Первое клиническое испытание на людях эффективности депигментации кожи глицинамида гидрохлорида
Mar 18, 2022
Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791
Абстрактный:Предыдущее исследование выявило определенные низкомолекулярные антимеланогенные пептиды, которые разделяют общая последовательность с α-меланоцит-стимулирующим гормоном (МСГ) и заканчивается глицинамидным фрагментом. Сам глицинамид также показал антимеланогенную активность в клеточных анализах, но ни глицин, ни глицин. ацетилглицинамид был активен, что указывало на особую структуру и взаимосвязь активности. Цель этого исследования было направлено на изучение эффективности депигментации кожи глицинамида гидрохлорида у человека Предметы. Первичный потенциал раздражения кожи глицинамида гидрохлорида оценивали с помощью пластыря тестирование на 30 людях. Эффективность депигментации кожи глицинамида гидрохлорида составила оценивается в двойном слепом клиническом тесте на 21 человеке. Тестовый продукт и элемент управления продукт наносили на назначенные участки на правой или левой стороне лица два раза в день в течение восьми Недель. Параметры цвета кожи, т.е. индекс меланина, значение L* (представляющее светлоту кожи), значение a* (покраснение) и значение b* (желтизна) измерялись с помощью приборов. Личность Угол топологии (ITAo, представляющий цвет кожи) был рассчитан из значений L* и b. Степень кожапигментациябыл визуально оценен двумя тестировщиками. Первичный тест на раздражение кожи показал, что раствор, содержащий глицинамида гидрохлорид до 10%, не вызывал каких-либо неблагоприятных кожных реакций. В тесте эффективности тестируемый продукт значительно снижал индекс меланина и увеличивал значение L* и ITAo после двух недель применения относительно базового значения в начале теста. Это также значительно снижена степеньпигментацияпосле 6 недель применения, относительно исходного уровня ценность. Различия в индексе меланина, значении L*, ITAo и степенипигментациямежду тестовая и контрольная группы стали статистически значимыми после шести недель или восьми недель применения. Во время теста на эффективность не наблюдалось никаких признаков раздражения кожи. Настоящее исследование свидетельствует о том, что глицинамида гидрохлорид имеет большой потенциал для использования в борьбе с гиперпигментацией кожи.
Ключевые слова:меланин; глицинамида гидрохлорид; депигментация;пигментация;осветление кожи; отбеливание; пептид
1. Введение
Цвет кожи человека в основном определяется содержанием и распределением различных пигментов вещества, такие как меланин, гемоглобин и каротиноиды [1]. Генетические факторы в первую очередь определяют цвет кожи, но на него также сильно влияют приобретенные факторы. Меланин вырабатывается через процесс, при котором аминокислота под названием L-тирозин метаболизируется в серии ферментативных реакций в меланосомах, которые являются органеллами меланоцитов. Существуют различные типы меланина, такие как эумеланин и феомеланин, которые придают разные цвета [2]. Меланосомы поставляют меланин в окружающие кератиноциты и, как следствие, меланин распределяется по всей коже и экспрессируется для получения различных цветов кожи [3]. В дополнение к своему влиянию на внешний вид кожи, меланин играет важную роль в защите организма от токсичности ультрафиолетовых (УФ) лучей [4]. Следовательно метаболизм меланина в коже стал важной темой исследований как с физиологического, так и с точки зрения физиологического и эстетическая перспектива [5,6].
Аномальный метаболизм меланина может вызвать различные виды пигментных заболеваний кожи, которые подразделяются на гиперпигментацию и гипопигментацию [7,8]. Гиперпигментация возникает, когда меланин чрезмерно или неравномерно накапливается из-за воспаления, старения, ультрафиолетовых лучей, физических повреждений; и другие внутренние/внешние стимулирующие факторы [9,10]. Между тем, генетические или эпигенетические дефекты в выработка меланина может привести к гипопигментации, например, при альбинизме или витилиго [11,12].
Стратегии профилактики и лечения гиперпигментации включают фотопротекцию, фармакотерапию, хирургическое лечение (химический пилинг и лазерное лечение), а также косметический камуфляж [13–15]. Химический часто проводится пилинг и лазерное лечение, но у них есть побочные эффекты, такие как дерматит и повторяющийсяпигментация[16,17]. Гидрохинон в основном используется в качестве фармакотерапевтика, но он потенциально может вызвать раздражение кожи, аллергию, мутации и рак [18]. В области косметики,осветление кожифункциональная косметика, содержащая арбутин, ниацинамид и производные витамина С доминируют, но удовлетворенность потребителей относительно их безопасности и эффективности осветления кожи низкий [19]. Эта исследовательская группа искалаосветление кожиагенты из различных природных источников и идентифицированы многочисленные природные соединения, такие как п-кумаровая кислота, ресвератрол и лютеолин 7-сульфат, которые ингибируют синтез клеточного меланина с помощью различных механизмов [20–23].
Пептиды все чаще используются в качестве активных ингредиентов в дерматологии и средствах по уходу за кожей [24,25]. Чем меньше пептид, чем дешевле его производство, тем выше его стабильность, и тем легче он впитывается кожей.
Наши недавние исследования выявили определенные низкомолекулярные антимеланогенные пептиды [26,27]. В этих Исследования, специальный алгоритм был использован для прогнозирования последовательностей активных пептидов с помощью позиционного сканирующая библиотека комбинаций синтетических пептидов [28,29]. Используя этот метод, можно было идентифицировать антимеланогенные пептиды, оценив активность 80 тетрапептидных пулов вместо оценка активности всех 160 000 возможных типов тетрапептидов [27]. Антимеланогенный активность пептидов была предварительно оценена в клетках меланомы B16-F10, обработанных α-меланоцит-стимулирующий гормон (МСГ). Последовательность активного тетрапептида прогнозировалась: быть R-(F/L)-(C/W)-(G/R)-NH2. Из отдельных протестированных тетрапептидов RFWG-NH2 и RLWG-NH2 показал высокую антимеланогенную активность. Тетрапептид FRWG-NH2, который имеет ту же последовательность, что и часть α-MSH (ацетил-SYSMEHFRWGKPV-NH2), также проявляла аналогичную активность. Среди трипептидов испытанные FWG-NH2, LWG-NH2 и RWG-NH2 были относительно активными. Дипептид WG-NH2 и G-NH2 (глицинамид) сохранял свою антимеланогенную активность, в то время как ни ацети-G-NH2, ни G (глицин) был активным. Считается, что эти низкомолекулярные антимеланогенные пептиды нацелены на рецептор меланокортина 1 (MC1R), потому что они имеют последовательность, похожую на последовательность α-MSH. Эти низкомолекулярные антимеланогенные пептиды могут быть очень полезны при изучении MC1R-зависимых физиологические функции меланоцитов [30].
