Защитный эффект Herba Cistanches на статин-индуцированную миотоксичность in vitro
Mar 24, 2022
Контактное лицо: Одри Ху Whatsapp/hp: 0086 13880143964 Электронная почта:audrey.hu@wecistanche.com
Элейн Ват a,b,1, Чун Фай Нг a,b,1, Чи Ман Кун a,b, Эрик Чун Вай Вонг a,b, Брайан Томлинсон c, Клара Бик Сан Лау a,b,n
Институт китайской медицины Китайского университета Гонконга, Шатин, Новые территории, Гонконг
b Государственная ключевая лаборатория фитохимии и растительных ресурсов в Западном Китае, Китайский университет Гонконга, Шатин, Новые территории, Гонконг
c Отделение клинической фармакологии, факультет медицины и терапии, Китайский университет Гонконга, Шатин, Новые территории, Гонконг
Абстрактный:
Этнофармакологическая значимость: ХербаЦистанхи(ХК,Цистанхепустыня, или жеЦистанхетрубчатый) — китайская трава, традиционно используемая при проблемах с мышцами. Предыдущие исследования показали, что экстракт HC может уменьшить повреждение мышц и улучшить накопление АТФ у крыс после тренировки. Однако его влияние на вызванную статинами мышечную токсичность никогда не исследовалось.
Цель:Цель этого исследования состояла в том, чтобы определить, может ли водный экстракт HC (HCE) предотвратить индуцированную симвастатином токсичность в клетках скелетных мышц крыс L6 и является ли вербаскозид основным биологически активным компонентом, который способствует эффектам.
Материалы и методы:МТТ проводили для определения эффектов HCE ({{0}}–2000 мг/мл) или вербаскозида (0–160 мМ) на клетки L6, обработанные симвастатином (10 мМ). Аннексин V-FITC/PI анализ апоптоза и анализ каспазы 3 были выполнены для определения защитной роли HCE в отношении индуцированной симвастатином гибели клеток, а также для оценки того, оказывает ли HCE свое защитное действие через каспазный путь. Производство АТФ измеряли, чтобы выяснить, может ли ГХЭ предотвращать индуцированное симвастатином снижение производства АТФ in vitro.
Полученные результаты:Симвастатин значительно увеличивал апоптозную гибель клеток L6. HCE значительно вызывал дозозависимое снижение индуцированных симвастатином апоптотических клеток, возможно, посредством каспазы -3. Симвастатин снижал продукцию АТФ в клетках L6, что дозозависимо предотвращалось HCE. Наблюдалась только тенденция, но незначительный эффект (за исключением высоких доз) вербаскозида на защиту от мышечной токсичности, вызванной симвастатином.
Выводы:В заключение мы впервые продемонстрировали, что ГХЭ может оказывать дозозависимое защитное действие на индуцированную симвастатином токсичность in vitro, что маловероятно из-за присутствия вербаскозида. Наше исследование показало потенциальное использование HC в ситуации мышечной токсичности, вызванной симвастатином.
