Цистанхе: индуцированная эхинакозидом продукция оксида азота в эндотелиальных клетках: роль рецептора андрогена и пути PI3K-Akt

Контактное лицо: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Электронная почта:audrey.hu@wecistanche.com

ЛИ ГУ, ДАНХУН ЛЯНЬ, ИМЕЙ ЧЖЭН, ВЕЙ ЧЖОУ, ДЖИНЛЭЙ ГУ и СИНЬ ЛЮ

Введение

ЦистанхеХоффмг. Et Link — многолетнее растение-паразит из рода семейства Orobanchaceae. ХербаЦистанхе, стебельЦистанхе пустыняЮ. с. Ма иЦистанхе трубчатый(Schenk) R. Weight, использовались в качестве тонизирующего средства для лечения почечной недостаточности, импотенции, болезненных белей и старческих запоров (1), что может быть связано с его андрогеноподобным или регуляторным эффектом половых гормонов (2).Эхинакозид(EcH; c35H46O20;

молекулярная масса 786,73; рис. 1), является одним из фенилэтаноидных гликозидов (ФГ), выделенных из стеблей HerbaЦистанхе, и проявляет множество биологических свойств, включая антиоксидантное, омолаживающее, противовоспалительное, гепатопротекторное и нейропротекторное действие (3). Современные фармакологические исследования показали, что различные компоненты HerbaЦистанхе, включая EcH, актеозид, канканозу, канканозид F и цистанозид F, проявляют сосудорасширяющую активность (4).

Эндотелий является важным регулятором сосудистой сети, а оксид азота (NO) является важным расслабляющим фактором, высвобождаемым эндотелиальными клетками. Диффундируя в гладкомышечные клетки, NO активирует гуанилатциклазу, повышает уровень циклического гуанозинмонофосфата (цГМФ), а затем активирует цГМФ-зависимые протеинкиназы (PKG), способствуя расслаблению гладкой мускулатуры (5). Ранее было продемонстрировано, что EcH в концентрации 350-400 мкМ непосредственно действует на гладкие мышцы сосудов и ингибирует индуцированную гипоксией пролиферацию клеток гладкой мускулатуры легочной артерии крысы (6), тогда как 30-300 мкM EcH вызывает острую вазорелаксацию в эндотелиальных клетках. интактных колец в зависимости от концентрации, а также усиление продукции цГМФ в гладких мышцах кавернозных тел колец аорты, сокращенных фенилэфрином (7). Открывая каналы NO-cGMP-PKG-BKca в гладкомышечных клетках, 100 или 300 мкМ EcH подавляли индуцированное норадреналином сокращение в легочных артериях крыс, особенно в кольцах без эндотелия (8). Эндотелиальные клетки являются ключевыми регуляторами сердечно-сосудистой функции, и в нескольких случаях было обнаружено, что эндотелиально-зависимая релаксация была обусловлена ​​переносимым веществом, таким как NO, высвобождаемым из эндотелия (9). Однако вышестоящий молекулярный механизм индуцированной EcH продукции NO в эндотелиальных клетках сосудов требует дальнейшего изучения.

В эндотелии сосудов образование NO в основном опосредуется эндотелиальной NO-синтазой (eNOS). Несколько групп продемонстрировали, что путь фосфатидилинозитол3-киназы (PI3K) активирует серин-треонинпротеинкиназу B (Akt), которая вызывает прямое фосфорилирование eNOS по серину 1177 (Ser1177) (10). Рецептор андрогена (AR) является членом подсемейства ядерных рецепторов s3, который канонически модифицирует экспрессию генов. Локализация АР в кавеолах клеточной мембраны участвует в

