Острые дозозависимые нейропротекторные эффекты поли(про-17эстрадиола) на мышиной модели ушиба позвоночника

Абстрактный

17 -Эстрадиол (Е2) обеспечивает нейропротекцию на доклинических моделях повреждения спинного мозга при системном применении. Целью этого исследования было локальное применение E2 к поврежденному спинному мозгу в течение длительного времени с использованием пленочных биоматериалов поли(про-E2).

По мере того, как люди узнают больше о травмах спинного мозга, мы начинаем понимать, какое влияние они оказывают на физическое и психическое здоровье людей. Хотя травмы спинного мозга могут вызывать множество побочных эффектов, к счастью, их влияние на память можно контролировать.

Для начала необходимо уточнить, что такое травма спинного мозга. Спинной мозг — это нерв, защищенный в позвоночнике и отвечающий за передачу инструкций от головного мозга к различным частям тела. Если спинной мозг поврежден, некоторые части тела теряют хорошую связь с головным мозгом, что приводит к нарушению движений конечностей, чувствительности и вегетативного контроля.

Травмы спинного мозга могут оказывать определенное влияние на память людей, особенно на ранних этапах реабилитации больных с травмами спинного мозга. Травмы спинного мозга могут привести к ухудшению внимания, рабочей памяти и способности обрабатывать эмоции, что повлияет на способность памяти человека.

Однако эти негативные последствия постепенно уменьшатся по мере прохождения пациентами реабилитационного лечения. Пациенты могут улучшить свою память, участвуя в играх на память и других когнитивных тренировках. В то же время физическая реабилитация также способствует восстановлению двигательных и сенсорных функций организма, тем самым улучшая эмоциональные и когнитивные функции.

Мы должны поощрять пациентов с травмами спинного мозга активно участвовать в реабилитационном лечении и продолжать реабилитационное обучение для улучшения физического и психического здоровья. Пожалуйста, поверьте, что с помощью правильного познания и послеоперационного лечения пациенты могут преодолеть влияние травмы спинного мозга на память и продолжать жить активной жизнью. Видно, что нам нужно улучшить память, и Цистанхе может значительно улучшить память, поскольку Цистанхе также может регулировать баланс нейротрансмиттеров, например, повышая уровень ацетилхолина и факторов роста, которые очень важны для памяти и обучения. Кроме того, цистанхе также может улучшить кровоток и способствовать доставке кислорода, что может гарантировать, что мозг получает достаточное питание и энергию, тем самым повышая жизнеспособность и выносливость мозга.

Нажмите «Знайте добавки для улучшения памяти»

После контузионной травмы спинного мозга взрослым мышам-самцам субдурально имплантировали пленки из поли(про-Е2), а нейропротекцию оценивали с помощью иммуногистохимии через 7 дней после травмы и имплантации. В этих исследованиях пленки из поли(про-Е2) умеренно улучшали нейропротекцию, не влияя на воспалительную реакцию. по сравнению с травмированными участниками контроля.

Чтобы увеличить высвобождаемую дозу Е2, были изготовлены пленки поли(про-Е2), высвобождающие болюс, путем включения несвязанного Е2 в пленки поли(проЕ2).

Однако по сравнению с травмированными контрольными пленками болюсно-высвобождающие поли(про-Е2) пленки существенно не усиливали нейропротекцию и не ограничивали воспаление ни через 7, ни через 21 день после травмы. Будущая работа будет сосредоточена на разработке поли(про-Е2) биоматериалов, способных точнее высвобождение терапевтических доз Е2.

ВВЕДЕНИЕ

Травматическое повреждение спинного мозга (ТСМ) — это изнурительное состояние, от которого ежегодно в США страдают более 18 000 человек,1 в то время как глобальная распространенность ТСМ оценивается в пределах от 236 до 1009 случаев на миллион.2

У пациентов с травмой спинного мозга наблюдаются серьезные неврологические нарушения, включая потерю чувствительности, нарушение функции кишечника/мочевого пузыря и паралич.3,4 Первичное воздействие на спинной мозг приводит к гибели нейронов в месте повреждения, что еще больше усугубляется несколькими каскадами вторичных повреждений с участием астроцитов и макрофагов. .

