Амниотические мезенхимальные стволовые клетки человека облегчают ОРВПХ после алло-ТГСК, регулируя взаимодействие между микробиотой кишечника и кишечным иммунитетом
Oct 18, 2023
Абстрактный
Острая реакция «трансплантат против хозяина» (оРТПХ) после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток представляет собой одну из наиболее неприятных проблем. Дисбактериоз кишечной микробиоты может протекать с оРТПХ, а мезенхимальные стволовые клетки (МСК) обладают многообещающим терапевтическим потенциалом при оРТПХ. Однако остается неизвестным, влияют ли hAMSC на микробиоту кишечника во время смягчения РТПХ. Соответственно, мы стремились определить эффекты и основные механизмы человеческих МСК, полученных из амниотической мембраны (hAMSC), регулирующих кишечную микробиоту и кишечный иммунитет при оРТПХ. Создав гуманизированные мышиные модели РТПХ и лечение hAMSC, мы обнаружили, что hAMSC значительно облегчают симптомы РТПХ, обращают вспять иммунный дисбаланс субпопуляций Т-клеток и цитокинов и восстанавливают кишечный барьер. Более того, разнообразие и состав кишечной микробиоты улучшились при лечении hAMSC. Корреляционный анализ Спирмена показал, что существует корреляция между микробиотой кишечника и белками плотных соединений, а также иммунными клетками и цитокинами. Наше исследование показало, что hAMSC облегчают РТПХ, способствуя нормализации микробиоты кишечника и регулируя взаимодействие между микробиотой кишечника и кишечным барьером, а также иммунитетом.
Польза цистанхе для мужчин – укрепление иммунной системы
Ключевые слова
Острая реакция «трансплантат против хозяина» · Амниотические мезенхимальные стволовые клетки · Микробиота кишечника · Кишечный барьер · Кишечный иммунитет
Введение
Основным преимуществом аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток (алло-ТГСК) является мощный противоопухолевый ответ, обусловленный эффектом «трансплантат против лейкоза» (GVL), который запускается распознаванием пептидов, возникающих в результате различий в геномном полиморфизме между пациентом и пациентом. донор. Однако острая реакция «трансплантат против хозяина» (оРТПХ) вращается вокруг развития повреждения тканей реципиента из-за атаки алло-реактивных донорских Т-клеток и представляет собой опасное для жизни серьезное осложнение при аллоТГСК [1, 2]. Сообщается, что микробное заболевание кишечника вызывает воспалительные реакции и коррелирует с воспалительными заболеваниями [3, 4]. Многочисленные исследования показали, что нарушения микробиоты кишечника являются важным фактором, запускающим РТПХ после алло-ТГСК, и становятся новой мишенью для лечения [5, 6]. В частности, дисбактериоз кишечной микробиоты при оРТПХ обычно характеризуется потерей кишечного бактериального разнообразия и ростом условно-патогенных микроорганизмов [6]. При гастроинтестинальной РТПХ нарушенный барьер слизистой оболочки инициирует активацию антигенпрезентирующих клеток хозяина и донорских Т-клеток, что приводит к дифференцировке Т-клеток по патогенному типу-1 и типу-17 парадигм за счет толерогенных регуляторных Т- клеточные структуры [7]. В первую очередь на основе секвенирования 16S рибосомальной РНК (16S рРНК) было показано, что несколько видов кишечной микробиоты связаны с РТПХ, и, например, клостридии, продуцирующие бутират, связаны с поддержанием функции эпителиального барьера и ослаблением острой РТПХ [8]. ]. Мезенхимальные стволовые клетки (МСК) привлекли огромное внимание в последнее десятилетие благодаря их потенциалу самообновления и многолинейной дифференцировки, а также иммуномодулирующим свойствам [9]. Считается, что МСК обеспечивают сбалансированное воспалительное и регенеративное микроокружение поврежденных тканей при наличии сильного воспаления и широко используются для лечения иммунных нарушений, наиболее успешное клиническое применение которых связано с лечением РТПХ [10]. Амниотические мезенхимальные стволовые клетки человека (hAMSC) представляют собой перинатальные стволовые клетки, которые обладают способностью к дифференцировке, подобной эмбриональным стволовым клеткам, и иммуномодулирующими свойствами, подобными взрослым стволовым клеткам. Обладая фенотипами, сходными с типичными МСК, hAMSC стали многообещающим источником стволовых клеток благодаря простоте, неинвазивности и безопасности получения тканей, большому выходу клеток и очень небольшому количеству этических и моральных споров по сравнению со стволовыми клетками из других источников. AMSC человека обладают преимуществами низкой иммуногенности и отсутствия онкогенности, что делает их идеальным источником клеток для клеточной терапии [11, 12]. Эксперименты in vitro подтвердили, что hAMSC проявляют более высокую пролиферативную способность и большую способность к долгосрочному росту, чем МСК костномозгового происхождения [13, 14]. Многочисленные исследования показали, что hAMSC обладают потенциалом для облегчения многих воспалительных заболеваний, включая воспалительные заболевания кишечника, остеоартрит и аутоиммунные заболевания [11]. Наше недавнее исследование показало, что hAMSC улучшают течение РТПХ, регулируя баланс Т-эффекторных и Treg-клеток [15]. Однако влияние и механизм hAMSC на микробные нарушения кишечника при РТПХ неизвестны. Здесь мы стремимся исследовать потенциальное влияние hAMSC на РТПХ, а также на микроэкосистему кишечника. Это будет первое исследование, которое выявит кишечную микробиоту и ее корреляцию с кишечным иммунитетом после лечения оРТПХ с помощью hAMSC.
Материалы и методы
Выделение, культивирование и идентификация hAMSC
hAMSCs экстрагировали, как описано ранее [15]. Клетки третьего пассажа (P3) собирали после идентификации фенотипа путем окрашивания антителами против CD34 (581, BD Pharmingen, США), CD45 (HI30, BD Pharmingen, США), HLA-DR (G46-6, BD Pharmingen, США). , США), CD11b (ICRF44, BD Pharmingen, США), CD90 (5E10, BD Pharmingen, США), CD73 (AD2, BD Pharmingen, США) и CD105 (SN6, bioscience, США), а затем анализировали с помощью проточного цитометра ( BD FACS Canto II). Клетки проверяли на мультилинейную дифференцировку с использованием специфической индукционной среды (BGscience, Китай) и окрашивали Oil Red-O и Alizarin Red для адипогенеза и остеогенной дифференцировки соответственно. Для экспериментов использовали hAMSC в пассажах 3–6.
цистанхе трубчатой – улучшает иммунную систему
Коллекция человеческих PBMC
Образцы плазмы были получены от здоровых добровольцев с письменного информированного согласия. Мононуклеарные клетки периферической крови человека (РВМС) выделяли из периферической крови центрифугированием плотности Ficoll-Hypaque (Тяньцзинь Хаоян, Китай), промывали PBS, суспендировали в буфере для лизиса красной крови (Solarbio, Китай) при 4 градусах в течение 15 мин. Снова промойте, а затем приостановите в PBS для инъекции в хвостовую вену мышам NPG.
