АБСТРАКТНЫЙ

Цели:Maclura pomifera (Rafin.) Schneider — широко распространенный во всем мире вид, который также часто культивируется в декоративных целях. Предыдущие исследования показали, что плоды M. pomifera богаты пренилированными изофлавоноидами, проявляют заслуживающую внимания биологическую активность и обладают вероятными преимуществами, особенно при местном применении. Учитывая, что фенольные соединения являются важными источниками при разработке антивозрастных косметических продуктов, в этом исследовании изучался омолаживающий потенциал 80-процентного метанольного экстракта M. pomifera (MPM) путем оценки антиоксидантной и ингибирующей активности ферментов, разрушающих внеклеточный матрикс.

Гликозид цистанхе также может повышать активность СОД в тканях сердца и печени и значительно снижать содержание липофусцина и МДА в каждой ткани, эффективно удаляя различные активные кислородные радикалы (ОН-, Н₂О₂ и др.) и защищая от повреждения ДНК, вызванного ОН-радикалами. Цистанхефенилэтаноидные гликозиды обладают сильной акцепторной способностью свободных радикалов, более высокой восстановительной способностью, чем витамин С, улучшают активность СОД в суспензии сперматозоидов, снижают содержание МДА и оказывают определенное защитное действие на функцию мембран сперматозоидов. Полисахариды цистанхе способны усиливать активность СОД и GSH-Px в эритроцитах и ​​тканях легких экспериментально стареющих мышей, вызванную D-галактозой, а также снижать содержание МДА и коллагена в легких и плазме, повышать содержание эластина, хороший очищающий эффект на DPPH, продлевает время гипоксии у стареющих мышей, улучшает активность SOD в сыворотке и задерживает физиологическую дегенерацию легких у экспериментально стареющих мышей Эксперименты с клеточной морфологической дегенерацией показали, что Cistanche обладает хорошей антиоксидантной способностью и потенциально может стать лекарством для профилактики и лечения заболеваний кожи, вызывающих старение. В то же время эхинакозид в цистанхе обладает значительной способностью улавливать свободные радикалы DPPH и обладает способностью улавливать активные формы кислорода и предотвращать вызванную свободными радикалами деградацию коллагена, а также оказывает хорошее восстанавливающее действие на повреждение свободных радикалов тимина.

Нажмите на добавку Cistanche Tubulosa.

【Для получения дополнительной информации:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Материалы и методы:Для этого исследования был оценен ингибирующий потенциал 80-процентного MPM в отношении различных ферментов, связанных с процессом старения. Учитывая несомненную роль оксидативного стресса в старении, также использовались тесты на антиоксиданты in vitro. Кроме того, с помощью анализа методом высокоэффективной тонкослойной хроматографии озаджин был определен как основной биоактивный изофлавоноид в образце.

Полученные результаты:Результаты механистически различных анализов антиоксидантов продемонстрировали значительный антиоксидантный потенциал экстракта. Был исследован ингибирующий потенциал MPM в отношении ферментов гиалуронидазы, коллагеназы и эластазы, которые напрямую связаны с ускорением процесса старения, и результаты показали, что MPM явно ингибирует указанные выше ферменты. MPM имел уникальное содержание фенолов и флавоноидов; 113,92 ± 2,26 мг эквивалента галловой кислоты/г и 66,41 ± 0,74 мг QE/г соответственно. Когда были рассмотрены анализы общей антиоксидантной способности, можно предположить, что MPM является многообещающим средством против старения.

Заключение:В результате это исследование показывает, что экстракты плодов M. pomifera обладают значительным омолаживающим потенциалом и могут использоваться для этой цели.

Ключевые слова:Maclura pomifera, омолаживающий эффект, антиоксиданты, ВЭТСХ, осаджин

ВВЕДЕНИЕ

Точно так же все органы, включая кожу человека, претерпевают различные физиологические изменения с возрастом.1 Существуют два класса старения: внутреннее старение контролируется генетикой, а внешнее старение является естественным результатом физиологических модификаций из-за повреждающего воздействия факторов окружающей среды, таких как ультрафиолетовое (УФ) ) радиация, химические токсины и курение.1,2 Деградация сосудистой и железистой структуры, потеря фиброзной ткани и снижение регенерации клеток являются фундаментальными факторами старения,3 которые приводят к усилению дегенерации тканей, морщинам и уменьшению внеклеточного матрикса (ECM). ).4

Как самый большой орган, кожа выполняет несколько функций, таких как защита, регуляция температуры тела и определение чувств.5 Кожа состоит из эпидермиса, дермы и подкожной ткани и является первым барьером между человеческим телом и внешней средой. окружающей среды.6,7 ВКМ является крупнейшей единицей дермы и поддерживает рост и эластичность, представляя собой структурную основу.8 Коллаген, эластин и фибронектин, которые образуются дермальными фибробластами, составляют ВКМ и сливаются с протеогликанами.5 Коллаген представляет собой основной белок, составляющий примерно 25-35 процентов всего содержания белка в организме и обнаруженный во внеклеточном пространстве различных типов соединительных тканей животных.3 Одной из основных причин старения кожи и образования морщин является изменение коллагена Эластин — это белок, который придает коже уникальную физиологическую эластичность и присутствует в нескольких соединительных тканях. гликозаминогликан (ГАГ), гиалуроновая кислота, играет жизненно важную роль в этих действиях.8 Эти основные компоненты расщепляются ферментами гиалуронидазой, коллагеназой и эластазой, что приводит к ускорению старения кожи. Более того, воздействие микроорганизмов, загрязнение окружающей среды, ионизирующее излучение, химические вещества и токсины приводят к образованию активных форм кислорода (АФК), и его вредные последствия ускоряют старение кожи.9 АФК могут инициировать сложные молекулярные пути и, как следствие, коллагеназу, эластазу , и активность гиалуронидазы может повышаться, что приводит к заметному распаду ВКМ и изменению текстуры кожи.10 По упомянутым причинам новые природные агенты, снижающие образование АФК и ингибирующие протеазы, разрушающие ВКМ, могут задерживать процесс старения кожи.11

