Прогресс метаболизма глюкозы, связанный с болезнью Альцгеймера, регулирующий гормоны, и перспективы исследований в области ноотропов фитотерапии
Mar 12, 2022
Контактное лицо: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Электронная почта:audrey.hu@wecistanche.com
Цзя-Ци Чжао, Сяо-Цин Ли, И-Мин Чжан, Мей-тонг Го, Ченг Хань, Ян Шен, Ци Чжан, Ши-Фэн Чу, Най-хонг Чен, Вэнь-Бин Хэ
1 Ключевая лаборатория Шаньси энцефалопатии китайской медицины, Шаньсийский университет китайской медицины, Тайюань, Китай;
2 Институт Материа Медика, Китайская академия медицинских наук, Пекин, Китай.
Выделять
В этой статье представлен обзор исследований, которые связывают гормоны, регулирующие метаболизм глюкозы, сБолезнь Альцгеймераи предполагает, что качество пациентов с болезнью Альцгеймера улучшается за счет регулирования метаболизма глюкозы. Поскольку имеются существенные эпидемиологические исследования, которые четко установили связь между метаболическими и нейродегенеративными нарушениями в целом, а также было обнаружено, что патологические изменения резистентности к инсулину и нарушения метаболизма глюкозы при БА сходны с таковыми при диабете, найти новый путь для рассмотрения исследовательской стратегии по изучению ноотропов-кандидатов, уходящих корнями в фитотерапию и ее формулу.
Цистанхе помогает предотвратить и лечитьБолезнь Альцгеймера
Абстрактный
Болезнь Альцгеймераявляется одним из нейродегенеративных заболеваний, патологические механизмы которого до сих пор остаются неясными. Имеются доказательства того, что диабет связан сБолезнь Альцгеймера. Однако основной причиной диабета является нарушение метаболизма глюкозы. Может существовать неразрывная связь между гормонами, регулирующими метаболизм глюкозы, и болезнью Альцгеймера. Здесь мы рассмотрим исследования, которые связывают гормоны, регулирующие метаболизм глюкозы, с болезнью Альцгеймера и предполагают, что качество пациентов с болезнью Альцгеймера улучшается за счет регулирования метаболизма глюкозы.
Ключевые слова: болезнь Альцгеймера; Диабет; Метаболизм глюкозы; Гормоны, регулирующие метаболизм глюкозы
Анти-болезнь Альцгеймера: Cistanche
Гормон регуляции метаболизма глюкозы и АД
инсулин
AD и диабет 2 типа (T2DM) являются двумя видами наиболее распространенных заболеваний стареющего общества. Считается, что СД2 является причиной его ранней стадии от снижения чувствительности окружающих тканей к циркулирующему инсулину, что приводит к нарушению толерантности к глюкозе [6]. Становится очевидным, что аналогичный процесс внутриклеточной инсулинорезистентности и недостаточности происходит в области головного мозга при БА, в том числе у лиц без системного диабета [7].
Инсулин представляет собой белок с молекулярной массой 6KD, секретируемый островковыми клетками, которые стимулируются эндогенными или экзогенными веществами. Инсулин считался своего рода гормоном, который с трудом проходит через гематоэнцефалический барьер и существует только в периферической крови. До конца 1970-х годов были выдвинуты непосредственные доказательства того, что инсулин присутствует в мозге крыс с помощью метода РИА, это открытие продемонстрировало, что инсулин может проникать через гематоэнцефалический барьер в центр, так что это можно отрегулировать. центрами процесса метаболизма глюкозы, Кроме того, нейрон может синтезировать инсулин. Инсулиновый рецептор (ИР) широко распространен в центральной нервной системе (ЦНС), особенно в гиппокампе, коре и других областях, связанных с обучением и памятью [8]. С тех пор, как было опубликовано открытие инсулина и инсулиновых рецепторов, существующих в ЦНС, дополнительные исследования показали, что инсулин в центральной области активирует сигнальные пути, такие как PI3K/Akt. Более того, нервные клетки поглощают глюкозу при посредничестве инсулина [9] и регулируют синаптическую пластичность [10] с помощью сигнальных путей инсулина в ЦНС.