негеномная регуляция функции эндотелиальных клеток или экспрессии генов путем запуска каскада c-Src/PI3K/Akt, что в конечном итоге приводит к фосфорилированию eNOS и продукции NO (11). Сообщалось, что в эндотелиальных клетках аорты человека тестостерон активирует передачу сигналов PI3K/Akt и быстро индуцирует продукцию NO благодаря прямому взаимодействию AR и субъединицы p85 PI3K в сердечно-сосудистой системе (12). Сообщалось, что EcH усугубляет симптомы, связанные с дефицитом гормонов, и проявляет свои андрогеноподобные эффекты из-за конкурентного связывания с AR вместо тестостерона (2). Следовательно, в настоящем исследовании была выдвинута гипотеза о том, что путь PI3K/Akt может быть вовлечен в продукцию NO посредством AR-зависимого фосфорилирования eNOS, индуцированного EcH. Цель настоящего исследования заключалась в оценке следующих эффектов EcH: i) индукция продукции NO и фосфорилирования eNOS; ii) участие AR в фосфорилировании eNOS; и iii) активация пути PI3K/Akt в эндотелиальных клетках пупочной вены человека (HUVEcs), хорошо известной экспериментальной модели для изучения регуляции функций эндотелиальных клеток и ангиогенеза (13).

Материалы а также методы

Химикаты а также реагенты.EcH (чистота 92,5%) был получен из Национальных эталонных стандартов лекарственных средств в Национальном институте контроля пищевых продуктов и лекарственных средств. Антитела против p-Akt (Ser473; каталожный номер ab8805), Akt (кат. № ab81283), p-eNOS (Ser1177; кат. № ab184154) и eNOS (кат. № ab76198) были приобретены у Abcam. Ингибиторы нилутамида и IcI 182780 были получены от Sigma-Aldrich; Мерк КГаА. L-NAME был приобретен в компании «Адамас-Бета, ООО», а вортманнин был приобретен в компании «Приболаб».

Клетка культура и наркотик лечение.HUVEc были получены от Sciencell Research Laboratories Inc. и культивированы в среде эндотелиальных клеток (ECM; Sciencell Research Laboratories) с 5% (об./об.) эмбриональной бычьей сыворотки (FBS; Gibco, Thermo Fisher Scientific, Inc.) и 1% эндотелиальных клеток. добавка для роста (ECGS) при 37°C (5 процентов CO2 и 95 процентов влажности) (14). По достижении слияния клетки расщепляли трипсином и высевали в ЭКМ с 1% FBS и 1% EcGS. Для всех экспериментов HUVEc высевали в чашках с концентрацией 1×104/мл и выращивали до достижения слияния. Перед обработкой ЭКГ или другими стимуляторами клетки инкубировали в ЭКМ без фенолового красного без ФБС и ЭКГС в течение 6 ч для индукции

остановка роста. В ингибирующих экспериментах HUVEc предварительно инкубировали с различными антагонистами или ингибиторами, включая 10 мкМ нилутамида, 10 мкМ IcI 182780, 0,5 мМ L-NAME или 5 мкМ вортманнина, в течение 30 мин. с ЭХГ или без него, при 37°С. Во всех группах, включая контрольную, в качестве растворителя использовали dMSO в равных концентрациях 0,001%.

Измерение внутриклеточный НЕпроизводство.

Относительные изменения цитозольной концентрации NO в HUVEcs контролировали с использованием флуоресцентного NO-зонда DAF-FM (Cayman Chemical Company), как сообщалось ранее (12). Вкратце, клетки нагружали 5 мкМ диацетата DAF-FM в течение 20 минут при 37°C в черном титрационном микропланшете и несколько раз промывали PBS (pH 7,4). Флуоресценцию определяли при длинах волн возбуждения и излучения 495 и 515 нм соответственно с использованием флуоресцентного микропланшет-ридера (Biotek Synergy H4; BioTek Instruments, Inc.) и компактного инвертированного микроскопа (Nikon eclipse Ts2R, корпорация Nikon).

вестерн пятно анализ.Как сообщалось ранее (15), конфлюэнтные монослои клеток дважды промывали ледяным PBS и лизировали буфером RIPA (P0013d; Институт биотехнологии Beyotime). Концентрацию белка в супернатанте измеряли с использованием метода анализа на бицинхониновую кислоту (16). Затем на каждую дорожку наносили 30 мкг белка, разделяли с помощью 10-процентных полиакриламидных гелей и переносили на поливинилидендифторидные мембраны. Мембраны блокировали 5-процентным обезжиренным молоком в течение 1 ч при 25°С. После инкубации с моноклональными антителами против Akt (1:1, 000 разведение), p-Akt (1:500 разведение), eNOS (1:2, 000 разведение) или p-eNOS (1 :1, 000 разведение) при 4°C в течение ночи, мембраны промывали TBST (содержащим 0,1% Tween-20) 4 раза в течение ~15 мин на промывку при 25°C. Затем мембраны инкубировали со вторичными антителами, конъюгированными с пероксидазой хрена (1:5, 000 разведение; антимышиное антитело, кат. № A0216, или антикроличье антитело, кат. № A0208, Beyotime Institute). биотехнологии) в течение 1 ч при 25°C и обнаруживают с помощью набора для улучшенной хемилюминесценции (кат. № 32209, Thermo Fisher Scientific, Inc.). Интенсивность полос определяли количественно с использованием программного обеспечения для анализа геля Image J, версия 1.8.0_112 (Национальный институт здравоохранения).

