Экстракт клеток жасмина самбак в качестве антиоксидантного усилителя против старения кожи, часть 1

Абстрактный: Окислительный стресс играет важную роль в процессе старения кожи за счет выработки активных форм кислорода и образования конечных продуктов гликирования (AGE). Поэтому антиоксидантные ингредиенты необходимы на рынке средств по уходу за кожей, а использование молекул, происходящих из культур растительных клеток, предоставляет уникальную возможность. В данной работе исследованы свойства гидроэтанольного экстракта, полученного клетками Jasminum sambac (JasHEx). Антиоксидантные и антивозрастные свойства были исследованы с помощью междисциплинарного подхода, сочетающего масс-спектрометрические и биоинформационные эксперименты in vitro и ex vivo. JasHEx содержит производные фенольной кислоты, лигнаны и тритерпены, и было обнаружено, что он снижает выработку цитозольных активных форм кислорода в кератиноцитах, подверженных экзогенному стрессу. Он также показал способность снижать образование КПГ и увеличивать выработку коллагена I типа во внеклеточном матриксе. Данные показали, что антиоксидантные свойства JasHEx были связаны с его активностью по удалению свободных радикалов и хелатированию металлов, а также с активацией пути Nrf2/ARE. Это может хорошо объяснить противовоспалительную активность JasHEx, связанную со снижением уровня NO в LPS-стимулированных макрофагах. Таким образом, JasHEx можно считать мощным антиоксидантным усилителем против старения кожи, вызванного окислительным стрессом.

Гликозид цистанхе также может повышать активность СОД в тканях сердца и печени и значительно снижать содержание липофусцина и МДА в каждой ткани, эффективно удаляя различные активные кислородные радикалы (ОН-, Н₂О₂ и др.) и защищая от повреждения ДНК, вызванного ОН-радикалами. Цистанхефенилэтаноидные гликозиды обладают сильной акцепторной способностью свободных радикалов, более высокой восстановительной способностью, чем витамин С, улучшают активность СОД в суспензии сперматозоидов, снижают содержание МДА и оказывают определенное защитное действие на функцию мембран сперматозоидов. Полисахариды цистанхе способны усиливать активность СОД и GSH-Px в эритроцитах и ​​тканях легких экспериментально стареющих мышей, вызванную D-галактозой, а также снижать содержание МДА и коллагена в легких и плазме, повышать содержание эластина, хороший очищающий эффект на DPPH, продлевает время гипоксии у стареющих мышей, улучшает активность SOD в сыворотке и задерживает физиологическую дегенерацию легких у экспериментально стареющих мышей Эксперименты с клеточной морфологической дегенерацией показали, что Cistanche обладает хорошей антиоксидантной способностью и потенциально может стать лекарством для профилактики и лечения заболеваний кожи, вызывающих старение. В то же время эхинакозид в цистанхе обладает значительной способностью улавливать свободные радикалы DPPH и может улавливать активные формы кислорода, предотвращать вызванную свободными радикалами деградацию коллагена, а также оказывает хорошее восстанавливающее действие на повреждение анионов свободных радикалов тимина.

Нажмите «Где я могу купить Цистанхе».

【Для получения дополнительной информации:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】

Ключевые слова: старение кожи; активные формы кислорода (АФК); конечные продукты повышенного гликирования (AGE); гидроэтанольный экстракт жасмина самбак (JasHEx); масс-спектрометрии; метаболомика; Глобальная социальная молекулярная сеть натуральных продуктов (GNPS); ядерный фактор эритроидный 2-родственный фактор 2 (Nrf2)

1. Введение

Генетические внутренние факторы и внешние агенты, такие как ультрафиолетовое облучение, инфракрасное облучение, ксенобиотики и загрязнители окружающей среды, вызывают образование активных форм кислорода (АФК). Они генерируются активацией митохондриальной дыхательной цепи, цитохрома р450 и НАДФН-оксидаз [1]. АФК включают свободные радикалы (супероксидный анион, гидропероксильный радикал, алкоксирадикал и гидроксильный радикал) и нерадикальные молекулы (перекись водорода и синглетный кислород) [2]. Когда антиоксидантные системы перегружены, АФК накапливаются внутри клеток и вызывают так называемый окислительный стресс, который является основным фактором старения кожи [3].