Мыши
Мыши мужского и женского пола NPG в возрасте 8–10 недель и массой 25–30 г были приобретены у компании Beijing Vitalstar Biotechnology Co., Ltd. и выращивались в условиях SPF при 12-часовом цикле света и темноты с постоянной температурой и влажностью. Все процедуры на животных были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Южного медицинского университета (№ L2019132) в соответствии с Руководством Национального совета по здравоохранению и медицинским исследованиям Китая по экспериментам на животных.
Модель и лечение острой РТПХ на животных
Мышиная модель aGVHD была создана, как описано ранее [15]. Для лечения 5×105 hAMSC на мышь (в данном случае группа hAMSC) и PBS (в данном случае группа aGVHD) вводили через хвостовую вену каждой мыши на третий день после трансплантации. Во всех моделях мышей каждые два дня проверяли на заболеваемость и изменения веса. Каждую мышь оценивали по патологическим признакам, включая потерю веса, сгорбленную позу, взъерошенную шерсть, поражения кожи, снижение подвижности и диарею, а затем классифицировали в соответствии с клинической системой оценки РТПХ, адаптированной на основе той, которая первоначально была описана Куком [16]. В некоторых случаях мыши в группе оРТПХ страдали тяжелой формой оРТПХ, а мышей в группе чАМСК на третий день после лечения умерщвляли для сбора периферической крови и органов-мишеней, включая печень, селезенку, легкие и кишечник. Фекалии этих мышей собирали перед умерщвлением.
HAMSC, меченные GFP, и отслеживание in vivo
HAMSC, меченные GFP, были созданы и идентифицированы, как описано ранее [15]. Короче говоря, мы трансфицировали ген белка зеленой флуоресценции (GFP) в hAMSC, используя лентивирус в качестве вектора. 5×105 меченных GFP hAMSC, суспендированных в 500 мкл PBS, вводили мышам с РТПХ через хвостовую вену. Через 24 и 72 часа мышей подвергали эвтаназии для сбора кишечника, а затем получали замороженные срезы. Для различения клеток-реципиентов использовали контрастное окрашивание DAPI.
Гистопатологическая оценка
Органы-мишени РТПХ собирали во время вскрытия и затем обрабатывали до залитых в парафин блоков для получения срезов толщиной 5- мкм для окрашивания гематоксилином и эозином (H&E). Гистологическую оценку оценивали на основании разрушения тканевой структуры и инфильтрации лимфоцитов [17]. Для иммуногистохимии срезы депарафинизировали, регидратировали и обрабатывали 3% H2O2 в метаноле в течение 20 минут для инактивации активности эндогенной пероксидазы. Затем срезы подвергали извлечению антигена и обрабатывали сывороточным альбумином в течение 1 часа. Затем срезы инкубировали с кроличьими антителами против CD45 человека (EP322Y, Abcam, Англия) или антителами ZO-1 ((EPR19945-296, Abcam, Англия) в течение 1 часа при 37 градусах. антитела выявляли с помощью вторичного антитела, конъюгированного с HRP (Genentech, США), и визуализировали с помощью DAB. Положительную область анализировали с помощью Image J.
растение цистанхе, повышающее иммунную систему
Секвенирование 16S рРНК фекальной микробиоты
Геномную ДНК фекалий экстрагировали из 0,1 г замороженных образцов фекалий с использованием набора ДНК стула EZNA® (Omega BioTek, Норкросс, Джорджия, США) в соответствии с протоколом производителя. Используя геномную ДНК в качестве матрицы, для амплификации использовали специфические праймеры (338F: 5'-ACTCCTACGGGAGGCAGCA-3' и 806R: 5'-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3') со штрих-кодами и PremixTaq (TaKaRa, Китай). гипервариабельные участки V3-V4 бактериального гена 16S рРНК. После амплификации и очистки весь геном образца секвенировали на платформе высокопроизводительного секвенирования Illumina Hiseq или Miseq компании Magigene Technology Co., Ltd. (Гуанчжоу, Китай) для получения необработанных данных в формате FASTQ. Анализ данных последовательностей в основном проводился с использованием платформы Magichand.
Проточный цитометрический анализ
Органы-мишени оРТПХ и периферическую кровь мышей получали и готовили в виде одноклеточной суспензии. Клетки окрашивали моноклональными антителами против CD3 (UCHT1, Biolegend, США), CD4 (RPA-T4, Invitrogen, США), CD8 (RPA-T8, Biolegend, США), CD25 (BC96, Biolegend, США) или совпадающих по изотипу. контроль IgG (eBioscience, США) в течение 30 мин при комнатной температуре в темноте. Затем клетки обрабатывали лизирующим буфером (BD Pharm Lyse™) при 4 градусах в темноте в течение 15 минут. Внутриклеточное окрашивание Foxp3 (236A/E7, Invitrogen, США) проводили в соответствии с рекомендациями производителя (Fixation/Permeabilization Solution Kit; eBioscience). Затем проводили полихроматический проточный цитометрический анализ на проточном цитометре.
Количественное определение цитокинов
Уровни цитокинов в сыворотке и тканевом супернатанте мышей определяли с использованием набора цитокинов Cytometric Bead Array (CBA) Human Th1/Th2/Th17 (BD Pharmingen, США) согласно инструкции производителя. Вкратце, 50 мкл каждого из образцов надосадочной жидкости инкубировали с 50 мкл смешанных шариков для захвата цитокинов Th1/Th2/Th17 человека и 50 мкл PE-реагента для обнаружения Th1/Th2/Th17 человека при комнатной температуре в темноте, а затем суспендировали. для анализа проточной цитометрии через 3 часа.
Количественная ПЦР в реальном времени
Тотальную РНК экстрагировали из ткани толстой кишки мышей после выделения с использованием реагента Trizol (TaKaRa, Китай). Тотальную РНК использовали в качестве матрицы для обратной транскрипции кДНК. -актин использовался в качестве внутреннего эталона. Экспрессию мРНК измеряли методом кПЦР с использованием следующих праймеров: ZO-1-F, 5'-ACCACCAACCCGAGAAGAC-3' и ZO- 1-R, 5'-CAGGAGTCATGGACGCACA-3. '; Окклюдин-F, 5'-TTGAAAGTCCACCTCCTTACAGA-3' и ОкклюдинR, 5'-CCGGATAAAAAGAGTACGCTGG-3'; -актин-F, 5'-GGCTGTATTCCCCTCCATCG-3' и -актин-R, 5'-CCAGTTGGTAACAATGCCATGT-3'. Метод 2-ct использовался для измерения уровней экспрессии РНК.
Иммуноферментный анализ (ИФА)
Уровни D-LA и DAO в плазме измеряли с помощью наборов ИФА (Jingmei, Китай) согласно инструкциям производителя. Вкратце, собранные супернатанты плазмы помещали в 96-луночные планшеты, покрытые специфичными антителами, соответственно. Поглощение регистрировали при 450 нм с использованием микропланшетного считывателя (Multiskan MK3, Thermo Fisher Scientific).