Maclura pomifera (Rafin.) Schneider принадлежит к семейству Moraceae или тутовых и также известна как апельсиновое дерево осейджа, культивируемое почти во всем мире. и противомалярийное13 благодаря содержащимся в нем пренилированным изофлавонам, т.е. осаджину и помиферину, которые считаются основными метаболитами фруктов.14 В производстве антивозрастной косметики фенольные соединения являются важными природными источниками. Таким образом, растет интерес к изучению растений, богатых фенольными соединениями, таких как M. pomifera, на наличие такой активности. Предыдущие исследования показали, что изофлавоны Maclura повышают уровни экспрессии коллагена, эластина и фибриллина, сравнимые или превосходящие эквивалентные концентрации ретинола. Таким образом, можно предположить, что изофлавоны Maclura являются мощными стимуляторами белков внеклеточного матрикса.15 Учитывая эти данные, это исследование направлено на изучение омолаживающего потенциала 80-процентного метанольного экстракта M. pomifera (MPM) путем изучения его потенциала в отношении антиоксидантной биологической активности и ингибирования Ферменты, разрушающие ВКМ. Кроме того, количественный анализ основного биологически активного компонента экстракта, осаджина, был измерен с помощью высокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ), а для более точного понимания фенольного профиля были проведены анализы общего содержания фенолов и общего содержания флавоноидов. Результаты показывают, что M. pomifera может быть ценным источником продуктов против старения.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Химикаты

Sigma Chemical Co. (Сент-Луис, Миссури, США) предоставила все ферменты, химические вещества и эталоны, использовавшиеся в тестах. Качество всех реагентов было аналитической чистоты.

Растительный материал

Плоды M. pomifera были собраны в Ушаке, Турция, в мае 2020 года. Доктор Хилал Бардакчи провел процедуру ботанической идентификации образцов растений. Ваучерный образец растения был депонирован в Гербарии фармацевтического факультета Университета Аджибадем (ACUPH 00002).

Приготовление экстрактов

Плоды были разделены на мелкие кусочки и пропущены через блендер. Плоды (6,45 кг) мацерировали 3125 мл 80-процентного метанола (MeOH) с использованием устройства для встряхивания в течение трех дней при комнатной температуре в темном месте. Мацерат фильтровали, и эту процедуру повторяли дважды. Полученные фильтраты собирали вместе, затем метанол выпаривали на роторном испарителе. Неочищенный метанольный экстракт лиофилизировали (выход 204,37 г, 3,16%) и хранили при температуре -20 (MPM).

Процедура количественного определения основных биологически активных соединений с помощью ВЭТСХ

Все использованные химикаты и реагенты были аналитической чистоты. Хлороформ (CHCl3) и этилацетат (EtOAc) были приобретены у Sigma-Aldrich. Коммерчески доступный стандарт осаджина был приобретен у Sigma-Aldrich (SMB {{10}}0092). ВЭТСХ-анализы проводили на стеклянных ВЭТСХ-силикагельных пластинах 60 F254 размером 20 см × 10 см (Merck, Дармштадт, Германия). Содержание осажина в МПМ определяли с помощью аналитической системы ВЭТСХ CAMAG. Подвижная фаза, используемая в настоящем исследовании, была ранее описана Bozkurt et al.16 во время выделения активных компонентов M. pomifera. Экстракт MeOH с концентрацией 10 мг/мл использовали в качестве тестового раствора для анализа. Стандартный исходный раствор (0,5 мг/мл) осаджина готовили с использованием 2 мл ацетона. Рабочий раствор с концентрацией стандартного соединения 50 мкг/мл готовили разбавлением ацетоном из маточного раствора. Каждый образец фильтровали через шприцевой фильтр 0,45 мкм. 10 мкл экстракта вместе с не менее чем пятью различными концентрациями стандартного раствора (3,{18}},7 мкл) наносили в виде полос длиной 8 мм на пластины для ВЭТСХ с силикагелем 60 F254 с CAMAG Automatic. Пробоотборник ТСХ IV. Проявку проводили в автоматической проявочной камере CAMAG-2 (ADC- 2), а подвижной фазой был CHCl3:EtOAc [8:2 (об./об.)]. Камеру насыщали в течение 10 минут, а планшет предварительно кондиционировали в течение 5 минут перед проявлением. Влажность контролировалась с помощью ADC-2 с использованием MgCl2 (относительная влажность 33%) в течение 10 мин. Денситометрическую оценку проводили с использованием сканера CAMAG TLC Scanner IV в режиме флуоресценции. Размер щели поддерживали на уровне 5 × 0,2 мм, микро, а скорость сканирования устанавливали на уровне 20 мм/с. Содержание стандартов получали путем сравнения площади под кривыми рабочих характеристик (ППК) приемника с калибровочной кривой стандартов при 280 нм. Наличие стандартов в экстракте подтверждали путем сравнения обоих факторов удерживания (Rf) и наложения УФ-спектров каждого экстракта и стандарта. Количество озажина определяли путем сравнения интенсивности диффузно отраженного света от экстракта и фракций со стандартным соединением.

Содержание осажина в неочищенном растительном экстракте измеряли с помощью ВЭТСХ-денситометрии. Было установлено, что значение Rf стандарта осаджина составляет 0,556. Присутствие осаджина в испытуемых образцах было подтверждено путем сравнения их значений Rf и перекрытия их УФ-спектров (рис. 1). Количественную оценку проводили путем сравнения AUC образцов с калибровочной кривой, полученной с использованием стандартного соединения осаджина. Функция калибровки: y=2,268*10-8x. Коэффициент корреляции (R) и коэффициент вариации калибровочной функции составляли 0,998 процента и 1,06 процента соответственно. Анализ ВЭТСХ показал, что MPM содержит 0,22 процента (мас./мас.) осаджина. Результаты исследования ВЭТСХ приведены в табл. 1.