Маленький вмешательство (си) РНК подготовка а также трансфекция.Длинные двухцепочечные РНК были синтезированы мРНК-мишенью AR и рецептора эстрогена (ER) с последовательностями, показанными в таблице I. Условия для нокдауна siRNA включали трансфекцию HUVEC при 7{31}} процентном слиянии, поддерживаемом в неантимикробных средах. культуральную среду в культуральных чашках диаметром 60 мм, покрытых коллагеном. Трансфекцию 5 нМ AR-миРНК или 10 нМ ER-миРНК реагентом Lipofectamine 3000 (Invitrogen; Thermo Fisher Scientific, Inc.) проводили отдельно в соответствии с протоколами производителя. Эффективность трансфекции оценивали с помощью количественного ПЦР-анализа с обратной транскрипцией (RT-qPcR), как сообщалось ранее (17). Условия термоциклирования были следующими: 10 мин при 95°С; 40 циклов 95°С в течение 5 сек и 60°С в течение 1 мин, и кривая плавления при 95°С в течение 15 сек, 60°С в течение 1 мин и 95°С в течение 15 сек; для каждого образца выполняли три независимые биологические повторности. Последующие эксперименты проводили через 48 ч после трансфекции. Пары праймеров были сконструированы с использованием программного обеспечения Primer Premier v5.0 (PREMIER Biosoft) со следующими последовательностями: прямая AR, 5'-GGTTAcAccAAAGGGcTAGAA-3' и обратная, 5'-GAcTTGTAGAGAcAGGGTAGA-3'; ER прямой, 5'-ccAGTAccA ATGACA AGG GAAG -3' и обратный, 5'-TcAcAGGAccAGAcTccATAA-3'; и GAPdH вперед, 5'-cAGGGcTGcTTTTAAcTcTGGTAA-3' и обратно, 5'-GGGTGGAATcATATTGGAAcATGT-3'.

Статистический анализ.Все данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. Статистические сравнения между группами были выполнены с использованием критерия Крускала-Уоллиса или двустороннего дисперсионного анализа с апостериорным критерием Тьюки для множественных сравнений. п<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Полученные результаты

ЭХ вызывает НЕТ производство а также eNOSфосфорилирование.Как показано на рис. 2А и В, 1 мкМ ЭХГ значительно увеличивал внутриклеточную продукцию NO в клетках HUVEc по сравнению с клетками отрицательного контроля, в то время как стимулирующий эффект ЭХГ снижался до контрольного уровня при предварительной обработке L-NAME. Для получения оптимальной концентрации фосфорилирование eNOS тестировали через 60 мин после обработки EcH в концентрациях

из {{0}}, 0.01, 0.1, 1 и 10 мкМ. Результаты показали, что EcH в концентрациях 0,01–10 мкМ может значительно индуцировать фосфорилирование eNOS по Ser 1177 в зависимости от концентрации, при этом максимальное фосфорилирование eNOS наблюдается при индукции 10 мкМ EcH (рис. 2c и d). Кроме того, фосфорилирование eNOS по Ser1177 исследовали вестерн-блоттингом через 0, 5, 15, 30, 60 и 120 минут после инкубации с 1 мкМ EcH. Было замечено, что фосфорилирование eNOS быстро запускалось EcH через 5 минут и продолжало увеличиваться до 30 минут инкубации (рис. 2E и F). Впоследствии, несмотря на обработку EcH, относительная величина фосфорилирования eNOS оставалась стабильной, начиная с 30 мин; поэтому EcH не влиял на общую экспрессию eNOS (Fig. 2c и E).

