Фактор, индуцируемый гипоксией перицитов почек, регулирует эритропоэз, но не фиброз почек
Mar 13, 2022
Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Шу-Ю Пан1,2,3 и другие
Ингибиторы фермента домена пролилгидроксилазы (PHD) эффективны при лечениихроническое заболевание почек(ХБП)-ассоциированная анемия за счет стабилизации фактора, индуцируемого гипоксией (HIF), тем самым повышая уровень эритропоэтина и, следовательно, эритропоэз. Тем не менее, опасения по поводу прогрессирования ХБП необходимо решать в ходе клинических испытаний. Хотя доклинические исследования показали противовоспалительный эффект впочкамодели заболевания, влияние ингибиторов PHD напочкафиброзбыл непоследовательным, вероятно, потому, что эффекты HIF зависят от типа клеток и контекста. ГлавнымпочкаКлетки, продуцирующие эритропоэтин, представляют собой перициты, которые продуцируют эритропоэтин посредством HIF-2a-зависимой транскрипции генов. Обеспокоенность влиянием HIF в перицитах напочкафиброзвозникает из-за того, что перициты являются основными клетками-предшественниками миофибробластов при ХБП. Поскольку клетки, экспрессирующие Gli1, соответствуют морфологическим и анатомическим критериям перицитов, мы индуцировали Gli1 плюс клеточно-специфическую стабилизацию или нокаут HIF для изучения влияния HIF в перицитах напочкапатология мышей с фиброзным повреждением или без него, вызванная односторонней обструкцией мочеточника. По сравнению с контрольными однопометниками, у мышей со специфичной для перицитов стабилизацией HIF за счет белка фон Хиппеля-Линдау или нокаута PHD2 наблюдались повышенный уровень эритропоэтина в сыворотке и полицитемия, а не заметная разница впочкафиброз. По сравнению с Gli1плюсперициты, отсортированные от контрольных однопометников, Gli1плюсперициты, отсортированные от мышей с нокаутом PHD2, показали повышенную экспрессию гена эритропоэтина, а не заметные изменения в экспрессии Col1a1 или Acta2. Кроме того, специфичный для перицитов нокаут HIF-1a или HIF-2a не влиял напочкафиброз. Таким образом, наше исследование подтверждает отсутствие негативного влияния ингибиторов PHD напочкафиброзмышей, несмотря на стабилизацию HIF в перицитах.
КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: эритропоэтин;фиброз; фактор, индуцируемый гипоксией; перицит
Цистанхехорошо дляпочечныйфункция
Заявление о переводе
Ингибиторы фермента домена пролилгидроксилазы (PHD) эффективны при лечении анемии ухроническийпочкаболезнь(ХБП) за счет стабилизации фактора, индуцируемого гипоксией (HIF), тем самым повышая уровень эритропоэтина (ЭПО) и эритропоэз. Почечные перициты продуцируют EPO через HIF-2a в нормальных физиологических условиях, но они дифференцируются в рубцовые миофибробласты при ХБП. Неясно, влияет ли экспрессия HIF в перицитах почек.почечныйфиброз. С помощью доклинических мышиных моделей манипуляций с HIF и почечного фиброза мы показываем, что Gli1 плюс специфичные для перицитов манипуляции с HIF влияют на продукцию EPO и эритропоэз, но непочечный фиброз. Наше исследование подтверждает отсутствие негативного влияния ингибиторов PHD на почечный фиброз.
Основа лечения анемии у больных схроническийпочкаболезнь(CKD) – стимуляторы эритропоэза и препараты железа. 1,2 В последнее время ингибитор фермента домена пролилгидроксилазы (PHD) становится многообещающим терапевтическим средством для лечения анемии, связанной с ХБП, главным образом за счет стабилизации фактора, индуцируемого гипоксией (HIF), и, таким образом, увеличения продукции эритропоэтина (EPO).3-5 Клинические применение ингибиторов PHD или стабилизаторов HIF у пациентов с CKD неизбежно в обозримом будущем, если опасения относительно возможного ангиогенеза, роста опухоли, аномального метаболизма глюкозы и ускоренного сниженияпочкафункции должны быть рассмотрены в ходе клинических испытаний.
HIF является наиболее важным из известных клеточных механизмов, чувствительных к кислороду.6,7 Функциональный HIF состоит из субъединиц a и b. HIF-a представляет собой лабильную к кислороду субъединицу, которая быстро разрушается в нормоксических условиях в присутствии кофакторов. HIF-b не регулируется напряжением кислорода. Деградации HIF-a предшествует гидроксилирование и полиубиквитинирование пролина. Гидроксилирование пролина катализируется PHD в присутствии кислорода, железа и 2-оксоглутарата в качестве кофакторов. Затем полиубиквитинирование катализируется убиквитинлигазой Е3, состоящей из комплекса белок фон Хиппеля Линдау (pVHL)-элонгин BC-CUL2. Потребность в железе, PHD и pVHL для деградации HIF позволяет стабилизировать HIF в нормоксическом состоянии с ингибированием или уменьшением любого из этих ключевых компонентов.
Почечные перициты встроены в базальную мембрану микрососудов и находятся в тесном контакте с эндотелиальными клетками, поддерживая микроциркуляторное русло и регулируя кровоток.8–13 Мы сообщали, что почечные перициты представляют собой почечные ЭПО-продуцирующие клетки (REPC), которые продуцируют ЭПО через HIF{{3 }}a-зависимая транскрипция генов, индуцированная анемией или гипоксией.14 Перициты были продемонстрированы как основной источник рубцовых миофибробластов при ХБП,8,10,11,15,16 данные, подтвержденные другими независимыми отчетами.17, 18 Хотя переход в миофибробласты приводит к репрессии транскрипции Epo, сверхэкспрессия HIF-2a частично восстанавливает продукцию EPO в миофибробластах.14,17
Наши исследования показали, чтопочечный фиброзможет быть ослаблен прерыванием перехода перицит-миофибробласт через фармакологическую блокаду трансформирующего фактора роста-b, 19 фактора роста тромбоцитов, 20 фактора роста эндотелия сосудов 21 или путей WNT/b-катенина.22
Что касается опасений по поводу ускоренного сниженияпочкафункции у пациентов, получающих лечение ингибиторами PHD, мало что известно о влиянии активности HIF в перицитах или миофибробластах напочечный фиброз.23 В противоположность этому эффекты гиперэкспрессии или нокаута HIF напочечный фиброзбыли широко изучены либо неселективно24-27, либо селективно в тубулярных клетках,28,29 эндотелиальных клетках,30 и подоцитах.31,32 Однако результаты были противоречивыми, вероятно, потому, что эффекты HIF зависят от типа клеток и контекста.