Статистический анализ
Данные были представлены как среднее ± SD. t-критерий независимых выборок был выполнен и визуализирован с помощью GraphPad Prism8.0. Анализ данных секвенирования 16S рРНК проводили с использованием платформы Magichand (http://cloud.magigene (на английском языке)ком/). Корреляционный анализ между микробиотой кишечника и иммунитетом проводился с помощью пакетов R (v3.6.3) для отображения корреляционной матрицы. P-значения<0.05 were considered statistically significant. * p<0.05, ** p<0.01, *** p<0.001, **** p<0.0001, n.s. not signifcant.
Полученные результаты
Идентификация hAMSC
hAMSC в культуре демонстрировали полигональную или фибробластоподобную морфологию (рис. 1А) и были строго положительными в отношении поверхностной экспрессии специфичных для МСК маркеров CD90, CD105 и CD73, но отрицательными в отношении CD34, CD45, HLA-DR и CD11b (рис. 1С). Что касается мультилинейной дифференцировки, наши результаты показали, что hAMSC демонстрируют адипоцитарную и остеобластную дифференцировку (рис. 1B).
hAMSC значительно облегчают симптомы оРТПХ у мышей
Сначала мы оценили терапевтический эффект hAMSC на РТПХ. По сравнению с группой с РТПХ, hAMSC значительно улучшали РТПХ, о чем свидетельствует заметное снижение потери веса (рис. 2B) и снижение клинической оценки РТПХ (рис. 2C). Кроме того, группа hAMSC имела значительно более высокую выживаемость по сравнению с мышами aGVHD (рис. 2D). Патолого-гистологический анализ показал, что оРТПХ вызывает тяжелое повреждение тканей и лейкоцитарную инфильтрацию. hAMSC, как продемонстрировало H&E, ослабляют разрушение тканей и инфильтрацию экзогенных Т-клеток в органах-мишенях РТПХ (рис. 2E). Соответственно, результаты ИГХ также подтвердили, что hAMSC улучшают аномальные патологические проявления (рис. 2F). Эти результаты позволили предположить, что hAMSC обладают потенциалом для облегчения симптомов РТПХ у мышей с РТПХ.
hAMSC влияют на иммунитет хозяина у мышей с РТПХ
Чтобы понять основные иммуномодулирующие механизмы, с помощью которых hAMSC снижают РТПХ, мы измерили активацию и расширение Т-клеток в периферической крови и органах-мишенях. Анализ проточной цитометрии показал, что hAMSC заметно ингибируют количество CD3+CD4+T и CD3+CD8+T-клеток в крови и органах-мишенях (рис. 3A, Б). При этом доля CD4+CD25+Foxp3+Treg в крови и органах-мишенях мышей в группе чАМСК была достоверно выше, чем в группе оРТПХ (рис. 3В). . Затем мы исследовали влияние hAMSC на профиль цитокинов (рис. 4). Введение hAMSC приводило к очевидному снижению уровней IL-17A, IFN-, TNF, IL-6 и IL-2 в органах-мишенях и крови по сравнению с таковыми в группе с РТПХ, за исключением уровня TNF в селезенке. Между тем, в дополнение к уровням IL-10 в печени, у мышей, получавших hAMSCs, наблюдались существенно повышенные уровни IL-10 и IL-4 в органах-мишенях и крови. В совокупности hAMSC играют защитную роль при РТПХ, обращая вспять иммунный дисбаланс субпопуляций Т-клеток и цитокиновый шторм.
Преимущества цистанхе трубчатой-укрепить иммунную систему
Нажмите здесь, чтобы просмотреть продукты Cistanche Enhance Immunity
【Запросить дополнительную информацию】 Электронная почта:cindy.xue@wecistanche.com / Whats App: 0086 18599088692 / Wechat: 18599088692
hAMSC уменьшают повреждение кишечного барьера у мышей с РТПХ
Чтобы выяснить, могут ли hAMSC восстанавливать кишечный барьер при РТПХ, мы сначала наблюдали, могут ли hAMSC мигрировать в кишечник. Как показано на рис. 5А, hAMSC, меченные GFP, обнаруживались в кишечнике после инъекции в hAMSC и могли приживляться и инфильтрироваться в кишечнике. Затем мы разработали гистопатологическую оценку ткани тонкого кишечника. В группе с РТПХ кишка была эрозирована и некротизирована, ворсинки кишечника были явно разрушены, ворсинки были сломаны, а массивные лейкоциты инфильтрировали слизистую, подслизистую оболочку и собственную пластинку кишечника. Кишечные ворсинки располагались регулярно, после обработки hAMSC не наблюдалось разрыва кишечных ворсинок или отслойки ворсинчатого эпителия (рис. 5Б). Инфильтрация лимфоцитов человека также наблюдалась с помощью иммуногистохимии в кишечнике в группе РТПХ, тогда как обработка hAMSC могла уменьшить их инфильтрацию (рис. 5В). Чтобы оценить защитное действие hAMSC на целостность слизистой оболочки кишечника, мы провели иммуногистохимию для выявления влияния на ZO-1. В группе лечения hAMSC уровень экспрессии белка плотного соединения ZO-1 был значительно повышен по сравнению с группой aGVHD (рис. 5D). Мы также исследовали уровни экспрессии мРНК белков плотных соединений кишечника (TJ) и уровни D-молочной кислоты (D-LA) и диаминоксидазы (DAO) в плазме, чтобы определить барьерную функцию кишечника и кишечную проницаемость. При внутривенном введении hMASC могут значительно повышать уровни экспрессии мРНК ZO-1 и окклюдина, ключевых белков TJ (рис. 5E, F), одновременно снижая уровни D-LA и DAO (рис. 5G, ЧАС). Следовательно, при возникновении оРТПХ кишечный барьер повреждается с уменьшением количества белков плотных контактов кишечника и увеличением кишечной проницаемости. Между тем, hAMCS могут заметно обратить вспять нарушение кишечного барьера.
Рис. 1. Фенотипическая и функциональная характеристика hAMSC. (А) Репрезентативные микрофотографии hAMSC от пассажа 0 до 3 (без окрашивания, 100×). (B) Способность к мультилинейной дифференцировке SCs hAM. Адипогенную дифференцировку hAMSC (слева) окрашивали Oil Red-O, а остеобластную дифференцировку hAMSC (справа) окрашивали ализарином красным (окрашивание, 100×). (C) Проточно-цитометрический анализ, показывающий, что hAMSC положительные по CD90, CD105 и CD73, но отрицательные по CD34, CD45, CD11b и HLA-DR.
Рис. 2. hAMSC облегчают РТПХ у мышей NPG. (A) Схематическая диаграмма, иллюстрирующая график введения hAMSC в мышиных моделях РТПХ. (B) Изменения массы тела в разных группах (n=10). (C) клиническая оценка aGVHD (на основе потери веса, сгорбленной позы, рыжего меха, поражений кожи, снижения подвижности и диареи) в разных группах (n=10). (D) Выживание среди разных групп (n=10). (E) Репрезентативные микроскопические фотографии окрашивания H&E (400×) и гистологической оценки (на основе разрушения структуры тканей и инфильтрации лимфоцитов) (n=4). (F) Репрезентативные микроскопические снимки иммуногистохимии (400×) и доля положительной области CD45 (n=4). Значения были представлены как среднее ± стандартное отклонение.
