Влияние цистанхе на антивозрастную и иммунную функцию стареющих модельных крыс до и после обработки

Контактное лицо: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Электронная почта:audrey.hu@wecistanche.com

Абстрактный: Цель: изучить различные продукты переработкиЦистанхиherba in D - омолаживающая функция галактозы у крыс и влияние на функцию иммунных органов. Методы: мы экстрагировали различные продукты переработки травы цистанчес. Крысы SD были случайным образом разделены на контрольную группу, группу модели старения, группу витамина Е, группы с высокой, средней и низкой дозой цистанхе, группы с высокой, средней и низкой дозой винного цистанхе. С Д-галактозой создавали модель старения крыс, после лечения определяли содержание МДА, СОД и NO в сыворотке крови крыс каждой группы и рассчитывали индексы селезенки и тимуса; а затем наблюдали патологические морфологические изменения тканей селезенки и мтДНК в головном мозге. Результаты: MDA и NO в сыворотке крыс модели старения значительно увеличились (P<0. 01)="" and="" sod="" decreased="" significantly="" (fvo.="" 01).="" the="" model="" group="" had="" a="" tendency="" to="" decrease,="" thymus="" and="" spleen="" coefficient="" had="" obvious="" pathological="" spleen="" injury,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" was="" missing.="" different="" processed="" products="" of="">Цистанхиherba может значительно снизить МДА и NO(P<0. 01="" or="" p=""><0. 05).="" sod="" had="" a="" rising="" trend,="" improving="" the="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improving="" the="" pathological="" injury="" of="" the="" spleen.="" the="" mtdna="" in="" the="" brain="" of="" the="" high="" dose="" group="" and="" positive="" medicine="" group="" did="" not="" miss.="" and="" processing="" products="" were="" better="" than="" the="" raw="" cistanches="" herba.="" the="" high="" dose="" group="" was="" better="" than="" the="" low="" dose="" group.="" conclusion:="" different="" processing="" products="" of="" cistanches="" herbs="" have="" different="" anti-aging="" effects="" and="" immune="">

Ключевые слова: Cistanches herba; обработка; старение; иммунный

Традиционная китайская медицинаЦистанхе пустыннаяYC Ма илиЦистанхе пустыннаяYC Ma или C. Tubulosa (Schenk) Wight представляет собой сухой, чешуйчатый мясистый стебельЦистанхе пустынная(Шенк) Уайт. Он теплый по своей природе, сладкий и соленый на вкус и находится в меридиане почек и толстой кишки. Он необходим для укрепления почек и укрепления ян. Медицина называется «женьшень пустыни» (2). Цистанхе была впервые опубликована в «Материа Медика Шень Нуна». Он указан как высший сорт. Он обладает эффектом наполнения эссенцией и питания костного мозга, питания почек и укрепления ян, приятного цвета и продления жизни, питания крови и увлажнения сухости и т. Д. Он может лечить женское бесплодие, мужское бессилие, сухой запор крови, холодную талию и колени. . Болезни, такие как боль, защемление, коллапс крови и т.д.! 3_5]o Издание 2010 года "Фармакопеи Китайской Народной Республики" содержитЦистанхе трубчатаяа такжеЦистанхе E.

По мере старения тела происходит некоторая деградация как физиологических функций, так и морфологической структуры. Это то, что мы часто называем «старением». Его проявлениями являются главным образом ухудшение состояния органов, тканей и клеток, такое как снижение эластичности тканей, атрофия органов и уменьшение количества клеток, что приводит к постепенному ухудшению многих функций организма. Эксперименты подтвердили, чтоЦистанхеоказывает омолаживающее действие «I», но сравнительные исследования омолаживающего действияЦистанхедо и после обработки пока не сообщается. Этот эксперимент в основном изучаетомолаживающие эффектыизЦистанхедо и после обработки и обеспечивает научную основу для изучения механизма старения.

Эхинакозид

1 Экспериментальный материал

1.1 Экспериментальные животные

Крысы SD весом 180-220 г. SPF был предоставлен Liaoning Changsheng Biotechnology Co., Ltd., номер лицензии: SCXK (Liao) 2015-0001.