Исследования in vitro с использованием изолированных почечных фибробластов человека33 и интерстициальных клеток мозгового вещества почек34 показали профибротическую роль HIF-1a. Однако Souma et al.17 сообщили, что одновременный нокаут PHD1, PHD2 и PHD3 в REPC мышей Tg(Epo-Cre), которые экспрессируют рекомбиназу Cre под контролем промотора Epo, не влияет напочечный фиброзв модели односторонней мочеточниковой непроходимости (ОМО). Однако почечная экспрессия Epo низка, а размер пула REPC невелик в стационарном состоянии без гипоксии или анемии, 35 что позволяет предположить, что трансген Epo-Cre определяет лишь небольшую часть от общего числа REPC. Недавно было показано, что клетки, экспрессирующие почечный Gli1-, являются перицитами и дифференцируются в миофибробласты напочкатравмы.11,36 Абляция клеток Gli1 plus улучшает UUO-индуцированныйпочечныйфиброз.11 Здесь мы использовали мышей с рекомбиназой Cre под контролем промотора/энхансера Gli1 для изучения эффектов стабилизации или нокаута HIF, специфичных для перицитов, наrэнальный фиброз.
Цистанхе хорошо подходит дляпочка
МЕТОДЫ
Мыши
Gli1CreERT2/ плюс, Tg(UBC-CreERT2), VhlF/F,РОСА26fstdTomato/fstdПомидор, Hif1aF/Fи Hif2aF/F мышей приобретали в лаборатории Джексона (Бар-Харбор, Мэн). Egln1F/F мышей любезно предоставил профессор Го-Хуа Фонг (Центр здоровья Университета Коннектикута, Фармингтон, Коннектикут). Все исследования проводились в соответствии с протоколом, одобренным Институциональным комитетом по уходу и использованию животных Медицинского колледжа Национального Тайваньского университета (IACUC 20160499).
Односторонняя обструкция мочеточника
Процедура была подробно описана в предыдущем исследовании. мочеточники мышей обнажали и перевязывали нейлоновой нитью через разрез на левом боку. Дата операции UUO была определена как 0-й день эксперимента.
Статистический анализ
Данные были выражены как среднееплюсSD. Статистический анализ проводили с использованием GraphPad Prism (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния). Статистическую значимость определяли с помощью t-критерия Стьюдента или U-критерия Манна-Уитни, как показано в подписях.
Дополнительные методы
Полные методы, включая мышей, UUO, введение тамоксифена, количественную полимеразную цепную реакцию, иммуноблоттинг, иммуногистохимию, гибридизацию РНК in situ, микроскопию, проточную цитометрию и выделение почечных клеток Gli1 plus, приведены в дополнительных методах.
ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ
Повышенная продукция ЭПО и эритропоэз у мышей с нокаутом Gli1 плюс специфичный для перицитов PHD2
Чтобы продемонстрировать, что Gli1 плюс перициты продуцируют ЭПО, прежде чем мы приступим к изучению влияния манипуляций с HIF, специфичных для перицитов, напочечный фиброз, мы сгенерировали Gli1CreERT2/ плюс; Egln1F/Fмышей, чтобы условно индуцировать нокаут PHD2 в Gli1 плюс перициты (рис. 1а). По сравнению с однопометником Egln1F/Fмыши, Gli1CreERT2/ плюс; Egln1F/Fмыши показали более высокий уровень ЭПО в сыворотке (рис. 1b), большую массу селезенки (рис. 1c), больше TER-119плюсэритроидная линия в спленоцитах к 14-му дню после введения тамоксифена (рис. 1d), но аналогичное изменение массы тела после введения тамоксифена (дополнительная фигура S1A). Гематокрит (Hct) был выше у Gli1.CreERT2/ плюс; Egln1F/Fмышей на 21-й день (рис. 1е). Мы проанализировали мРНК почечного Epo и анализ периферической крови через 14 дней после тамоксифена. По сравнению с однопометником Egln1F/Fмыши, Gli1CreERT2/ плюс; Egln1F/Fу мышей была повышена экспрессия Epo в почках (рис. 1f) и периферических ретикулоцитов (рис. 1g), тогда как количество периферических лейкоцитов и количество тромбоцитов не различались (дополнительные рисунки S1B и C). Чтобы идентифицировать почечные клетки, ответственные за экспрессию Epo, мы провели гибридизацию Epo in situ.почкасрезы из Egln1F/F и Gli1CreERT2/плюс; Egln1F/Fмыши (дополнительная фигура S2A – F). Увеличенное количество интерстициальных клеток, экспрессирующих Epo, может быть идентифицировано в основном в кортикомедуллярном соединении и, в меньшей степени, во внутреннем мозговом веществе и коре в Gli1.CreERT2/плюс; Egln1F/Fмышей. Эти результаты свидетельствуют о том, что Gli1 плюс нокаут PHD2, специфичный для перицитов, индуцирует выработку EPO в почках и эритропоэз.
Чтобы определить, регулирует ли PHD2 продукцию ЭПО в других типах клеток и органах, кроме перицитов, впочка, мы сгенерировали Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fмышей, чтобы вызвать глобальный нокаут PHD2 (дополнительная фигура S3A). После введения тамоксифена нокаут гена Egln1 впочка, могут быть обнаружены печень, селезенка, сердце и легкие (дополнительный рисунок S4). впочка, экспрессия мРНК Egln1 снизилась до 4 процентов, что указывает на высокую эффективность нокаута PHD2 (дополнительная фигура S3B). Как в Gli1CreERT2/ плюс; Egln1F/Fмыши, Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fмыши показали прогрессивное увеличение Hct по сравнению с однопометниками Egln1F/Fмыши (дополнительная фигура S3C). В частности, Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/Fмыши показали снижение массы тела (дополнительная фигура S3D). Удивительно высокий уровень ЭПО в сыворотке, около 130 000 пг/мл, был обнаружен в Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F мышей, что было намного выше, чем при флеботомии (менее 5 000 пг/мл) у мышей дикого типа (дополнительная фигура S3E). Чтобы идентифицировать источник сывороточного EPO, мы проверили уровни мРНК Epo в различных органах от Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/F,и однопометные контрольные мыши на 15-й день. У однопометных контрольных мышей мРНК Epo почти не обнаруживалась ни в одном органе. В 5 основных органах (почка, печень, легкие, сердце, селезенка) Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F мыши, толькопочкапоказали заметное увеличение мРНК Epo, что указывает напочкав качестве основного источника сывороточного ЭПО (дополнительные рисунки S3F и G). Гибридизация in situ мРНК Epo напочкасрезы показали, что почечные клетки с экспрессией Epo представляли собой интерстициальные клетки с морфологией перицитов в Tg (UBC-CreERT2); Egln1F/Fмыши (дополнительная фигура S5). Следовательно, эти данные подтвердили, что почечный Gli1 плюс перициты продуцируют EPO при нокауте PHD2, тем самым увеличивая эритропоэз и Hct.
