Этаноловый экстракт Cucurbita Pepo L. Seeds модифицирует нейроэндокринные нарушения у крыс с хроническим стрессом и экспрессию надпочечников воспалительных маркеров и HSP70

Контакт: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Электронная почта:audrey.hu@wecistanche.com

Хайла М. Альмохимид1, Шерин Хамед2, Ханан С. Селем3,4, Ашвак Х. Батави 5, Зухаир М. Мохаммедсале6, Маха Джамиль Балгун7, Соад С. Али 8,9, Соад Аль-Джауни 9,10 и Насра Аюоб11*

Фон: Тыквы(Кукурбита пепо Л.) были описаны как имеющиеантиоксидантпротивовоспалительное, противоусталостное и антидепрессивное действие. Надпочечник является важный стресс-чувствительный орган, который поддерживает гомеостаз во время стресса.

Цели:Данное исследование было направлено на оценку эффективности введения Кукурбиты Экстракт pepo L. (CP) в облегчении поведенческих, биохимических и структурных изменений в организме надпочечники, вызванные воздействием хронического непредсказуемого легкого стресса (CUMS) и изучить механизм, лежащий в основе этого воздействия.

Материалы и методы:Сорок самцов крыс-альбиносов были разделены на 4 группы (n = 10): контрольные, CUMS, флуоксетиновые и CP-обработанные группы. Поведенческие изменения, уровень кортикостерона, провоспалительные цитокины TNF-α и IL-6, а также окислитель/антиоксидантПрофиль оценивали в сыворотке крови в конце эксперимента. Надпочечный железы перерабатывали для гистопатологической и иммуногистохимической оценки. Экспрессия генов каспазы-3 и Ki67 и белка теплового шока 70 (HSP70) были оценивается в надпочечниках с помощью ОТ-ПЦР.

Результаты:Экстракт CP значительно снижал уровень кортикостерона (p< 0.001),="" immobility="" time="" (p="">< 0.001),="" and="" inflammatory="" and="" oxidative="" changes="" associated="" with="" cums-induced="" depression="" compared="" to="" the="" untreated="" group.="" the="" cp="" extract="" alleviated="" cums-induced="" adrenal="" histopathological="" changes="" and="" significantly="" reduced="">апоптоз(п< 0.001)="" and="" significantly="" upregulated="">антиоксидантуровни в сыворотке крови.

Заключение:Cucurbita pepo L. эффективно улучшала хронический стресс, вызванный поведенческие, биохимические и структурные изменения надпочечников в основном черезантиоксиданти противовоспалительное действие.

Ключевые слова: тыква, стресс, депрессия, каспаза-3, ki67, Hsp70,апоптоз

Цистанч, китайская трава, обладает антиоксидантной функцией.

ЗНАКОМСТВО

Более 264 миллионов человек всех возрастов страдают от депрессии во всем мире мира (ВОЗ, 2020). Показатели депрессивных человек, как правило, беден в школе, на работе и в семье. Депрессия может привести к самоубийству; так, он считается вторым основная причина смерти среди лиц в возрасте от 15 до 29 лет (ВОЗ, 2020 г.). Млекопитающие могут пережить стрессовые события путем активации соответствующих физиологические реакции на эти события. Надпочечник является частью гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной (HPA) оси и симпатия – адреномедулларная ось, поддерживающая гомеостаз во время стресса (Ulrich-Lai et al., 2006). Сообщалось, что воздействие теплового напряжения приводит к быстрому выражению HSP70 в коре надпочечников (Huang et al., 2001). Эти белки разделяют внутриклеточный трафик, презентацию антигена,апоптоз, и многие другие действия (Khar et al., 2001). Он имеет было описано, что экзогенные гормоны или вмешательство в эндогенные гормоны, в критические периоды развитие, может оказывать постоянное влияние на физиологическое и поведенческие пути, регулируемые гипоталамикой нейроэндокринные схемы (Gore and Patisaul, 2010). Нейроэндокринное нарушение также было описано для расширения концепция эндокринных нарушений должна включать в себя всю широту интегративная физиология; поэтому это больше, чем гормональное расстройство (Уэй и Трюдо, 2011).

Изменения в нейроэндокринной регуляции, метаболизме и диете/ микробиота считается триггером воспаления и предрасположенность к развитию депрессии (Huang et al., 2019). Оно было постулировано, что депрессия — одна из нервно-психических расстройств расстройства — и воспаление имеют двустороннюю связь. В то время как депрессия способствует воспалительным реакциям, воспаление способствует нервно-психическим расстройствам, в том числе депрессия (Bauer and Teixeira, 2019).

Флуоксетин, классический антидепрессант, входит в число препаратов доступны на рынке для лечения депрессии. Это сейчас считается новым нейроэндокринным разрушителем. Этот эффект флуоксетина является побочным эффектом, а не основной терапевтической мишенью у млекопитающих (León-Olea et al., 2014). Поэтому возникает необходимость для более безопасных антидепрессантов без побочных эффектов нейроэндокринный статус.