Ключевые слова:ХербаЦистанхи, СтатинХолестерин, Гиперлипидемия, Мышечная токсичность, Вербаскозид, Каспаза-3
1. Введение
Ингибиторы ГМГ-КоА-редуктазы (статины), являющиеся самым продаваемым классом рецептурных препаратов в мире в истории, хорошо задокументированы как полезные для пациентов обоих полов в разном возрасте с умеренным и высоким риском сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) (Голомб и Голомб). Эванс, 2008). Затем были разработаны и клинически одобрены различные статины, включая правастатин, аторвастатин, флувастатин, ловастатин, питавастатин, розувастатин и симвастатин. В целом, все статины действуют путем ингибирования восстановления HMG-CoA до мевалоновой кислоты на ранней стадии пути мевалоната для снижения продукции холестерина (Kromer and Moosmann, 2009; Thompson et al., 2003). Хотя статины обычно хорошо переносятся, одним из наиболее важных и хорошо известных клинических побочных эффектов является токсичность скелетных мышц (рабдомиолиз) (Kobayashi et al., 2008). Аномалии скелетных мышц могут варьироваться от доброкачественной миалгии до тяжелой миопатии. Несмотря на то, что предлагается множество механизмов, которые могут быть ответственны за побочные эффекты статинов на мышцы, считается, что митохондриальные механизмы играют важную роль (Golomb and Evans, 2008). Мевалонат является предшественником не только холестерина, но и других соединений, включая селенопротеины, долихол и убихинон (Kaufmann et al., 2006; Vaklavas et al., 2009). Таким образом, способность статинов ингибировать мевалонат будет также ингибировать выработку селенопротеинов, таких как глутатионпероксидаза (GPx), которые являются важными ферментами в поддержании механизма антиоксидантной защиты (Kromer and Moosmann, 2009). Статины также могут приводить к истощению запасов убихинона, вызывая снижение потребления кислорода и синтеза АТФ (Beltowski et al., 2009). Кроме того, увеличение количества исследований in vitro и in vivo продемонстрировало, что статины могут также воздействовать непосредственно на митохондрии тканей, индуцируя Ca2+-зависимый переход проницаемости мембраны (MPT) дозозависимым образом (Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006). ). Это также связано с увеличением количества активных форм кислорода (АФК) и митохондриальным окислительным стрессом, что приводит к гибели клеток и, следовательно, способствует повреждению печени и мышц (Beltowski et al., 2009; Velho et al., 2006).
ХербаЦистанхи, цельное высушенное растение Cistanche Deserticola YC Ma, или Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight (семейство Orobanchaceae), являются паразитическими растениями, преимущественно произрастающими в пустынных районах северного и северо-восточного Китая (Siu and Ko, 2010).ХербаЦистанхиКитайская тонизирующая трава Ян, которая в основном используется для лечения почечной недостаточности с такими симптомами, как импотенция, бесплодие, преждевременная эякуляция. Тяжелая и приторная природа травы также увлажняет кишечник и помогает облегчить запоры. Это также китайское растение, которое традиционно прописывают пациентам при болях в пояснице и коленях, и это растение обычно используется в китайских препаратах для лечения проблем с мышцами (Siu and Ko, 2010; Xiong et al., 1998). Интересно, что это также согласуется с современными научными исследованиями, которые продемонстрировали антиусталостную активность экстракта, богатого полисахаридами и фенилэтаноидами.ХербаЦистанхиу крыс после тренировки за счет уменьшения повреждения мышц и улучшения накопления АТФ (Cai et al., 2010). Недавняя работа продемонстрировала, что метанольный экстракт Herba Cistanches может усиливать выработку митохондриального АТФ (Leung and Ko, 2008). Сиу и Ко (2010) продемонстрировали, чтоХербаЦистанхитакже может повышать статус митохондриального глутатиона, опосредуя уровни синтеза глутатиона и GPx, тем самым защищая ткани от окислительного стресса в сердце крыс. Сиу и Ко (2010) также показали, чтоХербаЦистанхиможет снизить содержание Ca2+ в митохондриях, тем самым снижая Ca2+-зависимую МРТ. Более того,ХербаЦистанхитакже было доказано, что он является сильным антиоксидантом и поглотителем свободных радикалов в различных органах, снижая окислительный стресс и активность АФК в исследованиях in vivo (Lu et al., 1995; Sui et al., 2011). Что еще более интересно, в попытке определить активную фракцию, которая способствует антиусталостной активностиХербаЦистанхибыло обнаружено, что вербаскозид является основным компонентом активной фракции (Cai et al., 2010). Также было продемонстрировано, что вербаскозид снижает мышечную усталость у жаб, возможно, из-за его антиоксидантной активности (Liao et al., 1999), что позволяет предположить, что вербаскозид может быть биологически активным компонентом, способствующим благотворному воздействию Herba Cistanches.
Цель этого исследования состояла в том, чтобы определить, может ли использование растительного водного экстракта цистанков (HCE) снизить мышечную токсичность, вызванную симвастатином in vitro. Было высказано предположение, что использование HCE может скорректировать побочные эффекты мышечной токсичности, вызванные симвастатином. Была также предпринята попытка определить, оказывает ли благотворное воздействиеХербаЦистанхисвязаны с присутствием вербаскозида.