Анализ фенольного профиля

Анализ общего содержания фенолов

Анализ проводился для оценки общего содержания фенолов в образцах по методу Фолина-Чокальтеу, который ранее использовался Куртом-Селепом и др. 17 20 мкл свежеразбавленных растворов образцов смешивали с 75 мкл Na2CO3 (20 процентов ) и 100 мкл FCR (реактив Фолина-Чиокальтеу), разбавленного H2O (1:9). После инкубации в течение 30 мин при 45°С спектрофотометрически считывали оптическую плотность смесей при 765 нм. Результаты выражали в мг эквивалентов галловой кислоты (ЭАК) на г экстракта.

Анализ общего содержания флавоноидов

Измерение общего содержания флавоноидов во фракциях было выполнено в соответствии с методом, описанным ранее Bardakci et al.18. Короче говоря, свежеприготовленный 1 М CH3COONa и 10% AlCl3 смешивали с образцами. Затем проводили инкубацию смесей в течение 30 мин при комнатной температуре и в темноте. После процесса инкубации оптическую плотность рассчитывали при 415 нм. Результаты были выражены в мг эквивалентов кверцетина (QE) в 1 г образца.

Определение антиоксидантной активности in vitro

2, 2-Дифенил-1-пикрилгидразил (DPPH) тест на активность по удалению радикалов

Для определения активности DPPH по удалению радикалов была приготовлена ​​комбинация свежеразбавленных растворов образцов (различные концентрации, приготовленные из исходного раствора 1 мг/мл) и метанольного раствора DPPH (100 мМ). После инкубации при комнатной температуре в течение 45 минут считывали оптическую плотность при 517 нм. Бутилированный гидрокситолуол (БГТ) использовали в качестве эталонного соединения для получения калибровочной кривой. Значения IC50 результатов были указаны в мкг/мл.19

Тест на снижение антиоксидантной способности железа (FRAP)

Для получения реагента FRAP 25 мл 300 мМ ацетатного буфера (pH 3,6), 2,5 мл TPTZ [2,4,6-трис(2-пиридил)-s-триазин] и 2,5 мл FeCl3·6H2O (20 мМ). После этого 10 мл образца добавляли к 260 мл реагента FRAP и разбавляли до 300 мл дистиллированной водой в 96-луночном планшете. После инкубации в течение 30 мин при 37°С измерение поглощения проводили при 593 нм. BHT использовали в качестве эталонного соединения. Раствор хлорида железа (0,252 мМ) использовали для получения стандартной кривой, и результаты были представлены как мМ FeSO4 в 1 г сухого экстракта.20

Тест на медь-восстанавливающую антиоксидантную способность (CUPRAC)

Тест CUPRAC оценивали в соответствии с методом, описанным ранее Barak et al.21 Равные объемы 10 мМ CuSO4, неокупрена и буфера ацетата аммония (85 мл) смешивали в 96-луночном планшете. После этого к смеси добавляли 51 мл дистиллированной воды и 43 мл растворов проб соответственно. После инкубации в течение 20 минут считывали оптическую плотность при 450 нм. Результаты выражены в мг эквивалента аскорбиновой кислоты на 1 г сухого экстракта.

Тест на определение общей антиоксидантной емкости (ТОАЦ)

Испытание на общую антиоксидантную способность было рассчитано в соответствии с фосфомолибденовым методом, описанным ранее Barak et al.22. Во-первых, для получения раствора TOAC; Смешивали 28 мМ одноосновного фосфата натрия, 4 мМ молибдата аммония и 600 мМ H2SO4. Затем 300 мкл раствора ТОАЦ смешивали с 30 мкл растворов образцов в чашке 96 здоровых. После периода инкубации при 95°С в течение 90 мин оптическую плотность считывали при 695 нм. Для получения стандартной кривой использовали аскорбиновую кислоту, а результаты рассчитывали как эквиваленты тролокса в мг на 1 г сухого экстракта.

Ингибирующая активность в отношении ферментов, связанных со старением кожи.

Антиколлагеназная активность

Для измерения антиколлагеназной активности MPM готовили 50 мМ трициновый буферный раствор (рН: 7,5) (400 мМ NaCl и 10 мМ CaCl2). В качестве источника коллагеназы использовали Clostridium histolyticum (ХК - КФ. 3.4.23.3), которую растворяли в 50 мМ трициновом буферном растворе до начальной концентрации 0,8 ЕД/мл. В качестве субстрата использовали 2 мМ N-[3-(2-фурил)акрилоил]-Leu-Gly-Pro-Ala (FALGPA), растворенного в трициновом буфере. Экстракты инкубировали с ферментом коллагеназой в буферном растворе в течение 15 мин перед добавлением субстрата для запуска реакции. Конечная реакционная смесь имела общий объем 150 мкл; трициновый буфер, 0,8 мМ ФАЛГПА, 0,1 ед. ХЦ и 25 мкл МФМ. Для холостых результатов использовали воду. После добавления субстрата сразу же проводили измерение оптической плотности. В положительном контроле использовали галлат эпигаллокатехина (EGCG).23

Антиэластазная активность

Оценку MPM на антиэластазную активность проводили с использованием буферного раствора 0,2 мМ Tris-HCl (pH: 8,0). Исходный раствор эластазы (ФЭ, КФ 3.4.21.36), полученный из поджелудочной железы свиньи, готовили на дистиллированной воде с концентрацией 3,33 мг/мл. N-сукцинил-Ala-Ala-п-нитроанилид (AAAPVN), используемый в качестве субстрата, растворяли в буферном растворе (1,6 мМ). Экстракт MPM инкубировали с 1 мкг/мл PE в течение 15 минут при 37°C перед добавлением субстрата. По окончании 15-минутной предварительной инкубации к ферментной смеси, содержащей 1 мг/мл растительного экстракта, добавляли 0.8 мМ субстрата AAAPVN, и снова проводили инкубацию в течение 15 минут при 37°С. При использовании 0,25 мг/мл ЭГКГ в качестве положительного контроля этот тестовый образец содержит тот же объем ЭГКГ вместо МФМ, и тестовая установка была повторена. После инкубационных периодов были проведены измерения в 4 разных временных точках в течение от 5 до 30 минут с помощью спектрофотометра для микропланшетов Thermo Scientific Multiskan SkyHigh при возбуждении 365 нм и эмиссии 410 нм.24, 25