Тыквы(Кукурбита пепо Л.) являются экономически важными виды, культивируемые во всем мире. У них есть питание и здоровье польза, так как они богаты фенолами, флавоноидами, аминокислотами; углеводы и витамины (Wang et al., 2002). Несколько исследований Исследования показали, что тыквы обладают обширной биологической активностью, такие как как противодиабетическое, противоопухолевое,антиоксидант, противовоспалительные, антиутомляющие и антидепрессивные эффекты (Wang et al., 2012; Чжан и др., 2012; Навирска-Ольшаньска и др., 2013; Kim Nr et al., 2016). Традиционная медицина в основном аюрведические системы и китайские Медицина использовала различные части тыквы, включая мякоть плодов и семена (Perez Gutierrez, 2016). Тем антидепрессивная эффективность Sweetme Sweet Pumpkin (SSP) и Cucurbita moschata Duch был предварительно протестирован in vivo исследование с использованием теста на принудительное плавание (FST), индуцированного животной моделью депрессии и сравнивали с флуоксетином (Kim Nr et al., 2016). В одном из относительно недавних обзоров подведены итоги. что антидепрессанты, такие как тыквенные семечки, были описано, что антидепрессанты в пище оцениваются в 47%, обеспечение его антидепрессивного эффекта (Лашанс и Рэмси, 2018). Недавно Дотто и Чача одобрили проведение большего количества исследования на животных и клинических испытаниях с целью подтвердить мелиоративное действие тыквенных семечек на депрессия (Дотто и Чача, 2020).

Эти отчеты были обнадеживающими для проверки эффективностиТыквыв смягчении воздействия хронического стресса на Надпочечников. Поэтому данное исследование было проведено для оценки эффект от перорального приема Cucurbita pepo L. (CP) экстракт по снятию хронического непредсказуемого легкого стресса (CUMS) – поведенческие, биохимические и надпочечниковые структурировать и изучить механизм, лежащий в основе этого воздействия.

экстракт пустынной цистанчи: Антиоксидантный

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Экстракция и дозировка тыквы

Cucurbita pepo L. (образец ваучера: AQJ_95) был приобретено на местном рынке в Джидде, Саудовская Аравия. Они были идентифицированы в Университете короля Абдулазиза гербарий с использованием образцов гербария и флоры КСА (Чаудхари, 2001). Образцы ваучеров были депонированы в гербарии. КП был идентифицирован авторами и был проверено ботаником с факультета естественных наук, Кинг Университет Абдулазиз.

Экстракция ДЦП проводилась в соответствии с предыдущими исследованиями (Wang et al., 2012). Сырые плоды с кожурой нарезали с помощью слайсер и сушка с помощью лиофилизатора (FD5508; ilShinBioBase Co., Ltd., Корея), а затем измельчается с помощью электрического шлифования машина. Порошок пропускали через 40-сетчатое сито, чтобы получить мелкий порошок и хранится в герметичном контейнере. Высушенный порошок (50 г) смешивали с 450 мл 80% этанола и оставляли на 1 день при 774 C в шейкере (JSSI-100T; JS Research Inc., Компактная встряхивание Инкубатор., Корея), а затем был отфильтрован хлопком и фильтром бумага на второй день. Этот процесс извлечения был повторен дважды при 37°C, чтобы получить экстракт этанола.

Идентификация составляющих КП

Химический состав ПЭ анализировали с помощью следового газа масс-спектрометр Хроматография GC-TSQ evo 8000 (Термо Scientific, Austin, TX, UNITED) с прямым капилляром колонна ТГ–5МС (30 м × 0,25 мм × толщиной пленки 0,25 мкм). Температура колонной печи была первоначально установлена на 50°C, а затем увеличен на 5° C/мин до 250° C и удерживается в течение 2 мин, а затем увеличен до конечной температуры 300°C на 25°C/мин и удерживается в течение 2 мин. Температура инжектора и передаточной линии MS составила держится на 270 и 260° С, соответственно; гелий использовался в качестве носителя газ при постоянном расходе 1 мл/мин. Задержка растворителя составила 4 мин, и разбавленные образцы 3 мкл вводили автоматически использование автопробоотборника AS1300 в сочетании с GC в сплит-бесщелке режим в инжекторе PTV. Масс-спектры EI были собраны при 70 эВ напряжения ионизации в диапазоне м/з 50–650 при полном сканировании режим. Температура источника ионов была установлена на уровне 250°C. Тем компоненты были идентифицированы путем сравнения их массы спектры с масс-спектрами WILEY 09 и NIST 14 базы данных, которые используются для идентификации и изучения химического вещества состав неизвестных компонентов в любом экстракте (Wiley, 2006; Микая и др., 2014). Анализ был проведен в качественный тип с использованием Thermo Scientific™ Xcalibur™ 2.2 программное обеспечение, и все значения были представлены в относительном проценте (Абд эль-Карим и др., 2016).