Со временем эти астроциты образуют глиальный рубец, который предотвращает распространение аксонов за пределы края поражения. На сегодняшний день не существует одобренных FDA нейропротекторных препаратов для лечения ТСМ.

Исследования, охватывающие несколько десятилетий, были сосредоточены на системном введении биомолекул для предотвращения потери нейронов из-за вторичного повреждения и/или для содействия регенерации аксонов, что в конечном итоге приводит к восстановлению утраченной функции.6 Одной из биомолекул, которая продемонстрировала значительные перспективы в доклинических моделях ТСМ, является женщина. половой гормон 17 -эстрадиол (Е2).

Введение E2 в целом полезно для центральной нервной системы за счет уменьшения воспаления,7–9 облегчения реактивности глиальных клеток,10 ограничения окислительного стресса11–14 и смягчения эксайтотоксической гибели нейронов, вызванной глутаматом.15 E2 улучшает функциональное восстановление в различных моделях ТСМ на грызунах.10, 16,17 Интересно, что многократное системное введение E2 вызывает функциональное восстановление быстрее18,19 по сравнению с животными, получавшими только однократную дозу.17

Поскольку E2 более эффективно способствует функциональному восстановлению при использовании нескольких доз, нашей целью было стабильное высвобождение E2 локально в месте повреждения (чтобы предотвратить любые нецелевые эффекты), чтобы обойти проблемы, возникающие в результате многократного введения/системных инъекций E2.

С этой целью мы использовали стратегию биоматериала поли(пролекарства), в которой нативное лекарство (E2) сначала функционализировали реакционноспособными аллильными группами, а затем полимеризовали посредством фотоинициируемого присоединения тиол-енового радикала с гибким олиго-(этиленгликоль)дитиолом, как описано ранее. .20 Мы получили полимерные цепи с высокой молекулярной массой, которые состоят из пролекарства E2 в качестве повторяющейся единицы внутри полимера.

При гидролитическом разложении полимер постепенно высвобождает Е2 в окружающую среду. Единственными другими побочными продуктами этого высвобождения являются диоксид углерода и олиго(этиленгликоль) (оЭГ) (рис. 1). Цепи поли(про-Е2), изготовленные в виде пленок или микроволокон, могут выделять Е2 в наномолярных концентрациях in vitro в течение времени от месяцев до лет. .20

E2, высвобождаемый из этих поли(про-E2) каркасов, является биоактивным, и эти каркасы способствуют нейротрофизму и нейропротекции in vitro, защищая нейроны от окислительного стресса, вызванного перекисью водорода. Здесь мы применили пленки поли(про-Е2) на мышиной модели ушиба ТСМ сразу после травмы и оценили их нейропротекторную способность in vivo.

Наша первоначальная конструкция пленки из поли(про-Е2) резко повышала нейропротекцию (через 7 дней после травмы) в месте повреждения, не влияя на воспалительную реакцию. Поскольку пленки поли(про-Е2) высвобождают нанограммы Е2 в день, мы разработали другую стратегию высвобождения, при которой несвязанный Е2 был включен в матрицу поли(про-Е2). Мы предположили, что болюсное высвобождение несвязанного Е2 может обеспечить дополнительные нейропротекторные преимущества.

Пленки поли(про-Е2) высвобождали Е2 взрывным способом с последующим устойчивым высвобождением Е2 из полимера в более низких концентрациях. Иммуногистологическое окрашивание позволило оценить нейроны, астроциты и макрофаги/микроглию, присутствующие в месте повреждения остро (7 дней после травмы) и хронически (21 день после травмы) после травмы спинного мозга в присутствии этих болюсно-высвобождающих поли(про-Е2) пленок.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Пленки поли(про-Е2) высвобождают Е2 в наномолярных концентрациях, способствуют росту нейронов из ганглия дорсального корешка и защищают нейроны от окислительного стресса, вызванного перекисью водорода in vitro.20 Представленное здесь исследование направлено на определение способности поли(про-Е2) пленки для обеспечения нейропротекции in vivo с использованием мышиной модели ушиба ТСМ.

