскому законодательству о защите животных ( Королевский указ 53/2013 от 1 февраля 2013 г.).

Заявление об информированном согласии:Непригодный.

Заявление о доступности данных:Данные, подтверждающие результаты этого исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Благодарности:Мы благодарим Foundation Folch за преддокторский грант для KLJA.

Конфликт интересов:Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Сокращения

AD, болезнь Альцгеймера; ADAM-10, белок 10, содержащий домен дезинтегрина и металлопротеиназы; APP, белок-предшественник амилоида; APPswe, шведская мутация белка-предшественника амилоида; А, амилоид-; BACE1, -сайт АРР, расщепляющий фермент 1; КАТ, каталаза; GPx, глутатионпероксидаза; GR, глутатионредуктаза; GSH, восстановленный глутатион; GSSG, окисленный глутатион; СОД, супероксиддисмутаза.

Рекомендации

1. Эбенау, Дж. Л.; Пелкманс, В.; Верберк, IMW; Верфайи, SCJ; ван ден Бош, К.А.; ван Левенстин, М.; Коллий, LE; Шелтенс, П.; Принс, Северная Дакота; Бархоф, Ф.; и другие. Ассоциация маркеров нейродегенерации CSF, плазмы и изображений с клиническим прогрессированием у людей с субъективным снижением когнитивных функций. Неврология 2022, 98, e1315–e1326. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

2. Домингес, Л.Дж.; Веронезе, Н.; Вернуччо, Л.; Катанезе, Г.; Инцерилло, Ф .; Салеми, Г.; Барбагалло, М. Питание, физическая активность и другие факторы образа жизни в предотвращении снижения когнитивных функций и деменции. Питательные вещества 2021, 13, 4080. [CrossRef]

3. Царбопулос, А. Болезнь Альцгеймера: изучение «лекарственного ящика» природы для новых терапевтических средств. биомол. Концепции 2020, 11, 201–208. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

4. Эш, К.Х.; Захс, К.Р. Изучение биологии болезни Альцгеймера у мышей. Нейрон 2010, 66, 631–645. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

5. Захс, К.Р.; Эш, К. Х. «Слишком много хороших новостей». Пытаются ли модели мышей с болезнью Альцгеймера рассказать нам, как предотвратить, а не вылечить болезнь Альцгеймера? Тренды Нейроси. 2010, 33, 381–389. [Перекрестная ссылка]

6. Фоули, А.М.; Аммар, ЗМ; Ли, Р. Х.; Митчелл, К.С. Систематический обзор взаимосвязи между уровнями амилоида и показателями когнитивного дефицита у трансгенных мышей при болезни Альцгеймера. Дисс. Дж. Альцгеймера. 2015, 44, 787–795. [Перекрестная ссылка]

7. Ананд Давид, А.; Арулмоли, Р.; Парасураман, С. Обзор биологической важности кверцетина: биологически активный флавоноид. фарм. 2016, 10, 84–89.

8. Хабтемариам, С. Рутин как естественная терапия болезни Альцгеймера: анализ механизмов действия. Курс. Мед. хим. 2016, 23, 860–873. [Перекрестная ссылка]

9. Мартин-Арагон, С.; Хименес-Алиага, К.; Бенеди, Дж.; Бермехо-Бескос, П. Нейрогорметические реакции кверцетина и рутина в клеточной линии, сверхэкспрессирующей белок-предшественник амилоида (клетки APPswe). Фитомедицина 2016, 23, 1285–1294. [Перекрестная ссылка]

10. Чжоу, В.; Цин, Х .; Тонг, Ю.; Сонг, экспрессия гена W. BACE1 и деградация белка. Анна. Академик Нью-Йорка науч. 2004, 1035, 49–67. [Перекрестная ссылка]

11. Гутбир, С.; Шпренг, А.С.; Делп, Дж.; Шильдкнехт, С.; Карреман, К.; Сучу, И.; Бруннер, Т .; Гроттруп, М.; Лейст, М. Предотвращение апоптоза нейронов астроцитами посредством тиол-опосредованной модуляции реакции на стресс и ускоренного восстановления после протеотоксического стресса. Смерть клеток 2018, 25, 101–117. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

12. Аояма К. Глутатион в головном мозге. Междунар. Дж. Мол. науч. 2021, 22, 5010. [CrossRef] [PubMed]

13. Шоли, А. Питательные вещества для нейрокогнитивных функций в норме и при заболеваниях: меры, методологии и механизмы. проц. Нутр. соц. 2018, 77, 73–83. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