Экспериментальное проектирование

Это исследование было одобрено Этикой биомедицинских исследований Комитет при медицинском факультете, король Абдулазиз Университет, Джидда, КСА (справочный номер 45-20). В этом исследование, сорок самцов крыс-альбиносов весом 150–200 г и возрастом 2–3 месяца были получены от короля Фахда Медикал Научно-исследовательский центр (KFMRC). Перед началом эксперимента, крыс оставили акклиматизироваться к лабораторным условиям для 1 неделя. Десять крыс были назначены в качестве контрольной группы, которая была оставлены неэкспонированными для CUMS. Остальные тридцать крыс были подвергнуты к процедуре CUMS в течение 4 недель, которая включала в себя различные виды стрессоров в разное время в течение дня для того, чтобы предотвратить привыкание к стрессу. Процедура CUMS была полностью описано в предыдущих работах (Ayuob et al., 2016; Али и др., 2017) и был показан в таблице 1. Крысы, подвергшиеся воздействию CUMS были разделены на 3 группы (n 10). Необработанная группа (CUMS) получил транспортное средство 0,03% карбоксиметилцеллюлозы (CMC-Na) по щаву в течение 2 недель. Группа, получающая лечение гриппом получил грипп (Dar Al Dawa Pharmaceuticals Co., Ltd., Amman, Jordan), антидепрессант, используемый для фармакологическая валидация, растворенная в КМЦ-Na 0,03% при доза 20 мг/кг желудочным приемом (Li et al., 2014). Группа, обработанная CP, получала CP-экстракт, растворенный в дистиллированном виде воды в дозе 100 мг/кг при приеме в течение 2 недель по Wang et al. (2012).

Оценка поведенческих изменений

FST был выполнен через 4 недели для подтверждения эффекта CUMS на крысах (Ali et al., 2017). Во время этого теста каждая крыса была помещен в стекловидный цилиндрический контейнер (высота 20 см, диаметр 14 см) с 15 см воды при 25 ± 2° С. Крыса была записана на видео в течение 6 минут с помощью программного обеспечения поведения (Noldus Information Технология, EthoVision XT®), и общее затраченное время неподвижность в течение 6 мин измерялась техником слепые к экспериментальным группам. Общее время, в секундах, проведенные крысами без движения конечностей, за исключением незначительные движения, необходимые для удержания мыши на плаву, определялось «время неподвижности» в течение 6 мин.

Биохимические методы

Двадцать четыре часа после завершения поведенческого теста, образцы крови были взяты из внутриорбитального синуса крыс после того, как были анестезирован 4% изофлураном (SEDICO Pharmaceuticals) Компания, Каир, Египет) в 100% кислороде. После этого крысы были усыплены при вывихе шейки матки. Образцы крови были центрифугирование при 3 000 об/мин в течение 15 мин при 4° C для получения сыворотки и поддерживались при −18° C для биохимической оценки.

Уровень кортикостерона (ALPCO Diagnostics, Orangeburg, NY, США) оценивали с использованием фермент-сцепленных наборы для иммуносорбентного анализа в соответствии с требованиями производителя резолюция. Согласно инструкции производителя, ТНФ-α и Ил-6 (система НИОКР «Квантакин», комплект США) оценивается с помощью иммуноферментного анализа. Тем оптическая плотность каждого образца определялась в двух экземплярах с микропластинчатым ИФА-считывателем, установленным на 450 нм.

Набор для анализа реакционноспособных веществ тиобарбитуровой кислоты (TBARS) (Биодиагностический; Египет) использовался для измерения уровня малондиальдегид (MDA) спектрофотометрически при 535 нм (Gamal et al., 2018). Уровень супероксиддисмутазы (СОД) был измерен с помощью набора для анализа SOD (Biodiagnostic; Египет) (Пэкер, 2002). Оценка глутатионпероксидазы Уровень (GPX) выполнялся с помощью комплекта GPX (Randox Labs, Крамлин, Великобритания). Для количественной оценки активности каталазы (CAT), была сгенерирована калибровочная кривая для анализа и все образцы, с использованием наборов для анализа (Biodiagnostic; Египет). Метод ранее описанные (Gamal et al., 2018).

Экстракт пустынной цистанхи преимущества: противовоспалительный

Количественная ПЦР в реальном времени

Извлечение РНК из образцов тканей производилось с использованием Реагент TriFast™ (PeqLab, Германия, Кат No: 30-2010), как описано в протоколе производителя. Концентрацию очищенной РНК оценивали с помощью NanoDrop 2000c спектрофотометр (Thermo Scientific, США). Тем извлеченная РНК из каждого образца была реверсивно транскрибирована использование комплекта синтеза кДНК SensiFAST™ для RT-qPCR (Bioline США Inc., США, Кат No: BIO-65053), следуя инструкциям производителя. Синтезированные кДНК хранилась при -80° C до применения для qRT-PCR.