Рис. 3. hAMSC ингибируют экспансию донорских Т-клеток, одновременно усиливая генерацию или экспансию Treg in vivo. (A) Анализ методом проточной цитометрии CD3+CD4+Т-клеток(n=6), (B) Анализ методом проточной цитометрии CD3+CD8+ Т-клетки (n=6), (C) Анализ методом проточной цитометрии CD4+CD25+Foxp3+Treg (n=6). Значения были представлены как среднее ± стандартное отклонение.
Рис. 4. hAMSC снижают уровень провоспалительных цитокинов IL-17A, IFN-, TNF, IL-6, IL-2 и повышают уровень противовоспалительных цитокинов IL-10 и IL. -4 in vivo (n=5). Значения были представлены как среднее ± стандартное отклонение.
Изменения микробиоты кишечника после лечения hAMSC у мышей с РТПХ
Секвенирование 16S рРНК проводили на ДНК фекальных бактерий, выделенных от разных групп мышей. Индексы -разнообразия, включая индексы OUT, Chao1 и Шеннона, проявляли схожие тенденции, а мыши, получавшие лечение hAMSC, имели микробиоту со значительно более высоким -разнообразием по сравнению с группой aGVHD (рис. 6A). Анализ главных координат (PCoA), основанный на расстоянии Un взвешенной унифракты, манхэттенском расстоянии и метрическом расстоянии Брея-Кертиса, дал разрозненные точки данных на графиках двух групп, несмотря на то, что разница была незначительной (рис. 6B). Впоследствии мы оценили ландшафт кишечной микробиоты для дальнейшего изучения потенциальной разницы в составе между двумя группами. Всего было подсчитано 773 OTU, причем в группе hAMSCs OTU было больше, чем в группе aGVHD (рис. 6C). С точки зрения бактериального состава на уровне типа, Firmicutes и Bacteroidetes были двумя наиболее преобладающими типами (рис. 6D). Мы также составили сравнительную тепловую карту для анализа микробиоты кишечника между двумя группами (рис. 6E). Роды Odoribacter и Ruminococcus_1 показали относительно высокую численность в группе hAMSC, которые являются важными микробами для поддержания гомеостаза кишечника (рис. 6F, G). Чтобы подтвердить, какая бактерия была изменена лечением hAMSC и, в свою очередь, повлияла на прогрессирование заболевания против РТПХ, мы провели многомерное сравнение классов с использованием линейного дискриминантного анализа (LDA) размера эффекта (LEfSe), который выявил заметные различия в преобладании бактериальных сообществ между две группы. Как показано на (рис. 6H, I), Streptococcaceae (семейство и род Streptococcus), Paludibacteraceae, F0058 и Delftia были ключевыми типами бактерий, способствующими дисбиозу микробиоты кишечника в группе оРТПХ. Тем не менее, полезные бактерии Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter и Clostridia (класс и порядок Clostridiales) продемонстрировали относительное обогащение группы hAMSC, что может быть связано с hAMSC-опосредованным облегчением течения оРТПХ. В целом, разнообразие и состав кишечной микробиоты улучшились после введения hAMSC и изменились в общей тенденции, что было полезно для организма.
цистанхе трубчатой – улучшает иммунную систему
hAMSC регулируют взаимодействие между кишечной микробиотой и кишечным иммунитетом
Чтобы понять потенциальную связь между микробиотой кишечника и барьером слизистой оболочки кишечника, корреляции между TJ и микробиотой кишечника на уровне рода были проанализированы с помощью корреляционного анализа Спирмена. Как показано на рис. 7, существовала положительная связь между ZO-1 и полезными бактериями, Ruminococcaceae_UCG.014, Muribaculum, Ruminococcus_1 и Ruminiclostridium_9. Относительная численность полезных бактерий Roseburia, Odoribacter, Ruminococcus_1 и Ruminococcaceae_UCG.014 продемонстрировала резко положительную корреляцию с окклюдином. Затем мы провели корреляционный анализ между кишечной микробиотой и кишечным иммунным барьером с помощью метода ранговой корреляции Спирмена (рис. 7). Мы заметили, что увеличение количества Roseburia, Muribaculum и Ruminococcus _1 отрицательно коррелирует с процентом CD3 +CD4+ Т-клеток. Кроме того, увеличение количества полезных бактерий, Ruminococcus_1 и Ruminiclostridium _9, положительно коррелировало с процентным содержанием Tregs, тогда как отрицательно коррелировало с IL-17. Численность Lactobacillus и Candidatus_Arthromitus отрицательно коррелировала с IFN-. Между численностью Muribaculum и IL-2 наблюдалась отрицательная корреляция. Увеличение численности Candidatus_Saccharimonas и снижение численности Escherichia. Численность шигелл положительно коррелировала с уровнем IL-10 (рис. 7). Результаты корреляционного анализа показали, что hAMSC улучшают воспалительную среду хозяина и регулируют гомеостаз кишечника, что может быть связано с модуляцией микробиоты кишечника, и, следовательно, предотвращают РТПХ.
Рис. 5. hAMSC улучшают дисфункцию кишечного барьера у мышей с РТПХ. (А) HAMSC, меченные GFP, проникли в кишечник. (B) Репрезентативные микроскопические фотографии окрашивания кишечника H&E (400×) и гистологический показатель (на основе разрушения тканевой структуры и инфильтрации лимфоцитов) (n=4). (C) Репрезентативные микроскопические фотографии иммуногистохимии (400×) кишечника и доля положительной области CD45 (n=4). (D) Репрезентативные микроскопические фотографии иммуногистохимии (400×) кишечника и доля положительной области ZO-1 (n=4). (E) уровни экспрессии мРНК ZO-1 и окклюдина (n=3). (F) Уровни D-LA и DAO в плазме (n=4).Значения были представлены как среднее ± стандартное отклонение.