У взрослых мышей-самцов вызывали умеренную контузию ТСМ, и сразу после травмы пленки поли(про-Е2) помещали непосредственно над травмой (рис. 2А). Чтобы гарантировать, что пленки поли(про-Е2) останутся на месте после имплантации, пленки поли(про-Е2), нагруженные родамином B, имплантировали в спинной мозг травмированных животных. Через семь дней после имплантации спинной мозг был собран и визуализирован с помощью светового микроскопа (рис. 2B). У всех животных имплантированные пленки поли(про-Е2), нагруженные родамином В, оставались на месте, что подтверждает протокол имплантации.

Чтобы проверить способность поли(про-Е2)-пленок обеспечивать нейрозащиту и облегчать воспаление, поли(про-Е2)-пленки (без родамина B) имплантировали после ушиба позвоночника, а спинной мозг собирали через 7 дней после травмы и имплантации. Были вырезаны продольные срезы (толщиной 10 мкм), сосредоточены вокруг эпицентра повреждения и иммуномаркированы для визуализации нейронов и макрофагов в спинном мозге (рис. 3).

Срезы были помечены NeuN для оценки присутствия нейронов, и количественный анализ окрашивания показал, что пленки поли(про-Е2) значительно увеличивали NeuN-положительную область вокруг эпицентра повреждения по сравнению с травмированными контрольными группами, которые не получали пленочные имплантаты (рис. 3А; р).=0.0002). Дополнительное окрашивание аксонов с использованием NFH (тяжелой цепи нейрофиламента) также выявило острый нейропротекторный эффект имплантированных поли(про-Е2) пленок (рис. 3B; p=0.0017).

Мы заметили, что это изменение нейропротекции не было связано с изменением апоптоза (каспазы 3) в месте повреждения (подтверждающий рисунок S1; p=0.9966). Окрашивание на активированные макрофаги (CD68) также не выявило каких-либо существенные различия между животными, обработанными поли(про-Е2) пленкой, и животными, не получавшими лечения (рис. 3C; p= 0.7207).

В совокупности поли(про-Е2) пленки умеренно усиливают нейрозащиту, не изменяя при этом воспалительную реакцию. Поли(про-Е2) пленки резко увеличивают плотность нейронов почти на 20%, но пленки не оказывают явного противовоспалительного действия (на основании количественного определения область, занятая активированными макрофагами) (рис. 3).

Отсутствие снижения воспаления может указывать на то, что противовоспалительная и нейропротекторная дозы Е2 различны и что обе они не были достигнуты с помощью нынешнего состава пленки.20 Мы предположили, что резкое увеличение высвобождения Е2 из поли(про-Е2) пленок может уменьшить воспаление. и обеспечить более надежный нейропротекторный ответ.

Для увеличения дозы Е2, высвобождаемой остро, пленки поли(про-Е2) были модифицированы таким образом, чтобы болюсное высвобождение Е2 происходило сразу после имплантации. После болюсного высвобождения E2 следует деградация полимера с высвобождением E2 в той же концентрации, что и раньше. Описанный выше эксперимент был повторен с использованием этих пленок поли(про-Е2) с болюсным высвобождением, и нейропротекция и воспаление оценивались через 7 дней после травмы (дпи).

Однако вместо дополнительного преимущества болюсно-высвобождающие пленки поли(про-Е2) не приводили к значительному увеличению NeuN-положительной области по сравнению с травмированными, необработанными контрольными группами (рис. 4А; р=0.6770). Болюсно-высвобождающие пленки поли(proE2) повышали экспрессию CD68, но это увеличение не отличалось статистически (p= 0.1780).

Тенденции к увеличению глиальной реактивности и воспаления микроглии также наблюдались в присутствии болюсно-высвобождающих пленок поли(про-Е2) из-за увеличения экспрессии GFAP (астроциты) и Iba1 (микроглия); однако это увеличение не было статистически больше, чем наблюдалось у травмированных, необработанных людей контрольной группы (p=0.3233 и p=0.3053 соответственно). В совокупности болюсно-высвобождающие пленки поли(про-Е2) не усиливали нейропротекцию, а реактивность астроцитов и присутствие макрофагов/микроглии не снижались, как первоначально предполагалось.