1.2 Лекарства и реагенты

Цистанхебыл куплен у ясеня дикого мяса Алашань во Внутренней Монголии и идентифицирован как сухой мясистый стебель с чешуйчатыми листьямиЦистанхе пустыннаяYC Ma профессора Чжай Яньцзюнь из нашей больницы; способ приготовления каждой группы испытуемых веществ следующий, сырой цистанхе: сырой цистанхе пропаривают в течение 2 часов, нарезают ломтиками толщиной 6 мм и сушат при 70°С. Возьмите кусочки цистанхе и 3 раза экстрагируйте в воде, затем смешайте отвар и сконцентрируйте до определенной концентрации. Приготовление цистанхе: Возьмите сырую цистанхе и замочите в желтом вине на 8 часов, добавьте 1:1, пропаривайте 16 часов, нарежьте ломтиками толщиной 6 мм и высушите при 70 Т. Возьмите ломтики цистанхе и экстрагируйте 3 раза водой, затем соедините отвар и сконцентрируйте его до определенной концентрации. мягкие капсулы с витамином Е (номер партии 1407061, Shenyang Hongqi Pharmaceutical Co., Ltd.); D-галактоза (номер партии 710B055, Beijing Soleibao Technology Co., Ltd.); Комплект оксида азота (NO) (номер партии: BPE30262); набор малонового диальдегида (номер партии: BPE30262) MDA (номер партии BPE30527); набор супероксиддисмутазы (SOD) (номер партии: BPE3O387); все предоставлено Shanghai Langdon Biotechnology Co., Ltd.; набор для выделения митохондриальной ДНК животных колоночного типа (приобретенный у Beijing Lab Technology Co., Ltd.); набор для ПЦР (приобретенный у TIANGEN Reagent Company); остальные реактивы отечественной чистоты.

1.3 Экспериментальное оборудование

Генный циклер (Hangzhou Longkey Scientific Instrument Co., Ltd.); микропланшетный ридер (Thermo Fisher Technology Co., Ltd., США); Камера постоянной температуры и влажности (Shanghai Yiheng Scientific Instrument Co., Ltd.); Тип TGL-16C говорит о настольной центрифуге (Шанхайский завод научных инструментов Anting); Вихревой смеситель (Шанхайский инструментальный завод Qingpu Huxi); Электронные весы (Shanghai Yousheng Weighing Apparatus Co., Ltd.); Вихревой смеситель (Шанхайский инструментальный завод Qingpu Huxi).

2 Экспериментальный метод

2.1 Животная модель и группировка

После 1 недели адаптивного кормления крыс случайным образом разделили на контрольную группу, модельную группу, контрольную группу, экспериментальную группу.Цистанхегруппа с высокой, средней и низкой дозой, и B. striata: группы с высокой, средней и низкой дозой, каждая из которых состояла из 9 групп по 8 штук. За исключением контрольной группы, остальным группам вводили D-галактозу 167,5 мг/кг подкожно утром; контрольной группе вводили равный объем физиологического раствора; во второй половине дня высокие, средние и низкие дозы мясной золы и вина давали 5,48 и 2 соответственно. 74, 1,37 г/кг раствора испытуемого продукта, группе положительного контроля давали 2,75 мг/мл витамина Е, контрольной группе и экспериментальной группе давали равный объем физиологического раствора путем внутрижелудочного введения. В течение 6 недель подряд их окончательно казнили и измеряли различные показатели.

2.2 Определение содержания СОД, МДА и NO в сыворотке крови крыс

Кровь собирали из брюшной аорты крысы, центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 минут для отделения сыворотки крови и хранили при -20 Y для последующего использования. Определение содержания МДА.СОД.NO проводят в соответствии с инструкцией к тест-набору.

2.3 Влияние на массу иммунных органов у стареющих модельных крыс

Крыс в каждой группе взвешивали и умерщвляли после взятия крови. Брали селезенку и тимус, промывали физиологическим раствором, сушили, взвешивали и рассчитывали коэффициенты селезенки и тимуса.