Gli1 плюс нокаут pVHL, специфичный для перицитов, приводит к полицитемии, но не влияет на почечный фиброз
В соответствии с предыдущими отчетами11,36 увеличение Gli1плюсперициты были показаны в кортикомедуллярном соединении и мозговом веществе после повреждения UUO в Gli1CreERT2/плюс; РОСА26fstdTomato/ fstdTomatoрепортерных мышей (дополнительная фигура S6), предполагая, что Gli1 плюс перициты пролиферируют и вносят значительный вклад в миофибробласты во времяпочечный фиброз.Поэтому мы изучили эффект стабилизации или нокаута HIF в Gli1.плюсперициты напочечный фиброз.
Мы использовали мышей с Gli1.плюсперицит-специфический нокаут pVHL, а не PHD2 из-за возможной избыточности в 3 разных PHD. Для изучения долгосрочного эффекта стабилизации HIF, специфичного для перицитов, напочкиу мышей без ХБП, Gli1CreERT2/плюс; ВХЛF/Fмыши и ВХЛF/Fоднопометникам вводили тамоксифен в возрасте 6 недель, а затем наблюдали до 30-недельного возраста (дополнительная фигура S7A). Одна неожиданная смерть в Gli1CreERT2/плюс; ВХЛF/Fмышей имели место в возрасте 25 недель (смертность 14,3%), но у Vhl летальных исходов не было.F/Fоднопометники. У Gli1 обнаружены слабость и снижение прибавки массы тела.CreERT2/ плюс; ВХЛF/Fмышей уже в возрасте 16 недель (дополнительная фигура S7B). Из-за истощения и неожиданной смерти некоторых мышей подвергали эвтаназии в возрасте до 30 недель. При патологии выявляется диффузный выраженный эритропоэз в селезенке и скопление эритроцитов в печени, легких ипочкав возрасте 18 недель (дополнительная фигура S8). За исключением скопления эритроцитов, никаких заметныхфибрознаблюдается в основных органах, включаяпочки. Уровни Hct и EPO в сыворотке увеличились до 87 плюс -2,6 процента и 1604 плюс -141 пг/мл в возрасте 30 недель (т. е. через 24 недели после приема тамоксифена) (дополнительные рисунки S9A и B).
Из-за отсутствия заметногопочечный фиброзу мышей с нокаутом Gli1 плюс специфичным для перицитов pVHL мы индуцировали UUO у мышей и оценивали тяжесть почечного фиброза через 7 или 14 дней (рис. 2а). Удаленные аллели Vhl в Gli1CreERT2/þ; ВХЛF/Fмыши были обнаружены впочкагеномной ДНК с помощью полимеразной цепной реакции, что указывает на нокаут pVHL в перицитах (дополнительная фигура S10). Hct был увеличен в Gli1CreERT2/ плюс; ВХЛF/Fмышей даже после операции UUO (рис. 2b). Примечательно, что экспрессия мРНК ЭПО была увеличена как в контралатеральном, так и в UUO.почкиGli1CreERT2/ плюс; ВХЛF/Fмышей (Рисунок 2c), предполагая, что стабилизация HIF может активировать транскрипцию Epo как в перицитах, так и в миофибробластах. Однако никакой разницы впочечный фиброзмежду Gli1CreERT2/ плюс; ВХЛF/Fи однопометник ВхлF/F мышей можно было обнаружить по площади, окрашенной пикросириусом в красный цвет (рис. 2d и 3a и b), и по экспрессии мРНК Col1a1 (рис. 2e) впочка. Кроме того, уровни мРНК и белка а-гладкомышечного актина не отличались упочки(Рисунок 2f и g и дополнительная фигура S11). Чтобы подтвердить, что миофибробласты сохраняли способность к экспрессии Epo после нокаута pVHL, мы провели гибридизацию in situ Epo и Acta2 напочкаразделы (дополнительные рисунки S12 и S13). Почечная экспрессия Acta2 резко и сравнительно увеличилась после повреждения UUO как в Gli1, так и вCreERT2/ плюс; ВХЛF/Fи ВхлF/Fмышей. В Gli1 можно было наблюдать больше интерстициальных клеток, экспрессирующих Epo.CreERT2/ плюс; ВХЛF/Fмышей, чем в ВХЛF/F мышей, независимо от наличия повреждения УОО. Кроме того, клетки с сопутствующей экспрессией Acta2 и Epo могут быть идентифицированы в UUO.почкаиз Gli1CreERT2/ плюс; ВХЛF/Fмыши но не вхлF/Fмышей. Фактически, мы едва ли смогли идентифицировать какие-либо Epo-экспрессирующие клетки в UUO.почкаиз ВХЛF/Fмышей. Эти результаты предполагают, что Gli1 плюс нокаут pVHL, ограниченный перицитами, способствует экспрессии Epo, но не дифференцировке миофибробластов или продукции коллагена даже после повреждения UUO.
Поскольку повреждение UUO приводит к повреждению клеток проксимальных канальцев и привлечению макрофагов, уровни мРНК Havcr1 (кодирующегопочкамолекула повреждения -1) (рис. 4a) и Adgre1 (кодирующий модуль эндотелиального фактора роста, содержащий муциноподобный гормоноподобный рецептор, подобный 1, также известный как F4/80) (рис. 4b), увеличивался в UUOпочки, но различий между Gli1 обнаружить не удалось.CreERT2/ плюс; ВХЛF/Fи однопометник ВхлF/F мышей. Уровни мРНК Vegfa, Hmox1, Egln1 и Egln3 (кодирующих фактор роста эндотелиальных клеток сосудов-А, гемоксигеназу -1, PHD2 и PHD3 соответственно) впочкине были изменены (рис. 4c-f), вероятно, отражая, что эти транскрипты не были доминантно продуцированы Gli1 плюс перициты или не изменились после нокаута Gli1 плюс ограниченного перицитами VHL. Мы оценили тубулоинтерстициальное повреждение при окрашивании периодической кислотой по Шиффу.почкасрезов, и между Gli1- не было обнаружено различийCreERT2/ плюс; ВХЛF/F,и однопометник ВхлF/Fмыши (рис. 4g и 5a и b). Поскольку сообщается, что тамоксифен ослабляетфиброз,38,39 мы увеличили период вымывания между последним введением тамоксифена и операцией UUO с 2 недель до 4 недель (дополнительная фигура S14A). Опять же, не было обнаружено различий между Gli1CreERT2/ плюс; ВХЛF/F и однопометник ВхлF/F мыши (дополнительная фигура S14B – E). Эти результаты показали, что нокаут Gli1 плюс специфичный для перицитов pVHL приводит к продукции ЭПО и полицитемии, но не влияет напочечныйфиброз.