Обсуждение
Расширенный микробный анализ позволил по-новому взглянуть на сложные взаимодействия между хозяином и микробиотой кишечника [18]. Микробиота кишечника может быть изменена после алло-ТГСК и тесно связана с РТПХ, что позволяет предположить, что микробиота кишечника может быть новой мишенью для лечения РТПХ [5]. Многочисленные исследования, включая наше недавнее исследование, изучили и подтвердили терапевтический эффект МСК на оРТПХ [15, 19, 20]. Однако влияние на микробиоту кишечника в этот период остается неясным. В этом исследовании мы исследовали влияние hAMSC на РТПХ и потенциальные механизмы этого процесса in vivo. В соответствии с предыдущими исследованиями [15, 21–23] наши результаты показали, что hAMSCs оказывают благоприятное защитное действие на РТПХ у мышей, о чем свидетельствуют ослабление симптомов РТПХ и увеличение выживаемости. Мы также продемонстрировали, что hAMSC проявляют иммуносупрессивный эффект за счет уменьшения экспансии донорских Т-клеток и одновременного усиления генерации Tregs при оРТПХ. Между тем, hAMSC могут подавлять провоспалительные цитокины и повышать уровень противовоспалительных цитокинов in vivo, чтобы ингибировать воспалительные реакции. Кишечный барьер, плотная структура, состоящая из монослоя эпителиальных клеток кишечника, сохраняет свою целостность и предотвращает транслокацию просветной микробиоты в здоровом состоянии [24]. Во время алло-ТГСК кондиционирующие режимы повреждают кишечный барьер, что является начальным этапом развития РТПХ, поскольку обеспечивает транслокацию бактерий через барьер и приводит к нарушению иммунного гомеостаза кишечника [24, 25]. Накопляющиеся данные показывают, что МСК обладают способностью к восстановлению тканей, что, как было доказано, восстанавливает целостность кишечного барьера у мышей с колитом [26]. Белки плотных контактов, в том числе ZO-1 и окклюдин, играют важную роль в барьерной функции кишечника, а транслокация микробиоты кишечника через нарушенный кишечный барьер провоцирует воспаление [27]. D-LA происходит из кишечных бактерий, а DAO в основном концентрируется в слизистой оболочке кишечника. Таким образом, высокие концентрации D-LA и DAO в плазме могут частично отражать изменения кишечной проницаемости и барьерной функции кишечника [28]. В настоящее время мы обнаружили, что уровни экспрессии TJ резко возрастают после введения hAMSC, тогда как уровни D-LA и DAO в плазме значительно снижаются, что указывает на то, что hAMSC могут улучшить дисфункцию кишечного барьера и восстановить кишечную проницаемость. Кишечник является одним из органов, наиболее сильно поражаемых РТПХ, и исследования показали, что бактерии, особенно микробиота кишечника, играют центральную роль в патогенезе и развитии РТПХ [5, 6]. Как сообщалось в предыдущих исследованиях, потеря бактериального разнообразия у пациентов с алло-ТГСК была связана с увеличением смертности от оРТПХ [29, 30]. Доминирование в фекалиях условно-патогенных микроорганизмов Enterococcus и Proteobacteria также связано с увеличением РТПХ [6, 31]. В последние десятилетия повышенное внимание уделяется взаимосвязи между микробиотой кишечника и лечением МСК при воспалительных заболеваниях. Доказано, что МСК улучшают дисбактериоз кишечной микробиоты при ревматоидном артрите, сепсисе и воспалительных заболеваниях кишечника [32–34]. Для дальнейшего изучения механизма, с помощью которого hAMSC улучшают течение РТПХ, мы исследовали влияние hAMSC на микробиоту кишечника. В текущем исследовании введение hAMSC показало значительный эффект на разнообразие микробных сообществ по сравнению с отсутствием трансплантации, что указывает на то, что численность микробиоты кишечника может быть изменена после лечения hAMSC. Однако существенной разницы в измерениях -разнообразия не было, возможно, из-за небольшого размера выборки в обеих группах или недостаточного цикла лечения hAMSC. Анализ с использованием сравнительной тепловой карты на уровне рода показал, что введение hAMSC увеличивает количество полезных бактерий, Odoribacter и Ruminococcus_1 в кишечной флоре, которые являются продуцентами короткоцепочечных жирных кислот (SCFA) с противовоспалительными свойствами [35] , 36]. Чтобы идентифицировать основные доминантные бактерии, опосредованные трансплантацией hAMSC, между двумя группами был проведен анализ LEfSe. По сравнению с группой с РТПХ, лечение hAMSCs значительно увеличило численность некоторых полезных микробов, связанных с противовоспалительным действием, таких как Lachnospiraceae, Roseburia, Ruminococcaceae, Ruminiclostridium, Oscillibacter, Clostridia, которые, как было описано, полезны для выработки метаболитов кишечной микробиоты SCFAs [ 37–42]. Таким образом, наши наблюдения показали, что после введения hAMSC дисбактериоз кишечной микробиоты уменьшился, что проявляется в улучшении разнообразия и увеличении относительной численности полезных бактерий.
Рис. 6. Изменения микробиоты кишечника у мышей с РТПХ. (А) сравнение -разнообразия. (Б) сравнение -разнообразия. (C) Диаграмма Венна OTU. (D) Относительная численность бактерий на уровне типа. (E) Тепловая карта обилия видов на уровне рода. (F) Относительная численность Odoribacter на уровне рода. (G) Относительная численность Ruminococcus_1 на уровне рода. (H) Кладограмма на основе анализа LEfSe. (I) Оценка LDA рассчитана на основе признаков, которые по-разному распространены между группами aGVHD и hAMSC. (AI) n=3 мышей на группу. Значения были представлены как среднее ± стандартное отклонение.
РТПХ — сложный воспалительный процесс, инициируемый разрушением целостности кишечного барьера с последующей транслокацией кишечной микробиоты и ее компонентов. Распознавание антигенпрезентирующими клетками молекулярных паттернов, связанных с повреждением, и молекулярных паттернов, связанных с патогеном, индуцирует провоспалительную реакцию, включая активацию Т-клеток и цитокиновый шторм, что усугубляет повреждение кишечного барьера и способствует развитию РТПХ [24, 43]. С другой стороны, микробиота кишечника и метаболиты, полученные из микробиоты, такие как SCFAs, играют важную роль в поддержании целостности кишечного барьера и гомеостаза кишечника, а также в формировании иммунной системы слизистой оболочки и балансировании защиты хозяина с помощью микробных компонентов и метаболитов [24, 44] . Взаимодействие между хозяином и микробиотой кишечника через кишечный барьер регулирует слизистые и системные иммунные реакции и в патологических состояниях может привести к РТПХ [6, 45, 46]. Было высказано предположение, что микробиота кишечника тесно связана с экспрессией белков плотных соединений [47]. Настоящее исследование показало, что экспрессия мРНК TJ ZO-1 и окклюдина отрицательно коррелировала с относительной численностью вредных бактерий, тогда как имела положительную корреляцию с полезными бактериями, что указывает на то, что микробиота кишечника важна для поддержания целостности кишечной микрофлоры. кишечный барьер. Кроме того, микробиота кишечника также очень важна для поддержания кишечного иммунного барьера [47]. Мы заметили, что некоторые полезные бактерии отрицательно коррелировали с процентом CD3+CD4+ Т-клеток, но положительно коррелировали с процентом Tregs. Здесь мы обнаружили, что полезные бактерии, в основном продуценты SCFA, отрицательно коррелируют с провоспалительными цитокинами, но положительно коррелируют с противовоспалительными цитокинами, тогда как вредные бактерии коррелируют наоборот. Таким образом, значительная разница в микробиоте кишечника между видами лечения предполагает полную картину взаимодействия между микробиотой кишечника и кишечным барьером, иммунитетом. В наших экспериментах все еще существовало несколько ограничений, которые стоит обсудить. Во-первых, хотя в нашем исследовании изучалось влияние hAMSC на иммунитет, кишечный барьер и микробиоту кишечника при оРТПХ, основной механизм все еще требует проверки в дальнейших исследованиях. Во-вторых, истощение кишечной микробиоты и трансплантация фекальной микробиоты необходимы для устранения причинно-следственных связей между кишечной микробиотой, кишечным барьером и иммунитетом. В-третьих, необходимы дальнейшие исследования по изучению влияния hAMSC на SCFAs, полученные из микробиоты, и другие метаболиты. В заключение, наше исследование показало, что hAMSC облегчают РТПХ, способствуя нормализации микробиоты кишечника и регулируя взаимодействие между микробиотой кишечника и кишечным барьером, иммунитетом. Наше исследование является первым, систематически определяющим эффекты и основные механизмы hAMSC, регулирующие микробиоту кишечника и кишечный иммунитет при оРТПХ.
