АБСТＲАКТ

Цель: выяснить, являются ли общиецистанозиды(ГК) улучшаеткогнитивная дисфункциябыстро стареющих мышей (SAMP8), опосредуя специфические андрогенные рецепторы (AＲ) врегуляция экспрессии синаптического белка． 

Методы: Всего 76 7-месячных мышей SAMP8 случайным образом разделили на модельную группу, группу GC, группу GC + флутамид (F), группу GC + фулвестрант (ICI), группу F и группу ICI. Функции обучения и памяти мышей в каждой группе были протестированы с помощью водного лабиринта Морриса. Для проверки были использованы вестерн-блоттинг и RT-PCR.уровень экспрессии синаптофизина( SYN), постсинаптическая плотность － 95 ( PSD － 95) и мозговой нейротрофический фактор (BDNF) мышей в каждой группе.

Результаты: GC значительно улучшили обучающую и когнитивную функцию мышей SAMP8.

По сравнению с группой GCs, функция обучения и памяти мышей в группе GCs + F и группе GCs + ICI была значительно снижена. Результаты вестерн-блоттинга и RT-PCR показали, что уровень экспрессии BDNF, SYN и PSD－95 был значительно повышен на уровне белка и уровне генов в группе GC по сравнению с группой Model ( P ＜ 0． {{ 11}}5) ． Уровень экспрессии SYN был повышен в группе GCs+F и GCs+ICI, а уровни экспрессии BDNF и PSD－95 были значительно снижены в группе GCs+F и GCs+ICI по сравнению с группой GCs (P＜0．05). ．

Вывод: GC могут специфически опосредовать AＲ для усиления синаптической пластичности у мышей SAMP8, что, в свою очередь, улучшает обучаемость и когнитивные функции.

КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА:Общие цистанозиды; рецептор андрогена; Синаптическая пластичность; Мыши SAMP8

Добавка Цистанхе Улучшение когнитивных функций Пищевая добавка PhGs75% Ech 30% Act 12%

Болезнь Альцгеймера(AD) является распространеннымневрологическое дегенеративное заболевание, клинически характеризующееся прогрессирующим снижением когнитивных функций и изменением психического и психологического статуса [1]. Исследования показали, что уровень тестостерона у мужчин, больных AD, значительно ниже, чем у нормальных мужчин.

когнитивные функции пациентовбыло улучшено в разной степени послекетоновая заместительная терапия[2], что указывает на то, что возрастное снижение уровня андрогенов может быть фактором риска развития АД у пожилых мужчин.

Общие гликозиды Cistanche Deserticola (общие цистанозиды, GC) являются одним из основных экстрактов Cistanche Deserticola, который может улучшить обучение икогнитивная дисфункция[3]. Кроме того, введение ГК через зонд значительно повышало уровень тестостерона у животных [4]. GC также выполняют функцию продвижения Ян и могут оказывать

Андрогеноподобные фармакодинамические эффекты. Предыдущие исследования показали, что тестостерон может улучшить обучающие и когнитивные функции у животных модели AD, и этот процесс зависит от специфического рецептора андрогена (андрогенового рецептора, AR) [5].

Хорошо известно, что когнитивная дисфункция у пациентов с БА тесно связана с синаптической пластичностью. Однако конкретный механизм, с помощью которого GC регулируют синаптическую пластичность и тем самым улучшают обучающие и когнитивные функции, до сих пор неясен. Это исследование было направлено на изучение того, опосредуют ли ГК специфическую ARＲ, влияющую на синаптическую пластичность и тем самым улучшающую обучение и когнитивные функции при болезни Альцгеймера.

1 Материалы и методы

1.1 Экспериментальные животные и оборудование

Самцы мышей SAMP8 в возрасте 3-месячного возраста были приобретены в Медицинской школе Пекинского университета (SCXK [Пекин] 2016-0010) и выращивались до тех пор, пока им не исполнилось 7 месяцев. Животные содержались в чистой среде при температуре (24 ± 1) град.

Животным обеспечивалось естественное освещение, свободный доступ к пище и воде, оказывалась гуманитарная помощь в соответствии с принципами 3R использования экспериментальных животных. Данное экспериментальное исследование было одобрено Комитетом по этике экспериментальных животных Медицинского колледжа Баотоу (Медицинский колледж Баотоу № 20201102).