14. Апельт, Дж.; Бигл, М.; Вундерлих, П.; Schliebsm, R. Связанное со старением усиление окислительного стресса коррелирует с моделью развития активности бета-секретазы и образованием бета-амилоидных бляшек у трансгенных мышей Tg2576 с патологией, подобной болезни Альцгеймера. Междунар. Дж. Дев. Неврологи. 2004, 22, 475–484. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

15. Хоулетт, Д.Р.; Ричардсон, Дж. К. Патология трансгенных мышей АРР: модель болезни Альцгеймера или просто сверхэкспрессия АРР? гистол. Гистопатол. 2009, 24, 83–100. [Пубмед]

16. Ченчони, К.; Спаллотта, Ф.; Мартелли, Ф.; Валенте, С.; Май, А .; Зейхер, AM; Гаэтано, К. Окислительный стресс и эпигенетическая регуляция при старении и возрастных заболеваниях. Междунар. Дж. Мол. науч. 2013, 14, 17643–17663. [Перекрестная ссылка]

17. Цанг, А.Х.; Чанг, К.К. Окислительный и нитрозативный стресс при болезни Паркинсона. Биохим. Биофиз. Acta 2009, 1792, 643–650. [Перекрестная ссылка]

18. Мандал, П.К.; Сахаран, С.; Трипати, М.; Мурари, Г. Уровни глутатиона в мозге — новый биомаркер легких когнитивных нарушений и болезни Альцгеймера. биол. Психиатрия 2015, 78, 702–710. [Перекрестная ссылка]

19. Чен, Джей Джей; Тиягараджа, М .; Песня, Дж.; Чен, К.; Херрманн, Н .; Галлахер, Д.; Рапопорт, М.Дж.; черный, ЮВ; Рамирес, Дж.; Андреацца, AC; и другие. Измененный центральный глутатион и глутатион крови при болезни Альцгеймера и легких когнитивных нарушениях: метаанализ. Рез. болезни Альцгеймера. тер. 2022, 14, 23. [Перекрестная ссылка]

20. Почернич, ЦБ; Баттерфилд, Д.А. Повышение уровня глутатиона как терапевтическая стратегия при болезни Альцгеймера. Биохим. Биофиз. Acta (BBA)-мол. Основа Дис. 2012, 1822, 625–630. [Перекрестная ссылка]

21. Раза, А.; Се, В .; Ким, К.Х.; Дронамраджу, В.Р.; Уильямс, Дж.; Винс, Р .; Более того, дипептид SS ψ-GSH ингибирует окислительный стресс и нейровоспаление в модели мышей с болезнью Альцгеймера. Антиоксиданты 2022, 11, 1075. [CrossRef] [PubMed]

22. Ян, Х .; Се, З .; Вэй, Л.; Дин, М .; Ван, П.; Bi, J. Глутатион-миметик D609 облегчает дефицит памяти и уменьшает отложение амилоида в модели трансгенных мышей A PP/PS1. Нейроотчет 2018, 29, 833–838. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

23. Герреро-Гомес, Д.; Мора-Лорка, Дж. А.; Саенс-Нарцисо, Б.; Наранхо-Галиндо, FJ; Муньос-Лобато, Ф.; Паррадо-Фернандес, К.; Гойколеа, Дж.; Седасо-Мингес, А.; Ссылка, компакт-диск; Нери, К.; и другие. Потеря окислительно-восстановительного гомеостаза глутатиона нарушает протеостаз, ингибируя зависимую от аутофагии деградацию белка. Смерть клеток 2019, 26, 1545–1565. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

24. Лефаки, М.; Папаевгениу, Н .; Хондрогианни, Н. Окислительно-восстановительная регуляция функции протеасом. Редокс Биол. 2017, 13, 452–458. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

25. Бонет-Коста, В.; Поматто, ЛК; Дэвис, К.Дж. Протеасомы и окислительный стресс при болезни Альцгеймера. Антиоксид. Окислительно-восстановительный сигнал. 2016, 25, 886–901. [Перекрестная ссылка]

26. Белкасеми, А.; Рамасами, С. Временная последовательность окислительного стресса в головном мозге на моделях трансгенных мышей болезни Альцгеймера, связанной с амилоидным каскадом. Свободный Радик. биол. Мед. 2012, 52, 593–600. [Перекрестная ссылка]