Рис. 7. Корреляционный анализ между микробиотой кишечника и кишечным иммунитетом. Корреляционный анализ Спирмена был проведен между относительной численностью 15 различных микробиот кишечника (на уровне рода) и уровнем экспрессии мРНК TJ, процентом иммунных клеток, а также концентрацией цитокинов в кишечнике среди двух групп. Значения Spearman r варьируются от -0,5 (синий) до 0,5 (красный).
Рекомендации
1. Шмид, К. (2021). На шаг ближе к ГВЛ без РТПХ. Кровь, 137 (19), 2565–2566. https://doi.org/10.1182/blood.2020010132
2. Чанг Ю., Чжао Х. и Хуан Х. (2018). Стратегии усиления и сохранения противолейкозного эффекта без усугубления реакции «трансплантат против хозяина». Frontiers in Immunology, 9, 3041. https://doi.org/10.3389/fmmu.2018.03041.
3. Чжу, В., Винтер, М.Г., Биндлосс, М.Х., Спига, Л., Дюркоп, Б.А., Хьюз, Э.Р., Бюттнер, Л., де Лима Ромао, Э., Берендт, К.Л., Лопес, К.А., Сифуэнтес- Домингес Л., Хуф-Харди К., Уилсон Р.П., Гиллис К.С., Тюкель Ч., Кох А.Я., Бурштейн Э., Хупер Л.В., Баумлер А.Дж. и Винтер С.Э. (2018). Точное редактирование кишечной микробиоты улучшает состояние при колите. Природа, 553(7687), 208–211. https://doi.org/10.1038/nature25172
4. Чжао Л., Чжан Ф., Дин С., Ву Г., Лам Ю.Ю., Ван Х., Фу Х., Сюэ Х., Лу К., Ма, Дж. , Ю, Л., Сюй, К., Жэнь, З., Сюй, Ю., Сюй, С., Шен, Х., Чжу, Х., Ши, Ю., Шен, Ц., … Чжан, К. (2018). Кишечные бактерии, избирательно стимулируемые пищевыми волокнами, облегчают диабет 2 типа. Science (Нью-Йорк, штат Нью-Йорк), 359 (6380), 1151–1156. https://doi.org/10.1126/science.aao5774
5. Шоно Ю. и ван ден Бринк MRM (2018). Повреждение микробиоты кишечника при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Обзоры природы. Рак, 18 (5), 283–295. https://doi.org/10.1038/nrc.2018.10
6. Стафас А., Бургос да Силва М. и ван ден Бринк MRM (2017). Кишечная микробиота при аллогенной трансплантации гемопоэтических клеток и реакции «трансплантат против хозяина». Кровь, 129 (8), 927–933. https://doi.org/10.1182/blood-2016-09-691394
7. У, К., Юань, Ю., Ю, Х., Дай, С., Ван, С., Сунь, З., Ван, Ф., Фэй, Х., Линь, Ц., Цзян, Х. ., и Чен, Т. (2020). Кишечный микробный метаболит триметиламин N-оксид усугубляет РТПХ, индуцируя поляризацию макрофагов M1 у мышей. Кровь, 136 (4), 501–515. https://doi.org/10.1182/blood.2019003990
8. Мэтьюсон, Н.Д., Дженк, Р., Мэтью, А.В., Кенигскнехт, М., Ханаш, А., Тубай, Т., Оравец-Уилсон, К., Ву, С., Сунь, Ю., Росси, К. ., Фудзивара, Х., Бьюн, Дж., Шоно, Ю., Линдеманс, К., Калафор, М., Шмидт, ТМ, Хонда, К., Янг, В.Б., Пеннатур, С., … Редди, П. (2016). Метаболиты, полученные из кишечного микробиома, модулируют повреждение эпителиальных клеток кишечника и смягчают реакцию «трансплантат против хозяина». Природная иммунология, 17 (5), 505–513. https://doi.org/10.1038/ni.3400
9. Дэйв Дж.Р., Чандекар, С.С., Бехера, С., Десаи, К.У., Сальве, П.М., Сапкал, Н.Б., Мхаске, С.Т., Дьюл, А.М., Покаре, П.С., Пейдж, М., Джог, А., Чивте. , Пенсильвания, Шривастава, Р.К., и Томар, Великобритания (2022). Мезенхимальные стволовые клетки десен человека сохраняют свой рост и иммуномодулирующие характеристики независимо от возраста донора. Успехи науки, 8(25), м6504. https://doi.org/10. 1126/sciadv.abm6504
10. Чжао К. и Лю К. (2016). Клиническое применение мезенхимальных стромальных клеток при трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Журнал гематологии и онкологии, 9 (1), 46. https://doi.org/10.1186/s13045-016-0276-z.
11. Лю Ц., Хуан Ц., Ву Х., Цзо Г., Гу Х., Дэн К. и Синь Х. (2021). Характеристики и терапевтический потенциал стволовых клеток, полученных из амниона человека. Международный журнал молекулярных наук, 22 (2), 970. https://doi.org/10.3390/ijms22020970.
12. Ли Дж., Чжоу З., Вэнь Дж., Цзян Ф. и Ся Ю. (2020). Амниотические мезенхимальные стволовые клетки человека способствуют эндогенной регенерации костей. Frontiers in Endocrinology, 11, 543623. https://doi.org/10.3389/fendo.2020.543623.
13. Диас-Прадо, С., Муиньос-Лопес, Э., Эрмида-Гомес, Т., Сичионе, К., Рендал-Васкес, М.Э., Фуэнтес-Бокете, И., де Торо, Ф.Дж., Бланко, Ф.Х. ( 2011). Амниотическая мембрана человека как альтернативный источник стволовых клеток для регенеративной медицины. Дифференциация; Исследования биологического разнообразия, 81(3), 162–171. https://doi.org/10.1016/j.dif.2011.01.005
14. Хун Дж., Гао Ю., Сун Дж., Чжо В., Сунь Х. и Пин Б. (2016). Сравнение биологических характеристик и иммуносупрессивной активности амниотических мезенхимальных стволовых клеток человека и мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека. Чжунго Ши Янь Сюэ Е Сюэ За Чжи, 24 (3), 858–864. https://doi.org/10.7534/j.issn.1009-2137.2016.03.041
15. Гао, Ю., Ли, В., Бу, С., Сюй, Ю., Цай, С., Чжун, Дж., Ду, М., Сунь, Х., Хуан, Л., Хэ, Ю. ., Ху С., Лю Ц., Цзинь Х., Ван Ц. и Пин Б. (2021). Амниотические мезенхимальные стволовые клетки человека ингибируют РТПХ, регулируя баланс Treg и Т-эффекторных клеток. Журнал исследований воспаления, 14, 3985–3999. https://doi.org/10.2147/JIR.S323054
16. Кук К.Р., Кобзик Л., Мартин Т.Р., Брюэр Дж., Дельмонте Дж.Дж., Кроуфорд Дж.М. и Феррара Дж.Л. (1996). Экспериментальная модель синдрома идиопатической пневмонии после трансплантации костного мозга: I. Роль минорных H-антигенов и эндотоксина. Кровь, 88 (8), 3230–3239.