Цистанхе хорошо подходит дляпочка
Gli1 плюс нокаут PHD2, специфичный для перицитов, увеличивает выработку ЭПО, но не выработку коллагена или дифференцировку миофибробластов.
Чтобы подтвердить эффекты стабилизации HIF в перицитах Gli1 plus на клеточном уровне, мы отсортировали клетки tdTomato plus изпочкиGli1CreERT2/ плюс; РОСА26fstdTomato/fstdTomatoи Gli1CreERT2/ плюс; Egln1F/F; РОСА26fstdTomato/fstdTomatoмыши после травмы UUO (дополнительные рисунки S15 и S16). При микроскопическом исследовании отсортированные клетки излучали оранжево-красную флуоресценцию при возбуждении (дополнительный рисунок S17A-C). По сравнению с Gli1CreERT2/ плюс; РОСА26fstdTomato/fstdTomatoмышей, уровень мРНК Egln1 в клетках tdTomato plus, отсортированных из контралатеральных и UUOпочкиGli1CreERT2/ плюс; Egln1F/F; РОСА26fstdTomato/fstdTomatoу мышей через 7 дней после травмы UUO снизился до 46 процентов и 33 процентов соответственно (дополнительные рисунки S17D и E).
Мы проанализировали уровни мРНК Epo, Col1a1, Col3a1 и Acta2 в отсортированных tdTomato плюс Gli1 плюс перициты из Gli1.CreERT2/ плюс;РОСА26fstdTomato/fstdTomatoи Gli1CreERT2/ плюс; Egln1F/F; РОСА26fstdTomato/fstdTomatoмышей. В соответствии с результатами, полученными на мышах с нокаутом Gli1 плюс специфичный для перицитов pVHL, нокаут PHD2 в Gli1 плюс перициты приводил к увеличению экспрессии Epo, но не влиял на экспрессию Col1a1, Col3a1 и Acta2 на клеточном уровне (рис. 6). , подтверждая нейтральное влияние стабилизации HIF на профибротические свойства перицитов/миофибробластов.
Нокаут HIF, специфичный для перицитов Gli1+, не влияет на почечный фиброз
Поскольку эти эксперименты подтвердили нейтральное влияние стабилизации HIF на профибротические свойства перицитов/миофибробластов, мы создали Gli1CreERT2/plus; Hif1aF/F; Hif2aF/F мышей для изучения влияния нокаута HIF в перицитах/миофибробластах напочечный фиброз(Рисунок 7а). Делеция Hif1a и Hif2a впочкаможно было обнаружить впочкагеномная ДНК после введения тамоксифена (дополнительная фигура S18). По сравнению с контрольным однопометником, Gli1CreERT2/ плюс; Hif1aF/F; Hif2aF/F у мышей было аналогичное изменение массы тела и уровня Hct через 7 дней после UUO (рис. 7b и c). С точки зренияпочечный фиброз, не было обнаружено различий в области, окрашенной красным пикросириусом, уровнях мРНК Col1a1 и Acta2 впочка(Рисунок 7d–f). Уровни мРНК Havcr1 и Adgre1 также не различались (рис. 7g и h). Мы изменили дозу и период вымывания тамоксифена (дополнительные рисунки S19A и S20A), и результаты по отложению коллагена и экспрессии генов были схожими (дополнительные рисунки S19B-E, S20B-E). Мы повторили эксперименты в Gli1CreERT2/ плюс; Hif1aF/F(рис. 8a–c) и Gli1- CreERT2/ plus ; Hif2aF/F(Рисунок 8d–f) и не продемонстрировали разницы в индуцированном UUOпочечный фиброзпо сравнению с контролем однопометников.
ОБСУЖДЕНИЕ
Основные результаты этого исследования включали следующее: (i) стабилизация почечного Gli1 плюс специфичная для перицитов HIF приводила к продукции EPO и эритропоэзу, но не влияла на патологию почек с повреждением UUO или без него; и (ii) почечный Gli1 плюс специфичный для перицитов HIF-1a и нокаут HIF-2a не влиялипочечный фиброзлибо.
Ранее мы сообщали, что почечный Foxd1 плюс перициты, происходящие от предшественников, представляют собой REPC и регулируются HIF-2a. 14 В этом исследовании мы показали, что почечные клетки Gli1 plus также являются REPC. Хотя нет прямых доказательств, объясняющих взаимосвязь между FOXD1 и GLI1 в перицитах, предыдущие исследования показали, что как почечные клетки Foxd1 плюс клетки-предшественники, так и клетки Gli1 плюс являются перицитами и способны дифференцироваться в миофибробласты при повреждении.10,11,36 Наши исследования данные показали, что нокаут PHD2 или pVHL, особенно в Gli1 плюс перициты, приводил к увеличению продукции ЭПО в почках, эритропоэзу и полицитемии, что согласуется с недавним сообщением Greenwald et al. 40. Кроме того, по сравнению с заметным снижением экспрессия в почках UUO однопометников дикого типа, экспрессия Epo в почках UUO мышей с нокаутом pVHL, специфичным к Gli1-, была сравнима с уровнем, показанным в контрольной контралатеральной группе.почка, одобрение стабилизации HIF может преодолеть механизм репрессии Epo в миофибробластах почек с фиброзом.почкамиофибробласты у мышей с нокаутом PHD2. В соответствии с нашими выводами, в совсем недавнем исследовании41 сообщалось, что почечные Gli1 плюс клетки представляют собой субпопуляцию тромбоцитарного рецептора фактора роста-b плюс REPC и сохраняют способность продуцировать ЭПО в UUO.почки.