27. Танигава, С.; Фуджи, М .; Hou, DX Действие Nrf2 и Keap1 в ARE-опосредованной экспрессии NQO1 с помощью кверцетина. Свободный Радик. биол. Мед. 2007, 42, 1690–1703. [Перекрестная ссылка]

28. Чондрогианни, Н.; Капета, С .; Чиноу, И.; Василату, К.; Папассидери, И.; Гонос Е.С. Антивозрастное и омолаживающее действие кверцетина. Эксп. Геронтол. 2010, 45, 763–771. [Перекрестная ссылка]

29. Бодендорф, У.; Даннер, С .; Фишер, Ф.; Стефани, М .; Штурхлер-Пьерра, К.; Видерхольд, К.Х.; Штауфенбиль, М.; Паганетти, П. Экспрессия бета-секретазы человека в мозге мыши увеличивает устойчивый уровень бета-амилоида. Дж. Нейрохим. 2002, 80, 799–806. [Перекрестная ссылка]

30. Ямакава, Х.; Ягишита, С .; Футай, Э .; Ishiura, S. Эффективность ингибитора бета-секретазы снижается из-за аберрантного бета-расщепления «шведского мутантного» белка-предшественника амилоида. Дж. Биол. хим. 2010, 285, 1634–1642. [Перекрестная ссылка]

31. Келлер Д.; Эрё, К.; Маркрам, Х. Плотность клеток в мозге мыши: систематический обзор. Передний. Нейроанат. 2018, 12, 83. [CrossRef] [PubMed]

32. Младенович Джорджевич, А.Н.; Капетаноу, М .; Лонкаревич-Василькович, Н.; Тодорович, С.; Атанасопулу, С.; Йович, М .; Првулович, М.; Тауфик, Э.; Матсас, Р .; Каназир, С .; и другие. Фармакологическое вмешательство на модели трансгенных мышей улучшает патологический фенотип, связанный с болезнью Альцгеймера: участие в активации протеасом. Свободный Радик. биол. Мед. 2021, 162, 88–103. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

33. Таманьо, Э.; Бардини, П.; Гульельмотто, М.; Данни, О .; Табатон, М. Различные состояния агрегации бета-амилоида 1-42 опосредуют различные эффекты на окислительный стресс, нейродегенерацию и экспрессию BACE-1. Свободный Радик. биол. Мед. 2006, 41, 202–212. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

34. Йориссен, Э.; Прокс, Дж.; Бернройтер, К.; Вебер, С.; Шванбек, Р.; Сернелс, Л.; Снеллинкс, А .; Крессартс, К.; Татия, А .; Тессер, И.; и другие. Дезинтегрин/металлопротеиназа ADAM10 необходима для образования коры головного мозга. Дж. Нейроски. 2010, 30, 4833–4844. [Перекрестная ссылка]

35. Кун, ПХ; Ван, Х .; Дислич, Б.; Коломбо, А .; Zeitschel, У .; Элварт, Дж. В.; Креммер, Э.; Росснер, С .; Lichtenthaler, SF ADAM10 представляет собой физиологически значимую конститутивную -секретазу белка-предшественника амилоида в первичных нейронах. EMBO J. 2010, 29, 3020–3032. [Перекрестная ссылка]

36. Постина Р.; Шредер, А .; Девахтер, И.; Бол, Дж.; Шмитт, У .; Койро, Э .; Принцен, К.; Эндрес, К.; Химке, К.; Благословение, М.; и другие. Дезинтегрин-металлопротеиназа предотвращает образование амилоидных бляшек и дефектов гиппокампа в модели мышей с болезнью Альцгеймера. Дж. Клин. расследование 2004, 113, 1456–1464. [Перекрестная ссылка]

37. Эльфики, А.М.; Махмуд, АА; Элриди, HA; Ибрагим, Канзас; Гази, М.А. Кверцетин стимулирует неамилоидогенный путь посредством активации экспрессии генов ADAM10 и ADAM17 в модели болезни Альцгеймера, вызванной хлоридом алюминия, у крыс. Жизнь наук. 2021, 285, 119964. [Перекрестная ссылка]

38. Копанаки, Э.; Чанг, С .; Влахос, А .; Чапе, Дж. А.; Мюллер, Калифорнийский университет; Кегель, Д.; Deller, T. sAPPalpha противодействует дегенерации дендритов и гибели нейронов, вызванной протеасомным стрессом. Мол. Клеточные нейробиологи. 2010, 44, 386–393. [Перекрестная ссылка]