Было показано, что глицинамид очень эффективно ингибирует выработку клеточного меланина за счет снижения активация цАМФ-чувствительного элемента-связывающего белка (CREB) и экспрессия генов микрофтальмия-ассоциированный транскрипционный фактор (MITF) и тирозиназа (TYR) в ответ на α-MSH [27]. В настоящем исследовании мы сообщаем о результатах первого теста на применение глицинамида на кожу человека (в форма гидрохлоридной соли), которая является наименьшей из низкомолекулярных антимеланогенных пептидов.
2. Материалы и методы
2.1. Материалы
Глицинамида гидрохлорид был закуплен у Sigma-Aldrich (Сент-Луис, Миссури, США), Ханчжоу Dayangchem Co., Ltd. (Ханчжоу, Китай) и Tokyo Chemical Industry Co., Ltd. (Токио, Япония). Тестовый продукт (Melapep), содержащий 10% глицинамида гидрохлорида в качестве активного ингредиента, был предоставлено Ruby Crown. Co., Ltd. (www.rubycrown.com, Тэгу, Корея). Контрольный продукт содержит тот же препарат без глицинамида гидрохлорида.
2.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ)
Хроматографический анализ продукции проводился с использованием системы ВЭЖХ Waters Alliance (Waters, Milford, MA, США), состоящий из сепарационного модуля Waters e2695 и Waters 2996 Детектор фотодиодных массивов. Стационарная фаза представляла собой 5 мкм, 4,6 мм × 250 мм колонну Hector-M C18 (RS Tech Co., Тэджон, Корея), а подвижная фаза составляла 20 мМ фосфорной кислоты, содержащей 5,0 мМ натрия 1-октановый сульфонат (рН 3,0). Расход подвижной фазы составлял 0,6 мл мин−1. Длина волны обнаружения составила 210 нм. Продукт разбавляли 10 раз подвижной фазой и пропускали через шприцевой фильтр (0,2 мкм, cat#431219, Corning, Inc. NY, США) перед инъекцией. Инъекция образца объем составил 10 мкл.
2.3. Первичный тест на раздражение кожи
Первичный тест на раздражение кожи был проведен в соответствии с продуктом личной гигиены руководящие принципы совета (PCPC) (2014) и стандартные операционные процедуры (SOP) Dermapro Co., Ltd. (www.dermapro.co.KR, Сеул, Корея), чтобы определить, раздражают ли тестируемые продукты кожу человека. Проект испытаний (No 1-220777-A-N-02-DICN19165) был утвержден 1 августа 2019 года биоэтикой комитет Dermapro Co., Ltd. и проводимый в соответствии с этическими принципами, основанными на Хельсинкская декларация.
Испытуемые были отобраны из здоровых добровольцев, которые соответствуют включению и исключению. критерии. Мы получили письменное информированное согласие от субъектов.
2.3.1. Критерии включения
(1) Здоровые заявители в возрасте 20−60 лет без кожных заболеваний. (2) Заявители, которые добровольно подписали письменная форма согласия до начала испытания после получения информации о цели и содержании теста. (3) Заявители, которые были готовы сотрудничать с требованиями испытания и немедленно сообщить об этом если возникли какие-либо неожиданные последствия. (4) Заявители, которые могут находиться под наблюдением в течение всего испытательного периода.
2.3.2. Критерии исключения
(1) Женщины, которые были беременны, кормили грудью или могли забеременеть. (2) Заявители с история кожных заболеваний, включая атопический дерматит, псориаз, экзему и сезонную аллергию в пределах последний месяц перед тестом. (3) Заявители с отклонениями в должностипигментация, может мешать подсчет баллов на полигоне. (4) Заявители, принимающие противовоспалительное, антигистаминное или иммунодепрессантное средство наркотики. (5) Заявители, которые использовали местные противовоспалительные препараты на испытательном полигоне в течение последних двух недель перед тестом. (6) Заявители с кожными заболеваниями, которые могли помешать цели теста. (7) Заявители с аутоиммунными заболеваниями или иммунодефицитными расстройствами в анамнезе. (8) Заявители которые получали иммунотерапию в последнюю неделю перед тестом или планировались к лечению в течение испытательного периода. (9) Заявители, которые получали лечение от хронических заболеваний, таких как астма и сахарный диабет. (10) Заявители, которые участвовали в других тестах или которые участвовали в аналогичный тест в течение последних четырех недель перед тестом. (11) Заявители, которые испытали раздражение кожи или аллергия в ответ на прикрепление ленты.
2.3.3. Условия участия
(1) Испытуемым не разрешалось поливать воду на испытательном полигоне при прикреплении пластыря. (2) Если субъект требовалось принимать или использовать лекарства, об этом должен был быть уведомлен сотрудник по тестированию. (3) Субъект должен был соблюдать с графиком проверок. (4) Испытуемые должны были информировать тестировщика обо всех аномальных кожных симптомах, что произошло во время тестового периода.
2.3.4. Критерии сдачи предметов в течение Тестового периода
(1) Если субъект добровольно отказался от теста из-за внезапного несчастного случая, болезни, беременности, и т.д. (2) Если возникла серьезная побочная кожная реакция, вызванная исследуемым материалом. (3) Если субъект этого не сделал следуйте протоколу тестирования. 4) Если испытание не могло быть проведено должным образом в силу особых обстоятельств, например, если невозможно связаться с субъектом.
