Какую роль играют активные ингредиенты Cistanche Tubulosa в развитии болезни Альцгеймера?

JIANHUA YANG1*, BOWEI JU1,2*, YAO YAN1, HUANHUAN XU1, SHANSHAN WU1, DANDAN ZHU1, DANDAN CAO1 и JUNPING HU2

Абстрактный.Настоящее исследование было направлено на изучение нейропротекторных эффектовфенилэтаноидные гликозиды(PhGs) на H2O2- и -амилоидный пептид (A )1-42-индуцированное повреждение клеток PC12 в качестве модели in vitroБолезнь Альцгеймера (ОБЪЯВЛЕНИЕ). Оптимальные условия индукции были установлены путем скрининга различных времен инкубации и концентраций. Клетки PC12 обрабатывали 0,5 мкМ A 1-42 и H2O2 в присутствии PhG в течение 24 ч, а затем оценивали жизнеспособность клеток с помощью анализа МТТ; Также измеряли высвобождение лактатдегидрогеназы (ЛДГ) и содержание малонового диальдегида (МДА). Оптимальные условия для созданияОБЪЯВЛЕНИЕМодель представляла собой обработку клеток PC12 0,5 мкМ A 1-42 в течение 48 ч или 25 мкМ H2O2, растворенных в DMEM с PBS. ФГ в концентрациях 5, 25 и 50 мкг/мл повышали жизнеспособность и снижали высвобождение ЛДГ и МДА клетками РС12, поврежденными A 1-42 или H2O2. В заключение, модель A 1-42- и H2O2-индуцированного повреждения клеток PC12 была успешно установлена. Было показано, что PhG обладают значительным нейропротекторным эффектом против повреждения клеток, вызванного A 1-42- или H2O2-.

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Cistanche tubulosa имеет много эффектов, нажмите здесь, чтобы узнать больше

Введение

Болезнь Альцгеймера (ОБЪЯВЛЕНИЕ), нейродегенеративное заболевание с клиническими характеристиками прогрессирующей потери памяти и нарушения когнитивных функций (1), является наиболее частой причиной деменции во всем мире (2). Финансовые затраты огромны из-за распространенности AD (3). Следовательно, необходимо срочно разработать соответствующие средства для управления и предотвращенияОБЪЯВЛЕНИЕ.

ПатогенезОБЪЯВЛЕНИЕтесно связан с накоплением нейрофибриллярных клубков и сенильных бляшек (СП) в пораженных областях головного мозга (4,5). Сообщалось, что амилоидный пептид (А), основной компонент СП, играет причинную роль в прогрессированииОБЪЯВЛЕНИЕтак как оказывает токсическое действие на нейрональные клетки (6). Фрагменты A, включая A 1-40, A 25-35 и A 1-42, были получены путем расщепления белка-предшественника амилоида (7). Было обнаружено, что нейротоксичность А 1-42 значительно выше, чем у А 25-35 и А 1-40, а А 1-42 способен вызыватьОБЪЯВЛЕНИЕмодель (1,8-10). Окислительный стресс может быть вовлечен в патогенезОБЪЯВЛЕНИЕи является основным механизмом, лежащим в основе А-индуцированной нейротоксичности (11-13). Несколько исследований показали, что A 1-42 вызывает внутриклеточное накопление активных форм кислорода (АФК), что приводит к окислению липидов и белков, повреждению ДНК и активации передачи сигналов контрольных точек клеточного цикла (1,14,15). Чрезмерное количество H2O2 может привести к окислительному повреждению и вызвать апоптоз клеток PC12 (16). Следовательно, воздействие на окислительный стресс может быть многообещающим подходом для разработки терапевтических стратегий для ингибирования А-индуцированной нейротоксичности при БА.