Инсулиновый сигнальный путь в основном включает: (1) путь фосфоинозитид3-киназы (PI3K), связанный с ростом и пролиферацией клеток [11]; (2) митоген-активируемая протеинкиназа (MAPK) регулирует дифференцировку клеток [12]. PI3K/Akt играет важную роль в сигнальном пути инсулина. Инсулинорезистентность (ИР) нечувствительна к инсулину в организме. Исследование показало, что в мозгу пациентов с болезнью Альцгеймера возникают аномальные сигнальные пути инсулина и резистентность к инсулину. Инсулин также влияет на продукцию и клиренс АТ [13]. Основным компонентом А является гидролиз белка-предшественника амилоида (АРР). Гидролиз АРР индуцировался сигнальным путем PI3K/Akt при появлении резистентности к инсулину, что приводило к увеличению А и затруднению транспорта А. Со временем в головном мозге формировались сенильные бляшки [14]. Тем не менее, киназа гликогенсинтазы (GSK) является одной из важных нижестоящих киназ PI3K. И его активность может усиливать аберрантное фосфорилирование тау и, наконец, появление NFT [15]. Амилин
Амилин представляет собой гормон клеток поджелудочной железы, высвобождаемый совместно с инсулином в ответ на прием пищи. Он уменьшает орексию, секрецию желудочного сока, ограничивает скорость опорожнения желудка и уменьшает секрецию глюкагона поджелудочной железой [16]. Это третий важный активный гормон поджелудочной железы, который регулирует баланс сахара в крови с помощью инсулина. В патологическом состоянии высокий уровень амилина крови оказывает ингибирующее действие на инсулин, секретируемый при гипергликемии.
Есть много общего между амилином и композицией A. Например, они имеют аналогичную вторичную структуру [17], которая связывается с единым амилоидным рецептором [18]. Расщепляются одним и тем же ферментом, разрушающим инсулин, и взаимодействуют друг с другом сложным образом [19].
Emerging предлагает подчеркнуть, что амилин ухудшает цереброваскулярную систему путем отложения амилоида у пациентов с БА [20]. В то же время у больных БА наблюдается высокая концентрация экспрессии амилина в крови. Следовательно, существует тесная связь между амилином и БА, который может быть вторым амилоидным белком в мозгу при БА. Кроме того, эксперимент по флуоресцентной маркировке доказывает, что амилин в основном распределялся в зрелых нейронах головного мозга мышей, с наибольшим распределением в коре, затем в гиппокампе и других частях. С увеличением возраста мышей с моделью БА экспрессия амилина в области коры постепенно увеличивается, образуя бляшки, характерные для А [211. В физиологическом состоянии амилин может снижать уровень сахара в крови, но длительное время высокий уровень глюкозы в крови может приводить к повышению уровня амилина, который может проходить через гематоэнцефалический барьер и образовывать агрегаты, нарушающие работу нейроцитов, что в конечном итоге приводит к снижению уровня сахара в крови. способность к обучению и память.
Глюкагоноподобные пептиды
Глюкагоноподобные пептиды представляют собой два типа глюкагоноподобного пептида-1(GLP-1) и глюкагоноподобного пептида-2(GLP-2). Один из них, GLP-2, является специфичным для кишечника фактором роста. Другой, GLP-1, представляет собой секретируемый пептид, который действует как ключевой детерминант гомеостаза глюкозы в крови благодаря своей способности замедлять опорожнение желудка, усиливать секрецию инсулина поджелудочной железой и подавлять секрецию глюкагона поджелудочной железой. GLP-1 секретируется L-клетками слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта в ответ на прием пищи и оказывает гипогликемическое действие [22]. Секреция GLP-1 тесно связана с составом пищи. Значительно GLP-1 увеличился после диеты с высоким содержанием сахара и жира [23]. Он выполняет важную физиологическую функцию в ЦНС.
Рецепторы GLP-1 в основном распределены в гипоталамусе, дейтоцеребруме и тритоцеребруме. Активация рецептора GLP-1 в этих областях мозга может контролировать аппетит и снижать потребление пищи, что может контролировать аппетит и снижать потребление пищи [24].