Поскольку различий между травмированными, необработанными животными и ранеными животными, обработанными пленкой поли(проЕ2) с болюсным высвобождением, не наблюдалось в острой временной точке, 7 dpi, для дальнейшего исследования был выбран хронический момент времени, поскольку пленки поли(про-Е2) могут высвобождать E2 в течение длительного времени.20 Описанный выше эксперимент был повторен с болюсно-высвобождающими пленками поли(про-Е2), но животных оценивали хронически при 21 dpi (рис. 5).

Спинной мозг был помечен для тех же типов клеток, которые были указаны ранее. После анализа наблюдалась тенденция к увеличению доли площади NeuN у животных, которым имплантировали болюсно-высвобождающую поли(про-Е2)пленку, по сравнению с травмированными, необработанными животными (рис. 5А; p=0.0897). Кроме того, наблюдались тенденции, при которых болюсно-высвобождающие пленки поли(про-Е2) снижали долю площади экспрессии CD68 и GFAP по сравнению с данными от необработанных, травмированных контрольных животных (рис. 5B, C; p=0.0859 и p).=0.2780).

Однако ни одна из тенденций не отличалась статистически. С другой стороны, меченные Iba1 срезы тканей животных, получавших болюсно-высвобождающее поли(про-Е2), демонстрировали повышенную экспрессию по сравнению с данными необработанных, травмированных контрольных животных (p < 0.0001). Наша предыдущая работа показывает, что поли(про-Е2) -E2) пленки, нанесенные на покровные стекла размером 15 × 15 мм, высвобождают около 266 нг E2 в день,20 что соответствует примерно 2 нг E2 в день из использованных здесь пленок (1 мм × 1,8 мм). Болюсно-высвобождающие пленки поли(про-Е2) высвобождают дополнительные 40 мкг несвязанного Е2 сразу после имплантации.

Исследования, посвященные использованию E2 в моделях ТСМ на грызунах, показывают, что низкие дозы эстрогена (10 мкг/кг), вводимые внутривенно, ослабляют реактивный глиоз и обеспечивают нейропротекцию, одновременно ослабляя воспалительные явления, ингибируя апоптоз и усиливая ангиогенез.21 И наоборот, высокие системные дозы эстрогена побочные эффекты, которые включают увеличение частоты тромбозов глубоких вен и рака22,23, а также развитие женских физических качеств у мужчин. Это примечательно, поскольку большая часть исследований Е2 была сосредоточена на системной доставке Е2 либо внутривенно, либо внутрибрюшинно.

Учитывая проблемы безопасности системного применения высоких доз Е2, важно оптимизировать концентрацию Е2 для местной доставки в поврежденный спинной мозг, чтобы предотвратить побочные эффекты. На сегодняшний день только одно исследование позволило доставить E2 из биоматериала с использованием наночастиц для фокальной доставки E2 (2,5 мкг или 25 мкг). Высвобождение наночастиц быстро уменьшало воспаление на крысиной модели ушиба ТСМ. 9 Отсутствие статистически значимого ответа в наших данных (рис. 4 и 5) может быть связано с дисбалансом в количестве Е2, который мы доставляем локально в спинной мозг с слишком много E2 (40 мкг) высвобождается остро, тогда как очень мало (2 нг) высвобождается хронически.

Хотя то, что мы наблюдаем на основе этих данных, является скромными тенденциями, это исследование подчеркивает важность дозирования E2 для усиления нейропротекции in vivo. Снижение начальной дозировки E2 и корректировка кинетики деградации биоматериала поли(про-E2) могут помочь облегчить эту проблему и потенциально обеспечить лучшие нейропротекторные результаты.

Хотя это исследование проводилось исключительно на мужчинах, крайне важно оценить эффект этих поли(про-Е2) пленок у обоих полов, чтобы установить действительный трансляционный потенциал для этого биоматериала. Исследования показали, что после ТСМ повышенный уровень эстрогена у женщин может быть частично ответственен за улучшение функциональных результатов по сравнению с мужчинами. кинетику высвобождения соответственно, чтобы гарантировать, что доставленная дозировка остается одинаковой для мужчин и женщин.