2. Материалы и методы
2.1. Аутентификация и подготовка растительных материалов
Сырье растительного происхожденияХербаЦистанхибыл приобретен у известного поставщика в Гуанчжоу, Китай.ХербаЦистанхибыл химически аутентифицирован с использованием тонкослойной хроматографии (ТСХ) в соответствии с Китайской фармакопеей (CP), 2010 г., с вербаскозидом и эхинакозидом в качестве химических маркеров (данные не показаны). После химической аутентификации образец гербарного ваучераХербаЦистанхибыл депонирован в Музее Института китайской медицины Китайского университета Гонконга (CUHK) с номером ваучера 2014–3434.
Вкратце, 1 кг сырой травы замачивали в течение 1 ч, после чего дважды экстрагировали путем нагревания в течение 1 ч с обратным холодильником при 100°, используя 10 мл дистиллированной воды для каждой экстракции. Водные экстракты (HCE) объединяли и фильтровали. Фильтрат концентрировали при пониженном давлении при 60°С. Концентрированный экстракт лиофилизировали досуха. Процент выхода составлял 50,1% масс./масс. Небольшое количество использовали для определения количества вербаскозида и эхинакозида с помощью сверхэффективной жидкостной хроматографии (UPLC). Весь извлеченный порошок был упакован под вакуумом и хранился до использования.
2.2. УЭЖХ анализ водного экстракта
Анализы УЭЖХ проводили с использованием системы Waters Acquity Ultra Performance LC System (Waters, США). Все растворители, необходимые для анализа UPLC, были приобретены на химическом факультете Китайского университета Гонконга. Вербаскозид и эхинакозид были приобретены в Национальном институте контроля фармацевтических и биологических продуктов, Китай. Раствор образца вводили в колонку Waters Acquity UPLC BEH C18 (10{{2{{2}}} внутренний диаметр 2,1 мм2, размер частиц 1,7 мм) с предварительной колонкой Waters ACQUITY UPLC BEH C18 VanGuard ( 5-2.1 мм2 внутренний диаметр, размер частиц 1,7 мм). Все растворители были предварительно отфильтрованы с помощью фильтрующего диска 0.45 мм Millipore (Millipore) и дегазированы. Градиентное элюирование осуществляли с использованием следующих систем растворителей: подвижная фаза А – ацетонитрил; подвижная фаза Б – бидистиллированная вода/муравьиная кислота (99,9/{34}},1; об./об.). Элюцию проводили с помощью градиентной процедуры следующим образом: 0–5 мин, 88% B; 5–10 мин, от 88 процентов B до 83 процентов B. Используемая скорость потока составляла 0,4 мл/мин, а определение выполнялось при 331 нм в соответствии с CP (2010). Каждый образец (5 мкл) вводили в колонку после фильтрации через фильтрующий диск 0,2 мм. Идентификацию химических маркеров проводили путем сравнения времени удерживания и УФ-поглощения неизвестных пиков со стандартами. Калибровочную кривую строили по ряду концентраций вербаскозида и эхинакозида (40, 20, 10, 5, 2,5 и 1,25 мг/мл) для количественного определения. Количественное определение вербаскозида и эхинакозида в растительном экстракте проводили в трех повторностях. Система контролировалась с помощью компьютера, оснащенного программным обеспечением Waters MassLynx для сбора, интеграции и анализа данных.
2.3. Культура клеток
Линию клеток скелетных мышц крысы L6 приобретали в Американской коллекции типовых культур (ATCC, Манасса, Вирджиния, США). Клетки поддерживали при субконфлюэнтной плотности в модифицированной Дульбекко среде Игла (DMEM, ATCC, Манассас, Вирджиния, США) с добавлением 10-процентной (об./об.) фетальной бычьей сыворотки (FBS) и 1-процентного пенициллин-стрептомицина (P/S) и инкубировали при 37 градусах во влажной атмосфере, содержащей 5 процентов CO2 и 95 процентов воздуха.