2.4 Наблюдение за морфологией ткани селезенки

Взвешенные селезенки фиксировали 4% параформальдегидом, заливали в парафин, делали срезы и окрашивали HE. Изменения патологических срезов селезенки в каждой группе наблюдали под микроскопом.

2.5 Статистические методы

Используйте программное обеспечение SPSS для выполнения одностороннего дисперсионного анализа и LSD-t-test для попарного сравнения.

2.6 Обнаружение мутаций мтДНК в головном мозге

Ткань головного мозга крысы помещали в ступку с жидким азотом, быстро растирали в порошок, а затем подвергали описанному в литературе методу в соответствии с инструкциями набора для выделения мтДНК из ткани головного мозга.

ПЦР-амплификация выявляет делецию фрагмента мтДНК4834: праймеры относятся к полной последовательности генома мтДНК крысы, описанной Gada-leta et al. (1898 г.), а праймеры синтезированы компанией Shanghai Shengang Industrial Co., Ltd. {13}}, P4: 5'-CCTCTTTTCTGATAGGCGGG-3,

Реакционная система ПЦР: матрица ДНК 1 |xL, 2 x Taq PCR MasterMix 25 |xL, ddH2O 20 мкл, по 2 праймера каждый. Условия амплификации: первая денатурация 95 Y в течение 5 мин; денатурация 95 Тл 30 с, отжиг 56 Тл 30 с, удлинение 72 Тл 45 с, всего 35 циклов; последнее расширение 72 Т в течение 7 минут. Амплифицированные продукты подвергали электрофорезу в 1,5% агарозном геле.

актеозид

3 Результаты и анализ

3.1 ВлияниеЦистанхена физические признаки старения крыс

По сравнению с контрольной группой у стареющих крыс наблюдалась темная и желтая шерсть, дряблая и тусклая кожа, дряблая кожа, выпадение волос, потеря аппетита, снижение спонтанной активности, замедленность движений, выпуклость позвоночника, вялость, замедленная реакция и другие проявления старения. Чем дольше время инъекции, тем более очевидны симптомы. По сравнению со стареющей группой, психическое состояние крыс, цвет шерсти, аппетит, форма тела и чувствительность реакции улучшались с увеличением времени введения в каждой группе введения.Цистанхе. Среди них практически не было различий между группой, получавшей продукт с высокой дозой, и контрольной группой.

3.2 ВлияниеЦистанхена содержание МДА, СОД и NO в сыворотке крови стареющих модельных крыс

Результаты представлены в Таблице I. По сравнению с контрольной группой модельная группа mda.no была значительно увеличена (P<0.01), and="" sod="" was="" significantly="" reduced="" (p=""><0.01); compared="" with="" the="" model="" group,="" each="" treatment="" group="" mda.no="" was="" significantly="" lower=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" but="" it="" is="" not="" statistically="" significant;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="">Цистанхе, MDA.N0 в группах со средней и низкой дозой цистанхе был значительно снижен (F<0.05 ),="" sod="" tends="" to="" increase;="" compared="" with="" the="" high-dose="" group="" of="" cistanche,="" the="" mda.no="" of="" the="" middle="" and="" low-dose="" groups="" of="" cistanche="" rose="" significantly="" (p=""><0.01 or="" p=""><0.05), and="" the="" sod="" tended="" to="" decrease;="" compared="" with="" the="" jiu="" nvrong="" gao="" dose="" group,="" the="" mda.no="" of="" the="" high-dose="" eggplant="" paste="" group="" increased="" significantly="" (p=""><0.01), and="" sod="" tended="" to="" decrease.="" this="" result="" shows="" that="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group="" compared="" with="" different="" dose="" groups,="" and="" the="" treatment="" effect="" of="" the="" product="" group="" is="" better="" than="" that="" of="" the="" raw="" product="" group="" compared="" with="" the="" same="" dose="" group.="">

3.3эффект Цистанхена иммунную функцию стареющих модельных крыс Chi

3.3.1 Влияние цистанхе на индекс селезенки и индекс тимуса у крыс с моделью старения

Результаты представлены в таблице 2. По сравнению с контрольной группой коэффициент тимуса и селезенки в модельной группе равен g.