Реакции qRT-PCR проводили с использованием Комплект SensiFAST™ SYBR Lo-ROX (Bioline США Inc., United Штаты, Кат No: BIO-94002) о прикладных биосистемах 7500 система обнаружения ПЦР в режиме реального времени (технология Life, США). Разработаны генно-специфические праймеры для крыс, используемые в этом исследовании. программным обеспечением Primer3 (v.0.4.0), и их специфика была проверена с помощью программы NCBI/Primer-BLAST. Грунтовки были тогда приобретено у компании Willowfort™ (Великобритания). Грунтовки были GAPDH (5′-TGCACCACCAACTGCTTAGC-3′, 5′-GGC ATGGACTGTGGTCATGAG-3′), каспаза-3 (вперед 5- TGT ATGCTTACTCTACCGCACCCG-3, реверс 5-GCGCAAAGT GACTGGATGAACC-3), HSP70 (5′-ACGAGGGTCTCAAGG GCAAG-3′, 5′-CTCTTTCTCAGCCAGCGTGTTAG-3′).

Ki67 (форвард 5-АГААГАККАКАКАКАГАГАГАА-3, реверс 5-АГААГАГЦККАКАКАГАГАГАА 3). ПЦР смесь готовили следующим образом: 10 мкл SensiFASTTM SYBR Смесь Lo-ROX, прямая грунтовка 0,8 мкл, обратная грунтовка 0,8 мкл, 2 мкл шаблонная кДНК и 6,4 мкл без нуклеазы воды. Реакционная смесь был перенесен на тепловой циклер, который был ранее запрограммирован на удержание на 95° C в течение 2 мин, затем 40 циклов 95° C в течение 15 с, а затем 60° C в течение 30 с. Отрицательный контроль реакция, не содержащая шаблона, выполнялась в каждом эксперименте.

Проведен анализ кривой плавления для доказательства специфики Получены продукты ПЦР и значение Ct для каждой реакции из графиков усиления. Относительная количественная оценка для каждого гена экспрессия в образцах тканей рассчитывалась с помощью сравнительный пороговый (ΔΔCt) метод с GAPDH в качестве ген внутреннего контроля. Для общего изменения сгиба это было вычисляется и линеаризируется по арифметической формуле 2−ΔΔCt.

Гистологические методики

В конце эксперимента и после крысы были обезболивание, живот был вскрыт и справа надпочечник был рассечен. Для получения парафиновых блоков, фиксация надпочечников в 10% нейтральном буферизованном формалине и были проведены дальнейшие процессы. Парафиновые срезы 4-мкм толщиной готовили и окрашивали гематоксилином и эозин (H&E). Кроме того, другие парафиновые секции были иммуногистохимически окрашивается с помощью метод стрептавидин-биотин-пероксидазы. Горки были инкубировали ночью при 4°C, а затем инкубировали с моноклональным анти-Ki67 (цитомация Дако, США, при разбавлении 1:1,000) для демонстрации ячейки распространение. Кроме того, поликлональное антикаспазное антитело-3 (Santa Cruz Biotechnology, СОЕДИНЕННЫЕ ШТАТЫ, при разведении 1:1000) был использован для обнаруженияапоптоз. Поликлональный антитело против белка теплового шока-70 (HSP70) (Dako, Карпинтерия, Калифорния, США, при разбавлении 1:1000) также была Использованы. Соответствующий биотинилированный конъюгированный вторичный использовали антитела из системы окрашивания Dako. Использовались слайды, окрашенные только вторичным антителом как отрицательные элементы управления.

Ядра были уравновешены гематоксилином. Коричневый цитоплазматическое окрашивание считалось положительной реакцией. Тем окрашенные участки были исследованы и сфотографированы с помощью Микроскоп Olympus BX-51 (Olympus) подключен к цифровому камера и компьютер. Полуколичественный анализ антител иммунореактивность была выполнена программным обеспечением для анализа изображений Pro Plus. Оценивали процентную площадь иммунопозитивной реакции в 30 полях при увеличении ×400. Были подсчитаны положительные клетки на 1,0 мм2 площади, как описано Zhou et al. (2016). По крайней мере пять полей с каждого слайда были изучены, и среднее значение составило рассчитывается для каждого животного.

Для морфометрического анализа были рассмотрены четыре раздела в каждое животное (увеличение ×100). Толщина разная зоны надпочечников измеряли в микрометрах. Тем толщина коры надпочечников была получена путем измерения расстояния между продолговатым мозгом и капсулой надпочечников по прямой линии; одно измерение проводится в каждом квадранте надпочечников кора.

Статистический анализ

Поведенческие, биохимические и иммуногистохимические данные были проанализированы Статистическим пакетом по социальным наукам (SPSS) версия 16. На переменные исследования повлияли два независимые факторы: стрессовое воздействие и лечение. Следовательно анализ с использованием смешанной модели двусторонней ANOVA на основе Бонферрони пост-хок был выполнен. Статистическая значимость составила рассмотрено на p<>

Преимущества пустынной цистанхи: антивозрастной

РЕЗУЛЬТАТЫ

Поведенческие результаты

Время неподвижности во время FST было значительно выше (p = 0,03) в группе CUMS, чем в контрольной, тогда как оно было значительно ниже (p=0,01, p=0,001) в группах, получавших ФЛУ и CP, чем в группе CUMS (рисунок 1A).