Чтобы определить влияние HCE на индуцированную статинами мышечную токсичность, клетки L6 обрабатывали симвастатином в концентрации 1 0 мкМ в течение 48 часов, чтобы вызвать токсичность. HCE (в концентрациях 0, 250, 500, 1000 и 2000 мкг/мл) или вербаскозид (в концентрациях 0, 20, 40, 80 и 160 мкМ) добавляли в качестве совместной обработки со статином, чтобы определить, экстракт трав может предотвратить индуцированную статинами токсичность в клетках скелетных мышц, и если бы вербаскозид мог оказывать такое же защитное действие, как и водный экстракт трав.
Защитный эффект экстракта Herba Cistanche в отношении индуцированной симвастатином токсичности in vitro
2.4. Цитотоксичность in vitro
Ячейки L6 (1x105/well) высевали в {{0}}луночные культуральные планшеты с плоским дном (Iwaki, Япония) в течение ночи с последующей обработкой 10 мкМ симвастатина вместе с различными дозами HCE или без них ( 0–2000 мкг/мл) или вербаскозида (0–160 мкМ) в течение 48 часов. В контрольные лунки добавляли простую среду (DMEM). Травяной экстракт и соединение растворяли в DMEM.
После 48-часовой обработки среду от всех клеток удаляли и добавляли 30 мкл 5 мг/мл 3-(4,5-диметилтиазол-2-ил)-2,{{ В каждую лунку добавляли 8}}дифенил-тетразолийбромид (МТТ; Sigma, США) в фосфатно-солевом буфере (PBS) и планшеты дополнительно инкубировали в течение 3 ч при 37°С. Затем супернатант удаляли и в каждую лунку добавляли 100 мкл ДМСО для растворения пурпурных кристаллов формазана (Sigma-Aldrich, Сент-Луис, Миссури, США). Поглощение каждого образца считывали при 540 нм с помощью микропланшет-ридера (Biotek µ-Quant, США). Результаты выражали в виде процента поглощения МТТ по отношению к контрольным клеткам.
2.5. Анализ окрашивания аннексином-V FITC/PI
Клетки L6 (3 x105/well) лечили симвастатином вместе с различными дозами HCE или вербаскозида или без них. Затем клетки собирали, промывали и окрашивали набором аннексина-V FITC в соответствии с протоколом производителя (Trevigen, MD, USA). Вкратце, клетки дважды промывали 1x буфером для связывания и инкубировали в 100 мкл раствора для мечения, содержащего 1 мкл конъюгата аннексин-V FITC и 10 мкл PI, в темноте в течение 15 мин при комнатной температуре. Флуоресценцию образцов регистрировали методом проточной цитометрии (Becton Dickinson FACSCanto II, США).
2.6. Анализ активности каспазы 3
Активность каспазы 3 определяли с помощью флуорометрического иммуноферментного анализа (Sigma) в соответствии с инструкцией производителя. Вкратце, клетки L6 (3 105/лунку), обработанные симвастатином вместе с различными дозами вербаскозида HCE или без них, лизировали с использованием буфера для лизиса. Свободный 7-амино-4-метилкумарин (АМС), образующийся в результате протеолитического расщепления субстрата каспазой 3, измеряли и количественно определяли флуорометрически с длиной волны возбуждения 360 нм и длиной волны испускания 460 нм с помощью микропланшета BMG FLUOstarOptima. ридер (BMG LABTECH GmbH, Германия).
2.7. Анализ клеточного АТФ
Ячейки L6 (3x105/well) лечили симвастатином вместе с различными дозами HCE или вербаскозида или без них. После обработки клетки собирали и измеряли содержание АТФ с использованием имеющегося в продаже колориметрического набора (Abcam, Великобритания) путем измерения содержания глицеринфосфата в лизированных клетках и считывания при 570 нм с помощью устройства для считывания микропланшетов (Biotek μ-Quant, США). ). Измерение продукции АТФ выражали в процентах по отношению к контрольной группе.
2.8. статистический анализ
Данные представлены в виде среднего 7SD, Prism 5 for Window (версия 5.0c, GraphPad Software, Inc., США) для статистического анализа. Значительные различия между всеми группами оценивали с помощью однофакторного дисперсионного анализа с последующим тестом множественного сравнения Бонферрони. Вероятность po0.05 считалась статистически значимой.