2.3.5. Тестирование патчей
Тестовые материалы (150 мкл) были применены к Finn Chambers® (Smart Practice, Hillerød, Дания) с использованием пипетки Microman M250 (Gilson, Villiers le bel, Франция). Камеры были прикреплены к задняя часть испытуемых и защищена лентой Micropore (3M, St. Paul, MN, США) в течение 24 ч. Тестировщики оценивали кожные реакции у испытуемых два раза, сначала через 20 мин. после удаления пластыря, а затем через 24 ч; использование системы классификации кожных реакций, описанной Фрошем и Клигманом [31] с небольшими изменениями следующим образом: 0, видимая реакция отсутствует; 1, незначительная пятнистая или диффузная эритема; 2, умеренно однородная эритема; 3, интенсивная эритема с отеками; и, 4, интенсивная эритема с отеками и пузырьками. Оценка ответа (R в %) был рассчитан как R = (Σ (наблюдаемая степень реакции × частоты отклика)/(всего четыре градации × общей сложности два раза наблюдений × общее количество испытуемых)) × 100 (%). Первичное раздражение кожи потенциал исследуемых материалов был описан на основе R, следующим образом: R< 0.87%,="" non-irritating/slight="" irritating;="" 0.87%="" ≤="" r="">< 2.42%,="" mildly="" irritating;="" 2.42%="" ≤="" r="">< 3.44%,="" moderately="" irritating;="" and,="" r="" ≥="" 3.44%,="" severely="">
2.4. Тест эффективности депигментации кожи
Был проведен тест для оценки эффективности депигментации кожи тестируемого продукта. Тест проект (No 1-220777-A-N-02-DICN19168) утвержден 16 августа 2019 года комитетом по биоэтике Dermapro Co., Ltd. и проводится в соответствии с этическими принципами, основанными на Хельсинки декларация. Испытуемые были отобраны из здоровых добровольцев, которые соответствуют инклюзии и критерии исключения. Мы получили письменное информированное согласие от пациента (испытуемых).
2.4.1. Критерии включения
(1) Мужчины или женщины в возрасте 20−60 лет с гиперпигментацией, такой как мелазма или лентиго, на лице. (2) Здоровые люди без острых или хронических физических заболеваний, включая кожные заболевания. (3) Те, кто подпадал под типы II, III и IV классификации типов кожи Фицпатрика. (4) Заявители которые были проинформированы о цели, содержании и т.д. теста и добровольно подписали договор об испытании. (5) Заявители, которые могут быть отслежены во время теста.
2.4.2. Критерии исключения
(1) Те, кто был беременн, кормил грудью или мог забеременеть. (2) Те, у кого есть история фотоаллергия или светочувствительность. (3) Те, кто использовал наружные препараты, содержащие стероиды для более одного месяца на лечение кожных заболеваний. (4) Те, кто участвовал в аналогичных тестах в течение 6 месяцев, предшествующих тесту. (5) Лица с чувствительной и раздражительной кожей. (6) Люди с кожей аномалии, такие как пятна, акне, эритема, расширение капилляров и т. Д. На испытательном участке. (7) Те, кто использовали ту же или аналогичную косметику или лекарства на испытательном полигоне в течение трех месяцев с момента начала тест. (8) Те, кто потреблял лекарства или продукты питания дляосветление кожиЭффекты. (9) Люди с атопией дерматит или другие инфекционные заболевания кожи. (10) Те, кто получал медикаментозное лечение (пилинг кожи, ботокс, другие средства по уходу за кожей и т.д.) на испытательном полигоне в течение 6 месяцев до теста. (11) Те, кто получил иммунизация, антигистаминные препараты, противовоспалительные средства и т.д. в течение трех месяцев до теста. (12) Те, кто получал системные стероиды, гормональную терапию или лучевую терапию в течение одного месяца до тест. (13) Люди с хроническими потребительскими заболеваниями (астма, диабет, высокое кровяное давление и т.д.). (14) Те, у кого есть работа, связанная с воздействием солнечного света в течение длительных периодов времени. (15) Те, кто взял препараты, вызывающие фотосенсибилизацию. (16) Те, кто был признан непригодным для участия в испытании тестировщик.
2.4.3. Условия участия
(1) Испытуемые не должны были использовать косметику или лекарства, которые претендуют на функциональность в течение испытательного периода. (2) Испытуемые должны были избегать воздействия более чем нормальных уровней солнечного света в повседневной жизни во время тестовый период и должны были использовать солнцезащитный крем при выходе на улицу. (3) Испытуемые не должны были путать тест продукты и должны были применять их в соответствии с предписаниями. (4) За исключением тестовых продуктов, испытуемые не должны были изменить косметические средства, которые они использовали в течение тестового периода. (5) Субъекты должны были сообщать обо всех аномальные симптомы для тестировщика. (6) Субъекты должны были добросовестно следовать инструкциям относительно использования и ограничения продуктов. (7) Субъекты должны были соблюдать график проверок и подтверждать использование продуктов для тестировщика.
2.4.4. Критерии сдачи предметов в течение Тестового периода
(1) Если субъект добровольно отказался от теста из-за внезапного несчастного случая, болезни, беременности, и т.д. (2) Если имела место серьезная побочная реакция, вызванная испытуемым материалом. (3) Если субъект этого не сделал соблюдать протокол испытаний. 4) Если испытанию препятствовали особые обстоятельства, например, если оно было невозможно отследить объект съемки. (5) Если субъект пил или курил чрезмерно, или подвергался воздействию чрезмерное УФ-излучение.
2.4.5. Применение тестируемой продукции
Тестовые и контрольные продукты (0,6 мл) замачивали в 4 × 3 см2 листов нетканого материала (название продукта, хлопок типа кожной ткани), приобретенный у Blue and Pink (Gimpo-si, Корея), которые были затем индивидуально упаковывается для использования испытуемыми.
Тест был двойным слепым; ни тестировщикам, ни испытуемым не сказали, какой продукт является который. После получения тестовой продукции в той же упаковке от поставщика, тестовый продукт менеджер маркировал упаковки тестовыми кодами в отдельном помещении, недоступном для тестировщиков или Предметы. Тестировщики получили тестовые продукты от менеджера по тестовому продукту в слепом состоянии и испытуемые также получали продукцию от тестировщика в слепом состоянии.
Метод блочной рандомизации использовался для выделения тестовых продуктов испытуемым. Случайный блок Таблица распределения (SSPP, SPSP, SPPS, PPSS, PSPS и PSSP) была предоставлена субъекту для определения порядок тестовых продуктов, S или P, которые будут использоваться ею и тремя другими субъектами в заказе.