Действительно, окислительный стресс вызывает как повреждение ДНК, так и окисление липидов и белков вместе с запуском пути митоген-активируемых протеинкиназ (MAPK) (AKT, JNK, ERK и p38) [4]. Это, в свою очередь, способствует экспрессии провоспалительных цитокинов, факторов роста и адгезивных молекул посредством стимуляции факторов транскрипции AP-1 и NF-κB. Более того, активация пути MAPK вызывает изменения дермального матрикса за счет снижения уровня коллагена. Он ускоряет разрушение коллагена, модулируя экспрессию матриксных металлопротеиназ (MMP) и их тканевых ингибиторов TIMP, и снижает синтез нового коллагена, блокируя рецептор TGF-типа II/передачу сигналов Smad. В дополнение к этому, окислительный стресс изменяет состояние кожи, нарушая градиент эпидермального кальция, необходимый для целостности и функции ороговевшей оболочки, стимулируя функцию сальных желез и индуцируя дегенерацию меланоцитов [5].

Параллельно с этим образование модифицированных биомолекул, известных как конечные продукты гликирования (AGE), способствует окислительному стрессу в клетках и тканях [6]. Развитие этих биомаркеров старения индуцируется различными факторами окружающей среды, такими как сигаретный дым, высокое содержание рафинированных и простых углеводов в рационе, продукты, приготовленные при высокой температуре, и малоподвижный образ жизни; КПГ представляют собой стабильные и необратимые продукты, полученные в результате неферментативной реакции между редуцирующими сахарами и белками, нуклеиновыми кислотами или липидами с последующими дальнейшими перегруппировками [7]. Действительно, отправной точкой образования КПГ является реакция Майяра, в которой карбонильные группы восстанавливающих сахаров обратимо реагируют со свободными аминогруппами белков, нуклеиновых кислот или аминофосфолипидов с образованием оснований Шиффа. Эти имины спонтанно перегруппировываются в более стабильный кетамин, называемый продуктами Амадори. Они продуцируют реактивные дикарбонилы (такие как глиоксаль или метилглиоксаль), которые реагируют с лизиновыми и аргининовыми функциональными группами белков, образуя большое разнообразие КПГ [8,9]. Они подразделяются на разные группы в зависимости от их способности излучать флуоресценцию и образовывать поперечные связи.

Действие AGE опосредовано рецепторами AGE (RAGE), которые представляют собой трансмембранные белки, принадлежащие к надсемейству иммуноглобулинов молекул клеточной поверхности типа I, экспрессируемые в различных типах клеток, включая кератиноциты, фибробласты и макрофаги. Связывание AGEs/RAGEs увеличивает продукцию ROS главным образом за счет активации НАДФН-оксидаз (NOX) и митохондриальной дыхательной цепи, что приводит к окислительному стрессу и всем вышеописанным последующим эффектам [6,8].

Более того, белки внеклеточного матрикса (ECM), особенно коллаген, очень чувствительны к гликированию. Действительно, уровни пентозидина структуры AGE, полученного из коллагена, значительно выше у пожилых людей, чем у молодых [10]. Гликирование коллагена изменяет не только механические свойства самого коллагена, который становится более жестким и ломким [11], но и свойства внеклеточного матрикса, влияя на поведение резидентных клеток (рост, дифференцировку, подвижность, экспрессию генов и ответ на изменения). цитокины) и матрично-клеточные взаимодействия [12].

В этом сценарии антиоксидантные ингредиенты пользуются большим спросом в косметической области для уменьшения образования КПГ и связанного с ними окислительного каскада: экстракты, полученные из вида Jasminum sambac, принадлежащего к семейству Oleaceae, интересны своими антиоксидантными свойствами и их совместным использованием в народной медицине. средства для лечения кожных заболеваний [13]. Однако растительные экстракты имеют ряд недостатков, таких как плохая биоустойчивость, потенциальное загрязнение пестицидами, удобрениями или патогенами, а также изменчивость их качественного и количественного состава в зависимости от времени года и условий окружающей среды. Достойной альтернативой растениям как источнику биоактивных косметических ингредиентов являются культуры клеток растений, обладающие рядом преимуществ: (i) высокая устойчивость производственного процесса, поскольку не требуются сельскохозяйственные угодья; (ii) непрерывное снабжение натуральными продуктами без зависимости от географического положения, сезона и репродуктивного цикла растений; (iii) отсутствие риска заражения патогенами, загрязнителями окружающей среды и остатками агрохимикатов; (iv) стандартизированные условия выращивания, позволяющие получать более высокие и воспроизводимые показатели выхода биомассы и метаболитов; (v) высокая универсальность, поскольку концентрация соединений может быть оптимизирована путем изменения условий культивирования и (vi) более простые и менее трудоемкие протоколы экстракции, снижающие потребность в агрессивных растворителях [14,15].