Тенденция к снижению есть, но она не является статистически значимой. По сравнению с модельной группой коэффициенты тимуса и селезенки в каждой группе лечения были значительно увеличены (F<0.05); compared="" with="" the="" high-dose="" cistanche="">

Групповое сравнение, коэффициенты тимуса и селезенки в средней и малодозовой группахЦистанхеимеют тенденцию к снижению

потенциал; по сравнению с высокими дозамиЦистанхе пустыннаягруппа с высокой дозой, тимус и селезенка групп со средней и низкой дозой винной пасты для девочек

Висцеральный коэффициент имеет тенденцию к снижению; по сравнению с высокими дозамиЦистанхе пустыннаягруппа с высокой дозой, коэффициенты тимуса и селезенки у группы с высокой дозойЦистанхе пустыннаягруппа с высокими дозами имеет тенденцию к снижению. Этот результат показывает, что группа с высокой дозой лучше, чем группа с низкой дозой, по сравнению с группами с разными дозами, а лечебный эффект группы продукта лучше, чем у группы сырого продукта по сравнению с группой с той же дозой.

Таблица 1 Сравнение содержания СОД.МДА.NO в крови крыс каждой группы (n.=8,x ±s)

Примечание:. По сравнению с модельной группой I, P<005.><001; j="" air-day="" group="" comparison.=""><[)01; tlilll="" high-dose="" ether="" group="" jqi="" [i_low-dose="" group="" comparison.=""><005.><(). ()1;="" the="" high-dose="" product="" group="" is="" compared="" with="" the="" product="" tl="" and="" ff="" [journal="" f="" group.="" })=""><0.05.1l><(1o1; product="" high="" yanlian="" group="" q.="" pindaoli="" {group="" comparison.=""><005.><>

3.3.2 Влияние патологических изменений селезенки наЦистанхестареющие модельные крысы. Пустая группа имеет тонкую и однородную капсулу селезенки, четкие трабекулы селезенки без отека, четкое разделение красной и белой пульпы, большее количество узелков селезенки и того же размера, в центре селезенки Количество клеток в лимфатической оболочке вокруг артериолы плотные. В модельной группе селезенка была утолщена, трабекулы и корковое вещество отечны, красная и белая пульпа была нечеткой, белая пульпа была значительно уменьшена, количество лимфоцитов было уменьшено, большое количество воспалительных клеток было инфильтрировано, и морфологическая структура нарушена. Хотя размер узлов селезенки в каждой группе лечения был разным, границы белой и красной пульпы были четкими. Количество клеток в лимфатической оболочке вокруг центральной малой артерии селезенки было плотным, морфология и структура восстановлены. Более того, группа перегонщиков высоких доз смогла улучшить патологические изменения. Это лучше, чем группа витамина Е, в которойЦистанхепродукт лучше, чем группа сырых продуктов, а группа с высокой дозой лучше, чем группа с низкой дозой. См. вставку X-XI.1-10 представляет собой мтДНК в мозге крыс в пустой группе, модельной группе, контрольной группе и группе с повышенным содержанием. мтДНК Рисунок 3. Результаты электрофореза продуктов амплификации ПЦР мтДНК в головном мозге крысы (праймер PI.P2)

3.4 Делеция и мутация мтДНК в головном мозге

По праймерам Р3 и Р4 можно получить консервативный фрагмент мтДНК длиной около 770 п.н. Из рисунка 2 видно, что целевые фрагменты были амплифицированы на всех 9 дорожках, что свидетельствует об успешном извлечении всех 9 групп мтДНК.