Испытуемые использовали тестовые продукты после умывания лица и перед использованием любой другой косметики. два раза в день, по утрам и вечерам, в течение восьми недель. Испытуемые приложили тест и контроль изделий на обозначенных участках с левой и правой сторон лица соответственно (или пороков) наоборот), в течение 30 мин., в соответствии с рекомендацией провайдера.
2.4.6. Оценка цвета кожи
Испытуемые посещали исследовательский центр каждые две недели для оценки своей кожи. После стирки их лица, испытуемые отдыхали в течение 20 минут перед оценкой кожи в лаборатории, поддерживаемой на 22 ± 2 ◦С и 50 ± 5% относительной влажности.
Индекс меланина и индекс эритемы измеряли с помощью мекзаметра® MX18 (Кураж + Khazaka electronic GmbH, Кельн, Германия). Мекзаметрический зонд излучает три определенные длины волн света (зеленый, λ = 568 нм; красный, λ = 660 нм; и инфракрасный, λ = 880 нм), а приемник измеряет свет, отраженный кожей. Измерения повторялись три раза и усреднялись.
Цвет кожи выражается с помощью цветового пространства Международной комиссии по эклеражу по степени светлоты (L*), степени от зеленого до красного (a*) и от синего до желтого (b*) [32]. Кожа цветовые параметры L*, a* и b* измеряли с помощью спектрофотометра® CM-2500d (Minolta, Токио, Япония) [32]. Индивидуальный угол типологии (ITA◦ ), представляющий цвет кожи, был рассчитан в то время как используя уравнение: ITA◦ = (тангенс дуги [(L*−50)/b*])(180/3.14159) [33].
Визуальную оценку проводили два тестировщика. Они самостоятельно оценивали степень пигментации кожи по шкале от 0 до 9 (0, светлый; 9, темный; приращения, 0,5). Если внутриклассный значение коэффициента корреляции между двумя тестировщиками было больше 0,8, данные были приняты и использовались усредненные значения. Фотографии кожи были сделаны во время использования VISIA® (Canfield Scientific, Inc., Фэрфилд, Нью-Джерси, США). Для оценки безопасности кожи тестировщики исследовали кожу на предмет раздражение и испытуемые проводили самооценку раздражения кожи в каждый момент времени оценки.
2.4.7. Оценка побочных реакций кожи
В течение восьминедельного испытательного периода испытуемые посещали институт каждые две недели. На каждом Во время визита тестировщики оценивали субъективные симптомы, задаваясь вопросом, испытывали ли испытуемые побочные кожные реакции, такие как зуд, покалывание, щекотание, жжение, жжение, скованность и подтяжка за последние две недели. Испытуемым было предложено немедленно сообщить, если побочные кожные реакции происходили между интервалами посещения. Тестировщики также изучили любые побочные кожные реакции, такие как: эритема, отек, размер и папулы для оценки объективных симптомов.
2.5. Статистический анализ
Данные анализировались с помощью программного комплекса SPSS (IBM, Chicago, IL, США). Данные выражается как среднее ± стандартного отклонения (SD). Было проверено нормальное распределение данных используя тест Шапиро-Уилкса, и нормальность была принята, если Куртоз и Косость находятся в пределах ± Предоднородность тестовой и контрольной групп перед испытанием проверялась при использовании парной t-тест. Зависящие от времени изменения по сравнению с базовым значением и различия между тестовые и контрольные группы в каждых точках времени анализировались с использованием повторных мер ANOVA для параметрические значения и пост-специальный тест wilcoxon sign-rank для непараметрических значений. Скорость изменения (%) от базового значения было рассчитано следующим образом; скорость изменения = [значение после лечения − исходный уровень значение до лечения)/исходное значение до начала лечения] × 100 (%).
3. Результаты
3.1. Тестовые продукты
В этом исследовании тестовый продукт, содержащий 10% глицинамида гидрохлорида, и контрольный продукт того же состава без глицинамида гидрохлорида использовали. Помимо основного ингредиент, продукты содержали глицерин, 1,2-гександиол и воду. В таблице 1 показан состав тестового продукта и контрольного продукта.
Типичные ВЭЖХ-хроматограммы тестируемых и контрольных продуктов показаны на рисунке 1. Тестовый продукт, но контрольный продукт не содержал глицинамида гидрохлорида. Пик глицинамида гидрохлорида в хроматограмма ВЭЖХ обозначается стрелкой. Кроме того, на рисунке 1 показана химическая структура.
При ВЭЖХ 1-октансульфонат натрия был включен в подвижную фазу в качестве ионно-спаривающего агента в для усиления удержания протонированной формы глицинамида, которая в противном случае была элюирована очень быстро из перевернутой фазы октадециловой кварцевой колонны. Наличие УФ-поглощающего амида связь в глицинамиде гидрохлориде позволила обнаружить его при 210 нм.
3.2. Первичный тест на раздражение кожи
в этом тесте на начальных этапах теста участвовала 31 женщина-испытуемая, подпадающая под критерии включения и исключения; однако один испытуемый выбыл (DSA-19046-10; добровольный уход), поэтому в общей сложности 30 испытуемых завершили весь тест. Средний возраст испытуемых составлял 40,43 ± 7,13 лет; самому старшему участнику было 50 лет, а самому младшему – 21 год.
Тестирование окклюзионного пластыря проводилось с целью оценки безопасности продуктов для кожи. Как показано в таблице 2, субъекты, которых лечили тестом, контрольным продуктом и ссылкой, показали отсутствие побочных кожных реакций в два разных времени наблюдения. Таким образом, оценка реакции во всех случаях была нулевой, что указывает на то, что первичные потенциалы раздражения кожи этих продуктов очень низки и их можно классифицировать как «не раздражающие / слегка раздражающие».
3.3. Тест эффективности депигментации кожи
Тест начался с 23 испытуемых женского пола, хотя двое впоследствии были исключены (#16, добровольно). вывод средств; #18, несоблюдение протокола), поэтому итоговое количество участников составило 21. Информация по этим темам был собран в ходе опроса на основе вопросников. Средний возраст испытуемых составил 48,43 ± 4,14 лет; самому старшему участнику было 55 лет; а самому младшему был 41 год. В таблице 3 приведены особенности кожи обследованных испытуемых.