Херба (Х.)Цистанхе, китайское растительное лекарственное средство, обычно используемое в материковом Китае для питания почек и восполнения эссенции и крови, использовалось для лечения потери памяти и старческих запоров (17). Фенилэтаноидный гликозид (PhG), один из основных компонентов H.Цистанхе, улучшает нарушение апоптоза нейронов, вызванное A 25-35, благодаря его антиоксидантному действию (18,19). Предыдущее исследование выявило пять основных компонентов от общего числа PhG, а именно:актеозид, 2'-ацетилактеозид,эхинакозид, цистанозиды и изоактеозиды (20). Среди этих компонентовактеозида такжеэхинакозидСообщалось, что они обладают нейропротекторным действием при нейротоксичности, вызванной A 25-35- или H2O2- (21-23). Например, Wu et al (24) предположили, что актеозид иэхинакозид

Ключевые слова:фенилэтаноидгликозиды, клетки PC12, H2O2, -амилоидный пептид1-42, нейропротекция,цистанхе

материалы и методы

Приготовление ФГ. Всего PhG были извлечены из H.Цистанхекак описано ранее (25). Высушенный на воздухе стебель H.Цистанхеизмельчали ​​в порошок и экстрагировали путем перколяции с 80% EtOH. Перколат выпаривали при пониженном давлении с последующим ресуспендированием в соответствующем количестве H2O2 (1{{2{0}}0 мкмоль/л). Смесь выделяли на колонке с макропористой смолой SP-825 (Mitsubishi Chemical, Токио, Япония) и элюировали 0, 30, 50, 70 и 90% EtOH в воде. Для получения богатой PhG фракции элюенты с содержанием 30-50% EtOH концентрировали и сушили при пониженном давлении. Ультрафиолетовую (УФ) спектрофотометрию проводили для определения общего количества PhG. Содержание эхинакозида и актеозида определяли с помощью жидкостной хроматографии высокого давления в соответствии с предыдущим протоколом (26). Использовали колонку Hypersil ODS-2 (4,6x250 мм, 5 мкм; Dalian Elite Analytical Instruments, Co., Ltd., Далянь, Китай) и поддерживали ее при комнатной температуре. Подвижными фазами были метилцианиды и вода, содержащая 0,4% фосфорной кислоты (об./об.; Sigma-Aldrich; Merck KGaA, Дармштадт, Германия). Скорость потока составляла 0,75 мл/мин, а длина волны была установлена ​​на 333 нм.

Культура клеток и медикаментозное лечение. Линия клеток феохромоцитомы крысы PC12 была предоставлена ​​доктором Хэ Чунхуи из Медицинской школы Синьцзянского медицинского университета (Урумчи, Китай). Клетки культивировали в модифицированной Дульбекко среде Игла с высоким содержанием глюкозы (DMEM; Thermo Fisher Scientific, Inc., Уолтем, Массачусетс, США), содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки (Sangon Biotech Co. Ltd., Шанхай, Китай). , 100 ЕД/мл пенициллина и 100 ЕД/мл стрептомицина в инкубаторе при 37°C, содержащем 5 процентов CO2 и 95 процентов воздуха. При достижении 80-процентного слияния клетки обрабатывали 0,25-процентным раствором трипсина и пассировали.

Чтобы исключить влияние самого препарата на рост клеток РС12, был проведен эксперимент по токсичности. Вкратце, клетки PC12 (3x104 клеток/мл) высевали в 96-луночные планшеты по 100 мкл/лунку и инкубировали при 37°C в течение ночи. После удаления супернатанта в контрольную группу добавляли 200 мкл полной DMEM, в то время как клетки экспериментальных групп обрабатывали PhG в различных дозах (5, 25, 50, 75, 100, 125, 150, 175 и 200 мкг/мл). мл). После инкубации клеток при 37°С в течение 48 ч в каждую лунку добавляли по 20 мкл раствора МТТ (Sigma-Aldrich; Merck KGaA). После инкубации в течение 4 ч супернатант удаляли и добавляли по 150 мкл диметилсульфоксида на лунку с последующим перемешиванием в течение 10 мин. Значения оптической плотности (OD) при 490 нм определяли с помощью планшетного считывателя ELISA.

1-42-индуцированное повреждение клеток PC12. Пептид 1-42, приобретенный у Bioss Biotech (Пекин, Китай), растворяли в воде (100 мкг/мл). Затем смесь инкубировали при 37°С в течение 4 дней и хранили при 4°С до использования.

Клетки PC12 высевали в 96-луночные планшеты (3x104 клетки в 100 мкл на лунку). После культивирования в течение 24 ч для прилипания добавляли 5 0 мкл A 1-42 в различных конечных концентрациях (0, 0,25, 0,5, 1, 1,5 или 2 мкМ), растворенных в DMEM без сыворотки, с последующим инкубация в течение 24, 48, 72 или 96 часов. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа МТТ. Оптимальная концентрация A 1-42 была определена как 0,5 мкМ.