3. Результаты
3.1. UPLC анализ водного экстракта Herba Cistanches
На рис. S1A показан профиль UPLC стандартной смеси, содержащей эхинакозид и вербаскозид. Точки времени удерживания каждого из этих маркеров сравнивали с профилем UPLCХербаЦистанхиводный экстракт (рис. S1B). Количество эхинакозида и вербаскозида вХербаЦистанхиБыло обнаружено, что водный экстракт составляет {{0}},45 процента по массе и 0,085 процента по массе соответственно.
3.2. Влияние HCE и вербаскозида на цитотоксичность симвастатина in vitro в клетках скелетных мышц L6
Как показано на фиг. 1А, симвастатин вызывал значительную цитотоксичность в отношении клеток L6, что отражалось в значительном снижении жизнеспособности клеток L6 при 10 мМ симвастатина. Лечение HCE дозозависимо и значительно предотвращало индуцированную симвастатином цитотоксичность при дозах 500, 1000 и 2000 мг/мл. Вербаскозид проявлял тенденцию к повышению жизнеспособности клеток L6, обработанных совместно с симвастатином. Однако ни одна из концентраций не достигла статистической значимости (рис. 1В).
Рис. 1. Защитное действие ГХЭ (а); и (b) вербаскозид на цитотоксичность, индуцированную симвастатином, в клетках L6. Значения представляют собой средние значения 7SD (n=3). Значительная разница между лечением только симвастатином и контрольной группой с использованием t-критерия Стьюдента: ### po0.{{10}}}01. Достоверная разница между всеми группами, получавшими симвастатин, с или без совместного лечения HCE вербаскозидом с использованием однофакторного дисперсионного анализа: ** р0,01, *** р0,001.
3.3. Влияние HCE и вербаскозида на вызванную симвастатином гибель клеток в клетках скелетных мышц L6
Чтобы изучить способ гибели клеток, вызванный симвастатином, и определить защитную роль HCE или вербаскозида в отношении гибели клеток, вызванной симвастатином, определяли долю апоптотических клеток с помощью окрашивания йодидом пропидия (PI). Результаты показали, что симвастатин индуцировал значительное увеличение доли ранних апоптотических клеток (аннексин V-FITC-положительных и PI-отрицательных, Q4-2) и поздних апоптотических/мертвых клеток (аннексин V-FITC-положительных и PI-положительных, Q2-2). 2) по сравнению с контрольной группой. Совместное лечение с ГХЭ снижало долю ранних апоптотических и позднеапоптотических/мертвых клеток дозозависимым образом до 1000 мг/мл (рис. 2А). Этот защитный эффект также наблюдался в группах совместного лечения вербаскозидом. Однако ни одна из протестированных концентраций не достигла статистической значимости (рис. 2В).
Рис. 2. Влияние симвастатина с ГХЭ или вербаскозидом или без них на экстернализацию фосфатидилсерина в клетках L6. Клетки окрашивали аннексином-V FITC и I и обнаруживали с помощью проточной цитометрии.
3.4. Влияние HCE и вербаскозида на активность каспазы 3 в клетках скелетных мышц L6, обработанных симвастатином
Как показано на фиг. 3А, 10 мМ симвастатин значительно индуцировал активность каспазы 3 в клетках L6, предполагая, что симвастатин индуцировал апоптоз в клетках L6 посредством каскада каспаз. Однако в клетках L6, совместно обработанных симвастатином и HCE, HCE дозозависимо и значительно снижал активность каспазы 3, что свидетельствует о способности HCE предотвращать индуцируемый симвастатином апоптоз через каспазный каскад. С другой стороны, хотя вербаскозид также проявлял тенденцию к снижению индуцированного симвастатином увеличения активности фермента каспазы 3, только концентрация при 160 мМ достигала статистической значимости (рис. 3В).