дополненная реальность опосредует ЭХГ-индуцированный НЕТ производство а также eNOSинтерферирующие эффекты AR-siRNA-1 и ER-siRNA-2 были наиболее успешными в ингибировании экспрессии AR и ER в HUVEcs в настоящем исследовании (рис. 3). Впоследствии антагонист для анализа ингибирования функции AR и миРНК для анализа потери функции AR применяли для оценки участия AR в индуцированной EcH активации eNOS и продукции NO. Как показано на рис. 4А, 1 мкМ ЭХГ значительно увеличивал продукцию NO в HUVEcs (P<0.05). pretreatment="" with="" the="" ar="" antagonist="" nilutamide="" (10="" µm)="" abolished="" ech-induced="" no="" production,="" whereas="" ici182789="" (an="" er="" antagonist)="" did="" not="" exert="" the="" same="" effects.="" furthermore,="" the="" effects="" of="" sirna-mediated="" ar="" knockdown="" on="" no="" production="" were="" examined="" in="" cultured="" cells,="" indicating="" that="" no="" production="" was="" diminished="" by="" transfection="" with="" ar="" sirnas;="" however,="" it="" was="" not="" affected="" by="" er="" sirnas="" or="" control="" random="" sirnas="" (fig.="" 4b).="" representative="" western="" blots="" and="" semi-quantitative="" analysis="" (fig.="" 4c="" and="" d)="" revealed="" that="" the="" phosphorylation="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" inhibited="" by="" nilutamide="" and="" ici182789,="" and="" that="" the="" inhibitory="" effect="" of="" nilutamide="" on="" ech-induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" higher="" compared="" with="" that="" of="" ici182789,="" which="" indicated="" that="" inhibi-="" tion="" of="" ar="" function="" had="" a="" greater="" impact="" than="" er="" on="" enos="" phosphorylation="" induced="" by="" ech.="" similarly,="" the="" phosphoryla-="" tion="" of="" enos="" induced="" by="" ech="" was="" reduced="" significantly="" in="" cells="" transfected="" with="" ar-sirna="" and="" er-sirna="" compared="" with="" the="" control="" random="" sirna;="" the="" inhibitory="" effect="" of="" ar‑sirna="" on="" ech‑induced="" enos="" activation="" was="" significantly="" stronger="" compared="" with="" that="" of="" er-sirna="" (fig.="" 4e="" and="" f).="" therefore,="" the="" aforementioned="" results="" suggested="" that="" ech="" may="" cause="" ar-dependent="" activation="" of="" enos="" to="" induce="" no="" production="" in="">

ЭХ активирует в ПИ3К/Акт путь.В настоящем исследовании фосфорилирование Akt по Ser473 тестировали через 60 мин после инкубации с EcH при концентрациях 0, 0.01, 0.1 , 1 и 10 мкМ. Результаты показали, что EcH (0,01-10 мкМ) может значительно индуцировать фосфорилирование Akt. Относительные уровни экспрессии p-Akt достигали максимума при 1 и 10 мкМ обработки EcH (фиг. 5A и B). Кроме того, фосфорилирование Akt исследовали с помощью вестерн-блоттинга через 0, 5, 15, 30, 60 и 120 минут после добавления 1 мкМ EcH к культурам HUVEc. Как показано на рис. 5c и d, EcH быстро повышал фосфорилирование Akt через 5 мин инкубации, а максимальный уровень белка p-Akt наблюдался через 60 мин. Напротив, EcH не влиял на общую экспрессию Akt (фиг. 5А и с). Кроме того, чтобы исследовать потенциальное влияние пути PI3K на фосфорилирование eNOS, HUVEc были предварительно обработаны ингибитором PI3K вортманнином перед применением EcH. Было обнаружено, что вортманнин снижает индуцированную EcH продукцию NO до исходного уровня (рис. 5E). Аналогичное явление наблюдалось с помощью флуоресцентной микроскопии при исследовании флуоресценции DAF-FM, индуцированной EcH (рис. 5F). Кроме того, вортманнин может иметь способность отменять быстрое фосфорилирование eNOS в HUVEcs (Fig. 5G и H). Вышеупомянутые результаты предполагают, что EcH может активировать фосфорилирование eNOS и продукцию NO посредством пути PI3K/Akt.