17. Яньес Р., Ламана М.Л., Гарсия-Кастро Х., Кольменеро И., Рамирес М. и Бюрен Х.А. (2006). Мезенхимальные стволовые клетки, полученные из жировой ткани, обладают иммуносупрессивными свойствами in vivo, применимыми для контроля реакции «трансплантат против хозяина». Стволовые клетки (Дейтон, Огайо), 24 (11), 2582–2591.
18 Хупер Л.В., Литтман Д.Р. и Макферсон А.Дж. (2012). Взаимодействие микробиоты и иммунной системы. Science (Нью-Йорк, штат Нью-Йорк), 336 (6086), 1268–1273. https://doi.org/10.1126/science.1223490
19. Келли К. и Раско JEJ (2021). Мезенхимальные стромальные клетки для лечения реакции «трансплантат против хозяина». Frontiers in Immunology, 12, 761616. https://doi.org/10.3389/fmmu.2021.761616.
20. Масиас-Санчес, МДМ, Мората-Тарифа, К., Куэнде, Н., Кардеса-Хиль, А., Куэста-Касас, М.А., Паскуаль-Каскон, М.Х., Паскуаль, А., Мартин-Кальво , К., Хурадо М., Перес-Симон Х.А., Эспигадо И., Гарсон Лопес С., Кармона Санчес Г., Мата-Алькасар-Кабальеро Р. и Санчес-Пернауте Р. (2022 г.) ). Мезенхимальные стромальные клетки для лечения стероидорезистентной острой и хронической реакции «трансплантат против хозяина»: многоцентровый опыт сострадательного использования. Трансляционная медицина стволовых клеток, 11 (4), 343–355. https://doi.org/10.1093/stcltm/szac003
21. Таго Ю., Кобаяши К., Огура М., Вада Дж., Ямагути С., Ямагути Т., Хаяси М., Накаиси Т., Кубо Х. и Уэда, Ю. (2021). Мезенхимальные стволовые клетки, полученные из амниона человека, ослабляют ксеногенную реакцию «трансплантат против хозяина», предотвращая активацию и пролиферацию Т-клеток. Научные отчеты, 11(1), 2406. https://doi. орг/10.1038/s41598-021-81916-г
22. Ямахара, К., Харада, К., Осима, М., Исикане, С., Ониши, С., Цуда, Х., Отани, К., Тагучи, А., Сома, Т., Огава, Х. ., Кацураги С., Ёсимацу Дж., Харада-Сиба М., Кангава К. и Икеда Т. (2014). Сравнение ангиогенных, цитопротекторных и иммуносупрессивных свойств мезенхимальных стволовых клеток человека, полученных из амниона и хориона. ПЛоС Один, 9(2), e88319. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0088319
23. Ямахара К., Хамада А., Сома Т., Окамото Р., Окада М., Ёшихара С., Ёшихара К., Икегаме К., Тамаки Х., Кайда К. ., Иноуэ, Т., Осуги, Ю., Нисикава, Х., Хаяси, Х., Ито, Ю.М., Иидзима, Х., Ониши, С., Хасимото, Д., Исоэ, Т., … Фухимори, Ю. (2019). Безопасность и эффективность мезенхимальных стволовых клеток, полученных из амниона (AM01), у пациентов с стероидорефрактерной острой болезнью «трансплантат против хозяина» после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток: протокол исследования фазы I/II японского исследования. БМЖ Опен, 9(7), e26403. https://doi.org/10.1136/bmjop ru-2018-026403
24. Линь Д., Ху Б., Ли П., Чжао Ю., Сюй Ю. и Ву Д. (2021). Роль кишечной микробиоты и микробных метаболитов при острой РТПХ. Экспериментальная гематология и онкология, 10(1), 49. https://doi.org/10.1186/s40164-021-00240-3
25. Гимир С., Вебер Д., Мавин Э., Ван XN, Дикинсон А.М. и Холлер Э. (2017). Патофизиология РТПХ и других серьезных осложнений, связанных с ТГСК. Frontiers in Immunology, 8, 79. https://doi.org/10.3389/fmmu.2017.00079.
26. Сюй Дж., Ван Х., Чен Дж., Чен С., Ли З., Лю Х., Бай Ю. и Чжи Ф. (2020). Мезенхимальные стволовые клетки, полученные из эмбриональных стволовых клеток, способствуют целостности и регенерации эпителия толстой кишки за счет повышения уровня циркулирующего IGF-1 у мышей с колитом. Тераностика, 10(26), 12204–12222. https://doi.org/10.7150/thno.47683.
27. Чжао Ю., Хуан Дж., Ли Т., Чжан С., Вэнь К. и Ван Л. (2022). Берберин ослабляет РТПХ за счет ремоделирования микробиоты кишечника, подавления передачи сигналов TLR4 и восстановления барьера толстой кишки для ингибирования воспаления NLRP3. Журнал клеточной и молекулярной медицины, 26 (4), 1060–1070. https://doi.org/10. 1111/jcmm.17158
28. Юань М., Линь Л., Цао Х., Чжэн В., Ву Л., Цзо Х., Тянь Х. и Сун Х. (2022). Кишечная микробиота участвует в защитном действии HO-1/BMMSCs при трансплантации печени стеатотическим трансплантатом печени у крыс. Frontiers in Microbiology, 13, 905567. https://doi.org/10.3389/fmicb.2022.905567.
29. Таур, Ю., Дженк, Р.Р., Пералес, М., Литтманн, Э.Р., Морджариа, С., Линг, Л., Но, Д., Гобурн, А., Виале, А., Дахи, П.Б., Понсе , Д.М., Баркер Дж.Н., Гиральт С., ван ден Бринк М. и Памер Э.Г. (2014). Влияние бактериального разнообразия кишечного тракта на смертность после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток. Кровь, 124 (7), 1174–1182. https://doi.org/10.1182/кровь-2014-02-554725
30. Дженк, Р.Р., Таур, Ю., Девлин, С.М., Понсе, Д.М., Голдберг, Дж.Д., Ар, К.Ф., Литтманн, Э.Р., Линг, Л., Гобурн, А.С., Миллер, Л.С., Докампо, М.Д., Пелед, Ю., Арпая, Н., Кросс, Дж.Р., Питс, Т.К., Люмиш, М.А., Шоно, Ю., Дудаков, Дж.А., Поек, Х.,… ван ден Бринк, MRM (2015). Кишечная блаутия связана со снижением смертности от реакции «трансплантат против хозяина». Биология трансплантации крови и костного мозга: Журнал Американского общества трансплантации крови и костного мозга, 21 (8), 1373–1383. https://doi.org/10.1016/j.bbmt.2015.04.016
31. Ле Бастард К., Шевалье П. и Монтасье Э. (2021). Микробиом кишечника при аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток и специфические изменения, связанные с острой реакцией «трансплантат против хозяина». Всемирный журнал гастроэнтерологии, 27 (45), 7792–7800. https://doi.org/10.3748/wjg.v27.i45.7792
32. Ли, С., Лу, Ц., Фань, Д., Лу, С., Ся, Ю., Чжао, Х., Сюй, Х., Чжу, Ю., Ли, Дж., Лю, Х. . и Сяо, К. (2020). Мезенхимальные стволовые клетки пуповины человека демонстрируют терапевтический потенциал при ревматоидном артрите, регулируя взаимодействие между иммунитетом и микробиотой кишечника через арильный углеводородный рецептор. Границы клеточной биологии и биологии развития, 8, 131. https://doi.org/10.3389/fcell.2020.00131.
