Эмбрион рыбки данио как модель для проверки защитных эффектов пищевых антиоксидантных соединений

Эл. адресtina.xiang@wecistanche.comЧтобы получить больше информации.

Абстрактный:антиоксидантактивность пищевых соединений является одним из свойств, вызывающих наибольший интерес, из-за его пользы для здоровья и корреляции с профилактикой хронических заболеваний. Эта активность обычно измеряется с помощью анализов in vitro, которые не могут предсказать эффекты или механизмы действия in vivo. Цель этого исследования состояла в том, чтобы оценить in vivo защитные эффекты шести фенольных соединений (нарингенин, апигенин, рутин, олеуропеин, хлорогеновая кислота и куркумин) и трех каротиноидов (ликопин B, -каротин и астаксантин), естественно присутствующих в пищевых продуктах с использованием модель эмбриона рыбки данио. Эмбрион рыбок данио предварительно обрабатывали каждым из девяти антиоксидантных соединений, а затем подвергали воздействию третбутилгидропероксида (tBOOH), известного индуктораокислительный стрессу рыбок данио. Значимые различия были определены путем сравнения концентрации-реакции летальности и дисморфогенеза, индуцированных tBOOH, по сравнению с предварительно обработанными эмбрионами сантиоксидантсоединения. Обнаружен защитный эффект каждого соединения, кроме -каротина, против летальности, вызванной окислительным стрессом. Кроме того, апигенин, рутин и куркумин также проявляли защитные свойства против дисморфогенеза. С другой стороны, -каротин проявлял повышенную смертность и дисморфогенез по сравнению с обработкой только tBOOH.

Ключевые слова: окислительный стресс; эмбрион рыбки данио; антиоксидантный эффект; полифенолы; каротиноиды

1. Введение

Активные формы кислорода (АФК) и активные формы азота (АФК) образуются в процессе клеточного метаболизма. Они необходимы для нормального физиологического состояния, но при избытке участвуют в патологических процессах [1]. Аэробные организмы обладают защитой для предотвращения окислительного повреждения, вызванного АФК, включаяантиоксидантферментов и/или неферментативных механизмов, включая эндогенно продуцируемые антиоксидантные соединения или прием антиоксидантов с пищей [2].
Дисбаланс, когда концентрация реактивных частиц выше, чемантиоксидантзащитные силы организма, называетсяокислительный стресс(ОС) [3]. Последствия ОС включают рекрутирование макрофагов; угнетение нормального функционирования липидов и белков; повреждение митохондрий, мембран и ДНК [4–7]. Эти изменения коррелируют с несколькими патологиями, такими как рак, старение, диабет, ревматоидный артрит, сердечно-сосудистые и нейродегенеративные заболевания [8–11].

Несколько исследований показали, что организму требуется поступление антиоксидантов с пищей для уменьшения окислительного повреждения [12] в физиопатологических ситуациях (из-за воздействия УФ-излучения, курения, загрязненного воздуха и т. д.), которые производят избыток АФК. С пищей поступают различные антиоксиданты, такие как фенольные соединения, витамины, каротиноиды и т.флавоноиды. Термин «фенольные соединения» относится к любому веществу с фенольной группой, присоединенной к ароматическим или алифатическим структурам. Фенольные соединения происходят из растений и являются одними из наиболее важных вторичных метаболитов; их присутствие в животном мире связано с их потреблением с пищей. Среди этих соединенийфлавоноидыявляются наиболее изученными и многочисленными; их химическая структура содержитфлавоноидядро, состоящее из 15 атомов углерода, расположенных в три кольца (С6–С3–С6) [13]. Их антиоксидантные механизмы включают ингибирование ферментов или хелатирование микроэлементов, участвующих в образовании свободных радикалов, поглощение АФК и защиту эндогенной антиоксидантной защиты [14]. Значениефлавоноидпотребление оценивается в 23 мг/день [15,16], а основными источниками являются черный чай, красное вино, лук, яблоки и пиво [17,18].

Другая группа соединений, которые были изучены из-за их антиоксидантной активности, — это каротиноиды. Это пигменты, структура которых включает ряд сопряженных связей C=C (полиен), что позволяет им взаимодействовать со свободными радикалами; следовательно, они могут действовать как эффективные антиоксиданты [19]. Каротиноиды широко распространены в природных системах, и их роль в предотвращении различных заболеваний была изучена, главным образом, для соединений, присутствующих в рационе, таких как бета-каротин, лютеин и ликопин [18,20,21].