Двойной слепой тест был проведен для оценки эффективности депигментации тестовый продукт. Ни тестировщик, ни испытуемый не смогли отличить тестовый продукт. и контрольный продукт, и клиническое исследование проводилось по назначенному методу. Испытуемые наносили испытуемый и контрольный продукт на левую или правую сторону лица дважды в день. день в течение восьми недель и посещал институт каждые две недели для оценки кожи.
Для инструментальной оценки параметров цвета кожи использовались два типа приборов. Сначала индекс меланина и индекс эритемы измеряли с помощью гекзаметра. Как показано в Таблица 4 и рисунок 2а, значительное снижение индекса меланина наблюдалось на двух, четырех, шести и восьми недель как в тестовой, так и в контрольной группах по сравнению с исходными значениями до начала теста. Когда тестовый продукт применялся в течение двух, четырех, шести и восьми недель, наблюдалось значительное сокращение. в индексе меланина по сравнению с исходным значением. Темпы снижения индекса меланина составили 1,48% через две недели 2,87% через четыре недели, 3,92% через шесть недель и 5,88% через восемь недель. Значительный Различия были обнаружены между тестовой и контрольной группами через шесть и восемь недель после начала теста. С другой стороны, не было никаких изменений в индексе эритемы ни в тестовой группе, ни в контрольной. группа по сравнению с базовыми значениями, измеренными до начала испытания (таблица 5 и рисунок 2b).
Мы также использовали спектрофотометр для измерения значений L*, a* и b*, которые представляли кожу. светлота, покраснение и желтизна соответственно. Как показано в таблице 6 и на рисунке 2с, значительное увеличение в коже светлота (значение L*) наблюдалась через две, четыре, шесть и восемь недель как в тесте, так и в контроле групп по сравнению с базовыми значениями до начала теста. По сравнению с базовыми значениями, тестируемый продукт увеличил значение L* на 0,88% через две недели, на 0,85% через четыре недели, на 1,16% после шесть недель, и 1,40% через восемь недель. Между тестовым продуктом были обнаружены существенные различия и контролировать продукт через шесть и восемь недель после начала испытания. С другой стороны, хотя наблюдались некоторые изменения значений* и b* как в тестовой, так и в контрольной группе до начала испытания эти изменения не были последовательными (таблицы 7 и 8, рисунок 2d,e). В* значение временно снижалось на второй неделе в контрольной группе и на второй и восьмой недель в тестовой группе. Значение* в тестовой группе было ниже, чем в контрольной группе в восьмая неделя. Значение b* снизилось на восьмой неделе только в контрольной группе, и никакой разницы в значении b* между контрольной и тестовой группами не наблюдалось.
The ITA◦ для выражения цвета кожи использовались значения L* и b*. Чем выше ITA◦ , светлее цвет кожи. Как показано в таблице 9 и на рисунке 2f, значительные изменения цвета кожи были наблюдается через две недели, четыре недели, шесть недель и восемь недель как в тестовой группе, так и в контрольной группе. по сравнению с базовыми значениями до начала теста. По сравнению с базовым уровнем значения, тестовый продукт увеличил ITA◦ на 3,28% через две недели, на 4,43% через четыре недели, 6,48% через шесть недель и 8,07% через восемь недель. Существенная разница в ITA◦ также была обнаружена между тестируемый продукт и контрольные продукты через восемь недель после начала испытания.
Как показано в таблице 10 и на рисунке 3а, участок кожи, на который был нанесен контрольный продукт, не был существенное изменение с точки зрения степенипигментацияв течение восьми недель, но степень пигментации на участке кожи, на который был нанесен тестовый продукт, значительно уменьшилось через шесть недель и восемь недель. Когда тестируемый продукт применялся в течение шести и восьми недель, степень пигментации снизились на 1,42% и 3,45% соответственно относительно базового значения до начала тест. На восьмой неделе после начала теста также наблюдалась существенная разница в степени. изпигментациямежду тестируемым продуктом и контрольным продуктом. На рисунке 3b показаны изображения двух репрезентативные человеческие субъекты.
Не было никаких побочных реакций на тест и контрольные продукты, о которых сообщали испытуемые или обнаружен тестировщиками в течение восьми недель.
4. Обсуждение
Это исследование является первым, в котором сообщается о безопасности и эффективности депигментации глицинамида гидрохлорида наносится на кожу лица человека. В первичном тесте на раздражение кожи тестовый продукт, содержащий 10% глицинамида гидрохлорид не вызывал каких-либо побочных реакций у 30 человек. В двойной слепой эффективности тест, тестируемый продукт и контрольный продукт использовались на левой и правой сторонах, соответственно, лица по 21 испытуемому, случайным образом распределенным по разным группам. В течение восьминедельного испытательного периода кожа участки, на которых применялся тестируемый продукт, стали легче, чем участки, на которых был применен контрольный продукт было применено. Как визуальная оценка степенипигментация, и инструментальная оценка индекс меланина, стянутость кожи и цвет кожи поддерживали эффективность депигментации тестового продукта содержащие глицинамида гидрохлорид.
Эффективность продукта для депигментации кожи человека может быть оценена при использовании искусственного загара и модели естественной гиперпигментации [34–36]. В настоящем исследовании использование натуральногопигментациямодель, изменения параметров цвета кожи в тестовой и контрольной группах в течение восьми недель теста были отслеживается с двухнедельными интервалами. Контрольный продукт, не содержащий глицинамида гидрохлорида, также произвели значительные изменения в индексе меланина, значении L* и ITA o от двух недель после старта теста. Точная причина этого в настоящее время неясна, и несколько факторов, возможно, способствовали изменения. Ингредиенты, содержащиеся в контрольном продукте, такие как глицерин и 1,2-гександиол, могли изменить состояние поверхности кожи, улучшая чистоту, блеск и яркость. Всё же Дополнительные изменения в параметрах, упомянутых выше, через две недели не были существенными в контрольная группа. Кроме того, степеньпигментация(оценен визуально) не был значимым уменьшается контрольным продуктом по сравнению с началом испытания. Поэтому считается что контрольный продукт имеет очень слабыйосветление кожиэффект, если таковой имеется.