Аденилатциклаза активируется, когда GLP-1 связывается с рецептором GLP-1 на поверхности клеточной мембраны, что может повышать уровень циклического аденозинмонофосфата (цАМФ), активировать PKA, цАМФ-регулируемый гуаниновый нуклеотид обменный фактор II (Epac2), тем самым способствуя стимулированной глюкозой секреции инсулина. В отличие от глюкозозависимого эффекта секреции инсулина, GLP-1 способствует пролиферации и дифференцировке клеток независимо от концентрации глюкозы, которая может продуцироваться при нормальной глюкозе крови. Рецептор GLP-1 ниже по течению, несколько сигнальных путей участвуют в стимулировании пролиферации, дифференцировки и защиты клеток.
GLP-1 не только регулирует уровень глюкозы в периферической крови, но и действует как нейротрансмиттер в ЦНС, играя важную роль в клеточной пролиферации, апоптозе и нейрогенезе [25]. Между тем, в сочетании с соответствующими рецепторами, GLP-1 участвует в сигнальных путях PI3K и MAPK, которые могут активировать расположенную ниже по течению молекулу субстрата PKA, способствовать высвобождению нейротрансмиттера и улучшать синаптическую пластичность [26]. В то же время он не только компенсирует сигнал инсулина, но и улучшает явление резистентности к инсулину у пациентов с БА. Эксперимент показал, что аналоги GLP-1 улучшали память, в которую вводили A [27], и уменьшали образование A [28].
Преимущество продукта цистанхе:Анти болезнь Альцгеймера
Аспросин
Аспросин расщепляется на конце белка миофибрилл -1, который содержит сегмент из 140 аминокислот. Он может способствовать расщеплению глюкозы в печени с помощью пути G-белка in-cAMP-PKA и способствовать поглощению глюкозы клетками, чтобы поддерживать ее уровень в крови на оптимальном уровне [29]. Предыдущие исследования показали, что у пациентов с неонатальным прогероидным синдромом (НПС) существовала резистентность к инсулину [30]. Из предыдущего обзора мы можем уловить, что БА имеет значительную связь с резистентностью к инсулину.
Исследователи обнаружили, что модель мышей с диабетом оказывает более высокий уровень аспросина, чем при нормальном цикле, после чего ей вводили деактивацию моноклонального антитела в сочетании с аспросином, который может регулировать уровень инсулина. При настаивании на лечении инсулинорезистентность возвращалась к норме [31]. Улучшение резистентности к инсулину играет жизненно важную роль в снижении заболеваемости БА.
глюкокортикоиды
Глюкокортикоиды (ГК) секретируются зонально-пучковой корой надпочечников. У человека основным фактором является кортизол, тогда как у грызунов это в основном кортикостерон. Он имеет функцию регулирования метаболизма гликолипидов и белков, а также ингибирования иммунного ответа, противовоспалительного и противошокового действия. Высвобождение глюкокортикоидов регулируется гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной осью (ГГА) [32]. Центральным элементом реакции на стресс является активация ГГН и стимуляция коры надпочечников к высвобождению глюкокортикоидов.
GC представляет собой стероидный гормон, который проходит через гематоэнцефалический барьер и связывается с рецепторами. Глюкокортикоид имеет два рецептора в головном мозге, один представляет собой минералокортикоидные рецепторы (MR) с высоким сродством, а другой представляет собой глюкокортикоидный рецептор (GR) с низким сродством. Эти рецепторы экспрессируются в основном в области гиппокампа, где GR экспрессируется в области CAl. [33]. Временно высокие уровни GC могут улучшить память, тогда как постоянные высокие уровни GC делают GR настолько активным, что могут повредить функцию памяти организма [34].
Исследования показывают, что уровни кортизола в плазме, слюне или спинномозговой жидкости у пациентов с БА выше, чем у здоровых людей. Изменения уровня кортизола положительно коррелируют с памятью при БА, но механизм не ясен [35]. Гиппокамп является передовым центром регуляции оси HPA. При поражении гиппокампа у больных БА нарушается функция ГГА оси, при этом уровень ГЦ повышен. Это вызывает атрофию, потерю, регенерацию дендритов нейронов гиппокампа и, в конечном итоге, снижение когнитивных функций. В то же время высокий уровень GC ускоряет гидролиз АРР и увеличивает накопление А. И наоборот, отложение А, вероятно, повысит уровень ГК, сформирует порочный круг А и усугубит состояние БА. Высокая концентрация ГК в головном мозге стимулирует активацию киназы GSK3 и увеличивает аномальное фосфорилирование тау-белка [36].