Клинические испытания доказали эффективность ингибиторов PHD при лечении анемии, связанной с ХБП.3–5,42–45 Важно отметить, что объединенный анализ исследований фазы III роксадустата продемонстрировал не худшие или даже лучшие сердечно-сосудистые исходы.46 Однако формальных данных нет. к настоящему времени опубликован отчет о влиянии ингибиторов PHD на прогрессирование ХБП. Экспериментально роль гипоксии и HIF впочечный фиброзвызывает споры.47,48 У мышей, перенесших острую почечную недостаточность (ОПП), вызванную ишемически-реперфузионным повреждением, Капицину и др.24 продемонстрировали, что ингибирование PHD до ОПП улучшаетфиброз, в то время как торможения в ранней восстановительной фазе ОПП нет. Более того, Uchida et al.26 продемонстрировали, что ингибитор PHD может улучшатьпочечный фиброзв связи со снижением провоспалительных цитокинов и восстановлением плотности капилляров в почках крыс с моделью ХБП, индуцированной субтотальной нефрэктомией 5/6, хотя не показано влияния на протеинурию и уровень креатинина в сыворотке. Напротив, недавнее сообщение показало, что ингибитор PHD способствует полицитемии и ослаблению тубулоинтерстициального нефрита, но не влияет на почечный фиброз в модели аденин-индуцированного хронического тубулоинтерстициального нефрита.25 Также был продемонстрирован противовоспалительный эффект ингибиторов PHD. в почках мышиной модели диабета 2 типа с ожирением. 27 Требует дальнейшего изучения вопрос о том, уменьшают ли ингибиторы PHD почечный фиброз за счет ослабления интерстициального воспаления. Хотя в этих исследованиях не сообщалось о влиянии ингибиторов PHD на активацию почечных миофибробластов, отсутствие отрицательного влияния на почечный фиброз может подтверждать игнорируемый эффект экспрессии HIF на продукцию коллагена в почечных перицитах. Оценка влияния HIF на почки сложна. 49 Во-первых, разные типы клеток могут экспрессировать разные изоформы HIF. 50 Во-вторых, даже одна и та же изоформа HIF может регулировать разные гены-мишени в разных типах клеток. 51 В-третьих, экспрессия и регуляция HIF в физиологическом состоянии может отличаться от пораженной почки. 50 Кроме того, быстрая деградация HIF в нормоксических условиях усложняет неточный анализ уровней белка HIF в ткани. 52 Таким образом, предыдущие противоречивые результаты относительно влияния на фиброз почек, вероятно, потому что эффекты HIF зависят от типа клеток и контекста. Например, данные показали, что ингибитор PHD до индуцированного ишемически-реперфузионным повреждением ОПП уменьшает фиброз после ОПП за счет эндотелиального HIF-2a-зависимого механизма,24,30 в то время как HIF-1a-зависимое воспаление , фиброз и дисплазия почечных клеток были обнаружены в Tg(Hoxb7-Cre); ВХЛF/Fмышей с нокаутом pVHL в собирательных трубочках и части дистальных канальцев.почечный фиброз,мы продемонстрировали, что продукция ЭПО была существенно увеличена в почечных перицитах у мышей со стабилизацией Gli1 плюс специфичной для перицитов HIF путем клеточно-специфического нокаута pVHL или PHD2, и, что особенно важно, экспрессия Epo сохранялась в UUO-почечных миофибробластах. Однако мы не обнаружили, что стабилизация HIF, специфичная для перицитов, влияла на переход перицит-миофибробласты, выработку коллагена в миофибробластах или индуцированный UUOпочкафиброз. Более того, экспрессия Havcr1 и Adgre1 не была затронута в почках UUO, что указывает на то, что тяжесть повреждения почечных канальцев и почечного воспаления не влияла у мышей со стабилизацией HIF, специфичной для перицитов. Поскольку миофибробласты являются типом клеток, образующих рубцы во времяпочечный фиброз, наши результаты могут служить экспериментальным доказательством отсутствия негативного влияния стабилизации HIF ингибиторами PHD на почечный фиброз. В соответствии с нашим исследованием Souma et al.17 также сообщили, чтопочечный фиброзне зависит от одновременного нокаута PHD1, PHD2 и PHD3 в REPC мышей Tg(Epo-Cre).
Цистанхе хорошо подходит дляпочечный
В нашем исследовании Gli1CreERT2/plus; ВХЛF/F мыши характеризовались как повышенной эндогенной продукцией ЭПО, так и полицитемией. Влияет ли повышенный уровень ЭПО в сыворотке полицитемии напочечный фиброзявляется спорным. Имеются обширные исследования влияния экзогенного рекомбинантного ЭПО на ОПП или ХБП.53-57 В более ранних исследованиях сообщалось, что высокие дозы рекомбинантного ЭПО вызывают полицитемию, гипертензию и ухудшение почечной функции.56,58 Интересно, что некоторые исследования выявили что низкие дозы экзогенного аналога ЭПО, настолько низкие, чтобы не индуцировать эритропоэз, приводят к ренопротекторным эффектам в остаткепочкаи модели мышей db/db.59,60 Кроме того, было показано, что флеботомия для нормализации полицитемии уменьшает повышенную альбуминурию у мышей db/db, подвергшихся воздействию высоких доз экзогенного аналога ЭПО.60 В клинической когорте пациентов с истинной полицитемией заболевание, характеризующееся полицитемией без повышения уровня эндогенного ЭПО,61 частота ХБП (определяемая как предполагаемая скорость клубочковой фильтрации<60 ml/min="" per="" 1.73="" m2="" )="" was="" 27%,="" which="" was="" higher="" than="" in="" the="" general="" population.62,63="" however,="" the="" annual="" decline="" rate="" of="" estimated="" glomerular="" filtration="" rate="" was="" slower="" in="" patients="" with="" polycythemia="" vera="" than="" with="" other="" myeloproliferative="" diseases.="" in="" the="" study="" of="">CreERT2/ плюс; ВХЛF/F мышей, подвергшихся травме UUO, наши данные показали повышенную экспрессию Epo в почках и полицитемию, но никаких изменений впочечный фиброз, воспаление и повреждение канальцев. Таким образом, общее влияние перицитоспецифической стабилизации HIF на повреждение почек, воспаление и фиброз было нейтральным, что подтверждает безопасность ингибиторов PHD при прогрессировании ХБП. Почечные перициты можно определить как гетерогенную популяцию фибробластов, находящихся в тесном контакте с эндотелиальными клетками впочка.8-13 Из-за сложности развития,64,65 гетерогенной биологической функции,8,11-13,23 и дифференциальной регуляции PHD и HIF,17,41,66 оптимальный генетический маркер для почечных перицитов еще предстоит определить. Клетки Gli1 plus соответствуют морфологическим и анатомическим критериям перицитов. После повреждения UUO почечные клетки Gli1 plus пролиферируют и дифференцируются в миофибробласты. Почечные клетки Gli1 plus составляли около 45 процентов от общего пула почечных миофибробластов, а удаление почечных клеток Gli1 plus уменьшалось.