Здесь изучали гидроэтанольный экстракт, полученный из культур клеток Jasminum sambac (JasHEx). Целью нашего исследования является широкая химическая и биологическая характеристика JasHEx, в частности изучение его антигликационных и омолаживающих свойств. Во-первых, для получения подробной структурной характеристики экстракта использовались передовые подходы на основе масс-спектрометрии. Затем были проведены эксперименты in vitro и ex vivo, чтобы доказать биологическую активность JasHEx как антиоксиданта.

2. Материалы и методы

2.1. Культуры растительных тканей и подготовка экстрактов

Сертифицированный арабский жасмин (Jasminum sambac) был получен из местного питомника («Ladre di Piante», Пистойя, регион Тоскана, Италия). Листья жасмина самбак вымачивали в 70 % этаноле (Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) в течение 1 минуты и стерилизовали поверхность 1 % (об./об.) коммерческого отбеливателя с добавлением твина 2{{ 9}} (Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) в течение 8 мин с последующим трехкратным полосканием в стерильной дистиллированной воде. Затем листья разрезали на кусочки 0,5–1,0 см и культивировали на полноценных средах МС [16], содержащих 3% (масс./об.) сахарозы, 0 0,2 мг/л 2,4D и 8 г/л фитоагара. Экспланты ежемесячно пересевают на свежую среду в течение трех месяцев. Как только был получен желто-зеленый, рыхлый и быстрорастущий каллюс, растительные клетки переносили в жидкую среду MS, дополненную 3% (масса/объем) сахарозы и 0,2 мг/л 2,4D. Суспензию перемешивали на вращающемся шейкере при 110 ч и 27°С в темной комнате. Выращенные в темноте клетки каждую неделю увеличивали в масштабе от мелкомасштабных до крупномасштабных колб до тех пор, пока не были достигнуты жидкие суспензионные культуры с концентрацией около 177 г/л. Приготовление водно-этанольного экстракта клеточной культуры Jasminum sambac (JasHEx) осуществляли путем добавления 2000 мл раствора этанол/вода (90/10, об./об.) к 500 г клеток. Смесь гомогенизировали в течение 3 мин при 1500 об/мин и 6 мин при 3800 об/мин с использованием ножевой мельницы Grindomix GM300 (Retsch GmbH, Haan, Germany). Полученную суспензию перемешивали при 400 об/мин в течение 2 ч при 25 ◦C, избегая воздействия света. Затем суспензию центрифугировали при 6300 об/мин в течение 10 мин при 4°С. Супернатант удаляли, фильтровали и затем концентрировали в вакууме на роторном испарителе (IKA RV8, IKA-Werke GmbH & Co., Штауфен, Германия) при температуре 25°С. Наконец, pH доводили до 7,0 с помощью 10 н. NaOH и затем сушили вымораживанием до получения тонкого порошка.

2.2. УЭЖХ–МС/МС анализ для химической характеристики JasHEx

Была достигнута двухфазная экстракция бутанол/вода. Бутанольную фракцию высушивали и оттаивали в метаноле (10 мг/мл) перед проведением анализа УЭЖХ-МС/МС на масс-спектрометре Q-Exactive Classic, оснащенном системой УЭЖХ UltiMate™ 3000 (Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). ). Все хроматографические циклы проводили, как уже описано Ceccacci et al. [17].

2.3. Глобальный анализ социальных молекулярных сетей натуральных продуктов

Для идентификации метаболитов использовали социальную молекулярную сеть Global Natural Products [18]. Все те сигналы MS и MSMS, не присвоенные GNPS, были тщательно изучены и присвоены в соответствии с литературой. Необработанные файлы были преобразованы в формат mzXML с помощью программного обеспечения общего пользовательского интерфейса MS Converter перед поиском в спектральной библиотеке GNPS. Это было выполнено с использованием допуска массы иона-предшественника 0.025 Да, допуска массы фрагментного иона 0.02 Да, минимальных совпадающих пиков 2 и порога оценки 0,7. Результаты подтверждались вручную.