Основными реагентами в эксперименте являются:Общие гликозиды Cistanche Deserticola(ГК, Сиань Циюань Биологическая Компания, Лтд.); антагонист андрогенных рецепторов-флутамид (Sigma Company, США); антагонист эстрогеновых рецепторов-фулвестрант (ICI 182780, США) Med Chem Express); Кроличьи антитела против мышиного BDNF,

антитело PSD-95, антитело SYN, антитело к актину (Proteintech Company, США); раствор для электрофореза белков, раствор для переноса белков, TEMED, акриламидный буфер, персульфат аммония, Трис (Beijing Solebao Technology Co., Ltd.); Набор для синтеза кДНК, количественное обнаружение флуоресценции талантов

Набор реагентов (Tiangen Biochemical Technology Co., Ltd.) и т. д. Основное экспериментальное оборудование включает в себя резервуар для электрофореза с вертикальной пластиной, аппарат для электрофореза, переносной резервуар, обесцвечивающий шейкер (Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd.), систему анализа изображений белкового геля. (Shanghai Tanon Technology Co., Ltd.), прибор для количественной флуоресцентной ПЦР в реальном времени (США Roche) и т. д.

1. 2 Группировка и администрирование

Две мыши умерли естественным путем во время процесса кормления, а оставшиеся 78 мышей были случайным образом разделены на модельную группу, группу GC, группу GC + флутамид (F), группу GC + фулвестрант (ICI), группу F, ICI.

Группы по 13 животных в каждой. За исключением модельной группы, группы F и группы ICI, остальным группам непрерывно вводили ГК в дозе 50 мг/(кг·сут) в течение 30 дней.

С 24-го дня после введения ГК группе ГК + флутамид (Ф) и группе ГК + фулвестрант (ИКИ) внутрибрюшинно вводили F (5 мг/кг/сут) через 30 минуты после введения ГК. через зонд. ), ICI (1 мг/кг/сут), непрерывная инъекция в течение 7 дней. Отрегулируйте концентрацию дозирования, чтобы гарантировать, что максимальный объем желудка мышей составляет 0,5 мл, 1 раз/сут.

1. Тест 3 водного лабиринта Морриса

Мыши адаптировались к водной среде за сутки. Водный лабиринт Морриса длился 6 дней. Первые 5 дней были тестами на позиционирование и навигацию. Мышей обучали один раз в день в каждом из четырех квадрантов по 1 минуте каждый раз. Каждый интервал тренировки составлял 15 минут, а рекорды записывались в одно и то же время. Задержка убегания при тесте позиционирования и навигации животного; на 6-й день вытащите платформу из воды и проведите испытание на освоение космоса. Запишите количество пересечений платформы и процент времени, проведенного в целевом квадранте мыши. целевой квадрант) и траектория пространственного исследования плавания (Траектория плавания теста пространственного зонда) и другие показатели.

1. 4 Вестерн-блоттинг

Экспрессия белков, связанных с синапсами SYN, PSD-95 и BDNF. После теста в водном лабиринте Морриса всем мышам вводили анестезию, их головы обезглавливали, мозг удаляли, а гиппокамп отделяли. Ткань гиппокампа подвергали лизису белка, разрушали ультразвуком при 4 градусах, оставляли на льду на 30 минут и центрифугировали при 12 000 об/мин в течение 15 минут при 4 градусах. Отбирали супернатант и измеряли концентрацию белка методом BCA. После загрузки белка выполняют штабелирующий гель-электрофорез при постоянном напряжении 80 В, разделительный гель-электрофорез при постоянном напряжении 120 В и влажный перенос при постоянном потоке 300 мА; выньте мембрану из ПВДФ, заблокируйте ее 5% обезжиренным молоком на 80 минут при комнатной температуре и трижды промойте мембрану TBST. 15 мин/время, первичное антитело инкубировали в течение ночи на шейкере при 4 градусах; на следующий день мембрану промывали 3 раза TBST.

15 мин/время, вторичное антитело инкубировали при комнатной температуре в течение 2 часов, затем осуществляли проявление цвета ECL и визуализацию осуществляли с помощью системы хемилюминесцентной визуализации. -актин использовали в качестве внутреннего эталона, а значение оптической плотности полосы анализировали с использованием программного обеспечения Image J.

1. 5ＲRT－PCRＲдетектирование

Экспрессию мРНК SYN, PSD-95 и BDNF экстрагировали из тотальной РНК ткани гиппокампа методом экстракции Trizol, а кДНК генерировали после обратной транскрипции. Для количественного определения относительной флуоресценции использовали набор для количественного обнаружения флуоресценции Talent. Эксперимент повторяли три раза, и результаты конвертировали в 2 - ΔΔCT и анализировали. Мышиные праймеры -актин, SYN, PSD-95 и BDNF были разработаны Shanghai Sangon Company, а последовательности праймеров показаны в Таблице 1.

1.6 Статистический анализ

Через SPSS 25. Статистическое программное обеспечение 0 для обработки, программное обеспечение Graphpad Prism 8 использовалось для построения статистических графиков, а однофакторный дисперсионный анализ использовался для сравнения попарных средних значений нескольких образцов. Р < 0. 05 означает, что разница статистически значима.