Обсуждение

EcH представляет собой природное соединение, выделенное из Herba.Цистанхе, с различными фармакологическими свойствами. Ранее было продемонстрировано, что EcH оказывает эндотелий-зависимое сосудистое релаксирующее действие, открывая каналы NO-cGMP-PKG-BKca в гладкомышечных клетках кровеносных сосудов (7,8). Текущие результаты свидетельствуют о том, что ECH оказывает AR-зависимую активацию eNOS, чтобы индуцировать продукцию NO с участием сигнального пути PI3K/Akt в эндотелиальных клетках сосудов.

Являясь самым внутренним слоем стенки сосуда, эндотелий может быстро ощущать и реагировать на изменения кровотока, что, в свою очередь, приводит к передаче сигнала нижележащим гладкомышечным клеткам для регулирования тонуса сосудов (18). Широко сообщалось, что существует множество сосудорасширяющих соединений эндотелиального происхождения, наиболее типичным из которых являетсяявляясь NO, образуется из эндотелиальной изоформы eNOS, что приводит к фосфорилированию (19). В нормальных условиях eNOS остается неактивной при связывании с кавеолином и активируется при следующей последовательности событий в эндотелии.клетки: i) eNOS диссоциирует от кавеолина-1 и связывается с ca2 plus/caM; ii) белок теплового шока (HSP)90 способствует eNOSдимеризация и способствует стерическому формированию для рекрутирования Akt; и iii) кальциневрин дефосфорилирует Thr495 для усиления состояния активации (20). В настоящем исследовании продукция NO была значительно увеличена в HUVEC, обработанных 1 мкМ ЭХГ. Это явление было похоже на предыдущие результаты, где EcH увеличивал высвобождение NO и стимулировал синтез цГМФ в кольцах грудной аорты крыс (7). Более того, два сайта фосфорилирования, Ser1177 и Thr495, по-видимому, особенно важны для регуляции активности eNOS (20), и настоящее исследование показало, что EcH индуцирует острое фосфорилирование eNOS по Ser1177 в зависимости от концентрации. Кроме того, стимулы, связанные с воздействием на уровни белка eNOS, в основном определяют стабильность мРНК eNOS, и если стимул сохраняется в течение более длительного периода времени, транскрипция мРНК eNOS происходит посредством митоген-активируемой протеинкиназы и ядерного фактора κB (20). В совокупности эти наблюдения указывают на то, что активация eNOS в Ser1177 отвечает за синтез NO, индуцированный EcH.

Кроме того, все большее число исследований продемонстрировало, что АР экспрессируется в эндотелиальных клетках ряда тканей человека, что указывает на потенциальную роль андрогенов и их аналогов, действующих посредством АР-опосредованных процессов, в модуляции эндотелиальных клеток человека. клеточный гомеостаз (21). В неклассическом пути PI3K/Akt AR может активировать PI3K путем прямого взаимодействия с регуляторной субъединицей PI3K p85 (22). Настоящее исследование показало, что антагонист AR или миРНК AR уменьшали продукцию NO и фосфорилирование eNOS, индуцированное EcH в HUVEcs. Ранее сообщалось, что эстрогены индуцируют фосфорилирование eNOS и стимулируют продукцию NO посредством классической активации ER в эндотелиальных клетках (23), а введение ECH значительно усиливает экспрессию ER в матке (24). Однако в настоящем исследовании эффект AR был более заметным по сравнению с эффектом ER на индуцированную EcH активацию eNOS и продукцию NO. Кроме того, было замечено, что EcH вызывает острую выработку NO в течение нескольких минут посредством AR-активации eNOS в HUVEcs, что согласуется с негеномной природой ответа в эндотелиальных клетках. AR связан с каркасными белками, включая HSP90, HSP70 и киназу Src, в цитоплазме и может транспортироваться на мембрану из комплекса AR в течение 5 минут после обработки тестостероном (23). Основываясь на стратегии «вылова мишени», HSP90 был идентифицирован как PhGs-связанная мишень, что указывает на то, что EcH может способствовать диссоциации AR от каркасных белков (25). Другое исследование показало, что в гипоталамусе EcH может объединяться с карманом AR в аминокислотах Met-894 и Val-713 и ингибировать транспорт цитоплазматического AR в ядро ​​(26). Однако лежащий в основе механизм, с помощью которого EcH обеспечивает цитоплазматическую транслокацию AR к мембране, требует дальнейшего изучения. Следовательно, необходимы дальнейшие исследования для выяснения механизма, с помощью которого EcH достигает AR-зависимой активации eNOS и как это может быть связано со связыванием с HSP90 в эндотелиальных клетках сосудов.