Антигиалуронидазная активность

Антигиалуронидазную активность определяли путем модификации метода, описанного Kolayli et al.26 и Lee et al.3. Во-первых, покупную гиалуронидазу (EC 3.2.1.35, Sigma-Aldrich) растворяли в 0. 02 М фосфатный буфер (pH: 3,5), содержащий NaCl и бычий сывороточный альбумин. Затем гиалуроновую кислоту, подходящий субстрат фермента, готовили в ацетатном буфере (0,1 М, рН: 3,5) и готовили к использованию. Тестовую смесь, состоящую из 20 мкл МФМ в концентрации 1 мг/мл, 10 мкл гиалуронидазы и 60 мкл 0,1 М ацетатного буфера, предварительно инкубировали в течение 20 мин при 37°С. По истечении времени инкубации к смеси добавляли 10 мкл гиалуроновой кислоты и снова инкубировали при 37°С в течение 20 мин. По окончании общего времени инкубации в различные моменты времени проводили измерения с помощью спектрофотометра для микропланшетов Thermo Scientific Multiskan SkyHigh при длине волны 600 нм. Пустая группа не содержала ферментов в экспериментальной установке, а контрольная группа не содержала экстракт. Процент антигиалуронидазной активности рассчитывали по следующему уравнению:

Антивозрастная активность (в процентах)= [(Abs контроля - Abs образца)/ Abs контроля] × 100

статистический анализ

Эксперименты с антиэластазной, антиколлагеназной и антигиалуронидазной активностью, включенные в это исследование, были повторены независимо три раза. Статистическая разница была проанализирована с использованием t-критерия программного обеспечения GraphPad Prism 8 (p меньше или равно 0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Определение омолаживающего потенциала

Эластин, коллаген и гиалуроновая кислота являются известными компонентами внеклеточного матрикса, которые играют ключевую роль в молодости кожи. Эластин является жизненно важным белком для поддержания эластичных свойств кожи, следовательно, уменьшение содержания эластина в ВКМ приводит к ускорению процесса старения.27 Предыдущая литература указывает на прямую связь между образованием морщин и старением кожи при пониженном количестве эластина.28 Гиалуроновая кислота представляет собой гидрофобную молекулу ГАГ, которая деполимеризуется под действием гиалуронидазы. Гиалуроновая кислота имеет решающее значение для поддержания гладкости и влажности кожи; следовательно, было показано, что чрезмерный распад приводит к высыханию и образованию морщин на коже. 29 В процессе старения с течением времени снижение уровня коллагена вызывает истончение дермы, что считается отличительным признаком при микроскопическом исследовании. 3 {{ 23). }} Было точно указано, что замедление распада коллагена с помощью ингибиторов коллагеназы, следовательно, замедляет образование морщин и старение структуры кожи. 5 Принимая во внимание эту информацию, вещества, которые ингибируют эластазу, коллагеназу и гиалуронидазу, обладают значительным потенциалом для продуктов против старения. Предыдущие исследования показали, что различные изофлавоноиды проявляют значительную ингибирующую биологическую активность в отношении вышеупомянутых ферментов. Addotey et al.31 показали, что четыре различных изофлавоноида ингибируют гиалуронидазу до 61,2%. Ким и др. 32 показали, что изолированный изофлавоноид из Glycyrrhiza uralensis Fisch., ликорицидин, обладает значительной активностью по ингибированию эластазы. Значение IC50 солодки было рассчитано как 61,2 ± 4,2 мкМ, тогда как олеаноловая кислота была рассчитана как 131,4 ± 11,4 в качестве эталонного соединения. Результаты показали, что изофлавоноиды могут ингибировать ферменты эластазы. В соответствии с вышеупомянутым исследованием Ким и др. 33 изучили девять различных пренилированных изофлавоноидов, очень родственных по структуре с осаджином, выделенных из корней Flemingia philippinensis Merr. & Рольфе. Исследователи сообщили, что пять из пренилированных изофлавонов обладали мощной ингибирующей активностью в отношении эластазы нейтрофилов, значения IC50 варьировались в пределах 1,9-12,0 мкМ, тогда как значение IC50 олеаноловой кислоты составляло 28,4 мкМ. В другом исследовании Egene Öz et al. 34 исследовали in vitro ингибирующую активность пяти изофлавоноидов, выделенных из корней Ononis spinoza L., в отношении гиалуронидазы, коллагеназы и эластазы. Сообщалось, что активность изофлавонов по ингибированию гиалуронидазы составляет 22,08-45,58%, в то время как при той же концентрации дубильная кислота показала ингибирование на 88,32%. Результаты ингибирования коллагеназы были рассчитаны между 20,41- 28,49 процента, а ингибирование эластазы было измерено как 20,47-46,88 процента. EGCG использовали в качестве эталона для обоих анализов, и ингибирующая активность при той же концентрации была измерена как 41,18% и 84,64% соответственно. В другом исследовании изучалось местное лечение помиферином, непосредственно выделенным из M. pomifera. 15 Помиферин представляет собой пренилированный изофлавоноид, который можно найти в плодах M. pomifera, и его молекулярная структура чрезвычайно напоминает структуру осаджина. Исследователи сообщили, что помиферин проявлял мощную активность по стимуляции белка ECM за счет увеличения количества коллагена и эластина, которые превосходят или эквивалентны эталонному соединению, ретинолу. Все упомянутые исследования показали, что изофлавоны являются ингибиторами этих ферментов от умеренных до мощных и обладают значительным потенциалом в качестве природных антивозрастных материалов.

