Ридер РНК M6 A YTHDF2 контролирует противоопухолевый и противовирусный иммунитет NK-клеток. Часть 4

Хорошо известно, что YTHDF2 действует как считыватель m6A, который распознает и связывает m6A-содержащие РНК и регулирует деградацию транскриптов m6A.
Затем мы выполнили иммунопреципитацию РНК (RIP) с использованием антитела YTHDF2 для картирования целевых транскриптов, связанных с YTHDF2, в NK-клетках. Сайты связывания YTHDF2- были обогащены областью кодирующей белок последовательности и 39UTR (рис. S5, E и F).

Связь между читателями и памятью очень тесная. Чтение — один из лучших способов улучшить нашу память.

Когда мы читаем, наш мозг проходит сложный процесс. Когда мы сканируем слова и преобразуем их в смысл, наш мозг постоянно создает новые нейронные связи. Эти нейронные связи составляют нашу систему памяти и помогают нам хранить информацию в долговременной памяти.

Кроме того, чтение стимулирует наше воображение и творческие способности, что также помогает улучшить нашу память. Когда мы мысленно конструируем образы и сцены, наш мозг активно задействуется, поэтому образуется больше нейронных связей, что укрепляет наши способности памяти.

Наконец, чтение также улучшает наше внимание и концентрацию. Когда мы сосредотачиваемся на чтении, наш мозг постоянно тренируется снова и снова, что укрепляет нашу память.

В целом чтение может оказать чрезвычайно положительное влияние на нашу память. Развивая привычку к чтению и стимулируя наш мозг посредством чтения, мы можем улучшить наши навыки памяти и наслаждаться более насыщенной и интересной жизнью. Видно, что нам необходимо улучшить память, а цистанхе пустынный может значительно улучшить память, потому что цистанхе пустынный — это традиционное китайское лекарственное средство, обладающее множеством уникальных эффектов, одним из которых является улучшение памяти. Эффективность Cistanche Deserticola обусловлена ​​множеством содержащихся в нем активных ингредиентов, включая дубильную кислоту, полисахариды, флавоноидные гликозиды и т. д. Эти ингредиенты могут способствовать здоровью мозга различными путями.

Нажмите «Знайте 10 способов улучшить память»

Мы идентифицировали 3951 потенциальный пик связывания YTHDF2 из 1290 транскриптов, 426 (33%) из которых были обнаружены со значительным обогащением m6A. Анализ обогащения GO показал, что 1290 целевых транскриптов YTHDF2 были обогащены трансляцией белков, связыванием РНК и сплайсингом РНК (рис. S5 G).

Затем мы идентифицировали потенциальные целевые транскрипты из перекрывающихся транскриптов с помощью RNA-seq, m6A-seq и RIP-seq и обнаружили, что набор из 29 транскриптов, связанных с YTHDF2 и отмеченных m6A (как в Ythdf2WT, так и в Ythdf2ΔNK NK-клетках), дифференциально экспрессируется между NK-клетками. от мышей Ythdf2WT и Ythdf2ΔNK (рис. 7G). Среди них 12 транскриптов были активированы, а 17 транскриптов подавлены в NK-клетках мышей Ythdf2ΔNK по сравнению с таковыми из NK-клеток Ythdf2WT (рис. 7G).

На основании нашей функциональной характеристики YTHDF2 и анализа GO на основе данных секвенирования РНК, дефицит Ythdf2 влияет на деление и пролиферацию NK-клеток, возможно, способствуя деградации мРНК контрольных точек клеточного цикла или негативных регуляторов во время клеточного деления.

Сообщалось, что из 12 транскриптов с повышенной регуляцией три отрицательно регулируют деление или пролиферацию клеток, включая Mdm2 (мышиный двухминутный 2 [MDM2]; Frum et al., 2009; Giono and Manfredi, 2007; Giono et al., 2017), Tardbp ( ДНК-связывающий белок TAR 43 [TDP43]; Ayala et al., 2008; Sanna et al., 2020) и Crebzf (транскрипционный фактор CREB/ATFBZIP; Hu et al., 2020; López-Mateo et al., 2012). , что позволяет предположить, что они являются потенциальными мишенями YTHDF2 в NK-клетках.

Следует отметить, что пики m6A хорошо совпадают с сайтами связывания YTHDF2- в 39UTR Mdm2 и Tardbp и с 59UTR генов Crebzf, как показано с помощью Integrative Genomics Viewer (рис. 7H).

RIP с использованием антитела m6A или YTHDF2 после qPCR подтвердил, что Mdm2, Tardbp и Crebzf действительно были метилированы m6A и обогащены преимущественно YTHDF2 в NK-клетках (рис. 7, I и J), что подтверждает данные m6A-seq и RIP-seq, которые указывают на то, что эти три гена являются потенциальными мишенями YTHDF2 в NK-клетках.