Клетки PC12 (3×104 клетки на лунку) обрабатывали различными дозами PhG (0, 0.5, 5, 25 или 50 мкг/мл) в присутствии 0,5 мкМ A 1-42 в течение 24 часов. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа МТТ.

H2O2-индуцированное повреждение клеток PC12. Клетки PC12 высевали в 96-луночные планшеты (3x104 клетки в 100 мкл на лунку). После культивирования в течение 24 ч для прилипания добавляли 100 мкл H2O2 в различных конечных концентрациях (0, 25, 50, 100, 200, 300, 400 и 500 мкМ), растворенных в DMEM с или без PBS (0,01 моль/л), с последующей инкубацией в течение 24 часов. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью анализа МТТ. Оптимальная концентрация H2O2 и растворитель были определены для создания модели AD in vitro.

Клетки PC12 (3×104 клетки на лунку) обрабатывали различными дозами PhG (0, 0,5, 5, 25 и 50 мкМ). После культивирования в течение 24 ч для прилипания клетки РС12 обрабатывали 100 мкл H2O2, растворенной в DMEM с PBS, в присутствии PhG в течение 24 ч. Жизнеспособность клеток оценивали с помощью МТТ-анализа.

Анализ высвобождения лактатдегидрогеназы (ЛДГ). Повреждение клеток оценивали путем измерения активности ЛДГ в супернатанте клеток РС12 с использованием набора ЛДГ в соответствии с протоколом производителя (кат. № 20150604; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute, Nanjing, Китай). Вкратце, бидистиллированная вода, 0,2 мкмоль/мл пировиноградной кислоты, матричный буфер и буфер для кофермента I последовательно добавлялись через 48 ч после обработки лекарственным средством. После инкубации при 37°С в течение 15 мин добавляли 2,4-динитро-фенилгидразин. Затем в каждую лунку добавляли по 250 мкл 0,4 М раствора NaOH. Супернатант собирали после инкубации в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем с помощью устройства для считывания микропланшетов измеряли поглощение при 450 нм.

Измерение малонового диальдегида (МДА). МДА измеряли в супернатанте клеток PC12 с использованием коммерческого набора (каталожный номер 20150604; Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute) в соответствии с протоколом производителя. Вкратце, обезвоженный спирт и другие реагенты добавляли по порядку с последующей инкубацией на водяной бане. при 95°С в течение 40 мин. Смесь центрифугировали при 1006×g и 25°C в течение 10 мин после охлаждения. Затем супернатант использовали для определения содержания МДА. Затем измеряли поглощение с помощью устройства для считывания микропланшетов при 532 нм.

Оценка защитных эффектов эхинакозида и актеозида против АтД in vitro. Клетки PC12 высевали с плотностью 3×104 клеток/лунку в 96-луночные планшеты (100 мкл/лунку). Клетки инкубировали с препаратами, включая эхинакозид (номер по каталогу 111670-200503; Национальные институты по контролю за продуктами и лекарствами, Пекин, Китай) и ацетонид (номер по каталогу 111530-200505; Национальные институты по контролю за продуктами и лекарствами). ) в различных концентрациях (0,5, 25 и 50 мкг/мл). Затем клетки обрабатывали A 1-42 или H2O2 в течение 24 ч и измеряли жизнеспособность клеток с помощью МТТ-анализа.

Статистический анализ. Значения выражены как среднее значение ± стандартное отклонение. Для межгрупповых сравнений использовали t-критерий Стьюдента. Статистический анализ проводили с использованием SPSS 18.0 (SPSS, Inc., Чикаго, Иллинойс, США). п<0.05 was="" considered="" to="" indicate="" a="" statistically="" significant="">

Полученные результаты

Количественное определение PhG из H. Cistanches. УФ-спектрыPhGэкстрагированные, а также стандартные растворыэхинакозида такжеактеозидбыли записаны, и результаты показали, что УФ-спектры были согласованными (рис. 1). УФ-спектрофотометрия

показали, что содержание PhG составило 87,6%. Результаты ВЭЖХ показали, что содержание эхинакозида и актеозида составляло 37,7 и 17,8% соответственно (рис. 2).