почечный фиброз.11,36 Мы знали, что почечные Gli1-плюс-клетки являются субпопуляцией тромбоцитарного рецептора фактора роста-b-клеток11,36,41 и что эффекты генетических манипуляций, ограниченных перицитами, Gli1-плюс могут быть замаскированы другими фибробластами. Однако наши эксперименты на отсортированных почечных клетках Gli1 plus доказали, что стабилизация HIF способна увеличивать экспрессию Epo, но не коллагена или Acta2 на клеточном уровне. Мы не можем исключить возможность того, что стабилизация HIF, вызванная другими маркерами перицитов, может иметь другие результаты. Мыши с рекомбиназой Cre, управляемой промотором Col1a1, Foxd1 или Pdgfrb, не использовались для определения перицитов в этом исследовании, потому что их рекомбиназа Cre также активна в гломерулярных подоцитах, 8 гломерулярных мезангиальных клетках, 67 гладкомышечных клетках сосудов, 68 и, возможно, в некоторых тубулярных клетках. эпителиальные клетки.69 Нокаут pVHL в подоцитах и канальцевых клетках, как сообщается, вызывает почечные патологии, такие как серповидный гломерулонефрит31 и почечные кисты.70 Кроме того, мы использовали индуцируемый Cre для нокаута PHD2 или pVHL после 5-недельного возраста, поскольку Foxd1 экспрессируется в эмбриональных стадия и нокаут либо pVHL, либо PHD2 в Foxd1-экспрессирующих перицитах, как было показано, нарушают нефрогенез.71,72
В отсортированных почечных клетках Gli1 plus с нокаутом PHD2 с использованием Gli1CreERT2/ плюс; Egln1F/F; РОСА26fstdTomato/fstdTomatoмышей, мы наблюдали значительное увеличение экспрессии мРНК клеточного Epo, но не Col1a1 или Acta2. 50-кратное увеличение мРНК Epo подтвердило сверхэкспрессию HIF в отсортированных почечных Gli1 плюс перицитах с нокаутом PHD2. Кроме того, in vivo нокаут pVHL или PHD2 в Gli1 плюс перициты приводил к увеличению почечной экспрессии Epo и полицитемии, но непочечный фиброз. Мы считаем, что если молекулы HIF ниже по течению в перицитах затронутыпочечный фиброз, это будет наблюдаться в нашем исследовании. Эффекты инактивации PHD2 на стабилизацию HIF могут быть замаскированы биологической избыточностью PHD1 и PHD3. Тем не менее, мы наблюдали последовательное влияние на продукцию ЭПО и коллагена в Gli1 плюс перицитах с нокаутом pVHL или PHD2, что еще больше подтверждает стабилизацию HIF в перицитах, что способствует эритропоэзу, но нефиброз. Мы не смогли сгенерировать Gli1CreERT2/ плюс;ВхлF/F; РОСА26fstdTomato/fstdTomatoмыши через скрещивание Gli1CreERT2/+; ВХЛF/Fи РОСА26fstdTomato/fstdTomatoмышей, потому что и Vhl, и ROSA26 расположены на хромосоме 6.
Мы использовали UUO в качествепочкамодель повреждения для изучения влияния перицит-специфических манипуляций с HIF напочечный фиброзпотому что в модели UUO большинство перицитов Gli1 плюс дифференцировались в миофибробласты, а удаление клеток Gli1 плюс уменьшало почечный фиброз. Модель UUO также успешно использовалась для демонстрации изменений продукции коллагена и ЭПО во время перехода перицит-миофибробласт нашей группой и другие.14,17,41 Однако UUO как модель ХБП имеет свои ограничения, и наши результаты этого исследования нельзя обобщать на другие модели ХБП. Необходимы дальнейшие исследования для проверки эффектов манипуляций с HIF, специфичных для перицитов, в различных моделях ХБП.
В заключение мы продемонстрировали, что Gli1 плюс стабилизация HIF, специфичная для перицитов, увеличивает EPO, эритропоэз, но не влияет нафиброзв моделях с травмой UUO или без нее. На клеточном уровне Gli1 плюс специфичная для перицитов стабилизация HIF увеличивает экспрессию Epo, но не экспрессию Col1a1, Col3a1 и Acta2. Перицит-специфический нокаут HIF не влиялпочечный фиброз, либо. Эти результаты экспериментально свидетельствуют об отсутствии негативного влияния ингибиторов PHD на почечный фиброз и прогрессирование ХБП.
Цистанхе для улучшенияпочкафункция
РАСКРЫТИЕ
Все авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.
БЛАГОДАРНОСТИ
SYP поддерживается Министерством науки и технологий (гранты 106-2314-B-418-006, 107-2314-B-418-001 и 108-2314-B-418-004) и Дальневосточная мемориальная больница (гранты 2017-C-037 и 2020-C- 037). SLL поддерживается Министерством науки и технологий (гранты 108-2314-B-002-078-MY3 и 109-2314-B-002-260), Национальными научно-исследовательскими институтами здравоохранения (грант EX108-10633 SI), Государственная больница Тайваньского университета (NTUH; гранты 108-T16 и 109-T16), NTUH и Медицинский колледж NTU (грант NSCCMOH-131-43), г-жа Сю-Чин ЛиПочкаИсследовательский фонд и Тайваньский фонд здравоохранения.
Мы благодарим профессора Го-Хуа Фонга (Центр здоровья Университета Коннектикута) за Egln1.F/Fмышей; Доктор Йи-Тинг Цай (Медицинский колледж НТУ) за патологическое исследование Gli1CreERT2/ плюс; ВХЛF/Fи ВхлF/Fмышей; и Департамент медицинских исследований NTUH, Основной центр сортировки и визуализации клеток Первой основной лаборатории, Основной центр моделей трансгенных мышей и Основная лаборатория мышей с нокаутом гена Медицинского колледжа NTU за поддержку оборудования и техническую помощь.
АВТОРСКИЙ ВКЛАД
SYP, PZT, YHC, YTC, FCC, YLC и WCC провели эксперименты и проанализировали данные. SYP, YLC, TH, YMC и TSC участвовали в разработке эксперимента и анализе данных. SLL разработал и руководил проектом. SYP и SLL написали рукопись.
ДОПОЛНИТЕЛЬНЫЙ МАТЕРИАЛ
Дополнительный файл (PDF)
Дополнительные методы.
Рисунок S1. Масса тела, количество периферических лейкоцитов и количество тромбоцитов не изменились у мышей с нокаутом PHD2 по перицитам.
