SLC37A2, связанная с фосфором молекула увеличивается в гладкомышечных клетках кальцинированной аорты Ⅱ

Полученные результаты

Поиск молекул-кандидатов вфосфат-индуцированный кальцинированныйAoSMC. Для поиска молекул, экспрессия которых увеличивается в кальцинированных AoSMC, был проведен микроматричный анализ ДНК около 26 000 генов с использованием кальцинированной мРНК AoSMC и некальцинированной мРНК AoSMC. На рисунке 1 показана тепловая карта различных генов, экспрессируемых между AoSMC, не культивированными с 2,6 мМ P, и теми, которые культивировались с 2,6 мМ P в течение 12 дней. В общей сложности 3066 генов увеличились более чем в два раза на культивируемых по сравнению с некультивируемыми AoSMC. Генами с повышенной экспрессией были молекулы, связанные с образованием остеобластов, такие как остеопонтин, периостиновый фактор, специфичный для остеобластов (POSTN), Wnt3, интерлейкин-6 (IL-6) ифактор роста фибробластов23 (FGF23), а также несколько молекул суперсемейства SLC (таблица 1). Среди этих молекул мы сосредоточили внимание на SLC37A2, количество мРНК которого увеличилось примерно в 3,1 раза на AoSMC, культивированном с 2,6 мМ P в течение 12 дней, по сравнению с AoSMC, не культивируемом с 2,6 мМ P. Сообщалось, что SLC37A2 связан с регуляцией P, но его подробная функция неизвестна. воспаления на экспрессию SLC37A2.Сосудистая кальцификацияСообщалось, что этому способствует воспаление, поэтому мы исследовали, влияет ли на мРНК SLC37A2 воспалительная реакция. Через 24 часа после обработки ЛПС уровень IL-6 значительно увеличился по сравнению с AoSMC, не обработанным ЛПС (рис. 2А). Эти результаты были также видны через 72 часа после лечения ЛПС. Не было существенных различий между группами по экспрессии мРНК SLC37A2 (рис. 2Б).

НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ НАТУРАЛЬНЫЙ ОРГАНИЧЕСКИЙ ЭКСТРАКТ ЦИСТАНШИ С 25% ЭХИНАКОЗИДА И 9% АКТЕОЗИДА ДЛЯ ФУНКЦИИ ПОЧЕК

Служба поддержки Wecistanche — крупнейшего экспортера цистаншей в Китае:

Электронная почта:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Телефон:+86 15292862950

Магазин для получения дополнительных технических характеристик:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Экспрессия SLC37A2 в кальцинированных AoSMC, индуцированных фосфатом. Чтобы определить, участвует ли SLC37A2 в кальцификации, мы исследовали экспрессию мРНК SLC37A2 на некальцинированных и кальцинированных AoSMC (рис.3). Кальцификация наблюдалась в AoSMC, культивируемом с 2,6 мМ Р в течение 6 дней, а более выраженная кальцификация наблюдалась в AoSMC, культивированном с 2,6 мМ Р в течение 12 дней (рис. 3А). мРНК Runx2 значительно увеличивалась на кальцинированных AoSMC по сравнению с некальцинированными AoSMC (рис. 3B). мРНК SLC37A2 значительно начинала увеличиваться на 3-й день в кальцинированных AoSMC, а на 9-й день кальцинированные AoSMC значительно увеличивались примерно в два раза по сравнению с некальцинированными AoSMC (рис. 3С). Экспрессия белка SLC37A2 значительно увеличилась примерно в два раза на 6-й день в кальцинированных AoSMC по сравнению с некальцинированными AoSMC (рис. 3D).

Экспрессия SLC37A2 у крыс модели ХБП.

Чтобы выяснить, участвует ли SLC37A2 в кальцификации сосудов in vivo, мы исследовали экспрессию мРНК SLC37A2 на сосудах крыс с ХБП, индуцированной аденином. Крыс с аденин-индуцированной ХБП создавали согласно протоколу, показанному на фиг. 4А. В таблице 2 приведены масса тела и биохимические данные в день умерщвления. Масса телааденин-индуцированная ХБПкрыс было значительно ниже по сравнению с крысами без ХБП. По сравнению с группой без ХБП, группы с ХБП имели более высокие уровни P и Cr в плазме и более низкие уровни кальция в плазме, а также 24-часовую экскрецию P, Ca и Cr с мочой. Кроме того, как видно из предыдущих исследований, эти результаты были более заметными в группе ХБП-ГП.37,39) Таким образом, функция почек снизилась в группе ХБП-ГП, особенно в группе ХБП-ГП. Мы исследовали экспрессию мРНК в сосудах аорты крыс с ХБП (рис. 4). Хотя существенных различий в экспрессии мРНК Runx2, фактора транскрипции, который действует на ранней стадии механизма сосудистой кальцификации, не было, между группами (рис. 4Б) экспрессия мРНК остеопонтина значительно увеличивалась в группе с ХБП-ГП по сравнению с группой без ХБП-ГП. Группа CKD иЧКД-ЛПгрупп(Рис. 4C). Экспрессия мРНК SLC37A2 также была значительно увеличена в группе CK D-HP по сравнению с группой без CKD и группой CKD-LP (рис. 4D). Поскольку у этих крыс были большие индивидуальные различия, мы исследовали корреляцию между остеопонтином и мРНК SLC37A2 и обнаружили значительную корреляцию между этими молекулами (рис. 4E). Гистологическое исследование торакоабдоминальной аорты выявило медиальную кальцификацию только в аорте группы ХБП-ГП (рис. 5А). Чтобы изучить сайт экспрессии SLC37A2 на аорте, мы провели иммуноокрашивание аорты CKD-HPrats. SLC37A2 был сильно выражен в области, гдесосудистая кальцификацияпроизошло (рис. 5Б).