39. Рензихаузен, Дж.; Хибель, К.; Нагель, Х .; Кунду, А .; Кинс, С .; Когель, Д.; Бел, К.; Хаджиева П. Продукт расщепления предшественника белка-амилоида-бета sAbetaPPalpha модулирует BAG3-зависимое образование агресом и усиливает клеточную протеасомную активность. Дисс. Дж. Альцгеймера. 2015, 44, 879–896. [Перекрестная ссылка]

40. Ливингстон, RW; Старейшина, М.К.; Сингх, А .; Вестлейк, см.; Тейт, ВП; Авраам, туалет; Уильямс, Дж. М. Секретируемый белок-предшественник амилоида-альфа усиливает LTP за счет синтеза и распределения Са2 плюс-проницаемых AMPA-рецепторов. Передний. Мол. Неврологи. 2021, 14, 660208. [Перекрестная ссылка]

41. Кроуфорд, ХК; Демпси, П.Дж.; Браун, Г.; Адам, Л.; Мосс, М.Л. ADAM10 как терапевтическая мишень при раке и воспалении. Курс. фарм. Дес. 2009, 15, 2288–2299. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

42. Сафтиг П.; Лихтенталер, С.Ф. Альфа-секретаза ADAM10: металлопротеаза с множественными функциями в головном мозге. прог. Нейробиол. 2015, 135, 1–20. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

43. Боррека, А.; Жирони, К.; Амадуро, Г.; Аммассари-Теуле, М. Противоположное нарушение регуляции белка ломкой X-умственной отсталости и белка гетероядерного рибонуклеопротеина С связано с усиленной трансляцией АРР при болезни Альцгеймера. Мол. Нейробиол. 2016, 53, 3227–3234. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

44. Огюстен, С.; Римбах, Г.; Огюстен, К.; Шлибс, Р.; Вольфрам, С.; Чермак, Р. Влияние краткосрочного и долгосрочного лечения экстрактом гинкго двулопастного на уровни белков-предшественников амилоида в модели трансгенных мышей, имеющих отношение к болезни Альцгеймера. Арка Биохим. Биофиз. 2009, 481, 177–182. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

45. Боррека, А.; Валери, Ф .; Де Лука, М.; Эрнст, Л.; Руссо, А .; Нобили, А .; Корделла, А .; Корсетти, В.; Амадуро, Г.; Меркури, Северная Каролина; и другие. Временная активация трансляционной эффективности у продромальных и ранних симптоматических мышей Tg2576 вносит вклад в патологию А. Нейробиол. Дис. 2020, 139, 104787. [CrossRef] [PubMed]

46. ​​Д'Амелио, М.; Шэн, М .; Чеккони, Ф. Каспаза -3 в центральной нервной системе: помимо апоптоза. Тренды Нейроси. 2012, 35, 700–709. [Перекрестная ссылка]

47. Эртюрк, А.; Ван, Ю .; Шэн, М. Локальное сокращение дендритов и шипов с помощью каспазозависимых и протеасомно-ограниченных механизмов. Дж. Нейроски. 2014, 34, 1672–1688. [Перекрестная ссылка]

48. Д'Амелио, М.; Каваллуччи, В.; Миддей, С.; Марчетти, К.; Пачони, С.; Ферри, А .; Диамантини, А .; Де Зио, Д.; Каррара, П.; Баттистини, Л.; и другие. Каспаза-3 вызывает раннюю синаптическую дисфункцию в мышиной модели болезни Альцгеймера. Нац. Неврологи. 2011, 14, 69–76. [Перекрестная ссылка]

49. Жерве, Ф. Г.; Сюй, Д.; Робертсон, Г.С.; Валланкур, JP; Чжу, Ю .; Хуанг, Дж.; Леблан, А .; Смит, Д.; Ригби, М.; Ширман, MS; и другие. Участие каспаз в протеолитическом расщеплении белка-предшественника бета-амилоида болезни Альцгеймера и образовании амилоидогенного бета-пептида. Ячейка 1999, 97, 395–406. [Перекрестная ссылка]

50. Парк, Г.; Нхан, ХС; Тян, СХ; Кавакацу, Ю.; Чжан, К.; Наварро, М .; Koo, EH Активация каспазы и опосредованное каспазой расщепление APP связано с индуцированной амилоидным белком потерей синапса при болезни Альцгеймера. Cell Rep. 2020, 31, 107839. [CrossRef]