33. Сунь Дж., Дин С., Лю С., Дуань Х., Лян Х. и Сунь Т. (2020). Мезенхимальные стволовые клетки, полученные из жировой ткани, смягчают острое повреждение легких и улучшают микробиоту кишечника у септических крыс. Исследования и терапия стволовыми клетками, 11(1), 384. https://doi.org/10.1186/s13287-020-01902-5
34. Сунтарарак С., Чоу Л., Джонсон В., Кой Дж., Уит В., Риган Д. и Доу С. (2018). Мезенхимальные стволовые клетки (МСК), полученные из индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК), эквивалентны МСК жирового происхождения, способствующие заживлению кишечника и нормализации микробиома на модели воспалительного заболевания кишечника у мышей. Трансляционная медицина стволовых клеток, 7 (6), 456–467. https://doi.org/10.1002/sctm.17-0305
35. Ли Дж., Цзоу К. и Лю Ю. (2022). Улучшение пищевой аллергии, вызванной овальбумином, у мышей путем целенаправленной доставки цианидин-3-O-глюкозида в прямую кишку и толстую кишку. Foods (Базель, Швейцария), 11(11), 1542. https://doi.org/10.3390/foods11111542.
36. Маруяма С., Мацуока Т., Хосоми К., Парк Дж., Нисимура М., Мураками Х., Кониси К., Миячи М., Кавасима Х., Мидзугути К. ., Кобаяши Т., Оока Т., Ямагата З. и Кунисава Дж. (2022). Классификация возникновения дислипидемии на основе кишечных бактерий, связанных с употреблением ячменя. Frontiers in Nutrition, 9, 812469. https://doi.org/10.3389/fnut.2022.812469.
37. Ли, С.Х., Пак, Х., Канг, С.Д., Чой, Д.Х., Пак, СК, Пак, Дж.М., Нам, С., Че, ГБ, Ли, Кентукки, Чо, Х. и Ли, С.Дж. ( 2022). Высокие дозы внутримышечного введения витамина D3 влияют на микробиоту кишечника пациентов с инфекцией Clostridioides difcile. Границы клеточной и инфекционной микробиологии, 12, 904987. https://doi.org/10.3389/fcimb.2022.904987.
38. Мейер Р.К., Лейн А.И., Венингер С.Н., Мартинес Т.М., Кангат А., Лаубиц Д. и Дука Ф.А. (2022). Олигофруктоза восстанавливает постпрандиальный уровень короткоцепочечных жирных кислот во время кормления с высоким содержанием жиров. Ожирение (Сильвер-Спринг, Мэриленд), 30 (7), 1442–1452. https://doi.org/10.1002/oby.23456
39. Санг, Дж., Чжуан, Д., Чжан, Т, Ву, К, Ю, Дж, Чжан, З (2022). Конвергентные и дивергентные возрастные закономерности разнообразия микробиоты кишечника у людей и приматов. М-Системы: e151221. https://doi.org/10.1128/msystems.01512-21
40. Ге, X., Хэ, X., Лю, Дж., Цзэн, Ф., Чен, Л., Сюй, В., Шао, Р., Хуан, Ю., Фараг, М.А., Капаноглу, Э. , Эль-Сиди, Х.Р., Чжао, К., и Лю, Б. (2022). Улучшение диабета 2 типа благодаря новой координации 6, 8-гуанидиллютеолинхинона и хрома посредством биохимических механизмов и взаимодействия кишечной микробиоты. Журнал перспективных исследований, S2090–1232 (22), 121–129. https://doi.org/10.1016/j.jare.2022.06.003
41. Дин К., Цао Ф., Лай С., Чжугэ Х., Чанг К., Валенчак Т.Г., Лю Дж., Ли С. и Рен Д. (2022). Lactobacillus plantarum ZY08 облегчает хронический алкогольный стеатоз и повреждение печени у мышей путем восстановления гомеостаза кишечника. Food Research International (Оттава, Онтарио), 157, 111259. https://doi.org/10. 1016/j.foodres.2022.111259
42. Рис, Н.П., Шахин, В., Айва, К., Целепис, К., Хорниблоу, Р.Д., Шарма, Н., Беггс, А.Д., Икбал, Т.Д. и Курайши, Миннесота (2022). Систематический обзор прогностических биомаркеров донора и реципиента ответа на трансплантацию фекальной микробиоты у пациентов с язвенным колитом. EBioMedicine, 81, 104088. https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.104088.
43. Ли А., Абрахам К., Ван Ю. и Чжан Ю. (2020). Новый взгляд на основы биологии острой реакции «трансплантат против хозяина». Гематологика, 105(11), 2540–2549. https://doi.org/10.3324/haematol. 2019.240291 44. Каяма Х., Окумура Р. и Такеда К. (2020). Взаимодействие микробиоты, эпителия и иммунных клеток кишечника. Ежегодный обзор иммунологии, 38, 23–48. https://doi.org/10.1146/Annu rev-immunol-070119-115104
45. Шлютер Дж., Пелед Ю., Тейлор Б.П., Марки К.А., Смит М., Таур Ю., Нихус Р., Стафас А., Дай А., Фонтана Э., Аморетти. , Л.А., Райт, Р.Дж., Морджария, С., Фенелус, М., Пессен, М.С., Чао, Нью-Джерси, Лью, М., Боханнон, Л., Буш, А.,… Ксавьер, Дж.Б. (2020). Микробиота кишечника связана с динамикой иммунных клеток у человека. Природа, 588(7837), 303–307. https://doi.org/10.1038/с41586-020-2971-8
46. Ян, Дж., Ян, Х., Ли, Ю (2022). Тройное взаимодействие между микробиотой кишечника, микобиотой и иммунитетом хозяина. Критические обзоры в области пищевой науки и питания: 1–21. https://doi.org/10.1080/10408 398.2022.2094888
47. Ань Дж., Лю Ю., Ван Ю., Фань Р., Ху Х., Чжан Ф., Ян Дж. и Чен Дж. (2022). Роль барьера слизистой оболочки кишечника при аутоиммунных заболеваниях: потенциальная мишень. Frontiers in Immunology, 13, 871713. https://doi.org/10.3389/fmmu.2022.871713.