В этом исследовании in vitro ингибирующая активность MPM в отношении гиалуронидазы, коллагеназы и эластазы изучалась для определения антивозрастного потенциала. Был проведен сравнительный анализ ингибирования коллагеназы в двух временных точках, например, 20 и 40 мин, как для MPM, так и для эталонного соединения, EGCG. Результаты показали, что ингибирующая активность коллагеназы увеличивалась со временем. 1 мг/мл MPM показал 84,55 ± 1,99% ингибирования, тогда как 25{40}} мкг/мл EGCG показал 84,66 ± 1,83% после 20 минут инкубации. Ингибирующая биоактивность усиливалась со временем, через 40 мин МФМ и ЭГКГ ингибировали коллагеназу на 94,68 ± 2,42% и 94,98 ± 2,81% соответственно. В соответствии с литературными данными, MPM проявлял значительную ингибирующую активность в отношении эластазы. Результаты были измерены для четырех временных точек (5, 10, 20 и 30 минут) и продемонстрировали увеличение с течением времени (рис. 2). ЭГКГ (250 мкг/мл) использовали в качестве эталона, и ингибирующая активность увеличивалась в каждый момент времени (44,07 ± 0,00 процента, 52,19 ± 0,00 процента, 64,69 ± 0,{{41). }} процентов и 86,21 ± 0,00 процентов соответственно). В то же время MPM в концентрации 1 мг/мл проявлял более высокую усиливающую и ингибирующую активность, которая повышалась с 34,70 ± 0,57 процента до 97,40 ± 1,04 процента с 5 до 30 минут. Точно так же 1 мг/мл MPM значительно ингибировал фермент гиалуронидазы после 40-минутной инкубации. Ингибирование 83,91 ± 2,36% было измерено через 40 мин, после 80 мин инкубации степень ингибирования увеличилась до 97,19 ± 0,45%. Когда были рассмотрены полные анализы ингибирования ферментов, результаты заметно продемонстрировали, что MPM может быть ценным естественным омолаживающим средством и может использоваться в составе различных продуктов против старения; таким образом, M. pomifera может приобрести дополнительное экономическое значение.

Определение антиоксидантного потенциала

Многочисленные экзогенные и эндогенные факторы приводят к старению кожи с помощью различных механизмов. На большинство этих факторов прямо или косвенно влияет образование АФК в ВКМ кожи.35 Поскольку кожа покрывает внешнюю часть нашего тела, в повседневной жизни она подвергается значительному воздействию УФ-излучения. Таким образом, большинство проблем с кожей, таких как солнечные ожоги, гиперпигментация и канцерогенез кожи, возникают или связаны с прямым воздействием УФ-излучения. Точно так же фотостарение является дополнительным следствием его опасных свойств.36 Более того, УФ-излучение вызывает образование АФК и, следовательно, окислительный стресс в тканях кожи, что является одним из наиболее важных механизмов, ведущих к фотостарению.37 Было высказано предположение, что, поскольку чрезмерное Образование АФК вызывает преждевременное старение кожи, агенты со значительной антиоксидантной способностью могут быть ценным инструментом против опасного воздействия УФ-излучения. Соответственно, клинические исследования показывают, что местное применение антиоксидантов оказывает защитное действие на кожу.38

После взаимосвязи между местным использованием антиоксидантов и отсрочкой старения кожи, которая хорошо известна в предыдущей литературе, изучение антиоксидантного потенциала MPM in vitro дает ценную информацию о его омолаживающем потенциале при местном применении. Более ранняя литература показала, что экстракты с высоким содержанием изофлавоноидов могут быть ценными антиоксидантами. В предыдущем исследовании богатый изофлавоноидами экстракт экстракта F. macrophylla уменьшал повреждение кожи, вызванное УФ-В, путем удаления АФК.39 Сантос и Силва4{{10}} указали, что пренилированные изофлавоноиды обладают важным антиоксидантным потенциалом благодаря флавоноидная часть и аддитивный эффект пренильной боковой цепи. Антиоксидантный потенциал экстрактов и изофлавоноидов M. pomifera оценивался в предыдущем исследовании. Результаты показали, что водно-спиртовой экстракт и чистый осаджин показали значительную активность в анализах DPPH, FRAP и TOAC, хотя фракции помиферина и этилацетата показали более высокую активность. проведено для комплексного определения антиоксидантного потенциала МФМ in vitro (табл. 2). MPM продемонстрировал значительную активность по удалению радикалов DPPH, где значение IC50 было измерено в 1998.86 ± {{20}}.02. Анализы FRAP и TOAC также продемонстрировали заметную металлоредуцирующую активность, 0,191 ± 0,01 мМ FeSO4/дЭ и 114,43 ± 0,02 AAE/г ДЭ соответственно. Эти результаты согласуются с предыдущим исследованием, опубликованным Orhan et al.41 Анализ CUPRAC был проведен на экстрактах плодов M. pomifera впервые, насколько нам известно. Соответственно, MPM продемонстрировал заметную медь-восстанавливающую активность в анализе CUPRAC, где результаты были измерены как 73,928 ± 0,01 AAE/г DE. Когда были рассмотрены анализы общей антиоксидантной способности, можно предположить, что MPM является многообещающим средством против старения.