51. Лу, округ Колумбия; Рабизаде, С .; Чандра, С .; Шайя, РФ; Эллерби, Л.М.; Е, Х .; Салвесен, Г.С.; Ку, Э. Х.; Bredesen, DE Второй цитотоксический протеолитический пептид, полученный из предшественника амилоидного бета-протеина. Нац. Мед. 2000, 6, 397–404. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

52. LeBlanc, AC Каспаза-6 как новая ранняя мишень в лечении болезни Альцгеймера. Евро. Дж. Нейроски. 2013, 37, 2005–2018. [Перекрестная ссылка]

53. Альбрехт, С.; Богданович, Н .; Гетти, Б.; Винблад, Б.; LeBlanc, AC Активация каспазы -6 в головном мозге с семейной болезнью Альцгеймера, несущего белок-предшественник амилоида или мутации пресенилина I или пресенилина II. Дж. Нейропатол. Эксп. Нейрол. 2009, 68, 1282–1293. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

54. Морихара Т.; Тетер, Б.; Ян, Ф .; Лим, врач общей практики; Будино, С .; Будино, Ф.Д.; Фраучи, Ю.А.; Cole, GM. Ибупрофен подавляет интерлейкин-1бета-индукцию проамилоидогенного альфа1-антихимотрипсина для облегчения бета-амилоидной (Абета) патологии в моделях болезни Альцгеймера. Нейропсихофармакология 2005, 30, 1111–1120. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

55. Ню, Ю.Л.; Чжан, WJ; Ву, П.; Лю, Б.; Солнце, ГТ; Ю, ДМ; Денг, Дж. Б. Экспрессия связанных с апоптозом белков каспазы -3 и NF-kappaB в гиппокампе мышей Tg2576. Неврологи. Бык. 2010, 26, 37–46. [Перекрестная ссылка]

56. Фуллер, С.; Стил, М.; Мунк, Г. Активированная астроглия во время хронического воспаления при болезни Альцгеймера - пренебрегают ли они своей нейроподдерживающей ролью? Мутат. Рез. 2010, 690, 40–49. [Перекрестная ссылка]

57. Ли, М.; Чо, Т .; Джантаратнотай, Н.; Ван, Ю. Т.; МакГир, Э.; McGeer, PL Истощение GSH в глиальных клетках вызывает нейротоксичность: отношение к старению и дегенеративным неврологическим заболеваниям. FASEB J. 2010, 24, 2533–2545. [Перекрестная ссылка]

58. Хенсли, К. Нейровоспаление при болезни Альцгеймера: механизмы, патологические последствия и потенциал для терапевтического воздействия. Дисс. Дж. Альцгеймера. 2010, 21, 1–14. [Перекрестная ссылка]

59. Лу, Дж.; Ву, ДМ; Чжэн, Ю.Л.; Центр.; Чжан, ЗФ; Шан, В.; Чжэн, Чж; Лю, см; Wang, YJ. Кверцетин активирует AMP-активированную протеинкиназу, снижая экспрессию PP2C, защищая мозг старых мышей от нейротоксичности, вызванной высоким уровнем холестерина. Дж. Патол. 2010, 222, 199–212. [Перекрестная ссылка]

60. Чен, Дж. К.; Хо, FM; Чао, PDL; Чен, КП; Дженг, KC; Сюй, HB; Ли, ST; Вэнь Тунг, В .; Lin, WW Ингибирование экспрессии гена iNOS кверцетином опосредовано ингибированием киназы IkappaB, ядерного фактора каппа B и STAT1 и зависит от индукции гемоксигеназы-1 в микроглии BV-2 мыши. Евро. Дж. Фармакол. 2005, 521, 9–20. [Перекрестная ссылка]

61. Двиведи, Д.; Мега, К.; Мишра, Р .; Мандал, П.К. Глутатион в головном мозге: обзор его конформаций, функций, биохимических характеристик, количественного определения и потенциальной терапевтической роли при заболеваниях головного мозга. Нейрохим. Рез. 2020, 45, 1461–1480. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

62. Росснер, С.; Састре, М .; Борн, К.; Лихтенталер, С.Ф. Транскрипционная и трансляционная регуляция экспрессии BACE1 – значение для болезни Альцгеймера. прог. Нейробиол. 2006, 79, 95–111. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