Определение идеальной концентрации PhG. По сравнению с контрольной группой PhG в дозах 75, 100, 125, 150, 175 и 200 мкг/мл оказывал значительное ингибирующее действие на клетки PC12 (P<0.05), while="" phg="" at="" 5,="" 25="" and="" 50="" µg/ml="" showed="" low="" toxicity="" on="" pc12="" cells,="" and="" the="" cell="" viability="" was="">80 процентов (рис. 3). Таким образом, ФГ в концентрации 5, 25 и 50 мкг/мл использовали для обработки клеток РС12 в последующих экспериментах, поскольку они не влияли на жизнеспособность клеток.

1-42-индуцированное повреждение клеток PC12. По сравнению с контрольной группой жизнеспособность клеток в группе с травмой 0,5 мкМ A 1-42 составила 63 процента (P<0.05). the="" cell="" viability="" was="" decreased="" by="" aβ1-42="" in="" a="" concentration-dependent="" manner,="" and="" the="" viability="" was=""><50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups="" (fig.="" 4).="" thus,="" treatment="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" in="" vitro="" ad="">

Также определяли активность клеток РС12, обработанных 0,5 мкМ А 1-42 в присутствии безопасных доз ФГ (5, 25 и 50 мкг/мл) в течение 24 ч. По сравнению с модельной группой (P<0.01), phgs="" showed="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" rescued="" by="" phgs="" in="" a="" dose-dependent="" manner="" (fig.="">

H2O2-индуцированное повреждение клеток PC12. Жизнеспособность клеток PC12, обработанных 25 мкМ H2O2, растворенной в DMEM с PBS, составила 56,43%. Жизнеспособность клеток PC12, обработанных 200 мкМ H2O2, растворенной в DMEM без PBS, составила 71,64% (табл. I). Таким образом, клетки PC12, обработанные 25 мкМ H2O2, растворенными в DMEM с PBS, были выбраны в качестве оптимальных условий для создания модели БА.

По сравнению с контрольной группой жизнеспособность клеток в модельной группе составила 48,8% (P<0.05). compared="" with="" the="" model="" group,="" phgs="" had="" a="" significant="" neuroprotective="" effect="" on="" pc12="" cells.="" the="" cell="" viability="" was="" dose-dependently="" increased="">

PhG, а жизнеспособность клеток PC12, обработанных PhG в концентрациях 5, 25 и 50 мкг/мл, составила 54, 57 и 64% соответственно (табл. II).

PhG ингибируют вызванное повреждением высвобождение ЛДГ клетками PC12. По сравнению с контрольной группой содержание ЛДГ в супернатанте поврежденных клеток PC12 было увеличено, что ингибировалось PhG в зависимости от концентрации. Этот результат показал, что PhG обладают значительным нейропротекторным действием на клетки PC12 (рис. 6).

Таблица I. Жизнеспособность клеток (в процентах) после обработки H2O2.

Таблица 2. Жизнеспособность клеток после вмешательства лекарств.

ингибируется PhG в зависимости от концентрации. Этот результат показал, что PhG обладают значительным нейропротекторным действием на клетки PC12 (рис. 7).

PhG и его компоненты эхинакозид и актеозид восстанавливают жизнеспособность поврежденных клеток PC12. По сравнению с модельной группой лечение актеозидом значительно повышало жизнеспособность 1-42-поврежденных клеток PC12 дозозависимым образом. PhG и эхинакозид также значительно повышали жизнеспособность клеток PC12, поврежденных A 1-42-, при всех испытанных концентрациях (фиг. 8A).

**P<0.05, vs.="" model="" group.="" aβ,="" â-amyloid="" peptide;="" phgs,="" phenylethanoid="" glycosides;="" ech,="" echinacoside;="" as,="">

По сравнению с модельной группой актеозид значительно повышал жизнеспособность клеток РС12, обработанных H2O2. ФГ также повышали жизнеспособность клеток РС12, обработанных H2O2, тогда как при концентрациях 5 и 25 мкг/мл эффект был незначительным (рис. 8Б). Кроме того, эхинакозид увеличивал жизнеспособность клеток при 25 мкг/мл.

В заключение, актеозид, PhG и эхинакозид оказывали значительное нейропротекторное действие на клетки PC12, подвергшиеся повреждению A 1-42 или H2O2.