Рис. 1. Тепловая карта генов с различной экспрессией между AoSMC, не культивированными с 2,6 мМ P, и AoSMC, культивированными с 2,6 мМ P. Красный цвет представляет гены с высоким уровнем сигнала, а зеленый представляет гены с низким уровнем сигнала. AOSMC гладкомышечные клетки аорты. Смотрите рисунок в онлайн-версии.

Обсуждение

Мы исследовали молекулы-кандидаты, связанные с P, участвующие в кальцификации сосудов. Наши результаты показали, что SLC37A2 является одной из молекул, количество которых увеличивается с увеличениемсосудистая кальцификацияin vitro и in vivo.

Семейство SLC37 принадлежит к суперсемейству SLC и включает белки: SLC37A 1-440) Семейство SLC37 содержит трансмембранные белки в мембране эндоплазматического ретикулума и имеет последовательность, гомологичную бактериальному фосфаторганическому антипортеру. (41) SLC37A4 более известен какпереносчик глюкозы6-фосфата.(2-44 Однако сообщений о SLC37A2 мало, и подробности его функции до конца не изучены. SLC37A2, также известный как SPX2, обильно экспрессируется в мышиных макрофагах, селезенке, тимусе и белой жировой ткани (WAT). ) моделей мышей с генетическим ожирением и остеокластоподобных клеток, полученных из клеток Raw264.7. (45.6) Белок SLC37A2 транспортирует как глюкозо--6-фосфат/фосфат, так и фосфат/фосфатный обмен. (4) Недавно появились сообщения о связи SLC37A2 при заболевании животных (47-49) Дефект SLC37A2 вызываеткраниомандибулярная остеопатия(CMO), самоограничивающееся пролиферативное заболевание костей у терьеров. (47) У молочного скота гомозиготная мутация SLC37A2 ответственна за эмбриональную гибель. (8.9) Кроме того. SLC37A2 считается мишенью для генов-мишеней витамина D. (Итак) Также рассматривался потенциал гена-мишени рецептора прогестерона фосфора-Ser294 в прогрессировании рака молочной железы (1). Сообщалось, что воспаление может как вызывать, так и усугублять кальцификацию сосудов. (2с26)Более того. SLC37A2 обильно экспрессируется в макрофагах и WAT, на которые влияет инфильтрация макрофагов. (с) Поэтому. мы считали, что SLC37A2 может быть молекулой, экспрессирующейся во время воспаления.. Однако наши результаты не показали увеличения экспрессии SLC37A2 в AoSMC, подвергшихся воспалительной реакции, и, по-видимому, на эту молекулу непосредственно не влияет стимуляция воспаления. SLC37A2 может участвовать в кальцификации сосудов не по воспалительному механизму.

Сообщалось, что SLC37A2 действует как P-связанныйанти-носильщик. (41) Кроме того, сообщалось, что SLC37A2 является геном-мишенью для витамина D, а ген SLC37A2 содержит основной сайт связывания витамина D с рецептором (ss2). Систематически коррелируют изменения в экспрессии генов SLC37A2 и циркулирующих форм витамина D. был обнаружен в мононуклеарных клетках периферической крови человека. (50) Рецепторы витамина D связываются с 1а, 25-дигидроксивитамином D, который является метаболитом витамина D, и регулируют экспрессию генов. lo, 25-дигидроксивитамин D, участвует в абсорбции Ca и P в кишечнике, мобилизации Ca в костях и реабсорбции Cain в почках. (3) Имеется сообщение о том, что у крыс на модели ХБП, вызванной аденином, сывороточный уровень la, 25-дигидроксивитамина D был значительно выше у крыс, получавших диету с высоким содержанием p, с выраженной кальцификацией сосудов, по сравнению с крысами с низким содержанием витамина D. -p диета.39) SLC37A2 может быть связан с регуляцией P через витамин D. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы уточнить, что витамин D влияет на экспрессию SLC37A2 in vitro и Vivo.

Показано, что механизм сосудистой кальцификации аналогичен механизму костеобразования. Дефицит SLC37A2, вызванный CMO, клинически сравним с детским кортикальным гиперостозом у человека, также известным как болезнь Каффи.7 Кроме того, имеются сообщения о том, что SLC37A2 экспрессируется в костном мозге и остеокластах.o Hytone и др. (7) предположили, что дисфункция SLC37A2 может вызвать дисбаланс функции формирования кости остеобластов и остеокластов и, как следствие, привести к гиперостозу.

Runx2 является важным фактором транскрипции для сосудистой кальцификации. Сообщается также, что Runx2 представляет собой транскрипционный фактор дифференцировки остеобластов, экспрессирующийся в развивающихся эпителиальных клетках молочной железы. (s435) Runx2, по-видимому, необходим для регуляции генов-мишеней прогестерона фосфор-Ser294, которые связаны с прогрессированием рака молочной железы. SLC37A2 считается кандидатным геном-мишенью рецептора прогестерона фосфор-Ser294. (s1) Таким образом, считается, что Runx2 может регулировать SLC37A2. В настоящем исследовании экспрессия мРНК SLC37A2 в аорте крыс CkD коррелировала с мРНК остеопонтина, которая нацелена на ген Runx2.