Determination of mtDNA4834 bp deletion mutation: If there is a rat mtDNA4834 bp deletion, primers P1 and P2 will amplify the 4834 bp loss and break the fusion gene fragment with a length of 597 bp. As shown in Figure 3, there is a clear DNA band between 500 l>p и 750 п.н. на дорожках 2, 4, 5, 7, 9 и 10. Фрагменты были извлечены и отправлены в Hangzhou Baocheng Biotechnology Company для секвенирования. По сравнению с последовательностью, описанной Gadateta et al. (1989) было доказано наличие делеции фрагментов мтДНК размером около 4000-5000 п.н. Следовательно, это показывает, что в головном мозге модельной группы имеется делеция мтДНК длиной около 4834 п.н. На дорожках 1, 3 и 8 нет фрагментов, что указывает на отсутствие делеций митохондриальных фрагментов в 1, 3 и 8. Результаты показали, что не было отсутствующих фрагментов в группе с высокими дозами дистилляционных дрожжей, группе с положительным лекарственным средством, и пустая группа, предполагающая, что группа дрожжей с высокой дозой дистиллятора может оказывать омолаживающее действие. См. рис. 2~рис. 3.

1-10 представляет собой мтДНК в мозге крыс в пустой группе, модельной группе, контрольной группе и группе с повышенным содержанием. мтДНК Рисунок 3. Результаты электрофореза продуктов амплификации ПЦР мтДНК в головном мозге крысы (праймер PI.P2)

Цистанхе: против старения

4. Дискуссия

Модель старения, вызванная внутрижелудочным введением D-галактозы, в настоящее время является более часто используемой моделью старения. Модель в основном снижает активность различных антиоксидантных ферментов, так что в процессе обмена веществ в организме образуется большое количество свободных радикалов, что приводит к старению организма. Изменения морфологии тканей аналогичны изменениям естественного старения ⑻. Большое количество экспериментов показало, что D-галактоза индуцирует аномальное увеличение содержания NO в головном мозге и коре мозжечка, а также в крови стареющих мышей. Результаты этого исследования подтвердили, что содержание в крови стареющих крыс было значительно выше, чем у нормальной группы, что было сходно с результатами, опубликованными в литературе «-м.

В этом эксперименте омолаживающий эффект модели старения крыс до и после обработкиЦистанхебыл изучен. Результаты показали уровни MDA и N в сыворотке стареющих крыс. Значительно повышен (P<0.01), sod="" significantly="" decreased="" (p=""><0.01), the="" model="" group="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" have="" a="" tendency="" to="" decrease,="" the="" spleen="" has="" obvious="" pathological="" damage,="" and="" mtdna="" in="" the="" brain="" is="" also="" missing.="" different="" processed="" meat="" ash="" can="" significantly="" reduce="" the="" levels="" of="" mda="" and="" no="" (/=""><0.01 or=""><0.05), sod="" has="" a="" rising="" trend,="" increase="" spleen="" index="" and="" thymus="" index,="" improve="" spleen="" pathological="" damage,="" and="" high="" mtdna="" in="" the="" brain="" the="" dose="" group="" and="" the="" positive="" drug="" group="" also="" did="" not="" appear="" to="" be="" missing.="" and="" the="" prepared="" meat="" puree="" is="" better="" than="" the="" raw="" meat="" puree,="" and="" the="" high-dose="" group="" is="" better="" than="" the="" low-dose="" group.="" research="" in="" recent="" years="" believes="" that="" aging="" is="" also="" related="" to="" the="" lipid="" peroxidation="" of="" biological="" membranes="" caused="" by="" free="" radicals.="" sod="" "'-e="" is="" an="" enzyme="" that="" scavenges="" superoxide="" free="" radicals.="" the="" older="" the="" body,="" the="" weaker="" the="" body's="" sod="" activity="" and="" the="" fewer="" antioxidants.="" this="" will="" increase="" the="" free="" radical="" damage="" factor="" mda,,4~,7],="" and="" eventually="" accelerate="" aging.="" in="" addition,="" the="" results="" of="" the="" thymus="" and="" spleen="" coefficients="" of="" aging="" model="" rats="" indicate="" that="" roujing="" rong="" can="" delay="" aging="" by="" improving="" the="" immune="" function="" of="" the="" body.="" the="" results="" of="" the="" study="" hope="" to="" provide="" a="" scientific="" basis="" for="" the="" clinical="" application="" of="">Цистанхе.