Фенольный профиль и анализ ВЭТСХ

Изофлавоноиды представляют собой фенольные вещества, которые известны как растительные компоненты, ответственные за различные заслуживающие внимания биологические действия, такие как антиоксидантная, противораковая и гинекологическая активность. 42 Предыдущие исследования показали, что пренилированные изофлавоноиды являются основными фенольными соединениями в плодах M. pomifera. 43 Многочисленные исследования идентифицировали осаджин. и помиферин в качестве основных ингредиентов плодов M. pomifera, которые в первую очередь ответственны за его биологическую активность.12 Осаджин и помиферин являются очень похожими пренилированными изофлавоноидами, которые различаются только одной гидроксильной группой.44 Предыдущие отчеты продемонстрировали противоречивые результаты по содержанию осаджина и помиферина. плодов М. pomifera. Kartal et al.45 разработали метод ЖХ-МС для определения осаджина и помиферина в M. pomifera, которые были собраны в провинции Анкара в Турции. Результаты показали, что содержание помиферина было немного выше, чем содержание осаджина в разных частях образцов плодов. В другом исследовании образцы плодов M. pomifera были собраны в разных регионах Среднего Запада и юга США, а содержание осаджина и помиферина было измерено с помощью нового метода анализа ВЭЖХ. Результаты показали, что географические различия приводят к значительным изменениям количества изофлавоноидов в образцах.46 Tsao et al.47 определили содержание озаджина и помиферина в плодах, собранных в Канаде, и обнаружили, что содержание помиферина было немного выше, чем содержание озаджина. Напротив, Hwang et al. 48 обобщил несколько исследований, в которых было обнаружено, что количество осаджина выше, чем количество помиферина в различных экстрактах. Можно утверждать, что содержание осаджина и помиферина в плодах M. pomifera исключительно изменчиво с географическими различиями и методами экстракции из-за их явно схожей химической структуры. Насколько нам известно, для этого исследования количество MPM было измерено с помощью анализа ВЭТСХ. Результаты анализа показали, что осаджин является преобладающим ингредиентом MPM, собранного в провинции Ушак, 0,22 процента образца состояли из осаджина (таблица 1). Кроме того, для дальнейшей оценки фенольного профиля MPM были проведены анализы общего содержания фенолов и флавоноидов. Результаты показали, что MPM имеет заметное содержание фенолов и флавоноидов, как указано ниже; 113,92 ± 2,26 мг GAE/г и 66,41 ± 0,74 мг QE/г соответственно. Результаты оценки фенольного профиля показали, что MPM может быть важным кандидатом в качестве нового природного агента против старения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на то, что исследования, посвященные местному применению плодов M. pomifera, являются относительно новыми, внимание к этому вопросу возрастает благодаря обнадеживающим сообщениям. Таким образом, это исследование было направлено на описание всесторонней оценки возможного омолаживающего потенциала экстракта плодов M. pomifera. Анализ ВЭТСХ был использован для плодов M. pomifera для определения содержания изофлавоноидов впервые, насколько нам известно, наряду с исследованиями in vitro для определения общего фенольного профиля. Результаты показали, что осаджин является основным ингредиентом образцов. Кроме того, антиоксидантный потенциал экстракта in vitro был оценен с помощью четырех различных анализов, и результаты продемонстрировали значительный антиоксидантный потенциал MPM. Кроме того, была измерена ингибирующая активность в отношении ферментов, связанных с процессом старения, и было замечено, что MPM обладает заметной ингибирующей активностью в отношении ферментов. В заключение, это исследование предоставляет информацию, которая может привести к производству новых продуктов по уходу за кожей.

Этика

Одобрение комитета по этике:Для проведения исследования не требуется одобрения комитета по этике.

Информированное согласие:Не обязательно.

Экспертная оценка:Внешняя экспертная оценка.

Авторские вклады

Концепция: THB, TBŞ., HB, Дизайн: THB, İ.KC, EC, Сбор или обработка данных: THB, İ.KC, HB, Анализ или интерпретация: THB, İ.KC, Поиск литературы: THB, TBŞ., Написание: THB, EC

Конфликт интересов:Авторы заявляли об отсутствии конфликта интересов.

Финансовая открытость:Это исследование было поддержано Комиссией научных проектов Университета Аджибадема Мехмета Али Айдынлара (№: 2020/02/07).

ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА

1. Хван Э, Пак С.И., Инь К.С., Ким Х.Т., Ким Ю.М., Йи Т.Х. Антивозрастные эффекты смеси Panax ginseng и Crataegus pinnatifida на дермальные фибробласты человека и здоровую кожу человека. Дж. Женьшень Res. 2017;41:69-77.

2. Ганцевичене Р., Ляку А.И., Теодоридис А., Макрантонаки Э., Зубулис С.С. Стратегии борьбы со старением кожи. Дерматоэндокринол. 2012;4:308-319.

3. Lee H, Hong Y, Tran Q, Cho H, Kim M, Kim C, Kwon SH, Park S, Park J, Park J. Новая роль гинзенозида RG3 в замедлении старения посредством функции митохондрий в облученной ультрафиолетом коже человека. фибробласты. Дж. Женьшень Res. 2019;43:431-441.

4. Rouvrais C, Bacqueville D, Patrick B, Haure MJ, Duprat L, Coutanceau C, Castex-Rizzi N, Duplan H, Mengeaud V, Bessou-Touya S. Оценка антивозрастных свойств ретинальдегида, дельта-токоферолглюкозида и глицилглицина. комбинация олеамидов. Джей Инвест Дерматол. 2017;137(Приложение 2):S303.

5. Браво К., Альзате Ф., Осорио Э. Плоды выбранных дикорастущих и культивируемых андских растений как источники потенциальных соединений с антиоксидантной и омолаживающей активностью. Ind Crops Prod. 2016;85:341-352.

6. Йепес А., Очоа-Баутиста Д., Мурильо-Аранго В., Кинтеро-Саумет Дж., Браво К., Осорио Э. Семена пурпурной маракуйи (Passiflora edulis f. edulis Sims) как многообещающий источник средств против старения кожи: ферментативные , антиоксидантные и многоуровневые вычислительные исследования. Arab J Chem. 2021;14:102905.

7. Ритти Л., Фишер Г.Дж. Сигнальные каскады, индуцированные УФ-светом, и старение кожи. Старение Res Rev. 2002;1:705-720.