Результаты анализа CP Extract с использованием ГК-МС

Основные соединения, обнаруженные в CP, в основном включают олеиновую кислоту. (около 56%), пальмитиновая кислота (около 8,9%), линоленовая кислота 3,5%, и линолевая кислота 2,8% помимо многих других соединений (таблица 2; Рисунок 2). Среди соединений ХП, о которых сообщалось оказывают противовоспалительное действие, присутствуют олеиновая кислота, пальмитиновая кислота; линоленовая кислота, бетулин и линолевая кислота, в то время как те, у кого естьантиоксидантэффектом являются пальмитиновая кислота, 10-октадеценовая кислота, и метиловый эфир.

Биохимическая оценка

Уровень кортикостерона в сыворотке крови

Уровень кортикостерона значительно повышен (p< 0.001)="" in="" untreated="" rats="" exposed="" to="" cums="" compared="" to="" that="" in="" the="" control="" rats,="" while="" those="" treated="" with="" flu="" and="" cp="" showed="" a="" significant="" reduction="" (p="">< 0.001)="" in="" serum="" corticosterone="" level="" compared="" to="" that="" in="" the="" untreated="" rats="" exposed="" to="" cums="" (figure="">

Уровни TNF-α и IL-6 в сыворотке крови

В конце эксперимента оценка сывороточных TNF-α и IL-6 показала, что они были значительно повышены (p< 0.001)="" in="" the="" cums="" group,="" whereas="" they="" showed="" a="" significant="" reduction="" (p="">< 0.001)="" in="" flu-="" and="" cp-treated="" groups="" compared="" with="" those="" in="" the="" untreated="" rats="" exposed="" to="" cums="" (figures="" 1c,="">

Уровни MDA, SOD, GPX и CAT в Сыворотка

Было замечено, что уровень сывороточного MDA был значительным выше (p< 0.001)="" in="" the="" cums="" group="" than="" in="" the="" control="" rats,="" while="" that="" in="" cp-treated="" groups="" was="" significantly="" lower="" (p=""
="" 0.003)="" than="" that="" in="" untreated="" rats="" exposed="" to="" cums.="" flu="" administration="" could="" not="" significantly="" reduce="" the="" mda="" level="" in="" rats="" exposed="" to="" cums="" (figure="">

Напротив, уровни SOD, GPX и CAT в сыворотке крови Группа CUMS была значительно ниже (p< 0.001,="" p="">< 0.001,="" p="0.002)" than="" those="" in="" the="" serum="" of="" the="" control="" group,="" while="" their="" levels="" showed="" a="" significant="" increase="" (p="0.01," p="0.003," p=""
="" 0.03)="" in="" the="" cp-treated="" group="" compared="" to="" those="" in="" the="" cums-exposed="" group.="" flu="" administration="" could="" not="" significantly="" increase="" sod,="" gpx,="" and="" cat="" in="" rats="" exposed="" to="" cums="" (figures="">

Экспрессия генов Ki67, Caspase-3 и HSP70

ОТ-ПЦР выявила незначительно высокую экспрессию гена Ki67 (p = 0,14) в надпочечниках группы CUMS по сравнению с контрольная группа, в то время как группа, получавшая грипп и ДЦП, показала значительно высокая экспрессия (p 0,02, p 0,01) по сравнению с таковой группы, подверженной воздействию CUMS (рисунок 3E). Что касается каспазы-3, то экспрессия ее генов была значительной. увеличенный (p< 0.001)="" in="" the="" adrenal="" glands="" of="" the="" cums="" group="" compared="" to="" the="" control="" group,="" while="" that="" of="" flu-="" and="" cp-treated="" groups="" showed="" a="" significant="" decrease="" (p="0.03," p="0.04)" compared="" to="" that="" of="" the="" cums-exposed="" group="" (figure="" 3f).="" when="" it="" came="" to="" hsp70="" gene="" expression,="" it="" recorded="" significantly="" higher="" (p="">< 0.001)="" levels="" in="" the="" adrenal="" glands="" of="" the="" cums="" group="" than="" in="" the="" control="" group,="" while="" that="" of="" fluand="" cp-treated="" groups="" showed="" an="" insignificant="" decrease="" (p="0.07," p="0.08)" compared="" to="" that="" of="" the="" cums-exposed="" group="" (figure="">

Гистопатологическая оценка

Надпочечники контрольных крыс имеют неповрежденную структуру с сохранилась архитектура коры головного мозга, включая зону клубочков, zona fasciculata, и zona reticularis, а также продолговатый мозг (Рисунок 4). Показаны надпочечники крыс, подвергшихся воздействию CUMS много клеток в ZG, ZF и ZR с явной вакуоляцией и дегенеративные ядра, а иногда и глубоко окрашенные ядра с умеренным утолщением в капсуле и соединительной ткани трабекулы. Многие клетки ZR оказались темными с коричневым пигменты липофусцина. С другой стороны, надпочечники крыс, получавших ДЦП, показали меньше явно вакуолизированных клеток и глубоко окрашенные ядра в ZG, а также ZF и ZR выявили несколько темных клеток.