Рис. 3. Защитный эффект ГХЭ (а); и (b) вербаскозид на симвастатин-индуцированную ферментативную активность каспазы 3 в клетках L6. Значения представляют собой средние значения 7SD (n=3–5). Значительная разница между лечением только симвастатином и контрольными группами с использованием t-критерия Стьюдента: ###po0.001. Достоверная разница между всеми группами, получавшими симвастатин, с или без совместного лечения HCE или вербаскозидом с использованием однофакторного дисперсионного анализа: *po0,05, **p 0,01, ***po0,001.
3.5. Влияние HCE на индуцированное симвастатином снижение продукции АТФ в клетках скелетных мышц L6
Симвастатин (10 мМ) значительно снижал продукцию АТФ в клетках L6 примерно на 60 процентов по сравнению с контрольной группой (рис. 4А). Одновременное лечение ГХЭ дозозависимо ослабляло снижение продукции АТФ в обработанных симвастатином клетках, из которых только концентрации при 500, 1000 и 2000 мг/мл достигли статистической значимости. С другой стороны, хотя вербаскозид проявлял тенденцию к восстановлению продукции АТФ при 50 мг/мл, это не достигало статистической значимости (рис. 4В).
Рис. 4. Протективное действие ГХЭ (а) и вербаскозида (б) на индуцированное симвастатином снижение продукции АТФ в клетках L6. Значения представляют собой средние значения 7SD (n=3–5). Значительная разница между лечением только симвастатином и контрольными группами с использованием t-критерия Стьюдента: ###po0.001. Достоверная разница между всеми группами, получавшими симвастатин, с или без HCE или совместного лечения вербаскозидом с использованием однофакторного дисперсионного анализа: *р0,05, **р0,01.
4. Дискуссия
С ростом распространенности сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ) и пациентов с гиперхолестеринемией во всем мире использование статинов стало более распространенным. Хотя статины, как правило, очень хорошо переносятся, часто сообщается о мышечном повреждении, связанном с применением статинов, которое может возникать остро через недели или месяцы после начала приема препарата (Fine, 2003). Мышечные симптомы могут варьироваться от легких проблем, таких как боль, болезненность или слабость с повышением уровня креатинкиназы (КК) или без него, до наиболее тяжелых состояний рабдомиолиза (Armitage, 2007; Hu et al., 2012). Из-за возникновения этих побочных эффектов и отсутствия эффективного лечения вызванной статинами мышечной токсичности статины остаются недостаточно используемыми. В ходе широкого опроса 10 409 французских субъектов, проведенного посредством телефонного интервью, 10 процентов пациентов, получавших лечение статинами, сообщили о мышечных симптомах, из которых 30 процентов этих пациентов с симптомами привели к прекращению лечения (Rosenbaum et al., 2013).
Мы впервые продемонстрировали, что водный экстрактХербаЦистанхи, обычно используемая традиционная китайская трава, может оказывать защитное действие против индуцированной симвастатином токсичности in vitro в клетках скелетных мышц L6, что предполагает потенциалХербаЦистанхиводный экстракт (HCE) за его защитную роль, вызванную статинами мышечную токсичность, которая является признанным частым побочным эффектом у пациентов, принимающих статины. Таким образом, мощная способность ГХЭ защищать от индуцированной статинами мышечной токсичности имеет большой потенциал.
Согласно традиционной теории ТКМ, Ян связан с митохондриальным энергетическим метаболизмом в организме, и было обнаружено, что назначение трав, укрепляющих Ян, усиливает выработку митохондриального АТФ (Ko and Leung, 2007). Интересно, что мы наблюдали снижение продукции АТФ в клетках скелетных мышц L6, обработанных симвастатином, и это снижение продукции АТФ было значительно улучшено при совместном лечении ГХЭ. В нашем исследовании с использованием клеток скелетных мышц крыс L6 мы продемонстрировали снижение жизнеспособности клеток, вызванное симвастатином. Это снижение жизнеспособности клеток было значительно улучшено при совместной обработкеХербаЦистанхидозозависимым образом. Хотя точный механизм индуцированной статинами мышечной токсичности до конца не выяснен, было высказано предположение, что вызванный статинами апоптоз здоровых скелетных миоцитов является фактором, вызывающим миопатию, наиболее распространенный побочный эффект, с которым сталкиваются пользователи статинов (Dirks and Jones, 2006). . В нашем исследовании мы наблюдали значительное увеличение апоптотических клеток, индуцированное симвастатином, что было связано со значительно повышенной активностью каспазы 3. Эти данные также согласуются с предыдущими исследованиями, которые показали, что различные статины могут индуцировать апоптоз в скелетных миобластах, миотрубках и в дифференцированных первичных клетках скелетных мышц человека посредством активации активности каспаз -9 и каспаз -3 (Dirks и Джонс, 2006). Наш HCE смог предотвратить это вызванное симвастатином увеличение апоптоза, активируемого каспазой-3, дозозависимым образом.