Предварительная обработка данных выполнялась с помощью Mzmine (версия 2.53, Softpedia, Бухарест, Румыния) [19], а задание Feature-Based Molecular Networking (FBMN) [20] выполнялось, как сообщает Ceccacci et al. [17]. Полученные сетевые файлы были импортированы в Cytoscape (версия 3.9.1, Национальный институт общих медицинских наук США (NIGMS), Bethesda, MD, USA) [21].

2.4. Количественный анализ лигнанов и тритерпенов

Те же самые настройки УЭЖХ, установленные для качественных экспериментов, использовались для количественного анализа лигнанов, в то время как для тритерпенов они были улучшены для разделения двух пар изомеров, аржуноловой/азиатской кислоты и олеаноловой/урсоловой кислоты. Анализ проводили на масс-спектрометре Q-Exactive Classic, как определено ранее. Разделение проводили на Phenomenex Kinetex (Торранс, Калифорния, США) EVO C18 300 Å (150 × 2,1 мм, размер частиц 5 мкм). Подвижная фаза состояла из A (5 мМ водного раствора ацетата аммония, pH 9,00 скорректированного гидроксидом аммония) и B (1{{40}}0 % ацетонитрила) с использованием градиентная элюция 13–28 процентов B при 0–20 мин, 28–65 процентов B при 20–24 мин, 65–75 процентов B при 24–28 мин, 75–95 процентов при 28–28,5 мин, 95 процентов при 28,5 –32 мин, 95–13% на 32–32,1 мин и 13% на 32,1–44 мин. Скорость потока составляла 0,450 мл/мин, а объем инъекции составлял 5 мкл. Как для лигнанов, так и для тритерпенов данные были получены с помощью метода масс, описанного Ceccacci et al. [17]. Мы приобрели нортачелогенин (#LCA52174) у Biosynth Carbosynth, матаирезинол (#80497) и маслиновую кислоту (#83209) у PhytoLab GmbH & Co.KG, секоизоларицирезинол (#60372) и аржуноловую кислоту (#SMB00119) у Sigma-Aldrich (Сент-Луис). , Мичиган, США), азиатская кислота (#0027), олеаноловая кислота (#0041 S) и урсоловая кислота (#0037 S) от Extrasynthèse (Genay, Франция). Калибровочные кривые получали путем введения стандартов в концентрации от 0,05 до 25 мкМ для лигнанов и от 0,1 до 25/250 мкМ для тритерпенов. Предел обнаружения (LOD) и предел количественного определения (LOQ) для стандартов определяли на основе отношения сигнал/шум (S/N).

2.5. Культуры клеток кожи и эксплантаты

Иммортализованные кератиноциты человека (HaCaT), купленные у компании Addexbio Technologies (Сан-Диего, Калифорния, США), сохраняли в модифицированной среде Игла Дульбекко (DMEM; Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США), в которую добавляли 10-процентную фетальную бычью сыворотку. (FBS; Sigma Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США) в 95-процентном воздухе, 5-процентном содержании CO2 и во влажной атмосфере при температуре 37 ◦C. Дермальные фибробласты человека (HDF) сохраняли в среде Игла, модифицированной Дульбекко (DMEM; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США), с добавлением 10% эмбриональной бычьей сыворотки (FBS; Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). ) в 95-процентном воздухе, 5-процентном СО2 и влажной атмосфере при 37 ◦C. Кожные эксплантаты, полученные из кожи здоровых женщин-доноров (31 и 40 лет) в хирургическом центре Villa Cinzia (Неаполь, Италия), культивировали в 24-трансвелловых планшетах в среде DMEM/FBS плюс антибиотики в воздушно-жидкостных условиях. при 37 ◦C в увлажненном воздухе с 5% CO2. Все доноры дали письменное информированное согласие на использование кожных тканей в соответствии с Хельсинкской декларацией.

2.6. Цитозольный анализ АФК в H2O2-напряженных клетках HaCaT

Для этого процесса 1,8 × 104 HaCaT высевали в 96-луночные планшеты и выращивали в течение 20 часов. Затем клетки обрабатывали в течение 2 ч различными концентрациями JasHEx (0,0006%, 0,002% и 0,006% от объема) или 500 мкМ аскорбиновой кислоты, используемой в качестве положительного контроля. После этого их промывали в PBS (фосфатно-солевом буфере) и инкубировали при 37 ◦C со 100 мкл/лунку раствора, содержащего: 10 мМ Hepes, 1,3 мМ CaCl2, 1 мМ MgSO4, 5 мМ глюкозы и 5 мкМ CM-H2DCFDA (5-(и-6)-хлорметил-20,70 -дихлордигидрофлуоресцеиндиацетат, Invitrogen). Через 45 минут выполняли промывку PBS и измеряли базовую интенсивность флуоресценции клеток при 535 нм (возбуждение 485 нм) с использованием прибора EnVision (PerkinElmer, Уолтем, Массачусетс, США). Затем индуцировали окислительный стресс добавлением 450 мкМ H2O2 и через 30 мин измеряли флуоресценцию образцов.