Морфометрические измерения показали, что толщина ZG и ZR показали незначительное увеличение после воздействия CUMS, при этом они были значительно повышены при FLU- (p 0,01, p 0,02) и CP-обработанные группы (p = 0,02, p = 0,001), соответственно. Что касается толщины ZF, то она была достоверно повышен (р 0,02) в группе, подвергшейся воздействию CUMS, и он был еще более увеличен, но незначительно, в группах, получавших ГРИПП и CP, по сравнению с группой, не получавших CUMS.

Для того чтобы определить, была ли клеточная гиперплазия ограниченные конкретным субрегионом надпочечников, иммуногистохимическая маркировка для Ki67 (маркер деление клетки) использовалось. Число Ki67-положительных пролиферирующие клетки были значительно увеличены (p< 0.001)="" in="" the="" zf="" after="" exposure="" to="" cums,="" while="" treatment="" with="" flu="" and="" cp="" insignificantly="" increased="" compared="" to="" the="" untreated="" cums="" group.="" although="" the="" number="" of="" proliferating="" cells="" was="" insignificantly="" increased="" in="" the="" zg="" and="" zr="" and="" insignificantly="" decreased="" in="" the="" medulla="" of="" the="" cums="" group="" compared="" to="" the="" control="" group,="" treatment="" with="" flu="" and="" cp="" significantly="" increased="" the="" number="" of="" proliferating="" cells="" in="" the="" zg="" (p="0.001," p="0.003)," zr="" (p="">< 0.001)="" and="" medulla="" (p="0.004," p="0.003)" compared="" to="" the="" untreated="" cums="" group="" (figures="" 4,="">

Иммуногистохимическое окрашивание с использованием каспазы-3 выполняется для оценкиапоптоз(Рисунок 6). Было замечено, что значительно увеличена процентная площадь экспрессии каспазы-3 (п< 0.001)="" in="" all="" zones="" of="" the="" gland="" following="" exposure="" to="" cums="" for="" 4="" weeks="" in="" comparison="" to="" that="" of="" the="" control="" group.="" the="" cptreated="" group="" showed="" a="" significant="" reduction="" in="" caspase-3="" expression="" in="" the="" zg="" (p="">< 0.001),="" zf="" (p="">< 0.001),="" zr="" (p="">< 0.001,="" p=""
="" 0.005),="" and="" medulla="" (p="0.004," p="0.001)," in="" comparison="" to="" that="" of="" the="" cums="" group="" (figures="">

Значительно увеличен процент площади экспрессии HSP70 (п< 0.001)="" in="" all="" zones="" of="" the="" cortex="" as="" well="" as="" in="" the="" medulla="" of="" the="" adrenal="" gland="" of="" the="" cums="" group="" compared="" to="" that="" of="" the="" control="" group,="" whereas="" it="" was="" insignificantly="" reduced="" in="" all="" zones="" and="" medulla="" of="" flu-="" and="" cp-treated="" groups="" compared="" to="" that="" of="" the="" cums="" group="" (figures="">

Сушеные ломтики цистанче тубулоса

ОБСУЖДЕНИЕ

Современное общество, очевидно, полно стресса, который может возникнуть из-за повседневности. проблемы, здравоохранение и вопросы, связанные с работой. Эти стрессоры могут вызывают так называемые стрессовые расстройства (Клейтон и Mccance, 2014). В этом исследовании этаноловый экстракт мякоть и кожура Cucurbita pepo L. были использованы для исследования его потенциал в облегчении депрессивного поведения, вызванного CUMS и его влияние на надпочечники. Это было доказано значительным повышением уровня кортикостерона в сыворотке крови и проверено длительным временем неподвижности во время ФСТ. Эти выводы соответствовали тем, о которых сообщалось ранее (Tang et al., 2015).

Сообщалось, что как TNF-α, так и IL-6 участвуют в патогенезе депрессии (Taraz et al., 2015; Педраз-Петроцци и др., 2020). Сообщалось, что у мышей наблюдается дефицит IL-6 или TNF-α рецепторы устойчивы к депрессивному поведению (Viana et al., 2010). Поэтому они были оценены в этом исследовании, и это наблюдалось. что и TNF-α, и Ил-6 были значительно увеличены в сыворотка крыс, подвергшихся воздействию CUMS в течение 4 недель, что указывает на то, что они были в депрессии. Этот вывод был поддержан Numakawa et al. (2014) у мышей с поведенческим отчаянием и Тараз и др. (2015) у пациентов с депрессией.