Путь PI3K/Akt является одним из наиболее важных сигнальных каскадов, активация которого индуцируется продуцированием фосфатидилинозитол-3,4,5-трифосфата для связывания N-концевого домена гомологии плекстрина Ser/ Thr киназа Akt. Это облегчает рекрутирование Akt на плазматическую мембрану (27). Путь PI3K/Akt может играть важную роль в контроле NO-зависимой релаксации, индуцированной EcH.

Настоящее исследование показало, что EcH-индуцированная продукция NO была значительно снижена, когда клетки инкубировали с вортманнином, ингибитором PI3K. Предыдущий отчет показал, что 15 мг/кг EcH активировали сигнальный путь PI3K/Akt в клетках костного мозга, подавленных 5-фторурацилом (28). В настоящем исследовании ингибиторы PI3K значительно снижали индуцированное EcH фосфорилирование eNOS по Ser1177. Более того, активность Akt преимущественно регулировалась восходящими регуляторными путями, особенно PI3K-зависимым фосфорилированием по Ser473 (20). В настоящем исследовании EcH индуцировал фосфорилирование Akt по Ser473 дозозависимым образом; аналогично, предыдущее исследование показало, что 5, 10 или 20 мкМ EcH оказывали кардиозащитный эффект против аноксии/реперфузии дозозависимым образом, потенциально повышая регуляцию p-Akt и SLc8A3 (29). Регуляция транскрипции гена Akt остается в значительной степени неизвестной (30); поэтому настоящее исследование было сосредоточено на посттранскрипционных регуляторных эффектах EcH на Akt. Принимая во внимание вышеупомянутые данные, был сделан вывод, что применение EcH к HUVEcs может привести к активации пути PI3K/Akt, который фосфорилирует eNOS и, впоследствии, увеличивает продукцию NO.

В заключение, EcH является натуральным продуктом, в основном выделенным из Herba.Цистанхе.Потенциальный механизм, лежащий в основе индуцированной EcH продукции NO в эндотелиальных клетках, может включать следующее (рис. 6): i) EcH действует как функциональный лиганд AR, который локализован в кавеолах клеточной мембраны; ii) PI3K связывается с гидрофобным доменом Akt в Ser473 и облегчает привлечение Akt к клеточной мембране; iii) рекрутирование каскадов PI3K/Akt запускает AR-зависимое фосфорилирование eNOS; и iv) образование NO опосредовано eNOS в эндотелиальных клетках. Наблюдение, что EcH индуцирует продукцию NO посредством AR-зависимого фосфорилирования eNOS с участием пути PI3K/Akt, может способствовать дальнейшему пониманию вазорелаксантных эффектов EcH. Кроме того, EcH, нацеленный на эндотелиальные пути NO, может быть обусловлен негеномными эффектами. Таким образом, настоящее исследование может помочь выяснить механизмы, посредством которых ЭГ оказывает фармакологический эффект на профилактику сердечно-сосудистых заболеваний.

Благодарности

Непригодный.

Финансирование

Настоящее исследование было поддержано Национальным фондом естественных наук Китая (грант № 81503333).

Доступность из данные а также материалы

Наборы данных, сгенерированные и проанализированные в ходе настоящего исследования, можно получить у соответствующего автора по обоснованному запросу.

Авторы' взносы

LG и XL задумали и разработали эксперименты. dL и YZ провели эксперименты. WZ и JG проанализировали данные. LG подготовила рукопись. XL рассмотрел и отредактировал рукопись. Все авторы прочитали и одобрили окончательный вариант рукописи.

1202 ГУэт все: ЭХИНАКОЗИД ВЫЗЫВАЕТ ПРОИЗВОДСТВО ОКСИДА АЗОТА ПО АР-ЗАВИСИМОМУ ПУТИ PI3K/AKT

Этика одобрение а также согласие к принимать участие

Непригодный.

Пациент согласие за публикация

Непригодный.

Конкуренция интересы

Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих интересов.