Определение ролейантиоксидантыпри заболеваниях и расстройствах, связанных с окислительными процессами, имеет важное значение для анализа защитных эффектов in vivo. По этой причине наша лаборатория разработала модель эмбриона рыбки данио (ZF) для оценки защитных эффектов этихантиоксидантсоединений [22].Окислительный стрессиндуцируется с использованием гидропероксида третбутила (tBOOH). tBOOH образует бутоксильные радикалы по реакции Фентона [23]. Образующиеся радикалы способствуют истощению внутриклеточных тиоловых групп и запасов глутатиона, вызывая значительное увеличение летальности и дисморфогенеза у подвергшихся воздействию эмбрионов рыбок данио. Эта модель позволяет сравнить кривые концентрации-эффекта летальности и дисморфогенеза для эмбрионов рыбок данио, подвергшихся воздействию tBOOH, и кривых эмбрионов, предварительно обработанных антиоксидантами; статистический анализ может быть выполнен для изучения защитного действия анализируемого антиоксидантного соединения.

Цель настоящей работы состояла в том, чтобы оценить in vivo защитные эффекты пищевых соединений с антиоксидантной активностью против индуцированной оксидантами токсичности развития у эмбрионов рыбок данио.

2. Результаты

2.1. Кривые влияния концентрации для tBOOH в эмбрионах рыбок данио

Наша исследовательская группа ранее разработала и утвердила эмбрион ZF.окислительный стрессмодель, с помощью которой можно оценить защитную активностьантиоксидантвещества (22).

Эмбрионы рыбок данио подвергают воздействию третбутилгидропероксида (tBOOH) для получения кривых летальности и дисморфогенеза. Эмбрионы рыбок данио подвергаются воздействию tBOOH от 24 до 48 ч после оплодотворения (hpf) в различных концентрациях, в диапазоне от 1 до 3,5 мМ (рис. 1). Было обнаружено, что летальная концентрация 50 (LC50) составляет 2,1 мМ, тогда как эффективная концентрация 50 для дисморфогенеза (EC50) составляет 1,7 мМ. Кривые, упомянутые выше, были использованы для сравнения эмбрионов рыбок данио, ранее подвергавшихся или не подвергавшихся воздействию антиоксидантных соединений, после чего они подвергались воздействию tBOOH.

2.2. Идентификация защитного действия антиоксидантных соединений на эмбрионы рыбок данио

Ранее описанная модель рыбок данио использовалась для оценки защитных эффектов шести полифенолов и трех каротиноидов, присутствующих в пище.

Из шести полифенолов три былифлавоноиды: нарингенин (20 мкМ), апигенин (10 мкМ) и рутин (10 мкМ). Трифлавоноидывызывал значительный дрейф кривых концентрация-реакция для летальности. Кроме того, апигенин и рутин проявляли защитное действие против дисморфогенеза, тогда как нарингенин не проявлял никакого защитного действия против дисморфогенеза (рис. 2).

Также были проанализированы олеуропеин (15 мкМ), хлорогеновая кислота (20 мкМ) и куркумин (15 мкМ). Эти полифенолы приводили к значительному дрейфу кривых концентрация-реакция для летальности. Только куркумин проявлял защитный эффект против дисморфогенеза (рис. 3).

Кроме того, оценивали каротиноиды ликопин (20 мкМ), астаксантин (20 мкМ) и -каротин (25 мкМ). Ликопин и астаксантин приводили к значительному дрейфу кривых концентрация-реакция для летальности. Напротив, ни один из каротиноидов не проявлял защитного действия против дисморфогенеза (рис. 4). Кроме того, бета-каротин приводил к смещению влево кривых летальности и дисморфогенеза, что могло указывать на возможный прооксидантный эффект.