ХербаЦистанхи
Кроме того, в предыдущей литературе предполагалось, что вербаскозид является одним из основных активных компонентов вХербаЦистанхи. Вербаскозид, также известный как актеозид, принадлежит к группе фенилэтаноидных гликозидов, встречающейся в природе группе полифенольных соединений, растворимых в воде (Liao et al., 1999). Ранее было показано, что вербаскозид является мощным антиоксидантом, который может проявлять сильную активность по удалению АФК и антиоксидантную активность (Liao et al., 1999). В нашем исследовании, чтобы определить, является ли вербаскозид основным компонентом нашего HCE, который способствует наблюдаемым полезным эффектам, мы протестировали эффекты вербаскозида в концентрациях 0–160 мМ. Поскольку мы продемонстрировали, что наш HCE активен в диапазоне концентраций 25{9}}–2000 мг/мл, на основании результатов ВЭЖХ предполагается, что наш HCE содержал вербаскозид в концентрации 0,085 мас. /масса, активная концентрация вербаскозида должна находиться в пределах 0,2125–1,7 мг/мл (т.е. 0,34–2,72 мМ), должен ли вербаскозид быть активным компонентом? Тем не менее, нам не удалось обнаружить значительного положительного эффекта вербаскозида в тестируемом диапазоне концентраций, хотя мы наблюдали дозозависимую тенденцию благоприятного воздействия вербаскозида на клетки скелетных мышц L6. Эти данные свидетельствуют о том, что положительный эффект нашего HCE, наблюдаемый в скелетных клетках L6, вряд ли можно отнести к эффекту одного вербаскозида, предполагая, что за наблюдаемые полезные эффекты могут быть ответственны другие компоненты, кроме вербаскозида. Также возможно, что вербаскозид может взаимодействовать с другими биоактивными соединениями в составе экстракта, что способствует благотворному эффекту. Дополнительные эксперименты с использованием фракционирования под контролем биоанализа будут полезны для получения дополнительной информации об обнаружении биологически активных компонентов, ответственных за вклад в наблюдаемые защитные эффекты HCE в отношении мышечной токсичности, вызванной симвастатином.
В заключение, настоящее исследование показывает, что HCE может оказывать мощное защитное действие на индуцированное симвастатином снижение жизнеспособности мышечных клеток in vitro. Эти результаты представляют собой предварительные данные, свидетельствующие о том, что наш водный экстракт HC может иметь терапевтическую ценность в качестве функционального пищевого продукта или нутрицевтика для пациентов с гиперлипидемией, которым необходимо отказаться от лечения статинами из-за вызванной статинами миотоксичности.
Благодарность Это исследование было проведено при финансовой поддержке Бюро пищевых продуктов и здоровья HKSAR, Фонда здравоохранения и медицинских исследований №. 11120831.
использованная литература
Armitage, J., 2007. Безопасность статинов в клинической практике. Ланцет 370, 1781–1790.
Белтовски Дж., Войчицка Г., Ямроз-Вишневска А., 2009 г. Побочные эффекты статинов – механизмы и последствия. Курс. Препарат Саф. 4, 209–228.
Цай, Р.Л., Ян, М.Х., Ши, Ю., Чен, Дж., Ли, Ю.К., Ци, Ю., 2010. Противоусталостная активность богатого фенилэтаноидами экстракта цистанхе пустынной. Фитотерм. Рез. 24, 313–315.
Диркс, А.Дж., Джонс, К.М., 2006. Статин-индуцированный апоптоз и скелетная миопатия. Являюсь. Дж. Физиол. Клеточная физиол. 291, C1208–C1212.