Лекарственное растение: Цистанхе
Перспектива исследования ноотропов фитотерапии
Как упоминалось выше, нарушение метаболизма глюкозы и связанного с ней гормона тесно связано с возникновением и развитием БА. Хотя были предложены основные теории патогенеза БА, а именно холинергическая гипотеза и гипотеза бета-амилоидного каскада, механизм все еще нуждается в выяснении. Клинически препараты для лечения БА в основном включают антихолинэстеразный препарат донепезил, литамин, галантамин и антагонист глутаматных рецепторов мемантин. Однако БА по-прежнему нельзя эффективно предотвратить или вылечить. Между тем, эти лекарства имеют много побочных эффектов, помимо продолжительности терапии. Появившиеся данные указывают на то, что вмешательство растительных лекарственных средств характеризуется малым побочным эффектом и высокой безопасностью, что делает их обладающими определенными преимуществами при лечении БА.
Одна из групп, занимающихся траволечением, в своем предыдущем исследовании обнаружила, что куркумин снижает агрегацию А в мозге мышей с болезнью Альцгеймера и улучшает симптомы нарушения памяти. Кроме того, они использовали методы иммуногистохимии и вестерн-блоттинга для определения метаболизма глюкозы и пути инсулина у трансгенных мышей с АРР. Результаты показали, что куркумин устраняет дефицит сигнального пути инсулина и улучшает способность к пространственному обучению и памяти за счет усиления экспрессии белка инсулиноподобного фактора роста [37]. Дурайраджан и др. предположили, что берберин ингибирует фосфорилирование белка-предшественника амилоида, чтобы предотвратить отложение А [38]. Исследование показало, что инъекции DanHong могут улучшить память у пациентов с диабетом [39]. В клинических испытаниях прием DanShenDiWan может уменьшить отложение А и улучшить когнитивные функции у пациентов с диабетом [40]. ZhengSunetal обнаружил, что рецепт ZiBuPiIYin может предотвратить повреждение головного мозга у крыс с диабетом. Механизмы могут быть связаны с улучшением аберрантной митохондриальной функции, резистентностью к инсулину и уменьшением поражения А [41]. Китайская медицина основана на совокупности сложных взаимодействий, другими словами, необходимы дополнительные исследования синергетического эффекта комбинаций трав, чтобы лучше понять механизмы заболевания [42].
Значительное эпидемиологическое исследование четко установило связь между метаболическими и нейродегенеративными нарушениями в целом [43]. Установлено также, что патологические изменения инсулинорезистентности и нарушения метаболизма глюкозы при БА аналогичны таковым при диабете. Поэтому перспективно найти новый путь для рассмотрения исследовательской стратегии по изучению кандидатов в ноотропы, уходящих корнями в фитотерапию и ее формулу.
Нейропротекторные эффекты цистанхе
использованная литература
1 Дун Ю.Х., Мао С.К., Лю Л. и др. Распространенность деменции среди китайцев в возрасте 60 лет и по данным метаанализа. Чин Дж. Общественное здравоохранение, 2014 г., 30(4): 512-515.
2. Робертс Р.О., Кнопман Д.С., Пшибельский С.А. и соавт. Ассоциация сахарного диабета 2 типа с атрофией головного мозга и когнитивными нарушениями. Нейрол 2014, 82(13): 1132–1141.
3. Моррис Дж.К., Видони Э.Д., Хонеа Р.А. и соавт. Нарушение гликемии увеличивает прогрессирование заболевания при легких когнитивных нарушениях. Neurobiol Aging 2014, 35(3): 585–589.
4. Cai H, Cong WN, Ji S, et al. Метаболическая дисфункция вБолезнь Альцгеймераи связанные с ними нейродегенеративные расстройства. Curr Alzheimer Res 2012, 9(1): 5-17.
5. Коп Ф.Д., Фролич Л. Опасность происшествияБолезнь Альцгеймерау больных сахарным диабетом: систематический обзор проспективных исследований. J Alzheimers Dis 2009, 16(4): 677–685.
6. Рейвен ГМ. Лекция Бантинга 1988 г. Роль инсулинорезистентности в заболеваниях человека. Диабет 1988, 37: 1595–1607. 7. Марк Ярчоан, Стивен Э. Арнольд. Перепрофилирование лекарств от диабета для резистентности мозга к инсулину при болезни Альцгеймера. Диабет, 2014 г., 63(7): 2253-2261.