3. Обсуждение

Кислород необходим для жизни человека; однако в то же время он производит токсичные вещества, такие как свободные радикалы и активные формы кислорода (АФК); эти вещества окисляющие, неустойчивые и реакционноспособные. Кроме того, они могут реагировать с любой макромолекулой и вызывать повреждение клеток [24]. Чтобы противодействовать этим окисляющим веществам, организм использует антиоксидантные ферменты, такие как супероксиддисмутаза и глутатионпероксидаза, а также антиоксидантные соединения, получаемые из пищи. Поэтому изучение антиоксидантной способности соединений вызывает интерес в последние несколько лет. Существует несколько методов определения антиоксидантной активности in vitro, хотя они имеют ограничения с точки зрения питания, поскольку ни один из них не воспроизводит физиологическую ситуацию [25]. По этой причине метод, включающий методы in vivo, может привести к более впечатляющим результатам, поскольку окислительный стресс подразумевает механизмы, которые зависят от многих системных условий, особенно кинетических частей реакций. Наша команда использовала модель эмбриона ZF [22], которая может быть ценным методом in vivo, для проверки защитных эффектов девяти антиоксидантных соединений, которые широко изучались in vitro. Мы оценили шесть фенольных соединений и три каротиноида. Фенольные соединения вносят важный вклад в антиоксидантный потенциал рациона человека; из этих соединений флавоноиды являются наиболее изученными и распространенными. Изучена антиоксидантная активность флавоноидов апигенина, рутина и нарингенина. Эти флавоноиды представляют собой биологически активные соединения, в основном содержащиеся в различных фруктах, растениях и овощах, орехах и луке. Исследования in vitro показали, что эти флавоноиды эффективно нейтрализуют гидроксильные радикалы, супероксид, пероксид водорода, радикалы оксида азота, ДФПГ и перекисное окисление липидов [26–29]. Chen et al. в 2012 году [30] провели анализ QSAR с использованием модели личинок рыбок данио, чтобы оценить способность пятнадцати флавоноидов, включая рутин, поглощать АФК в отношении фототоксичности, вызванной УФ-излучением. В соответствии с предыдущими исследованиями они пришли к выводу о важности двух гидроксильных групп и их положений, по крайней мере, с двумя гидроксильными группами, необходимыми для сильной биологической активности [30,31]. Кроме того, было установлено, что гидроксильные группы в положениях С3, С5 и С7 обеспечивают лучшую стабильность и активность флавонов [31]. Наши результаты показали защитный эффект трех флавоноидов от летальности, вызванной tBOOH. Апигенин и рутин также проявляли защитное действие против дисморфогенеза; однако нарингенин не проявлял никакого действия против дисморфогенеза.

В дополнение к антиоксидантным эффектам флавоноидов также оценивались антиоксидантные эффекты олеуропеина, хлорогеновой кислоты и куркумина. Исследования in vitro и in vivo показали, что эти

три фенольных соединения обладают важным антиоксидантным действием [32–34]. Олеуропеин — это биофенол, обнаруженный в оливковых листьях, оливковом масле первого отжима и некоторых видах семейства Oleaceae [32]. Хлорогеновые кислоты (ХГК) представляют собой сложные эфиры, образующиеся между кофейной и хинной кислотами, и представляют собой группу полифенолов, присутствующих в рационе человека [35]. Несколько исследований показали, что употребление напитков, содержащих АГК, таких как кофе, чай, вино и различные фруктовые соки, снижает риск развития различных хронических заболеваний [36–38]. Одной из причин такого снижения является антиоксидантная способность CGA, которые отдают атомы водорода для уменьшения свободных радикалов и ингибирования реакций окисления [35]. Куркумин — это полифенол, который используется для окрашивания и приправы пищевых продуктов. Его антиоксидантная активность изучалась в течение последних нескольких лет, и одно исследование предполагает, что он может защищать биомембраны от пероксидативного повреждения [39]. Используя модель эмбриона ZF, было замечено, что предварительная обработка олеуропеином, хлорогеновой кислотой или куркумином снижает вызывающий смертность эффект окислительного стресса, вызванного tBOOH; однако значительный защитный эффект против дисморфогенеза наблюдался только у куркумина.