использованная литература

1. Китайская фармакопея:ЦистанхеХерба. В: Фармакопея Китайской Народной Республики 1. чин. Мед. науч. Press, Пекин, стр. 135, 2015 г.

2. Jiang Z, Wang J, Li X и Zhang X: эхинакозид иЦистанхе трубчатый(Шенк)R. wight улучшает вызванное бисфенолом А повреждение яичек и сперматозоидов у крыс с помощью регулируемых осью гонад стероидогенных ферментов. J Ethnopharmacol 193: 321-328, 2016.

3. Liu J, Yang L, dong Y, Zhang B и Ma X: Эхинакозид, бесценный натуральный продукт для лечения неврологических и других расстройств. Молекулы 23: piiE1213, 2018.

4. Йошикава М., Мацуда Х., Морикава Т., Се Х., Накамура С. и Мураока О.: Фенилэтаноидные олигогликозиды и ацилированные олигосахара с сосудорасширяющей активностью отЦистанхе трубчатый. Bioorg Med chem 14: 7468-7475, 2006.

5. Arnold WP, ​​Mittal cK, Katsuki S и Murad F: Оксид азота активирует гуанилатциклазу и повышает уровень гуанозин-3':5'-циклического монофосфата в различных тканевых препаратах. Proc Natl Acad Sci USA 74: 3203-3207, 1977.

6. Gai XY, Tang F, Ma J, Zeng KW, Wang SL, Wang YP, Wuren TN, Lu dX, Zhou Y и Ge RL: Антипролиферативное действие эхинакозида на гладкомышечные клетки легочной артерии крысы в ​​условиях гипоксии. J Pharmacol Sci 126: 155-163, 2014.

7. He WJ, Fang TH, Ma X, Zhang K, Ma ZZ и Tu PF: Эхинакозид вызывает эндотелий-зависимую релаксацию в кольцах аорты крысы через путь NO-цГМФ. Планта Мед 75: 1400-1404, 2009.

8. Gai XY, Wei YH, Zhang W, Wuren TN, Wang YP, Li ZQ, Liu S, Ma L, Lu dX, Zhou Y и Ge RL: эхинакозид вызывает вазорелаксацию легочной артерии крыс путем открытия NO-цГМФ-ПКГ- BKca-каналы и снижение внутриклеточного уровня ca2 plus. Acta Pharmacol Sin 36: 587-596, 2015 г.

9. Maruhashi T, Kihara Y и Higashi Y: Оценка эндотелий-независимой вазодилатации: от методологии к клиническим перспективам. J Hypertens 36: 1460-1467, 2018.

10. Ahmad KA, Ze H, chen J, Khan FU, chen X, Xu J и производные на эндотелиальных клетках пупочной вены человека против повреждения, вызванного окислительным стрессом: участие антиоксидантных и сигнальных путей PI3k/Akt/eNOS/NO. Биомед Фармакотер 106: 1734-1741, 2018.

11. Yu J, Akishita M, Eto M, Koizumi H, Hashimoto R, Ogawa S, Tanaka K, Ouchi Y и Okabe T: Src-киназа опосредует зависимую от рецептора андрогена негеномную активацию сигнального каскада, ведущую к эндотелиальной синтазе оксида азота. . Коммуна Biochem Bioph Res 424: 538-543, 2012.

12. Yu J, Akishita M, Eto M, Ogawa S, Son B, Kato S, Ouchi Y и Okabe T: Зависимая от андрогенных рецепторов активация эндотелиальной синтазы оксида азота в эндотелиальных клетках сосудов: роль фосфатидилинозитола {{3} Путь киназы/Akt. Endocrinology 151: 1822-1828, 2010.

13. Pittarella P, Squarzanti dF, Molinari c, Invernizzi M, Uberti F и Reno F: NO-зависимая пролиферация и миграция, индуцированная витамином d в HUVEc. J Steroid Biochem 149: 35-42, 2015.

14. He Y, Luan Z, Fu X и ​​Xu X: сверхэкспрессия разобщающего белка 2 ингибирует индуцируемый глюкозой апоптоз эндотелиальных клеток пупочной вены человека. Int J Mol Med 37: 631-638, 2016.