8. Дуке Л., Браво К., Осорио Э. Целостный подход к борьбе со старением, применяемый в отдельных культивируемых лекарственных растениях: взгляд на фотозащиту кожи с помощью различных механизмов. Ind Crops Prod. 2017;97:431-439.

9. Манджия Н.Дж., Нджаю Н.Ф., Джоши А., Упадхьяй К., Ширсат К., Девкар В.Р., Мундипа Ф.П. Омолаживающий потенциал лекарственных растений в Камеруне Harungana madagascariensis Lam. и Psorospermum aurantiacum Engl. предотвратить in vitro повреждение кожи, вызванное ультрафиолетовым светом B. Eur J Integr Med. 2019;29:100925.

10. Пуджимуляни Д., Сурьяни К.Л., Сетёвати А., Хандаяни РАС, Арумвардана С., Видовати В., Маруф А. Космецевтические возможности куркумы манги Вал. экстракт в фибробластах BJ человека против MMP1, MMP3 и MMP13. Гелион. 2020;6:e04921.

11. Ставропулу М.И., Статопулу К., Чейлари А., Бенаки Д., Гардикис К., Чиноу И., Алигианнис Н. ЯМР-метаболическое профилирование образцов греческого прополиса: сравнительная оценка их фитохимического состава и исследование их омолаживающих и антиоксидантных свойств. Джей Фарм Биомед Анал. 2021;194:113814.

12. Филип С., Джармати З., Лисичков К., Чанади Дж., Янков Р.М. Выделение и характеристика экстрактов маклюры (Maclura pomifera), полученных путем сверхкритической флюидной экстракции. Ind Crops Prod. 2015;76:995-1000.

13. Салуа Ф., Эддин Н.И., Хеди З. Химический состав и профильные характеристики семян осейджа Maclura pomifera (Rafin.) Schneider и масла семян. Ind Crops Prod. 2009;29:1-8.

14. Весела Д., Кубинова Р., Муселик Дж., Землицка М., Сухи В. Антиоксидантная активность и активность EROD осаджина и помиферина. Фитотерапия. 2004;75:209-211.

15. Грубер Дж.В., Хольц Р., Сиккинк С.К., Тобин Д.Дж. Исследование местного лечения помиферином in vitro и ex vivo. Фитотерапия. 2014;94:164-171.

16. Бозкурт И., Дилек Э., Эрол Х.С., Чакир А., Хамзаоглу Э., Коч М., Келеш О.Н., Халичи М.Б. Исследование влияния помиферина из Maclura pomifera на язву желудка, индуцированную индометацином: экспериментальное исследование на крысах. Мед. хим. рез. 2017;26:2048-2056.

17. Kurt-Celep İ, Celep E, Akyüz S, İnan Y, Barak TH, Akaydin G, Telci D, Yesilada E. Hypericum Olympic L. восстанавливает повреждения ДНК и предотвращает активацию MMP-9, вызванную УФ-В в коже человека. фибробласты. J Этнофармакол. 2020;246:112202.

18. Bardakci H, Cevik D, Barak TH, Gozet T, Kan Y, Kirmizibekmez H. Вторичные метаболиты, фитохимическая характеристика и антиоксидантная активность различных экстрактов Sideritis congesta PH Davis et Hub.- Mor. Биохим Сист Экол. 2020;92:104120.

19. Селеп Э., Севен М., Акьюз С., Инан Й., Есилада Э. Влияние метода экстракции на ингибирование ферментов, фенольный профиль и антиоксидантную способность Sideritis trojan Bornm. Южноафриканский Джей Бот. 2019;121:360–365.

20. Bardakcı H, Barak TH, Özdemir K, Celep E. Влияние пивоваренного материала и различных добавок на полифенольный состав и антиоксидантную биологическую активность коммерческой Tilia platyphyllos Scop. настои. Джей Рез Фарм. 2020;24:133-141.

21. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yesilada E. Влияние пищеварения человека in vitro на биодоступность фенольного содержания и антиоксидантную активность экстрактов плодов Viburnum opulus L. (европейская клюква). Ind Crops Prod. 2019;131:62-69.

22. Barak TH, Celep E, İnan Y, Yeşilada E. Моделирование пищеварения человека in vitro биодоступности и антиоксидантной активности фенолов из экстрактов плодов Sambucus ebulus L.. Пищевые биотехнологии. 2020;37:100711.

23. Эрсой Э., Эроглу Озкан Э., Бога М., Йылмаз М.А., Мат А. Антивозрастной потенциал и антитирозиназная активность трех видов зверобоя с акцентом на фитохимический состав с помощью ЖХ-МС/МС. Ind Crops Prod. 2019;141:111735.

24. Ли К.К., Ким Дж.Х., Чо Дж.Дж., Чой Дж.Д. ингибирующее действие 150 растительных экстрактов на активность эластазы и их противовоспалительное действие. Int J Cosmet Sci. 1999;21:71-82.

25. Itoh S, Yamaguchi M, Shigeyama K, Sakaguchi I. Антивозрастной потенциал экстрактов Chaenomeles sinensis. Косметика 2019;6:21.

26. Колайли С., Джан З., Йылдыз О., Шахин Х., Караоглу С.А. Сравнительное изучение антигиалуронидазных, антифризных, антиоксидантных, противомикробных и физико-химических свойств меда разной степени одноцветности каштанового (Castanea sativa Mill.). J Enzyme Inhib Med Chem. 2016;31(Приложение 3):96-104.

27. Korkmaz B, Horwitz MS, Jenne DE, Gauthier F. Нейтрофильная эластаза, протеиназа 3 и катепсин G как терапевтические мишени при заболеваниях человека. Pharmacol Rev. 2010;62:726-759.

28. Akazaki S, Nakagawa H, Kazama H, Osanai O, Kawai M, Takema Y, Imokawa G. Возрастные изменения морщин кожи, оцененные с помощью нового трехмерного морфометрического анализа. Бр Дж Дерматол. 2002;147:689- 695.