В этом исследовании введение экстракта тыквы было связанные с улучшением депрессивного поведения, это проявляется в значительном сокращении времени неподвижности FST и подтверждено значительным сокращением кортикостерон и воспалительные цитокины TNF-α и IL-6 в сыворотка. Эти выводы были поддержаны Kim Nr et al. (2016) кто сообщил, что ТКП за 28 дней снизил уровень воспалительные цитокины у депрессивных крыс. Противовоспалительная активностьтыкваможет быть отнесен к активные соединения тыквы, такие как олеиновые и пальмитиновые кислоты и эстрадиол.

Понижение регуляции олеиновой кислоты, пальмитиновой кислоты и линолевой кислоты был описан в депрессии (Conklin et al., 2010; Мартин и др., 2010). Сообщалось, что олеиновая кислота опосредована нейропротекцией связан с его противовоспалительным действием, опосредованным пероксисомой активация гамма-рецептора, активированного пролифератором (PPAR-γ) (Сонг и др., 2019). В дополнение к этому, сообщалось о пальмитиновой кислоте. ингибировать фосфолипазу А(2) и, следовательно. рассматривается как противовоспалительное соединение (Aparna et al., 2012). Эстрадиол был одно из соединений тыквы, обнаруженное в этом исследовании. Сообщалось, что эстрадиол вызывает противовоспалительный эффект и впоследствии смягчить депрессивное поведение (Xu et al., 2015). Другой механизм, с помощью которого эстрадиол может индуцировать антидепрессивный эффект заключается в повышении регуляции экспрессии нейротрофического фактора головного мозга (BDNF) и фосфорилирования ERK путем активации ER-β в головном мозге (Yang et al., 2010).

В этом исследовании уровень MDA в сыворотке крови был повышен, в то время как Уровни SOD, GPX и CAT были снижены при воздействии CUMS Крыс. Аналогичные изменения были задокументированы после воздействия CUMS в предыдущих исследованиях, и они добавили, что эти биохимические изменения привели к окислительному стрессу и нарушению HPA (Набави и др., 2015). Liu T. et al. (2015) также сообщили, что развитие депрессии можно отнести к низкому уровню. содержание антиоксидантов в организме. Антиоксидант свойстватыквафруктовый экстракт был часто сообщается (Bahramsoltani et al., 2017). Кроме того, плоть и сообщалось, что кожура Cucurbita pepo L. обрабатывается более высокая антиоксидантная активность, чем у других частей, например, семена (Oyeleke et al., 2019). Введение экстракта тыквы, в многие предыдущие исследования, значительно повышавшие уровни СОД и GPX и пониженный MDA в сыворотке мышей (Guo-Hua и др., 2000 год; Dang, 2004), и этот эффект также был задокументирован в это исследование. Таким образом,антиоксидантактивность тыквы могла быть за его антидепрессивным эффектом, очевидным в этом исследовании. Это согласуется с наблюдениями Kim Nr et al. (2016). Это было сообщается, что натуральные продукты с противовоспалительным действием,антиоксидант, и анти-усталостные эффекты также имеют антидепрессивно-подобный эффект (Jeong et al., 2015). Все эти предыдущая деятельность была доказана вТыквы.

Цистанш обладает омолаживающим эффектом

Повышенная цитоплазматическая вакуолизация клеток коры надпочечников, наблюдаемые в группе CUMS в этом исследовании, могут быть связаны с растущим спросом на липиды, которые являются краеугольным камнем для синтез кортизола. Cigankova et al. (2005) отметили, что длительная экспериментальная гипердинамика приводит к слиянию множественные цитоплазматические липидные капли корковых клеток. Эти липиды капли содержат холестерин, который является основным предшественником в синтез стероидных гормонов. Однако Колдышева и Лушникова (2008) сообщила, что стресс привел к значительному уменьшение липидных капель в клетках коры надпочечников, особенно ЗФ (Колдышева и Лушникова, 2008). Было описано, что при воздействии физического стресса болевые раздражители передаются на гипоталамус, что приводит к секреции CRH в гипофизарная портальная система, которая увеличивает секрецию АКТГ и стимулирует его рецепторы в ZF и ZR для увеличения секреция кортизола (Patti et al., 2018). Утолщенный надпочечник капсулы и трабекулы, наблюдаемые у крыс, подвергшихся воздействию CUMS, были ранее сообщалось (El-Desouki et al., 2011; Алтайеб и Салем, 2017) в результате повышенного синтеза коллагена фибробластами на подверженность иммобилизационному стрессу.