В случае исследуемого продукта, помимо значительного изменения индекса меланина, значение L*, и ITAo через две недели после начала теста, после чего изменения, как правило, постепенно увеличивались. Кроме того, степеньпигментациядостигли значительно более низкого уровня, чем базовое значение. Это говорит о том, что использование тестового продукта может улучшить цвет кожи по сравнению с использованием без продукта.
С шестой недели начала теста наблюдалась существенная разница в меланине. индекс и значение L* между тестовой группой и контрольной группой, а через восемь недель было также разница в ITAo и степеньпигментация. Эти результаты подтверждают вывод о том, что Разница в эффективности между тестируемыми и контрольными продуктами была обусловлена наличием или отсутствием глицинамида гидрохлорид; таким образом, эффективность депигментации кожи тестируемого продукта была обусловлена его основной компонент, глицинамида гидрохлорид.
В этом исследовании раствор гидрохлорида глицинамида, замаченный в листах нетканого материала, был нанесено на лицо, и получены положительные результаты относительно эффективности его депигментации кожи. Этот способ применения оказался эффективным, но стоит разобраться, меняется ли рецептура и способ нанесения повысят эффективность продукта. В дополнение к местное нанесение на кожу, пероральное введение и инъекционные методы должны быть исследованы для того, чтобы для определения их клинической эффективности в будущих исследованиях.
Статистический анализ различий между тестовой и контрольной группами проводился с использованием Повторные измерения ANOVA с парными сравнениями. Кроме того, межгрупповые различия индекс меланина, значение L*, ITAo, ипигментациястепени были статистически значимыми после 8-недельных Процедуры. В текущем исследовании скорость снижения индекса меланина тестируемым продуктом, содержащим 10% глицинамида гидрохлорида составили 5,88% (базовый уровень 184,03 ± 22,70; на восьмой неделе 173,30 ± 20,79). Watanabe et al. сообщилиотбеливание кожиэффекты местного окисленного глутатиона в двойном слепом и плацебо-контролируемое клиническое исследование с участием тридцати здоровых женщин [36]. Местное лечение тестового продукта содержание 2% окисленного глутатиона в течение 10 недель снижало индекс меланина на 10,7% (исходный уровень, 272,77 ± 26.17; 10-я неделя, 243.47 ± 26.31) [36]. Даже несмотря на тестовые условия, такие как базовый меланин индекс, тестовая доза и продолжительность теста, отличаются друг от друга, косвенное сравнение этих двух Исследования показывают, что глицинамида гидрохлорид имеет потенциал для использования в качестве гипопигментированного агента. Необходимы дальнейшие исследования для оптимизации его дозы, состава и метода применения для достижения лучшего производительность при депигментации кожи.
Стационарный цвет кожи отражает относительное соотношение количества меланина, поставляемого из меланоциты к количеству меланина теряются из-за шелушения кератина кожи. Следовательно ингибирование синтеза меланина или усиление потери меланина является двумя возможными стратегиями для гиперпигментационная терапия. Глицинамида гидрохлорид является полезным веществом для первой стратегии, потому что он может ингибировать синтез меланина путем снижения уровня TYR и других ферментов, которые участвует в синтезе меланина в меланоцитах [27]. Если да, то сочетание глицинамида гидрохлорида с средства для пилинга кожи, такие как гликолевая кислота [37,38], могут привести к дальнейшему увеличению депигментации эффективность за счет синергизма между веществами с различными механизмами действия.
Многие существующие депигментационные агенты снижают синтез меланина путем ингибирования внутриклеточных процесс трансдукции сигнала, ответственный за экспрессию гена TYR или ингибирующий активность TYR непосредственно [39,40]. Однако глицинамида гидрохлорид может предотвратить связывание гормона с ним. рецепторы блокируют инициацию внутриклеточных процессов трансдукции сигнала, тем самым ингибируя выражение TYR [27]. Соответственно, глицинамида гидрохлорид может действовать через механизм, отличный от многие существующие депигментирующие агенты и синергетические эффекты ожидаются, если они используются в комбинации с другими депигментирующими средствами.
Пептидные гормоны, полученные из проопиомеланокортина, такие как α-MSH, β-MSH и адренокортикотрофные гормон (АКТГ), регулирующий кожупигментация, воспаление и фиброз [8,30,41]. О переплете эти агонисты к MC1R и последовательные активации аденилатциклазы (AC) и протеинкиназы A (PKA) фосфорилирует фактор транскрипции CREB, который, в свою очередь, индуцирует экспрессию MITF [42]. Экспрессия MITF также индуцируется другими сигнальными путями, которые включают Wnt / Frizzled / гликоген синтазная киназа 3β/β-катенин каскада и фактор стволовых клеток/c-Kit/митоген-активированные протеинкиназы каскад [43,44]. MITF направляет не только экспрессию генов меланогенных ферментов, но и биогенез меланосом [2,45].
Низкомолекулярные антимеланогенные пептиды, идентифицированные в предыдущем исследовании, включают FRWG-NH2, RWG-NH2, WG-NH2 и G-NH2 (глицинамид), которые имеют общие последовательности с α-MSH (ацетил-SYSMEHFRWGKPV-NH2) [27]. Было выдвинуто, что эти низкомолекулярные антимеланогенные пептиды могут мешать рецепторному связыванию α-MSH конкурентным образом, тем самым блокирование инициации процессов внутриклеточной трансдукции сигнала (рисунок 4). Если низкомолекулярный антимеланогенные пептиды действуют как антагонисты MC1R, они могут ингибировать активацию MC1R другие агонисты, такие как β-MSH и АКТГ, а также влияют на другие физиологические эветы, связанные с воспаление и фиброз, а такжепигментация[30].
Хотя для механизма действия необходимы более прямые доказательства, настоящее исследование демонстрирует, что гидрохлоридная солевая форма глицинамида, наименьшая существенная часть антимеланогенные пептиды, проявляющие эффективность депигментации кожи, не вызывая раздражения кожи в Людей. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы изучить эффективность депигментации другого антимеланогенные тетрапептиды, трипептиды и дипептид, упомянутые выше.