Чтобы выяснить, регулирует ли YTHDF2 экспрессию Mdm2, Tardbp и Crebzf посредством модуляции стабильности мРНК, мы измерили деградацию мРНК трех мишеней путем ингибирования транскрипции актиномицином D в NK-клетках мышей Ythdf2ΔNK и Ythdf2WT.

Результаты показали, что Mdm2 и Tardbp, но не Crebzf, имели более длительный период полураспада в NK-клетках мышей Ythdf2ΔNK по сравнению с таковыми у мышей Ythdf2WT (рис. 7, K-M), что позволяет предположить, что Mdm2 и Tardbpare напрямую регулируются YTHDF2 в NK-клетках.

Используя иммуноблоттинг, мы подтвердили, что уровни белка MDM2 и TDP43 повышаются в NK-клетках мышей Ythdf2ΔNK (рис. S5 H). Для дальнейшего подтверждения того, что эти два гена являются функциональными мишенями YTHDF2, мы использовали Mdm2- или Tardbp. -специфическая миРНК для нокдауна экспрессии двух генов in vitro (рис. S5, I и J).

Затем мы сравнили пролиферацию клеток и выживаемость клеток Ythdf2ΔNKNK с нокдауном Mdm2 или Tardbp в присутствии IL-15. Результаты показали, что нокдаун Tardbp может, по крайней мере, частично устранить дефект пролиферации и выживания клеток в NK-клетках мышей Ythdf2ΔNK (рис. 7, N и O).

Однако нокдаун Mdm2 не имел спасательного эффекта (рис. S5, K и L). Эти результаты показывают, что YTHDF2 регулирует пролиферацию и деление NK-клеток, по крайней мере частично, ингибируя стабильность мРНК Tardbp.

Обсуждение

В этом исследовании мы сообщаем о многогранной роли метилирования m6A, опосредованного YTHDF2-, в иммунитете NK-клеток. Мы обнаружили, что YTHDF2, один из наиболее важных читателей модификаций m6A, имеет решающее значение для поддержания гомеостаза NK-клеток, их созревания, опосредованного IL-15 выживания, а также противоопухолевой и противовирусной активности.

Мы также идентифицировали новую петлю положительной обратной связи между STAT5 и YTHDF2, расположенную ниже IL-15, которая способствует эффекторным функциям и выживанию в NK-клетках мыши. Наше исследование выясняет биологическую роль метилирования YTHDF2 или m6A в целом во врожденном иммунитете NK-клеток. Это заполняет пробел в знаниях о том, как YTHDF2 регулирует врожденный иммунный ответ на злокачественную трансформацию и вирусную инфекцию.

Наши результаты открывают новое направление в использовании противоопухолевого иммунитета NK-клеток и одновременно углубляют наше понимание модификаций m6A в формировании врожденного иммунитета. Белок-ридер m6A YTHDF2 регулирует стабильность целевых мРНК (Du et al., 2016; Wang et al., 2014). Многочисленные исследования подтвердили широкое влияние YTHDF2 на различные биологические процессы.

YTHDF2 подавляет нормальную экспансию и самообновление гемопоэтических стволовых клеток, но также необходим для длительного поддержания гемопоэтических стволовых клеток (Li et al., 2018; Mapperley et al., 2021 Paris et al., 2019; Wang et al., 2018a). Недавно этот ген участвует в сдерживании воспаления при бактериальной инфекции (Wu et al., 2020a). Роль и механизм YTHDF2 в развитии опухолей хорошо изучены.

YTHDF2 способствует развитию лейкемических стволовых клеток и инициации острого миелоидного лейкоза (Paris et al.,2019). Было показано, что помимо лейкемии YTHDF2 способствует развитию солидных опухолей, включая рак простаты (Liet al., 2020), глиобластому (Dixit et al., 2021) и гепатоцеллюлярную карциному (Chen et al., 2018; Hou et al., 2019; Zhang et al., 2020), путем нацеливания на различные m6A-модифицированные транскрипты, такие как супрессоры опухолей LHPP и NKX3-1 (Li et al., 2020), IGFBP3 (Dixit et al., 2021), OCT4 ( Чжан и др., 2020) и SOCS2 (Шене и др., 2018).

Хотя YTHDF2 играет стимулирующую роль в прогрессировании опухоли, наше исследование показывает полезную роль YTHDF2 в иммунном ответе на опухолевые клетки, особенно на NK-клетки, которые являются ключевым компонентом врожденного иммунитета против вирусных инфекций и злокачественной трансформации.

Таким образом, будущая разработка ингибиторов YTHDF2 для воздействия на опухолевые клетки для лечения рака должна осуществляться с осторожностью, поскольку ингибирование YTHDF2 может ухудшить противоопухолевый ответ хозяина со стороны NK-клеток. С другой стороны, использование противоопухолевой активности YTHDF2 в NK-клетках или других иммунных клетках должно учитывать его потенциальное воздействие непосредственно на опухолевые клетки. Дифференциальное нацеливание YTHDF2 на опухолевые и иммунные клетки должно максимизировать противоопухолевую активность.

For more information:1950477648nn@gmail.com