Многие клетки в надпочечниках крыс, подвергшихся воздействию CUMS показали глубоко окрашенные ядра, что указывает на то, что они подверглись апоптоз, который был подтвержден иммуногистохимическим веществом каспазы-3 окрашивание. Аналогичное наблюдение было сообщено Алтаебом и Салемом, (2017), пока изучали эффект иммобилизации нагрузка на надпочечники крыс. Liu Q. et al. (2015) сообщили, что чрезмерный окислительный стресс, проявляющийся после воздействия CUMS в Это исследование, измените уровни выражений "апоптоз-связанные генов» и индуцирует клеточный апоптоз и дегенерацию через сигнальные пути Bcl-2, Bax и каспазы-3. Этот механизм был подтвержден в этом исследовании ОТ-ПЦР, который выявлено значительное повышение регуляции экспрессии гена каспазы-3. При рецензировании литературы не было прямого эффекта Cucurbita pepo на каспазе-3–опосредованный апоптоз при различных Тканей. По-видимому, снижение каспазы-3 –положительной апоптотической клетки, обнаруженные в надпочечниках, были отнесены кантиоксидантэффект Cucurbita pepo задокументирован в этом исследовании. Это подтверждается многими предыдущими исследованиями, проведенными на других растения и травы со значительной антиоксидантной активностью (Банагозар Мохаммади и др., 2019; Газизаде и др., 2020).

Это исследование показало, что воздействие CUMS увеличивает Ki67- положительные клетки в коре надпочечников, что было значительно продемонстрировано в ZF, указывающий на увеличение числа пролиферирующих клеток, и в результате толщина этого слоя была значительно увеличена. С другой стороны, количество Ki67-положительных пролиферирующих клеток незначительно уменьшилось в продолговатом мозге в ответ на CUMS. Эти наблюдения соответствовали наблюдениям Ульриха-Лая и др. (2006), который сообщил об увеличении только Ki67-положительных клеточных ядер во внешнем ZF после воздействия хронического переменного напряжения, в то время как продолговатый мозг показал клеточную гипертрофию, а не гиперплазию. Кроме того, Laborie et al., (2003) сообщили об обобщенном увеличение медуллярной функции после воздействия хронического стресса, предполагая, что хронический стресс может привести к медуллярной гипертрофии. В этом исследовании администрированиетыкваэкстракт значительно увеличение пролиферации клеток, о чем свидетельствует повышение регуляции Ген Ki67 и иммуноэкспрессия почти во всех зонах и продолговатый мозг надпочечников по сравнению с CUMS. Это объясняет увеличение толщины зон желез, зафиксированных в данном исследовании. Оно также может компенсировать апоптотический эффект, вызванный воздействием КУМС. Этот вывод подтверждается Kim Hy et al. (2016), которые сообщается о значительном повышении регуляции экспрессии мРНК Ki67 и пролиферация спленоцитов, выделенных из селезенки BalB/c мышей, получавших SSP, струйные и Cucurbita moschata Дач и его основной компонент, β-каротин.

В настоящем исследовании воздействие CUMS значительно повышение экспрессии генов и иммуноэкспрессии HSP70 во всех зонах надпочечников. В соответствии с этим, Zheng et al. (2008) также доказали, что augmented HSP70 экспрессия после воздействия стрессовых состояний модулирует воспалительные реакции путем ингибирования активации воспалительный транскрипционный фактор, ядерный фактор-каппа В (НФ-каппаБ). Кроме того, HSP70 может напрямую мешать апоптоз и некроз (Yenari et al., 2005). Совсем недавно Ли et al. (2019) сообщили о повышении регуляции экспрессии HSP70 в ткань надпочечников свиней после воздействия теплового стресса, что указывает на роль HSP70 в повреждении надпочечников и подчеркивает его актуальность для воспалительных реакций. Быстрый индукция HSP70 в ответ на стресс считается необходимой для процесс клеточной защиты.

В нашем исследовании лечение крыс, подвергшихся воздействию CUMS,Тыквыбыл связано с незначительным снижением экспрессии HSP70 что было связано со снижением апоптоза и воспаления Ответы. Это может указывать на благотворное влияние относительно высокий уровень HSP70, индуцированный как ГРИППом, так и CP как это привело к восстановлению каспазы-3-опосредованнойапоптози высвобождение воспалительных цитокинов. Хотя влияния тыквы на тепловой шок семейства белков ранее не было. описана, олеиновая кислота, которая представляет собой основные составляющие изТыквыиспользованный в этом исследовании, был описан для понижения регуляции экспрессия HSP60 в клеточной линии Т-лимфоцитов человека (Martins De Lima et al., 2004), что поддерживает наше исследование обнаружение. Предложен механизм действия Cucurbita pepo как антидепрессивноподобное вещество обобщено на рисунке 7. Среди ограничений этого исследования была неспособность дальнейшее изучение механизма антидепрессивное действие ДЦП, а значит, дальнейшее изучение поощряется к этому.

В заключение, это исследование предоставляет научно обоснованные доказательства эффективность экстракта Cucurbita pepo L. для облегчения поведенческих и биохимических изменений, вызванных CUMS, а также гистопатологическое воздействие на надпочечники. Эти эффекты были очевидны через понижение регуляцииапоптози Выражение HSP70 и, казалось, было опосредовано черезантиоксиданти противовоспалительное действие Cucurbita pepo L. экстракт. Хотя это исследование и некоторые другие недавние исследования задокументирован антидепрессивный эффект Cucurbita pepo и исследовал его механизм, дальнейшие исследования, включая клинические исследования необходимы для подтверждения этого эффекта у людей.

Цистанхе Гранулы