В заключение, настоящее исследование предполагает, что глицинамид гидрохлорид обладает большим потенциалом быть используется для контроля гиперпигментации кожи.
Ссылки
1. Костин Г.Е.; Слух, В.Д. Пигментация кожи человека: меланоциты модулируют цвет кожи в ответ на стресс. FASEB J. 2007, 21, 976–994. [КроссРеф] [ПабМед]
2. Скьяффино М.В. Сигнальные пути в меланосомном биогенезе и патологии. Int. J. Biochem. Клеточный биол. 2010, 42, 1094–1104. [КроссРеф] [ПабМед]
3. Кардинали, Г.; Чеккарелли, С.; Ковач, Д.; Аспит, Н.; Лотти, Л.В.; Торриси, М.Р.; Пикардо, М. Фактор роста кератиноцитов способствует переносу меланосом к кератиноцитам. Д. Инвестиг. Кожа. 2005, 125, 1190–1199. [КроссРеф] [ПабМед]
4. Эпштейн, Дж.Х. Фотоканцерогенез, рак кожи и старение. И. Ам. Акад. Дерм. 1983, 9, 487–502. [КроссРеф]
5. Сломинский, А.; Ким, Т.К.; Брозина А.А.; Янджетович, З.; Брукс, Д.Л.; Шваб, Л.П.; Скобовят, К.; Йозвицкий, В.; Сигроувз, Т.Н. Роль меланогенеза в регуляции поведения меланомы: Меланогенез приводит к стимуляция экспрессии HIF-1альфа и HIF-зависимых сопутствующих путей. Арх. Биохимия. Биофиза. 2014, 563, 79–93. [КроссРеф]
6. Сломинский Р.М.; Змиевский, М.А.; Сломинский, А.Т. Роль пигмента меланина в меланоме. Exp. Derm. 2015, 24, 258–259. [КроссРеф]
7. Фистарол С.К.; Лин, П.Х. Нарушения пигментации. Ю. Дч. Дерматол. Гес. 2010, 8, 187–201. [КроссРеф]
8. Сломинский, А.; Тобин, Д.Д.; Шибахара, С.; Wortsman, J. Пигментация меланина в коже млекопитающих и ее гормональная регуляция. Physiol. Rev. 2004, 84, 1155–1228. [КроссРеф]
9. Роза, П.Т. Пигментные нарушения. Мед. Клин. Н. Ам. 2009, 93, 1225–1239. [КроссРеф]
10. Каллендер, В.Д.; Святой Сурин-Лорд, С.; Дэвис, Э.К.; Маклин, М. Поствоспалительная гиперпигментация: этиологическая
и терапевтические соображения. Ам. Дж. Кожа. 2011, 12, 87–99. [КроссРеф]
11. Ганджу, П.; Нагпал, С.; Мохаммед, М.Х.; Нишал Кумар, П.; Пандей, Р.; Натараджан, В.Т.; , С.С.; Gokhale, R.S. Микробное профилирование сообщества показывает дисбактериоз в пораженной коже субъектов витилиго. Sci. Rep. 2016, 6, 18761. [КроссРеф] [ПабМед]
12. Спритц, Р.А.; Андерсен, Г.Х. Генетика витилиго. Кожа. Клин. 2017, 35, 245–255. [КроссРеф] [ПабМед]
13. Павлич, В.; Бркич, З.; Марин, С.; Цикмил, С.; Гойков-Вукелич, М.; Аоки, А. Депигментация меланина депигментацией депина Er: YAG laser: Обзор литературы. Ж. Космет. Лазер Тер. 2018, 20, 85–90. [КроссРеф] [ПабМед]
14. Саксена, С.; Андерсен, Р.М.; Maibach, H.I. Подводные камни в клинических испытаниях показывают необходимость хорошо переносимого, более эффективного депигментирующие агенты. Д. Дерматол. Лечить. 2015, 26, 440–450. [КроссРеф] [ПабМед]
15. Леви, Л.Л.; Emer, J.J. Эмоциональная польза косметического камуфляжа при лечении заболеваний кожи лица: Личный опыт и отзыв. Клин. Космет. Инвестиг. Кожа. 2012, 5, 173–182.
16. Чу, К.Х.; Чоу, К.Я.; Ченг, Ю.П. Немедленная пигментация после лазерного лечения. ДЖАМА Дерм. 2015, 151, 1021–1022. [КроссРеф]
17. Борелли, К.; Урсин, Ф.; Штегер, Ф. Рост химического пилинга в европейской дерматологии 19-го века: появление агентов, составов и методов лечения. J. Eur. Acad. Derm. Венереол. 2020. [КроссРеф]
18. Джоу, Т.; Ханташ, Б.М. Гидрохиноно-индуцированная депигментация: Отчет о случае и обзор литературы. Дерматит 2014, 25, e1–e5. [КроссРеф]
19. Десмедт, Б.; Курсель, П.; Де Бир, Дж.О.; Рожье, В.; Гросбер, М.; Деконинк, Э.; Де Папе, К. Обзор отбеливающие средства для кожи с пониманием нелегального косметического рынка в Европе. J. Eur. Acad. Derm. Венереол. 2016, 30, 943–950. [КроссРеф]
20. Ким М.; Парк, Дж.; Песня, К.; Ким, Х.Г.; Кох, Дж.С.; Boo, Y.C. Скрининг растительных экстрактов на тирозиназу человека ингибирующие эффекты. Инт. Дж. Космет. 2012, 34, 202–208. [КроссРеф]
21. Парк, Дж.; Boo, Y.C. Выделение ресвератрола из vinifera caulis Вити и его мощное ингибирование человека тирозиназа. Эвид. Основанное дополнение. Альтерн. 2013, 2013, 645257. [КроссРеф] [ПабМед]
22. Квак, Дж.Я.; Сок, Дж.К.; Су, Х.Д.; Чхве, Ю.Х.; Хонг, С.С.; Ким, Д.С.; Бу, Ю.К. Антимеланогенные эффекты лютеолина 7-сульфат, выделенный из филлоспадикса iwatensis makino. Бр. Дж. 2016, 175, 501–511. [КроссРеф] [ПабМед]
23. Ли, С.В.; Ким, Дж.Х.; Сонг, Х.; Сок, Дж.К.; Хонг, С.С.; Boo, Y.C. Лютеолин 7-сульфат ослабляет синтез меланина через ингибирование CREB- и MITF-опосредованной экспрессии тирозиназы. Антиоксиданты 2019, 8, 87. [КроссРеф] [ПабМед]
24. Малерих, С.; Берсон, Д. Космецевтика следующего поколения: новейшие пептиды, факторы роста, цитокины, и стволовые клетки. Кожа. Клин. 2014, 32, 13–21. [КроссРеф]
25. Чжан, Л.; Falla, T.J. Космецевтики и пептиды. Клин. Кожа. 2009, 27, 485–494. [КроссРеф]
26. Сок, Дж.К.; Ли, С.В.; Чхве, Дж.; Ким, Ю.М.; Boo, Y.C. Идентификация новых антимеланогенных гексапептидов с помощью позиционное сканирование комбинаторной библиотеки синтетических пептидов. Exp. Derm. 2017, 26, 742–744. [КроссРеф]
27. Ким, Дж.Х.; Сок, Дж.К.; Ким, Ю.М.; Boo, Y.C. Идентификация малых пептидов и глицинамида, которые ингибируют синтез меланина с использованием позиционной сканирующей комбинаторной библиотеки синтетических пептидов. Бр. Дж. 2019, 181, 128–137. [КроссРеф]
28. Пинилья, К.; Аппель, Дж.Р.; Блан, П.; Хоутен, Р.А. Быстрая идентификация высокоаффинных пептидных лигандов с помощью позиционное сканирование синтетических пептидных комбинаторных библиотек. Биотехнологии 1992, 13, 901–905.