8. Мильке Дж.Г., Ван Ю.Т. Инсулин, синаптическая функция и возможности нейропротекции．ProgMolBiolTranslSci 2011, 98: 133-186．
9. Чжан Б., Сунь Л., Чжан Ю. и др. Экспрессия и корреляция глобулина, связывающего половые гормоны, инсулиновой сигнальной трансдукции и белков-переносчиков глюкозы в ткани плаценты при гестационном сахарном диабете. J China Med Univ 2017, 46(2): 97-102.
10. Бонди К.А., Ченг К.М. Передача сигналов инсулиноподобным фактором роста 1 в головном мозге. Eur J Pharmacol 2004, 490(1-3): 25-31.
11. Скрима М., Марко К.Д., Фабиани Ф. и др. Сигнальные сети, связанные с активацией AKT при немелкоклеточном раке легкого (НМРЛ): новое понимание роли фосфатидилинозитол-3 киназы. PLoS One 2012, 7(2): e30427.
12. Срамек Ян, Власта Н.Ф., Камила Б. и др. p38 MAPK активируется, но не играет ключевой роли во время индукции апоптоза насыщенными жирными кислотами в клетках поджелудочной железы человека. Int J MolSci 2016, 17(2): 159.
13. Боско Д. Возможные последствия инсулинорезистентности и метаболизма глюкозы уБолезнь Альцгеймерапатогенез. J Cell Mol Med 2011, 15: 1807-1821.
14. Динели К.Т., Ярлинг Дж.Б., Деннер Л. Инсулинорезистентность вБолезнь Альцгеймера. Neurobiol Dis 2014, 72 (Pt A): 92-103.
15. Ridler C. Болезнь Альцгеймера: неправильно свернутые амилоидные семена сахарного диабета. Nat Rev Neurol 2017, 13(3):128.
16. Лутц Т.А. Роль амилина в контроле энергетического гомеостаза. Am J PhysiolRegulIntegr Comp Physiol 2010, 298: R1475-R1484.
17. Лим Ю.А., Иттнер Л.М., Лим Ю.Л. и соавт. Человеческий, но не крысиный амилин имеет общие нейротоксические свойства с Abeta42 в долгосрочных культурах гиппокампа и коры. FEBS Lett 2008, 582(15): 2188-2194.
18. Fu W, Ruangkittisakul A, MacTavish D, et al. Пептид амилоид-бета (Абета) напрямую активирует подтип рецептора амилина -3, запуская множественные внутриклеточные сигнальные пути. J BiolChem 2012, 287(22): 18820-18830.
19. Shen Y, Joachimiak A, Rosner MR, et al. Структуры человеческого фермента, разлагающего инсулин, обнаруживают новый механизм распознавания субстрата. Природа 2006, 443 (7113): 870-874.
20. Джексон К., Барисон Г.А., Диас Э. и др. Отложение амилина в головном мозге: второй амилоид при болезни Альцгеймера. Энн Нейрол 2013, 74 (4): 517-526.
21. Чжан Т., Цзэн К.Х., Лю Ю. и др. Распределение и экспрессия амилина в головном мозгеБолезнь Альцгеймераи обычных мышей. Журнал третьего военно-медицинского университета 2016, 38(3): 258-262.
22. Прашант Надкарни, Олег Г Чепурм, Джордж Г Хольц. Регуляция гомеостаза глюкозы с помощью GLP-1. NIH Public Access 2014, 121: 23-65.
23. WU MJ, LU TT, WANG FJ и др. Роль GLP-1 для центральной нервной системы. Med Recapitulate 2016, 22(5): 886-889.
24. Диксон С.Л., Ширази Р.Х., Ханссон С. и соавт. Аналог глюкагоноподобного пептида 1 (GLP-1), эксендин-4, снижает ценность пищи: новая роль мезолимбических рецепторов GLP-1. J Neurosci, 2012, 32(14): 4812-4820.
25. Li Y, Duffy KB, Ottinger MA, et al. Стимуляция рецептора GLP-1 уменьшает накопление бета-амилоидного пептида и цитотоксичность в клеточных и животных моделяхболезни Альцгеймерае. J Alzheimers Dis 2010, 19(4): 1205-1219.