63. Вестерман, Массачусетс; Купер-Блэкетер, Д.; Мариаш, А .; Котилинек, Л.; Каварабаяши, Т .; Юнкин, Л.Х.; Карлсон, Джорджия; Юнкин, С.Г.; Эш, К. Х. Взаимосвязь между Abeta и памятью в мышиной модели болезни Альцгеймера Tg2576. Дж. Нейроски. 2002, 22, 1858–1867. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

64. Ирисарри, MC; Локасио, Джей Джей; Hyman, BT Бета-сайт, экспрессия мРНК фермента, расщепляющего APP, у трансгенных мышей APP: анатомическое перекрытие с экспрессией трансгена и статические уровни с возрастом. Являюсь. Дж. Патол. 2001, 158, 173–177. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

65. Сяо, К.; Чепмен, П.; Нильсен, С.; Экман, К.; Харигая, Ю.; Юнкин, С .; Ян, Ф .; Коул, Г. Коррелятивные нарушения памяти, повышение Абета и амилоидные бляшки у трансгенных мышей. Наука 1996, 274, 99–102. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

66. Hsiao, K. Трансгенные мыши, экспрессирующие белки-предшественники амилоида болезни Альцгеймера. Эксп. Геронтол. 1998, 33, 883–889. [Перекрестная ссылка]

67. Саймон, А.М.; Скиапарелли, Л.; Салазар-Колочо, П.; Куадрадо-Техедор, М.; Эскрибано, Л.; Лопес де Матурана, Р.; Дель Рио, Дж.; Перес-Медиавилла, А.; Фречилла, Д. Сверхэкспрессия АРР человека дикого типа у мышей вызывает когнитивный дефицит и патологические особенности, не связанные с уровнями Абета. Нейробиол. Дис. 2009, 33, 369–378. [Перекрестная ссылка]

68. Сенфт, А. П.; Далтон, ТП; Shertzer, HG Определение глутатиона и дисульфида глутатиона с использованием флуоресцентного зонда офтальмальдегида. Анальный. Биохим. 2000, 280, 80–86. [Перекрестная ссылка]

69. Марклунд, С.; Марклунд, Г. Участие супероксидного анион-радикала в самоокислении пирогаллола и удобный анализ супероксиддисмутазы. Евро. Дж. Биохим. 1974, 47, 469–474. [Перекрестная ссылка]

70. Aebi, H. Каталаза in vitro. Методы Энзимол. 1984, 105, 121–126.

71. Барха де Кирога, Г.; Перес-Кампо, Р.; Лопес Торрес, М. Антиоксидантная защита и перекисное окисление в печени и мозге старых крыс. Биохим. Дж. 1990, 272, 247–250. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

72. Мэсси, В.; Уильямс, CH, младший. О механизме реакции дрожжевой глутатионредуктазы. Дж. Биол. хим. 1965, 240, 4470–4480. [Перекрестная ссылка]

73. Джаш, К.; Гондалия, П.; Сункария, А .; Калиа, К. МикроРНК -29b модулирует активность -секретазы в клеточной линии SH-SY5Y и мозге диабетической мыши. Ячейка Мол. Нейробиол. 2020, 40, 1367–1381. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

74. Хименес-Алиага, К.; Бермехо-Бескос, П.; Бенеди, Дж.; Мартин-Арагон, С. Кверцетин и рутин проявляют антиамилоидогенный и дезагрегирующий фибриллы эффект in vitro и мощную антиоксидантную активность в клетках APPswe. Жизнь наук. 2011, 89, 939–945. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

75. Рамос, Калифорния; Боуман, Т.А.; Боулз, Северная Каролина; Торговец, АА; Чжэн, Ю .; Парра, И.; Фукуа, ЮАР; Шоу, Калифорния; Гуделл, М.А. Доказательства разнообразия профилей транскрипции отдельных гемопоэтических стволовых клеток. Генетика PLoS. 2006, 2, с.159.

76. Шмуед, Л.С.; Стоуэрс, CC; Скалле, переменный ток; Xu, L. Fluoro-Jade C приводит к сверхвысокому разрешению и контрастной маркировке дегенерирующих нейронов. Мозг Res. 2005, 1035, 24–31. [Перекрестная ссылка] [PubMed]

Отказ от ответственности/Примечание издателя:Заявления, мнения и данные, содержащиеся во всех публикациях, принадлежат исключительно отдельным авторам и участникам, а не MDPI и/или редакторам. MDPI и/или редактор(ы) отказываются от ответственности за любой ущерб людям или имуществу в результате любых идей, методов, инструкций или продуктов, упомянутых в содержании.

【Для получения дополнительной информации:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】