Другая группа с антиоксидантными свойствами — это каротиноиды, вездесущая группа изопреноидных пигментов. Они являются тушителями синглетного кислорода и поглотителями АФК [40]. Молекулярные механизмы, лежащие в основе антиоксидантной и прооксидантной активности каротиноидов, до сих пор полностью не изучены. Среди наиболее изученных каротиноидов ликопин и -каротин. Их можно найти в изобилии в помидорах, томатном соусе, различных фруктах, водорослях и овощах [18,41]. При оценке защитных эффектов этих каротинов было обнаружено, что ликопин проявляет антиоксидантную активность, обладая защитным эффектом от эмбриональной гибели; однако никакого эффекта против дисморфогенеза обнаружено не было. С другой стороны, β-каротин увеличивал частоту летальности и дисморфогенеза у эмбрионов ZF по сравнению с эффектом одного оксиданта; это согласуется с исследованиями, которые показали, что высокие дозы -каротина обладают антиоксидантным действием, за которым следует прооксидантное действие при высоком напряжении кислорода, что может быть связано с его побочными эффектами [42]. Более того, исследование показало, что добавки -каротина не оказывали защитного действия на общую смертность курильщиков-мужчин с диабетом по сравнению с плацебо [43]. Еще одним оцениваемым каротиноидом был астаксантин; это каротиноид ксантофилла, обнаруженный в водорослях, дрожжах, лососе, форели, криле, креветках и раках. Это красный жирорастворимый антиоксидантный пигмент, не обладающий активностью провитамина А [44]. В нашем исследовании астаксантин проявлял защитный эффект от летальности, но не был обнаружен эффект от дисморфогенеза.

В заключение, восемь из девяти оцененных молекул показали антиоксидантную активность с защитным действием против эмбриональной летальности ZF. Только апигенин (10 мкМ), рутин (10 мкМ) и куркумин (15 мкМ) дополнительно проявляли защитные эффекты против дисморфогенеза, возникающего в результате окислительного стресса, вызванного tBOOH. Напротив, было обнаружено, что -каротин оказывает противоположный эффект, увеличивая смертность и скорость дисморфогенеза, поскольку он снижает значения LC50 и EC50. Баланс и синхронизация окислительных и антиоксидантных сил являются ключом к правильной регуляции и времени эмбрионального развития [45]. Различия в кинетике или механизме действия этих антиоксидантов могут быть основной причиной различных защитных способностей против дисморфогенеза. Необходимы дополнительные исследования, чтобы выяснить, почему только некоторые соединения проявляют защитное действие на морфогенез во время эмбрионального развития. В этом исследовании была предпринята попытка провести различие между эмбриотоксическим эффектом (летальность) и эффектом дисморфогенеза (тератогенность). В некоторых случаях пороки развития могут предшествовать и привести к смерти. В других случаях летальность и пороки развития могут быть вызваны разными причинами. Независимость этих двух проявлений можно было бы заподозрить, если бы соединение увеличивало разделение между кривыми концентрация-реакция летального исхода и дисморфогенеза. Все испытанные в нашем исследовании антиоксидантные соединения не повышали тератогенный эффект сверх летальной дозы более чем в 2 раза; поэтому не наблюдалось повышенного тератогенного потенциала ни для одного антиоксидантного соединения [46].

В целом, эти результаты показывают, что эта модель эмбриона ZF является ценным инструментом для анализа защитных эффектов антиоксидантных молекул, составляющих пищу. Чтобы определить химико-структурные причины, по которым апигенин, рутин и куркумин показали самые высокие защитные эффекты в нашем исследовании, необходимы дальнейшие анализы; например, для определения количественных отношений структура-активность (QSAR).

4. Материалы и методы

4.1. Этическое заявление

Процедуры, связанные с личинками и эмбрионами рыбок данио, были одобрены Комитетом по этике животных Университета Барселоны, номер разрешения или протокол 7971 Департамента животноводства и рыболовства правительства Каталонии (ProcedureDAAM 7971).

4.2. Химические вещества и раствор

Препарат Трет-бутилгидропероксид (tBOOH, номер CAS: 75-91-2) и антиоксидантные соединения были приобретены в TCI Europe. tBOOH растворяли в 0.3X буфере Данье (17,4 мМ NaCl; 0,23 мМ KCl; 0,12 мМ MgSO4·7 H2O; 0,18 мМ Ca. (NO3)2; 1,5 мМ HEPES(N-(2-гидроксиэтил)пиперазин-N0 -(2-этансульфокислота); рН 7,4).

Нарингенин (20 мкМ) (номер CAS: 67604-48-2), олеуропеин (15 мкМ) (номер CAS: 32619-42-4), рутин (10 мкМ) (номер CAS : 207671-50-9), хлорогеновая кислота (20 мкМ) (номер CAS: 327-97-9), апигенин (10 мкМ) (номер CAS: 520-36-5), куркумин (15 мкМ) (номер CAS: 458-37-7), ликопин (20 мкМ) (номер CAS: 502-65-8), астаксантин (20 мкМ) (номер CAS: 472-61-7) и -каротин (25 мкМ) (номер CAS: 7235-40-7) были приобретены у Sigmar-Aldrich®. Антиоксиданты растворяли в 100-процентном диметилсульфоксиде (ДМСО, Sigma Aldrich, Мадрид, Испания) и затем разбавляли 0,3-кратным буфером Данье до конечной концентрации ДМСО 0,05 процента (об./об.). Антиоксиданты использовали в разных концентрациях, в зависимости от самой высокой концентрации, при которой не наблюдалось влияния на летальность или эмбриональное развитие (максимально переносимая концентрация, МПК).