2.7. Иммуноферментный анализ (ELISA) для обнаружения AGE в клетках дермальных фибробластов человека (HDF), подвергнутых воздействию глиоксаля

На этом этапе 1,5 × 104 HDF высевали в 96-луночные планшеты и выращивали в течение 2 дней. После промывания PBS клетки фиксировали в течение 1{{10}} мин 100 мкл 4-процентного формальдегида в PBS. Затем их обрабатывали JasHEx (0,0006% и 0,002% по объему) или положительным контролем 1 мкМ аминогуанидина в присутствии 0,5% глиоксаля при 50°C в течение 1 недели. После инкубации их обрабатывали для твердофазного иммуноферментного анализа (ELISA) с использованием специфического антитела против AGE (Abcam ab23722).

2.8. Иммуногистофлуоресцентный анализ эксплантатов кожи, подвергнутых воздействию метилглиоксаля, для обнаружения фибриллина-1

Кожные эксплантаты были получены от двух пациентов в возрасте 31 и 4 лет. Из каждой биопсии кожи было создано три удара для каждой обработки, происходящей на границе раздела воздух-жидкость. В первый день штампы обрабатывали JasHEx (0.002% и 0,006% p/v) или положительным контролем (1 мМ аминогуанидин), а через 24 ч - 500 мкМ метил- был добавлен глиоксаль. Процедуры обновлялись каждые два дня в течение семи дней. В конце периода штампы обрабатывали для гистологического анализа, фиксировали в 4-процентном растворе PFA, инкубировали в 15-процентном растворе сахарозы, затем в 30-процентном растворе сахарозы и криохранили в смеси ОСТ (оптимальная температура резки) при -80 ◦C. . Криосрез 5 мкм был получен с помощью криостата CM1520 Leica (Leica Biosystems, Буффало, Иллинойс, США). Предметные стекла с криосрезами гидратировали в течение 30 мин в PBS и помещали в «блокирующий» раствор (6% BSA, 5% сыворотка, 20 мМ MgCl2, 0,2% Tween) на 1 час. Впоследствии их инкубировали с первичным антителом против фибриллина 1 (MA5-12770, Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). в течение 16 ч при 4 ◦C. Предметные стекла промывали PBS в течение 30 минут, а затем инкубировали со вторичным антикроличьим антителом Alexa-Fluor 546 (A11035, Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) в течение 1 часа. Ядра окрашивали DAPI (40, 6-5диамидино-2-фенилиндол) 1 мкг/мл в PBS в течение 10 мин. Изображения были получены с помощью флуоресцентного микроскопа и проанализированы с помощью программного обеспечения ImageJ (версия 1.53a, Национальный институт здравоохранения, США).

2.9. Анализ AlphaLISA для измерения содержания C-пептида проколлагена I типа (PIP)

На этом этапе 8 × 103 HDF высевали в 96-луночный планшет и обрабатывали в течение 24 ч JasHEx (0.0006%, 0,002%, и 0,006% по объему) или с TGF- (2,5 нг/мл). После обработки клетки обрабатывали в соответствии с инструкциями поставщика набора коллагена alpha LISA hPIP (AL353HV, (PerkinElmer, Уолтем, Массачусетс, США)).