МЕТОДЫ

Производство поли(про-Э2) пленок.

Поли(про-Е2)-полимер P1 был синтезирован и охарактеризован, как подробно описано ранее.20 По данным гель-проникающей хроматографии (ГПХ) полимер имеет средневесовую молекулярную массу ~ 80 кДа и дисперсность ~ 3. Поли(про-Е2)пленки были изготовлены путем растворения полимера в хлороформе (5 мас.%/масс. полимер/хлороформ), нанесения раствора на покровные стекла размером 15 мм × 15 мм (100 мкл раствора на покровное стекло) и оставления их. сушить ночь под вакуумом(<100 mTorr) at room temperature (RT). In a subset of experiments, the polymer solution was supplemented with rhodamine B (0.005 wt %/wt; rhodamine B/chloroform) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) to verify the presence of the poly(pro-E2) films in animals post-implantation.
Для создания пленок поли(про-Е2) с несвязанным E2 пленки изготавливали путем добавления несвязанного E2 (Abcam, Кембридж, Массачусетс) к раствору полимера (0,0625 мас.%/мас.; E2/хлороформ) перед капельным литьем. раствор на покровные стекла. Перед имплантацией покровные стекла с пленками стерилизовали ультрафиолетовым (УФ) излучением в течение 30 мин и снимали пленки с покровных стекол в стерильном боксе биобезопасности. Затем пленки поли(про-Е2) разрезали на кусочки размером 1×1,8 мм, подходящие для имплантации взрослой мыши, как описано ниже.

Ушиб спинного мозга и имплантация поли(про-Е2) пленок.

Все хирургические и послеоперационные процедуры ухода были одобрены Политехническим институтом Ренсселера и Институциональными комитетами по уходу и использованию животных Университета штата Огайо (IACUC). Чтобы вызвать ушиб спинномозговой травмы, взрослых самцов мышей C57BL/6 (в возрасте от 10- до 12-недельного возраста), приобретенных в лаборатории Джексона (инвентарный номер 000664; Бар-Харбор, Мэн), анестезировали внутрибрюшинной инъекцией. кетамина (80 мг/кг) и ксилазина (10 мг/кг). Спины животных брили и обрабатывали в асептических условиях с использованием 70% этанола и бетадина.

После размещения животного на грелке, поддерживаемой при температуре 37 градусов, кожу и мышечные слои вскрывали, чтобы обнажить позвоночный столб, и выполняли дорсальную ламинэктомию на девятом грудном позвонке (Т9), чтобы обнажить спинной мозг. На этом уровне была вызвана умеренная (75 кдин) контузия ТСМ с использованием импактора Infinite Horizons (Precision Systems andInstrumentation, Лексингтон, Кентукки).

После достижения гемостаза твердую мозговую оболочку вскрывали (рис. 2) и пленку из поли(про-Е2) или болюсно-высвобождающую пленку из поли(про-Е2) (1 мм × 1,8 мм) помещали под твердую мозговую оболочку и над спинным мозгом, покрывая место травмы. У контрольных животных твердую мозговую оболочку вскрывали, но пленки поли(про-Е2) не имплантировали. Затем мышечные слои закрывали с помощью стерильных швов, а кожу закрывали с помощью стерильных металлических зажимов для ран.

Мышам вводили подкожно 2 мл стерильного физиологического раствора, возвращали их в клетки и помещали на предметное стекло с подогревом до 37 градусов на ночь. Чтобы обеспечить надлежащую гидратацию и предотвратить инфекции, мышам вводили подкожно 1–2 мл стерильного физиологического раствора и гентоцина (1 мг/кг) ежедневно в течение первых 5 дней после травмы (дпи). Мочевые пузырьки сцеживали вручную дважды в день на протяжении экспериментов. Всех животных содержали в обычных условиях при 12-часовом цикле света и темноты со свободным доступом к пище и воде.