15. Xiao-Hong d, chang-Qin X, Jian-Hua H, Wen-Jiang Z и Bing S: икариин задерживает индуцированное гомоцистеином эндотелиальное клеточное старение, включая активацию сигнального пути PI3K/AKT-eNOS. Фарм Биол 51: 433-440, 2013.

16. Smith PK, Krohn RI, Hermanson GT, Mallia AK, Gartner FH, Provenzano Md, Fujimoto EK, Goeke NM, Olson BJ и Klenk dc: Измерение белка с использованием бицинхониновой кислоты. Анальный биохим 150: 76-85, 1985.

17. Gu L, Zhong X, Lian d, Zheng Y, Wang H и Liu X: биосинтез тритерпеноидов и транскрипционный ответ, вызванный оксидом азота при глубинном брожении.Ганодерма ясный. Process Biochem 60: 19-26, 2017.

18. Ellinsworth dc, Sandow SL, Shukla N, Liu Y, Jeremy JY и Gutterman dd: Эндотелиальная гиперполяризация и коронарная вазодилатация: разнообразные и комплексные роли эпоксиэйкозатриеновых кислот, перекиси водорода и щелевых контактов. Микроциркуляция 23: 15-32, 2016.

19. Фрид Дж.К. и Гуттерман Д.Д.: Ключ к коммуникации: Механизмы межклеточной передачи сигналов при вазодилатации. J кардиовастический фарм 69: 264-272, 2017.

20. Quillon A, Fromy B и debret R: Восприятие микроокружения эндотелия, ведущее к вазодилатации, опосредованной оксидом азота: обзор нервных и биомеханических сигналов. Оксид азота 45: 20-26, 2015.

21. Torres-Estay V, carreno dV, Francisco IF, Sotomayor P, Godoy AS и Smith GJ: Рецептор андрогена в эндотелиальных клетках человека. J Эндокринол 224: 131-137, 2015.

22. Deng Q, Zhang Z, Wu Y, Yu WY, Zhang J, Jiang ZM, Zhang Y, Liang H и Gui YT: Негеномное действие андрогенов опосредовано быстрым фосфорилированием и регуляцией переноса рецепторов андрогенов. Cell Physiol Biochem 43: 223–236, 2017.

23. de Oliveira TS, de Oliveira LM, de Oliveira LP, costa RMd, Tostes Rc, Georg Rc, costa EA, Lobato NS, Filgueira FP и Ghedini Pc: Активация пути PI3K/Akt, опосредованная рецепторами эстрогена, объясняет индуцированную эстроном сосудистая активация передачи сигналов цГМФ. Vascul Pharmacol 110: 42-48, 2018.

24. Li F, Yang X, Yang Y, Guo c, Zhang c, Yang Z и Li P: Антиостеопоротическая активность эхинакозида у крыс с удаленными яичниками. Фитомедицина 20: 549-557, 2013.

25. Zeng KW, Liao LX, Wan YJ, Jiang Y и Tu PF: Идентификация фармакологических целей и анализ эффективности фенилэтаноидных гликозидов изЦистанхиHerba основана на стратегии «целевой рыбалки». chin Tradit Травяные препараты 49: 173-178, 2018.

26. Jiang Z, Zhou B, Li X, Kirby GM и Zhang X: Эхинакозид увеличивает количество сперматозоидов у крыс, воздействуя на гипоталамический андрогенный рецептор. Научный отчет 8: 3839-3850, 2018 г.

27. coffer PJ, Jin J и Woodgett JR: Протеинкиназа B (c-Akt): многофункциональный медиатор активации фосфатидилинозитол3-киназы. Биохим J 335, 1-13, 1998.

28. Wang S, Zheng G, Tian S, Zhang Y, Shen L, Pak Y, Shen Y и Qian J: Эхинакозид улучшает гемопоэтическую функцию у мышей с 5-функционирующей миелосупрессией. Life Sci 123: 86-92, 2015.

29. chen M, Wang X, Hu B, Zhou J, Wang X, Wei W и Zhou H: Защитные эффекты эхинакозида против аноксии/реперфузии в клетках H9c2 посредством повышающей регуляции p-AKT и SLc8A3. Биомед Фармакотер 104: 52-59, 2018.

30. Abeyrathna P и Su Y: Критическая роль Akt в сердечно-сосудистой функции. Vascul Pharmacol 74: 38-48, 2015.