Рисунок S2. Репрезентативные изображения мРНК Epo, обнаруженные гибридизацией РНК in situ впочкаEgln1F/F и Gli1CreERT2/+; Egln1F/F мышей. Рисунок S3. Глобальный нокаут PHD2 способствует производству ЭПО и
эритропоэз.
Рисунок S4. ПЦР-анализ геномной ДНК, выделенной изпочка, печень, селезенка, сердце и легкие в Tg(UBC-CreERT2); Egln1F/F и однопометные контрольные мыши.
Рисунок S5. Репрезентативные изображения мРНК Epo, обнаруженные гибридизацией РНК in situ впочкамышей Egln1F/F.
Рисунок S6. Репрезентативные изображения перицитов Gli1þ в CLK и UUOпочкипосле травмы УОО.
Рисунок S7. Долгосрочные эффекты стабилизации перицит-специфического HIF в
Мыши Gli1CreERT2/+;VhlF/F.
Рисунок S8. Отчет о патологии Gli1CreERT2/plus; Мыши VhlF/F.
Рисунок S9. Повышение гематокрита и уровня ЭПО в сыворотке у Gli1CreERT2/plus; ВХЛF/Fмышей.
Рисунок S10. ПЦР анализпочкагеномной ДНК после индукции тамоксифеном.
Рисунок S11. Полные гелевые изображения для иммуноблоттинга а-СМА и а[1]тубулина.
Рисунок S12. Почечная экспрессия Epo и Acta2 в VhlF/F и Gli1CreERT2/плюс; ВХЛF/Fмышей через 7 дней после травмы УОО.
Рисунок S13. Почечная экспрессия Epo и Acta2 в VhlF/F и Gli1CreERT2/плюс; ВХЛF/Fмышей через 14 дней после травмы УОО.
Рисунок S14.Почечный фиброзв расширенной модели вымывания тамоксифена.
Рисунок S15. Экспериментальная схема мечения почечных клеток Gli1+ с помощью tdTomato.
Рисунок S16. Стратегия гейтирования для сортировки почечных клеток tdTomatoþ.
Рисунок S17. Проверка экспрессии tdTomato и делеции Egln1 в отсортированных почечных клетках tdTomatoþ.
Рисунок S18. ПЦР анализпочкагеномная ДНК из Gli1CreERT2/plus; Hif1aF/F; Hif2aF/Fи однопометник Hif1aF/F; Hif2aF/Fконтрольные мыши после введения тамоксифена.
Рисунок S19. индуцированный UUOпочечный фиброзв Gli1CreERT2/ плюс; Hif1aF/F; Hif2aF/Fмышей после высоких доз и короткого периода вымывания тамоксифена.
Рисунок S20. индуцированный UUOпочечный фиброзв Gli1CreERT2/ плюс; Hif1aF/F; Hif2aF/F мышам после половинной дозы и длительного периода вымывания тамоксифена.
Таблица S1. Праймеры, используемые для генотипирования.
Таблица S2. Праймеры, используемые для количественной ПЦР.
Дополнительный макрос. Макрос для автоматического количественного определения пикросириуса, окрашенного в красный цветпочкаобласть от ImageJ.
Продукты Cistanche хороши дляпочечный
ИСПОЛЬЗОВАННАЯ ЛИТЕРАТУРА
1. Болезнь почек: Улучшение глобальных результатов (KDIGO) Рабочая группа по анемии. Клинические рекомендации KDIGO по анемии ухроническое заболевание почек.Почки Int Suppl. 2012;2:279–335.
2. Astor BC, Muntner P, Levin A, et al. Ассоциацияпочкафункции при анемии: Третье национальное обследование состояния здоровья и питания (1988-1994). Arch Intern Med. 2002; 162:1401–1408.
3. Максвелл П.Х., Эккардт К.Ю. Ингибиторы пролилгидроксилазы HIF для лечения почечной анемии и не только. Нат Рев Нефрол. 2016;12:157–168.
4. Чен Н., Хао С., Пэн С. и др. Роксадастат при анемии у пациентов спочказаболевание, не получающее диализ. N Engl J Med. 2019; 381:1001–1010.
5. Chen N, Hao C, Liu BC, et al. Роксадастат для лечения анемии у пациентов, находящихся на длительном диализе. N Engl J Med. 2019; 381:1011–1022.
6. Шодель Дж., Рэтклифф П.Дж. Механизмы передачи сигналов гипоксии: новые последствия для нефрологии. Нат Рев Нефрол. 2019;15:641–659.
7. Пан С.Ю., Чан В.К., Чен Ю.М. Путь от эритропоэтина к Нобелевской премии 2019 г.: фокус на факторах, индуцирующих гипоксию, впочка. J Formos Med Assoc. 2021;120:60–67.
8. Лин С.Л., Киселева Т., Бреннер Д.А. и соавт. Перициты и периваскулярные фибробласты являются основным источником клеток, продуцирующих коллаген, при обструктивных заболеваниях.фиброзпочек. Ам Джей Патол. 2008; 173:1617–1627.
9. Пан С.Ю., Чанг Ю.Т., Лин С.Л. Микроваскулярные перициты в здоровых и больных почках. Int J Nephrol Renovasc Dis. 2014;7:39–48.
10. Хамфрис Б.Д., Лин С.Л., Кобаяши А. и соавт. Прослеживание судьбы выявляет перицитарное, а не эпителиальное происхождение миофибробластов вфиброз почек. Ам Джей Патол. 2010; 176:85–97.
11. Краманн Р., Шнайдер Р.К., ДиРокко Д.П. и соавт. Периваскулярные предшественники Gli1+ вносят ключевой вклад в индуцированное повреждением органафиброз. Клеточная стволовая клетка. 2015;16:51–66.
12. Шримпф С., Синь С., Кампанхолл Г. и др. Перициты TIMP3 и ADAMTS1 модулируют стабильность сосудов послепочкарана. J Am Soc Нефрол. 2012; 23: 868–883.
13. Лемос Д.Р., Марш Г., Хуанг А. и др. Поддержание целостности сосудов перицитами необходимо для нормальногопочкафункция. Am J Physiol Renal Physiol. 2016; 311:F1230–F1242.
14. Чанг Ю.Т., Ян К.С., Пан С.И. и др. Ингибирование ДНК-метилтрансферазы восстанавливает продукцию эритропоэтина в фиброзных почках мышей. Джей Клин Инвест. 2016; 126:721–731.
15. Чжоу Ю.Х., Пан С.Ю., Шао Ю.Х. и др. Метилирование в перицитах после острого повреждения способствует хроническомупочкаболезнь. Джей Клин Инвест. 2020;130:4845–4857.