Обсуждение

Окислительный стресс является основным механизмом, лежащим в основе А-опосредованной нейротоксичности при БА (11-13). Таким образом, воздействие на окислительный стресс может представлять собой подход к лечению БА. В настоящем исследовании была успешно создана модель AD in vitro, включающая A 1-42- и H2O2--индуцированное повреждение клеток PC12. Результаты анализов MTT, LDH и MDA показали, что PhG повышали жизнеспособность клеток и снижали высвобождение LDH и MDA клетками PC12, подвергшимися повреждению. Можно сделать вывод, что PhG обладают значительным нейропротекторным действием на клетки PC12.

Чтобы уменьшить влияние самих PhG на рост клеток PC12 и предотвратить аномальную пролиферацию, в скрининговом анализе определяли безопасную дозу PhG. Результаты показали, что PhG в концентрации 75, 100, 125, 150, 175 и 200 мкг/мл оказывали значительное ингибирующее действие на клетки PC12 (P<0.05,><0.01), while="" cell="" viability="" remained="">80 процентов при концентрациях 5, 25 и 50 мкг/мл. Таким образом, ФГ в концентрации 5, 25 и 50 мкг/мл были безопасны для клеток РС12.

На повреждение A {{0}} повлияли определенные факторы, включая растворитель, время инкубации и качество продукта. В настоящем исследовании пептид A 1-42 растворяли в воде (100 мкг/мл) и перед использованием инкубировали при 37°C в течение 4 дней в CO2-инкубаторе. Клетки PC12 обрабатывали A 1-42 в концентрациях 0,5, 1, 1,5 и 2 мкМ. Результаты показали, что жизнеспособность клеток снижалась с увеличением A 1-42, а жизнеспособность<50% in="" the="" 1,="" 1.5,="" and="" 2="" µm="" aβ1-42="" injury="" groups.="" thus,="" treatment="" of="" pc12="" cells="" with="" 0.5="" µm="" aβ1-42="" for="" 48="" h="" was="" determined="" to="" be="" the="" optimal="" condition="" for="" establishing="" the="" ad="" model.="" aβ25-35="" has="" been="" commonly="" used="" to="" establish="" ad="" models="" due="" to="" its="" low="" cost="" and="" simple="" operation="" (27-29).="" the="" neurotoxicity="" of="" aβ1-42="" is="" significantly="" higher="" than="" that="" of="" aβ25-35,="" and="" aβ1-42="" is,="" therefore,="" the="" optimal="" aβ="" fragment="" for="" establishing="" an="" ad="" model="">

H2O2 является окислителем, и избыток H2O2 может вызвать окислительное повреждение и вызвать апоптоз клеток (30). В настоящем исследовании клетки PC12 обрабатывали 25-500 мкМ H2O2, растворенным в DMEM с PBS или без него. Результаты показали, что H2O2, растворенный в DMEM без PBS, вызывает аномальную пролиферацию клеток PC12. Таким образом, обработка клеток PC12 25 мкМ H2O2, растворенной в DMEM с PBS, была оптимальным условием для создания модели БА. Повреждение, вызванное 1-42-а, было больше, чем повреждение, вызванное 2-водой, из-за плохой стабильности H2O2 и эффектов растворителя.

При повреждении клетки утечка ЛДГ в культуральную среду значительно увеличивается. Известно, что АФК вызывают производство МДА. Таким образом, содержание МДА и ЛДГ отражает степень окислительного повреждения. В настоящем исследовании индуцированная повреждением активность ЛДГ и МДА снижалась при увеличении доз ФГ. Эти результаты показали, что PhG оказывает значительное нейропротекторное действие на клетки PC12. Анализ МТТ показал, что PhG проявляют дозозависимый нейропротекторный эффект в отношении клеток PC12.

В заключение, модель AD in vitro, включающая A 1-42- и H2O2--индуцированное повреждение клеток PC12, была успешно создана. Обработка PhG увеличивала жизнеспособность клеток и снижала высвобождение ЛДГ и МДА клетками PC12, обработанными A 1-42 или H2O2. PhG оказывали значительное нейропротекторное действие на повреждение клеток, вызванное A 1-42- или H2O2-.