Fine, DM, 2003. Мышечная токсичность, связанная со статинами. клин. Фармакол. 3, 554.
Голомб, Б.А., Эванс, М.А., 2008. Побочные эффекты статинов: обзор литературы и доказательства митохондриального механизма. Являюсь. Дж. Кардиовасц. Лекарства 8, 373–418.
Hu, M., Cheung, BM, Tomlinson, B., 2012. Безопасность статинов: обновление. тер. Доп. Препарат Саф. 3, 133–144.
Кауфманн П., Торок М., Захно А., Вальдхаузер К.М., Брехт К., Крахенбуль С., 2006. Токсичность статинов на митохондриях скелетных мышц крыс. Клетка. Мол. Жизнь наук. 63, 2415–2425.
Ko, KM, Leung, HY, 2007. Повышение способности генерировать АТФ, антиоксидантной активности и иммуномодулирующей активности с помощью китайских тонизирующих трав Ян и Инь. Подбородок. Мед. 2, 3.
Кобаяши М., Кагава Т., Наруми К., Итагаки С., Хирано Т., Исеки К., 2008 г. Бикарбонатные добавки как профилактический способ при повреждении мышц, вызванном статинами. Дж. Фарм. фарм. науч. 11, -8.
Кромер, А., Моосманн, Б., 2009. Повреждение печени, вызванное статинами, связано с перекрестными помехами между путями биосинтеза холестерина и селенопротеина. Мол. фарм. 75, 1421–1429.
Leung, HY, Ko, KM, 2008. Экстракт Herba Cistanche усиливает выработку митохондриального АТФ в сердцах крыс и клетках H9C2. фарм. биол. 46, 418.
Ляо, Ф., Чжэн, Р.Л., Гао, Дж.Дж., Цзя, З.Дж., 1999. Замедление утомления скелетных мышц двумя фенилпропаноидными гликозидами: вербаскозидом и мартенситом из Pedicularis plicata Maxim. Фитотерм. Рез. 13, 621–623.
Лу, К.Г., Лю, Х.Б., Гу, К.К., 1995. Исследование химических компонентов цистанхе пустынного Ма. и Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Подбородок. традиц. Трава. Наркотики 26, 143.
Комиссия по фармакопее, 2010 г. Фармакопея Китайской Народной Республики. Издательство химической промышленности, Пекин.
Розенбаум Д., Даллонжвилль Дж., Сабурет П., Брукерт Э., 2013 г. Прекращение терапии статинами из-за побочных эффектов со стороны мышц: исследование в реальной жизни. Нутр. Метаб. Кардиовас. Дис. 23, 871-875.
Siu, AH, Ko, KM, 2010. Экстракт Herba Cistanche улучшает статус митохондриального глутатиона и дыхание в сердцах крыс с возможной индукцией разобщающих белков. фарм. биол. 48, 512–517.
Sui, ZF, Gua, TM, Liu, B., Peng, SW, Zhao, ZL, Li, L., Shi, DF, Yang, RY, 2011. Водорастворимое углеводное соединение из телХербаЦистанхи: выделение и его очищающее действие на свободные радикалы в коже. углевод. Полим. 85, 75.
Томпсон, П.Д., Кларксон, П., Карас, Р.Х., 2003. Статин-ассоциированная миопатия. ДЖАМА 289, 1681–1690.
Ваклавас, К., Чацизисис, Ю.С., Зиакас, А., Замбулис, К., Джанноглу, Г.Д., 2009. Молекулярные основы статин-ассоциированной миопатии. Атеросклероз 202, 18–28.
Velho, JA, Okanobo, H., Degasperi, GR, Matsumoto, MY, Alberici, LC, Cosso, RG, Oliveira, HC, Vercesi, AE, 2006. Статины индуцируют кальций-зависимый переход митохондриальной проницаемости. Токсикология 219, 124–132.
Xiong, Q., Hase, K., Tezuka, Y., Tani, T., Namba, T., Kadota, S., 1998. Гепатопротекторная активность фенилэтаноидов из Cistanche Deserticola. Планта Мед. 64, 120–125.