16. Chang FC, Chou YH, Chen YT, et al. Новое понимание перехода перицитемиофибробластов и терапевтических целей впочечный фиброз. J Formos Med Assoc. 2012; 111: 589–598.
17. Сума Т., Незу М., Накано Д. и др. Синтез эритропоэтина в почечных миофибробластах восстанавливается за счет активации передачи сигналов гипоксии. J Am Soc Нефрол. 2016; 27: 428–438.
18. Асада Н., Такасе М., Накамура Дж. и др. В основе дисфункции фибробластов внепочечного происхожденияпочечный фибрози почечная анемия у мышей. Джей Клин Инвест. 2011; 121:3981–3990.
19. Wu CF, Chiang WC, Lai CF, et al. Трансформирующий фактор роста бета-1 стимулирует передачу сигналов профиброзного эпителия, чтобы активировать переход перицит-миофибробласт при обструктивном синдроме.фиброз почек.Ам Джей Патол. 2013; 182:118–131.
20. Chen YT, Chang FC, Wu CF, et al. Передача сигналов тромбоцитарного рецептора фактора роста активирует переход перицит-миофибробласт при обструктивных и постишемических состояниях.почкафиброз. почки инт. 2011;80:1170–1181.
21. Лин С.Л., Чанг Ф.К., Шримпф С. и др. Нацеливание на перекрестные помехи эндотелий-перицит путем ингибирования передачи сигналов рецептора VEGF ослабляетпочкамикрососудистое разрежение ифиброз. Ам Джей Патол. 2011; 178:911–923.
22. Рен С., Джонсон Б.Г., Кида Ю. и др. LRP-6 является корецептором для множественных фиброгенных сигнальных путей в перицитах и миофибробластах, которые ингибируются DKK-1. Proc Natl Acad Sci US A. 2013; 110:1440–1445.
23. Каваками Т., Мимура И., Сёдзи К. и др. Гипоксия ифиброзвхронические заболевания почекe: пересечение в перицитах. Почки Int Suppl. 2014; 4:107–112.
24. Капицину П.П., Джаффе Дж., Майкл М. и др. Преишемическое нацеливание на гидроксилирование пролила HIF ингибируетфиброзсвязанный с острымпочкарана. Am J Physiol Renal Physiol. 2012; 302: F1172–F1179.
25. Шлей Г., Кланке Б., Калука Дж. и др. Мононуклеарные фагоциты организуют ренопротекцию, опосредованную ингибированием пролилгидроксилазы, при хроническом тубулоинтерстициальном нефрите. почки инт. 2019;96:378–396.
26. Учида Л., Танака Т., Сайто Х. и др. Влияние ингибиторов пролилгидроксилазы напочкаи сердечно-сосудистые осложнения в крысиной модели хронического заболевания почек. Am J Physiol Renal Physiol. 2020; 318: F388–F401.
27. Сугахара М., Танака С., Танака Т. и др. Ингибитор домена пролилгидроксилазы защищает от метаболических нарушений и связанных с нимипочказаболевание мышей с ожирением и диабетом 2 типа. J Am Soc Нефрол. 2020; 31: 560–577.
28. Хиггинс Д.Ф., Кимура К., Бернхардт В.М. и соавт. Гипоксия способствует фиброгенезу in vivo посредством стимуляции HIF-1 эпителиально-мезенхимального перехода. Джей Клин Инвест. 2007; 117:3810–3820.
29. Pritchett TL, Bader HL, Henderson J, et al. Условная инактивация мышиного гена-супрессора опухоли фон Хиппеля-Линдау приводит к широко распространенным гиперпластическим, воспалительным и фиброзным поражениям в почках. Онкоген. 2014;34:2631.
30. Капицину П.П., Сано Х., Майкл М. и соавт. Эндотелиальный HIF-2 обеспечивает защиту и восстановление после ишемическогопочкарана. Джей Клин Инвест. 2014; 124:2396–2409.
31. Дин М., Цуй С., Ли С. и др. Потеря опухолевого супрессора Vhlh приводит к повышению экспрессии Cxcr4 и быстро прогрессирующему гломерулонефриту у мышей. Нат Мед. 2006; 12:1081–1087.
32. Дин М., Кауард Р.Дж., Джинссон М. и др. Регуляция индуцируемого гипоксией фактора 2-a необходима для целостности гломерулярного барьера. Am J Physiol Renal Physiol. 2013; 304:F120–F126.
33. Норман Дж.Т., Кларк И.М., Гарсия П.Л. Гипоксия способствует фиброгенезу в почечных фибробластах человека. почки инт. 2000;58:2351–2366.
34. Ван З., Тан Л., Чжу Ц. и др. Индуцируемый гипоксией фактор-1альфа способствует профибротическому действию ангиотензина II на интерстициальные клетки мозгового вещества почек.ПочкаМеждунар. 2011;79:300–310.
35. Кури М.Дж., Хаазе В.Х. Анемия впочказаболевание: использование реакций гипоксии для терапии. Нат Рев Нефрол. 2015; 11: 394–410.
36. Фабиан С.Л., Пенчев Р.Р., Сен-Жак Б. и соавт. Активация пути Hedgehog-Gli во времяфиброз почек.Ам Джей Патол. 2012; 180:1441–1453.
37. Лин С.Л., Кастано А.П., Ноулин Б.Т. и соавт. Моноциты Ly6Chigh костного мозга избирательно рекрутируются к поврежденнымпочкии дифференцируются в функционально обособленные популяции. Дж Иммунол. 2009; 183:6733–6743.
38. Delle H, Rocha JR, Cavaglieri RC, et al. Антифибротический эффект тамоксифена на модели прогрессирующей болезни почек. J Am Soc Нефрол. 2012; 23:37–48.
39. Falke LL, Broekhuizen R, Huitema A, et al. Тамоксифен для индукции Кререкомбинации может сбить с толкуфиброзисследования на самках мышей. Сигнал J Cell Commun. 2017;11:205–211.
40. Гринвальд А.С., Лихт Т., Кумар С. и соавт. VEGF расширяет эритропоэз за счет независимой от гипоксии индукции эритропоэтина в неканонических периваскулярных стромальных клетках. J Эксперт Мед. 2019;216:215–230.
41. Broeker KAE, Fuchs MAA, Schrankl J, et al. Различные субпопуляциипочкаинтерстициальные клетки продуцируют эритропоэтин и факторы, поддерживающие оксигенацию тканей в ответ на гипоксию in vivo.ПочкаМеждунар. 2020; 98: 918–931.