использованная литература

1. Qu M, Zhou Z, Xu S, Chen C, Yu Z и Wang D: сверхэкспрессия морталина ослабляет вызванную бета-амилоидом нейротоксичность в клетках SH-SY5Y. Мозг Res 1368: 336-345, 2011.

2. Узун С., Козумплик О. и Фолнегович-Смолл В. Деменция при болезни Альцгеймера: обзор текущих данных. Collegium antropologicum 35: 1333-1337, 2011.

3. Брукмейер Р., Джонсон Э., Зиглер-Грэм К. и Арриги Х.М. Прогнозирование глобального бремени болезни Альцгеймера. Болезнь Альцгеймера и деменция 3: 186-191, 2007 г.

4. Кастеллани Р.Дж., Ролстон Р.К. и Смит М.А. Болезнь Альцгеймера. Болезнь в месяц 56: 484-546, 2010 г.

5. Мэтсон М.П.: Пути к болезни Альцгеймера и от нее. Природа 430: 631-639, 2004.

6. Gouras GK, Tsai J, Naslund J, et al: Внутринейрональное накопление A 42 в мозге человека. Американский журнал патологии 156: 15-20, 2000.

7. Shen C, Chen Y, Liu H и др.: Перекись водорода способствует выработке A посредством JNK-зависимой активации -секретазы. Журнал биологической химии 283: 17721-17730, 2008 г.

8. Shih PH и Wu CH, Yeh CT и Yen GC: Защитные эффекты антоцианов против повреждения, вызванного амилоидными пептидами, в клетках Neuro-2A. Журнал сельскохозяйственной и пищевой химии 59: 1683-1689, 2011.

9. Фигейредо С.П., Бикка М.А., Латини А., Предигер Р., Медейрос Р. и Каликсто Дж.Б.: Фолиевая кислота плюс токоферол смягчает амилоид-индуцированную - -нейротоксичность посредством модуляции активности митохондриальных комплексов. Журнал болезни Альцгеймера: JAD 24: 61-75, 2010 г.

10. Дюмон М., Лин М.Т. и Бил М.Ф. Митохондрии и таргетные антиоксидантные терапевтические стратегии для болезни Альцгеймера. Журнал болезни Альцгеймера: JAD 20: S633, 2010.

11. Sonnen JA, Breitner JC, Lovell MA, Markesbery WR, Quinn JF и Montine TJ: Опосредованное свободными радикалами повреждение мозга при болезни Альцгеймера и ее моделях на трансгенных мышах. Свободнорадикальная биология и медицина 45: 219-230, 2008.

12. Лин М.Т. и Бил М.Ф.: Митохондриальная дисфункция и окислительный стресс при нейродегенеративных заболеваниях. Природа 443: 787-795, 2006.

13. Трушина Е. и МакМюррей С. Окислительный стресс и митохондриальная дисфункция при нейродегенеративных заболеваниях. Неврология 145: 1233-1248, 2007.

14. Huang SH, Lin CM и Chiang BH: Защитное действие экстракта дягиля китайского на амилоид-пептид-индуцированную нейротоксичность. Фитомедицина 15: 710-721, 2008.

15. Burhans WC и Heintz NH: Клеточный цикл — это окислительно-восстановительный цикл: связывание специфических для фазы мишеней с судьбой клетки. Свободнорадикальная биология и медицина 47: 1282-1293, 2009.

16. Xue HY, Gao GZ, Lin QY, Jin LJ и Xu YP: Защитное действие аукубина на HO-индуцированный апоптоз в клетках PC12. Фитотерапия

18. Liu, Fx Wang, Xw Luo L и Xin H, Na B и Wang Xf: Влияние гликозидов цистанхе на обучение и память при болезни Альцгеймера, вызванной бета-амилоидным пептидом, у мышей и ее возможный механизм. Китайский фармакологический бюллетень 22: 595, 2006.

19. Bao B, Tang X, Tian H, Tong Y, Wu W и Hong Y: Антиоксидантная активность экстрактов из живущих в пустыне Cistanche tubulosa (Schrenk) R. Wright Shanghai J Tradit Chin Med 44: 68-71, 2010 .

20. Jiang Y, Li S, Wang Y, Chen X, and Tu P: Дифференциация Herba Cistanches по отпечаткам пальцев с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии, детектирования на диодной матрице и масс-спектрометрии. Журнал хроматографии A 1216: 2156-2162, 2009 г.