26. Holscher C. Аналоги инкретина, которые были разработаны для лечения диабета 2 типа, обещают стать новой стратегией лечения диабета.Болезнь Альцгеймера. Недавний патент Patch CNS Drug Discov 2010, 5: 109-117.
27. Голт В.А., Хольшер. Агонисты GLP-1 облегчают LTP гиппокампа и устраняют нарушение LTP, вызванное бета-амилоидом. Eur J Pharmacol 2008, 587: 112-117.
28. Тан Дж., Донг К.Болезнь Альцгеймераи ход лечения аналогами GLP-1. Чин Дж. Clin Neurosci 2015, 23(1): 95-101.
29. Чейз Ромер, Клеменс Дюршмид, Хуан Бурнат и др. Аспросин, глюкогенный белковый гормон, индуцированный голоданием. Ячейка 2016, 2(63): 1-14.
30. Биндлиш С., Прессвала Л.С., Шварц Ф. Липодистрофия: синдром тяжелой резистентности к инсулину. Postgrad Med 2015, 127: 511-516.
31. Денис Р. Вкусовые качества могут стимулировать кормление независимо от нейронов AgRP. Cell Metab 2015, 22: 646-657.
32. Чжу Л.Дж., Лю М.Ю., Ли Х. и др. Различная роль глюкокортикоидов в гиппокампе и гипоталамусе при хронической гиперактивности оси HPA, вызванной стрессом. PLOS ONE 2014, 9(5): e97689.
33. Копер Дж.В., Ванр Оссум Э.Ф. Полиморфизмы и гаплотипы глюкокортикоидных рецепторов и их экспрессия в норме и при патологии. Стероиды 2014, 92: 62-73.
34. Yu XJ, Li Y, Tai LW, et al. Влияние глюкокортикоидов на нейронные клетки-предшественники взрослого гиппокампа. Chin J Tissue EngRes 2013, 19(16): 3521-3526.
35. Hu WH, Lu GH, Xu H. Изменения уровня кортизола в сыворотке у пациентов сБолезнь Альцгеймераи легкие когнитивные нарушения. Чин Дж. Геронтология 2016, 36(17): 4295-4297.
36. Ю. X. Роль стресса в развитииБолезнь Альцгеймера. World Latest Med Inf 2017, 17(21): 167-168.
37. Penguin Wang, Caixin Su, HuiliFeng и др. Куркумин регулирует пути инсулина и метаболизм глюкозы в мозге мышей APP swe/PS1dE9. Int J ImmunopatholPharmacol 2017, 30(1): 25-43.
38. Durairajan SSK, Liu LF, Lu JH и др. Берберин улучшает амилоидную патологию, глиоз и когнитивные нарушения вБолезнь Альцгеймерамодель трансгенной мыши. Neurobiol Aging 2012, 33: 2903-2919.
39. Сунь Б.Л., Чанг К.К. Влияние танцевальной инъекции на пациентов с синдромом апноэ-гипопноэ и диабетом 2 типа. Chin J Clin Rational Drug Use 2014; 7: 121–122.
40. Линь Дж.Ю., Лю Дж.Х., Лю Х.Х. и др. Влияние FufangDanshenDiwan на когнитивную функцию больных сахарным диабетом, осложненным ишемической болезнью сердца. Чин Дж. Новые лекарства 2009 г., 18: 1213–1216.
41. Чжэн С., Ли Б.З., Ли Н.Л. и др. Рецепт ZiBuPiYin предотвращает связанное с диабетом снижение когнитивных функций у крыс: возможное участие в улучшении митохондриальной дисфункции, пути резистентности к инсулину и гистопатологических изменениях. Дополнение BMC Altern Med 2016, 16: 200.
42. С.В. Сето, Г.Ю. Ян, А. Бенсуссан и др. Сахарный диабет, когнитивные нарушения и традиционная китайская медицина. Int J Endocrinol 2015: 810439.
43. Кляйнриддерс А., Кай В., Каппеллуччи Л. и соавт. Инсулинорезистентность в головном мозге изменяет оборот дофамина и вызывает поведенческие расстройства. ProcNatlAcadSci USA 2015, 112: 3463-3468.