Сбор тканей.

В назначенные конечные моменты времени (7 или 21 день на дюйм) мышам вводили летальную дозу кетамина/ксилазина (1,5-кратная хирургическая доза) и транскардиально перфузировали 0.1-мофосфатно-солевой буферный раствор (PBS; pH 7,4). с последующим добавлением 4% параформальдегида (PFA; pH 7,4). Спинной мозг удаляли, фиксировали в течение 2 часов в 4% PFA, а затем переносили в 0.2M фосфатный буфер (PB; pH 7,4) на ночь.

Спинной мозг криозащитили в 30% сахарозе в течение 48 часов при температуре 4 градуса, а затем блокировали на сегменты диаметром 10 мм, центрированные вокруг места повреждения, дорсальными столбами вверх. Эти срезы были помещены в среду Tissue-Tek с оптимальной температурой резки (VWR International, Раднор, Пенсильвания) и быстро заморожены на сухом льду. Все спинные мозги были разделены на срезы толщиной 10 мкм на криостате Microm HM505E и помещены на предметные стекла ColorFrost Plus (ThermoFisher Scientific, Уолтем, Массачусетс), а затем хранят при температуре -20 градусов до использования для иммуноокрашивания.

Иммуногистохимия и количественная оценка.

Предметные стекла оттаивали на подогревателе для предметных стекол в течение 1 часа, а затем 3 раза промывали в 0.1 MPBS. Эндогенную пероксидазную активность подавляли инкубированием предметных стекол в 6% H2O2, разбавленном метанолом, в течение 15 минут при комнатной температуре. После 3-кратной промывки в 0,1 М PBS срезы инкубировали с 4% BSA и 0,1% тритоном X-100 в 0,1 М PBS в течение 1 ч с последующей инкубацией первичных антител в течение ночи при температуре 4° или комнатной температуре (таблица 1).

Слайды инкубировали с соответствующими биотинилированными вторичными антителами (1:1000; Vector Laboratories, Берлингейм, Калифорния) при комнатной температуре в течение 1 часа. Для визуализации связанного антитела слайды инкубировали с Vectastain Elite-ABC (Vector Laboratories) в течение 1 часа и обрабатывали ImmPACT3,3'-диаминобензидином (DAB) или субстратом Vector SG (Vector Laboratories) в течение 10 минут.

Срезы обезвоживали посредством последовательных инкубаций 2×2 мин в 70% и 90% этаноле, 2×3 мин в 100% этаноле, затем 3×3 мин в Histoclear и, наконец, покрывали препаратом Permount (ThermoFisher Scientific). Для количественного анализа использовали шесть срезов на животное, расположенных на расстоянии 100 мкм друг от друга в поврежденном спинном мозге.

Иммуномеченые срезы визуализировали с помощью визуализирующего микроскопа Axioplan 2, оснащенного цифровой камерой AxioCam и программным обеспечением AxioVision версии 4.8.2 (Carl Zeiss Microcracy GmbH, Йена, Германия) и объективом с увеличением 5×.

Количество положительных пикселей в каждом из разделов подсчитывали с помощью программного обеспечения для анализа изображений MIPAR (MIPAR, Уортингтон, Огайо) для расчета процентной доли положительной площади на каждый раздел. Средний процент положительной площади шести срезов на животное рассчитывали для каждого пятна и сообщали о нем.

Статистический анализ.

Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. Статистический анализ проводили с использованием статистического программного обеспечения GraphPad Prism 9 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния). Во всех экспериментах в каждой группе использовали по 5–6 животных, происходящих как минимум из двух разных партий животных. Для проверки различий между контрольной группой и группой поли(про-Е2) пленки использовали t-критерий Стьюдента (рис. 3, 4 и 5). Значимость устанавливали при p, меньшем или равном 0,05.

Дополнительный материал

Дополнительные материалы см. в веб-версии PubMed Central.

БЛАГОДАРНОСТИ

Авторы благодарят Венмин Лай за помощь в операциях на мышах.