29. Barla F, Higashijima H, Funai S, Sugimoto K, Harada N, Yamaji R, Fujita T, Nakano Y, Inui H. Ингибирующее действие алкилгаллатов на гиалуронидазу и коллагеназу. Биоски Биотехнолог Биохим. 2019;73:2335-2337.

30. Чанг Дж. Х., Канг С., Варани Дж., Лин Дж., Фишер Дж. Дж., Вурхиз Дж. Дж. Снижение активности киназы, регулируемой внеклеточными сигналами, и повышение активности MAP-киназы, активируемой стрессом, в коже стареющего человека in vivo. Джей Инвест Дерматол. 2000;115:177-182.

31. Addotey JN, Lenger's I, Jose J, Gampe N, Béni S, Petereit F, Hensel A. Изофлавоноиды с ингибирующим действием на гиалуронидазу человека -1 и норнеолигнан клиториенолактон B из экстракта корня Ononis spinosa L.. Фитотерапия. 2018;130:169-174.

32. Ким К.Дж., Сюань С.Х., Пак С.Н. Ликорицидин, изофлавоноид, выделенный из Glycyrrhiza uralensis Fisher, предотвращает вызванное УФ-А фотостарение дермальных фибробластов человека. Int J Cosmet Sci. 2017;39:133-140.

33. Ким Дж.И., Ван Й., Уддин З., Сонг Й.Х., Ли З.П., Дженис Дж., Пак К.Х. Конкурентные изофлавоны, ингибирующие эластазу нейтрофилов, из корней Flemingia philippinensis. Биоорг хим. 2018;78:249-257.

34. Эргене Оз Б., Салтан Ишкан Г., Кюпели Акколь Э., Сюнтар И., Бахадыр Аджикара О. Изофлавоноиды как ранозаживляющие средства из корня Ононидиса. J Этнофармакол. 2018;211:384-393.

35. Азеведо Мартинс Т.Э., де Оливейра Пинто CAS, де Оливейра А.С., Роблес Веласко М.В., Горрити Гутьеррес А.Р., Коскильо Рафаэль М.Ф., Уамани Тарасона Х.П., Ретуэрто-Фигероа М.Г. Вклад актуальных антиоксидантов для поддержания здоровой кожи - обзор. научная фарм. 2020;88:27.

36. Крутманн Дж., Шредер П. Роль митохондрий в фотостарении кожи человека: модель дефектной электростанции. J Investig Dermatol Symp Proc. 2009;14:44-49.

37. Донг К.К., Дамаги Н., Пикарт С.Д., Маркова Н.Г., Обаяши К., Окано Ю., Масаки Х., Гретер-Бек С., Крутманн Дж., Смайлс К.А., Ярош Д.Б. УФ-индуцированное повреждение ДНК инициирует высвобождение MMP-1 в коже человека. Опыт Дерматол. 2008;17:1037-1044.

38. Oresajo C, Pillai S, Manco M, Yatskayer M, McDaniel D. Антиоксиданты и кожа: понимание состава и эффективности. Дерматол Тер. 2012;25:252-259.

39. Чан Х.М., Чиу Х.Х., Ляо С.Т., Чен Ю.Т., Чанг Х.К., Вэнь К.С. Богатый изофлавоноидами экстракт фламандского макрофилла ослабляет повреждение кожи, вызванное УФ-В, удаляя активные формы кислорода и ингибируя экспрессию MAP-киназы и MMP. Комплемент на основе Evid Alternat Med. 2013;2013:696879.

40. Сантос КММ, Сильва АМС. Антиоксидантная активность пренилфлавоноидов. Молекулы. 2020;25:696.

41. Orhan IE, Sezer Senol F, Demirci B, Dvorska M, Smejkal K, Zemlicka M. Антиоксидантный потенциал некоторых природных и полусинтетических производных флавоноидов и экстрактов Maclura pomifera (Rafin.) Schneider (осейдж апельсин) и его эфирных масел. масляный состав. Турецкий J Biochem. 2016;41:403-411.

42. Кржижова Л., Дадакова К., Кашпаровска Ю., Кашпаровский Т. Изофлавоны. Молекулы. 2019;24:1076.

43. Su Z, Wang P, Yuan W, Grant G, Li S. Фенольные смолы из плодов Maclura pomifera. Нац Прод коммун. 2017;12:1743-1745.

44. Оразбеков Ю., Ибрагим М.А., Момбеков С., Шриведавьясасри Р., Датхаев У., Махатов Б., Чаурасия Н.Д., Теквани Б.Л., Росс С.А. Выделение и биологическая оценка пренилированных флавоноидов из Maclura pomifera. Комплемент на основе Evid Alternat Med. 2018;2018:1370368.

45. Картал М., Абу-Асакер М., Дворска М., Орхан И., Землячка М. Метод LC-DAD-MS для анализа помиферина и осаджина, основных изофлавонов в Maclura pomifera (Rafin.) Schneider. Хроматография 2009;69:325-329.

46. ​​Дарджи К., Миглис С., Уордлоу А., Абурашед Э.А. Определение уровня изофлавонов с помощью ВЭЖХ в осейдже апельсине со Среднего Запада и юга США. J Agric Food Chem. 2013;61:6806-6811.

47. Цао Р., Ян Р., Янг Дж. К. Антиоксидантные изофлавоны в осейдж апельсине, Maclura pomifera (Raf.) Schneid. J Agric Food Chem. 2003;51:6445-6451.

48. Хванг Х.С., Винклер-Мозер Дж.К., Тиссерат Б., Гарри-Окуру Р.Э., Берхов М.А., Люн С.Х. Антиоксидантная активность экстракта осейдж апельсина в соевом масле и рыбьем жире при хранении. J Am Oil Chem Soc. 2021;98:73-87.

【Для получения дополнительной информации:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】