2.10. Анализ активации транскрипции на основе люциферазы Nrf2

Здесь 6 × 103 клеток HaCaT в 96-луночный планшет высевали и выращивали в течение 16 часов. После этого они были подвергнуты анализу активации транскрипции на основе люциферазы Nrf2 с использованием репортерного набора ARE BPS Bioscience (Сан-Диего, Калифорния, США, № 60514). Готовый к трансфекции репортерный вектор люциферазы ARE (содержащий ген люциферазы светлячка под контролем ARE-чувствительных элементов, расположенных выше минимального промотора) вместе с внутренним контролем (конститутивно экспрессирующий вектор люциферазы Renilla) временно совместно трансфицировали в клетки HaCaT с использованием Реагент для трансфекции ДНК HP гена X-TREME (Roche, Basilea, Швейцария, № 6366244001). После трансдукции в течение 24 часов клетки обрабатывали в течение 2 часов экстрактом (0,0006 %, 0,002 % и 0,006 % от объема) или положительным контролем ресвератрола (50 мкМ). После этого они были подвергнуты анализу люциферазы с помощью системы анализа люциферазы Dual-Glo (Promega, Rome, Italy #E2920). Вкратце, клетки инкубировали с субстратом люциферазы светлячка в течение 10 минут перед измерением люминесценции в 96-луночном ридере для планшетов (Victor Nivo, Waltham, MA, USA). Соотношение люминесценции светлячка и Renilla было рассчитано для нормализации и сравнения транскрипционной активности Nrf2.

2.11. Анализ экспрессии генов SOD-1(NM_000454.5) и OH-1(NM_002133.3) в клетках HaCaT

Для этого процесса 1,5 × 105 клеток HaCaT на лунку выращивали в 6-луночных планшетах в течение 16 ч и инкубировали в течение 6 ч с экстрактом (0,002% и 0,006% p/v) или 50 мкМ ресвератрола в качестве положительного контроля. В конце инкубации тотальную РНК экстрагировали с использованием набора «GenElute™ Total RNA Purification» (от Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Мичиган, США) и обрабатывали ДНКазой I (Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) при 37°С. ◦C в течение 30 мин для удаления примеси геномной ДНК. 500 нг тотальной РНК ретротранскрибировали с использованием фермента обратной транскриптазы (Thermo Scientific, Waltham, MA, USA).Полуколичественную ОТ-ПЦР проводили с использованием пары универсальных праймеры 18S праймер/конкурент (Invitrogen-Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США) в качестве внутренних стандартов.Продукты ПЦР разделяли на 1,5% агарозном геле и просматривали с использованием прибора iBright (Invitrogen Thermo Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). Последовательности праймеров, используемых для амплификации, были следующими: HsSOD1Fw: GAAAGTAATGGACCAGTGAAGG; HsSOD1Rv: ATTGGGCGATCCCAATTACACC; OH-1Fw GAACTTTCAGAAGGGTCAGG; OH-1Rv GCTCAATGTTGAGCAGGAA.

2.12. Анализ оксида азота в RAW 264.7, стимулированном LPS

Концентрацию NO определяли в мышиных макрофагах RAW 264.7, высеянных в концентрации 1,5 × 1{8}}5 клеток/лунку в 96-луночные планшеты в течение 24 ч и предварительно обработанных экстрактом ({{1 0}}0,0006%, 0,002% и 0,006% по объему) или с 10 мкМ TPCK (положительный контроль) в течение 2 часов перед инкубацией с 2 ​​мкг/мл LPS в течение 18 часов. Количество NO, перешедшего в нитрит, рассчитывали добавлением реактива Грисса (раствор N-(1-нафтил)этилендиамина и сульфаниловой кислоты, Invitrogen-Thermo Scientific, Waltham, MA, USA) и через 30 мин поглощение измеряли при 540 нм с помощью многолуночного планшет-ридера (EnVision, PerkinElmer, Уолтем, Массачусетс, США)

3. Результаты

3.1. Качественный и количественный анализ гидроэтанольного экстракта клеточной культуры жасмина самбака (JasHEx)

Был проведен UPLC-MS/MS анализ JasHEx, а спектрометрические данные высокого разрешения были проанализированы с использованием Global Natural Products Social Molecular Networking (GNPS), веб-системы масс-спектрометрии, которая помогает в аннотации натуральных продуктов (NP) [18] . В частности, спектральная библиотека GNPS была выполнена для онлайн-дерепликации. Химические виды, не идентифицированные с помощью GNPS, были отнесены в соответствии с литературными данными. Как показано на рисунках 1 и 2 и в таблице 1, было идентифицировано более 50 соединений, принадлежащих к нескольким классам вторичных метаболитов, в основном полифенолы и терпены. Действительно, экстракт JasHEx содержит производные фенольной кислоты, лигнаны (секоизоларицирезинол, нортрахелогенин и матаирезинол) и тритерпеноиды (аржуноловая кислота, аспарагиновая кислота, маслиновая кислота, олеаноловая кислота и урсоловая кислота).

【Для получения дополнительной информации:george.deng@wecistanche.com / WhatApp:86 13632399501】