Финансирование

Эта работа получила поддержку от стипендии Фонда Крейга Х. Нильсена (грант 468116) и стипендии Исследовательского фонда парализованных ветеранов Америки (грант 3171) от MKG, а также от NIH R01 (грант NS092754) и Совета по рассмотрению травм спинного мозга штата Нью-Йорк, грант C32245GG на институциональную поддержку RJG. Вся работа с животными была выполнена при содействии Хирургического центра кафедры нейронаук Университета штата Огайо при поддержке гранта NINDS P30NS104177.

ССЫЛКИ

(1). Национальный статистический центр травм спинного мозга. (2020) Краткий обзор фактов и цифр о травмах спинного мозга, Университет Алабамы в Бирмингеме, Бирмингем, Алабама.

(2). Криппс Р.А., Ли Б.Б., Уинг П., Вертс Е., Маккей Дж. и Браун Д. (2011) Глобальная карта эпидемиологии травматических повреждений спинного мозга: на пути к хранилищу живых данных для предотвращения травм. Спинной мозг. 49, 493–501. [В pubmed: 21102572]

(3). Донован WH (2007) Травма спинного мозга - прошлое, настоящее и будущее. Журнал медицины спинного мозга 30, 85–100.

(4). Пикельсимер Э., Широма Э.Дж. и Уилсон Д.А. (2010) Общегосударственное исследование неблагоприятных состояний здоровья людей с травмой спинного мозга, находящихся под медицинским наблюдением. J. Медицина спинного мозга. 33 (3), 221–231. [В pubmed: 20737795]

(5). Сильвер Дж. и Миллер Дж.Х. (2004) Регенерация за пределами глиального рубца. Нат. Преподобный Нейроски. 5 (2), 146–156. [В pubmed: 14735117]

(6). Варма А.К., Дас А., Уоллес Г., Барри Дж., Вертегель А.А., Рэй С.К. и Баник Н.Л. (2013) Травма спинного мозга: обзор современной терапии, будущих методов лечения и границ фундаментальной науки. Нейрохимия. Рез. 38, 895–905. [В pubmed: 23462880]

(7). Зендель А., Мённинк Ф., Хасанзаде Г., Замини А., Ансар М.М., Хабиб П., Словик А., Кипп М. и Бейер С. (2018)Эстроген ослабляет локальную экспрессию и активацию воспалительных сом после травмы спинного мозга. Мол. Нейробиол. 55 (2), 1364–1375. [В pubmed: 28127698]

(8). Lee JY, Choi HY, Ju BG и Yune TY (2018)Эстроген облегчает нейропатическую боль, вызванную травмой спинного мозга, ингибируя активацию микроглии и астроцитов. Биохим. Биофиз. Акта, Мол. Базис Дис. 1864 (7), 2472–2480. [В pubmed: 29653184]

(9). Кокс А., Варма А., Барри Дж., Вертегель А. и Баник Н. (2015)Наночастицы эстрогена при травме спинного мозга у крыс вызывают быстрые противовоспалительные эффекты в плазме, спинномозговой жидкости и тканях. Нейротравма 32 (18), 1413–1421. [В pubmed: 25845398]

(10). Срибник Э.А., Самантарай С., Дас А., Смит Дж., Мацелле Д.Д., Рэй С.К. и Баник Н.Л. (2010)Посттравматическое лечение эстрогеном при хронической травме спинного мозга улучшает двигательную функцию у крыс. Дж. Нейроски. Рез. 88 (8), 1738–1750. [В PubMed: 20091771]

(11). Хонда К., Симохама С., Савада Х., Кихара Т., Накамизо Т., Шибасаки Х. и Акаике А. (2001)Негеномная антиапоптотическая передача сигнала эстрогеном в культивируемых кортикальных нейронах. Дж. Нейроски. Рез. 64 (5), 466–475. [В pubmed: 11391701]

(12). Срибник Э.А., Вингрейв Дж.М., Мацелле Д.Д., Рэй С.К. и Баник Н.Л. (2003)Эстроген как нейропротекторный агент при лечении травм спинного мозга. Энн. Н-Й Акад. наук. 993,125–133. [В pubmed: 12853305]

For more information:1950477648nn@gmail.com