29. Рано, Т.А.; Тимки, Т.; Петерсон, Э.П.; Ротонда, Дж.; Николсон, Д.В.; Беккер, Дж.В.; Чепмен, К.Т.; Торнберри, Н.А. Комбинаторный подход к определению специфичности протеазы: применение к интерлейкин-1бета-преобразованию фермент (ДВС). Хим. Биол. 1997, 4, 149–155. [КроссРеф]
30. Сломинский, А.Т.; Сломинский, Р.М.; Zmijewski, M.A. Нацеливание на рецептор меланокортина типа 1 с помощью небольших пептидов. Бр. Дж. 2019, 181, 17–18. [КроссРеф]
31. Фрош, П.Д.; Клигман, А.М. Тест мыльной камеры. Новый метод оценки раздражительности мыла. Дж. Академик Дерм. 1979, 1, 35–41. [КроссРеф]
32. Pierard, G.E. Руководство EEMCO по оценке цвета кожи. J. Eur. Acad. Derm. Венереол. 1998, 10, 1–11. [КроссРеф]
33. Уилкс, М.; Райт, К.Я.; дю Плесси, Ж.Л.; Ридер, А. Фитцпатрик тип кожи, индивидуальный типологический угол, и индекс меланина в африканском населении: шаги к универсально применимой фоточувствительности кожи Оценки. ДЖАМА Дерм. 2015, 151, 902–903. [КроссРеф] [ПабМед]
34. Boo, Y.C. p-кумаровая кислота как активный ингредиент в косметике: обзор, посвященный ее антимеланогенным свойствам Эффекты. Антиоксиданты 2019, 8, 275. [КроссРеф] [ПабМед]
35. Boo, Y.C. Эффективность осветления кожи человека ресвератролом и его аналогами: от исследований in vitro к косметическим средствам Приложений. Антиоксиданты 2019, 8, 332. [КроссРеф] [ПабМед]
36. Ватанабэ, Ф.; Хашизуме, Э.; Чан, Г.П.; Камимура, А. Эффекты отбеливания и улучшения состояния кожи местного окисленного глутатиона: двойное слепое и плацебо-контролируемое клиническое исследование у здоровых женщин. Клин. Космет. Инвестиг. Кожа. 2014, 7, 267–274. [КроссРеф]
37. де Вилье, М.М.; Нарсай, К.; van der Watt, J.G. Физико-химическая стабильность составных кремов, содержащих а-гидроксикислоты. Int. J. Pharm. Compd. 2000, 4, 72–75.
38. Шарад, Д. Терапия пилинга гликолевой кислотой — текущий обзор. Клин. Космет. Инвестиг. Кожа. 2013, 6, 281–288. [КроссРеф]
39. Пиллайяр, Т.; Маникам, М.; Намасиваям, В. Отбеливающие средства для кожи: Перспективы медицинской химии ингибиторы тирозиназы. Я. Энзим. Инхиб. 2017, 32, 403–425. [КроссРеф]
40. Золгадри, С.; Бахрами, А.; Хасан Хан, М.Т.; Муньос-Муньос, Ж.; Гарсия-Молина, Ф.; Гарсия-Кановас, Ф.; Сабури, А.А. Всесторонний обзор ингибиторов тирозиназы. Я. Энзим. Инхиб. 2019, 34, 279–309. [КроссРеф]
41. Штайнхофф, М.; Стандер, С.; Зелигер, С.; Ансель, Дж.К.; Шмельц, М.; Люгер, Т. Современные аспекты кожного заболевания нейрогенное воспаление. Арх. Дерм. 2003, 139, 1479–1488. [КроссРеф] [ПабМед]
42. Буска, Р.; Баллотти, Р. Циклический АМП является ключевым мессенджером в регуляции пигментации кожи. Пигментные клетки Res. 2000, 13, 60–69. [КроссРеф] [ПабМед]
43. Тачибана, М. МИТФ: Поток, протекающий для пигментных клеток. Пигментные клетки Res. 2000, 13, 230–240. [КроссРеф] [ПабМед] 44. Эбанкс, Дж.П.; Уикетт, Р.Р.; Буасси, Р.Е. Механизмы, регулирующие пигментацию кожи: взлет и падение окраска цвета лица. Int. J. Mol. Sci. 2009, 10, 4066–4087. [КроссРеф]
45. Саймон, Дж.Д.; Пелеш, Д.; Вакамацу, К.; Ито, С. Современные проблемы в понимании меланогенеза: мост химия, биологический контроль, морфология и функция. Пигментно-клеточная меланома Res. 2009, 22, 563–579. [КроссРеф]