4.3. Содержание рыбок данио и производство яиц

Взрослых рыбок данио дикого типа содержали в стандартных условиях. Эмбрионы собирали, очищали и отбирали по их жизнеспособности. Оплодотворенные эмбрионы обрабатывали водой, стандартизированной в соответствии со стандартами Международной организации по стандартизации (ISO) 7346-1 и 7346-2 (ISO, 1998; 2 мМ CaCl2·2H2O, 0,5 мМ MgSO4. ·7H2O, 0,75 мМ NaHCO3 и 0,07 мМ KCl). Оплодотворенные яйца были стадированы в соответствии с предыдущими исследованиями Kimmel et al., 1995 [47] и отобраны для последующего экспонирования под препаровальным стереомикроскопом (Motic SMZ168, Motic China Group, LTD., Луван, Шанхай, Китай). Эмбрионы рыб содержали в стеклянных флаконах при контролируемой температуре 27 ± 1 ◦C.

4.4. Воздействие окислительного стресса на эмбрионы рыбок данио (трет-бутилгидропероксид)

Для получения кривой tBOOH использовали методологию Boix, 2020. Эта методология основана на получении кривой реакции концентрация-летальность (LC50) и дисморфогенеза (EC50) путем воздействия на эмбрионы ZF индуктора окислительного стресса, гидропероксида третбутила (tBOOH). После получения эмбрионов рыбок данио их держат в 0,3-кратной среде Данье от 0 до 24 часов после оплодотворения. С 24 по 48 часов после оплодотворения эмбрионы подвергают воздействию растворов tBOOH в различных концентрациях: 1, 1,5, 2, 2,5, 3 и 3,5 мМ. Были использованы эмбрионы из 3 разных кладок рыбок данио в трех экземплярах (рис. 5А).

4.5. Определение защитных эффектов антиоксидантных соединений.

Чтобы установить, оказывает ли соединение защитный эффект против окислительного стресса, эмбрионы рыбок данио сначала подвергали воздействию антиоксидантного соединения от 0 до 24 часов после оплодотворения. Концентрации рассчитывали в зависимости от максимально переносимых концентраций. Затем с 24 по 48 часов после оплодотворения эмбрионы подвергали воздействию индуктора стресса tBOOH. Впоследствии каждую группу эмбрионов оценивали при каждой концентрации tBOOH (рис. 5В). Чтобы определить, была ли существенная разница, сравнивали кривую воздействия только tBOOH и кривую предварительного воздействия антиоксидантного соединения.

Десять оплодотворенных яиц подвергались воздействию 2,5 мл каждого вещества и концентрации. Были выполнены три независимые повторности с использованием икры из разных нерестовых периодов. Эмбрионы ZF предварительно подвергали воздействию антиоксидантных соединений в течение 24 ч, затем раствор антиоксиданта удаляли, проводили промывание с использованием среды Данье, а эмбрионы ZF подвергали воздействию различных концентраций tBOOH. Летальность оценивали через 48 часов, а среднее число погибших эмбрионов рассчитывали после соответствующих анализов. Для оценки дисморфогенеза мы использовали систему оценки, описанную Teixido et al. [48] ​​для расчета дисморфогенеза эмбрионов примерно через 48 часов после оплодотворения. Мы выбрали девять морфологических признаков, описанных в таблице 2. Рассчитывали частоту аномальных эмбрионов (определяемую как эмбрионы с оценкой 1 по любому морфологическому признаку) для каждой концентрации и обработанной группы.

Сдвиг кривой концентрация-реакция вправо из-за предварительного воздействия антиоксидантов указывает на защитный эффект против индуктора окислительного стресса, поскольку для получения тех же результатов, что и при воздействии только tBOOH, требуется более высокая концентрация индуктора. Из-за предварительного воздействия антиоксидантов сдвиг кривой концентрация-реакция влево указывает на усиление окислительного стресса.

4.6.Статистический анализ

Кривые концентрация-реакция для смертности и дисморфогенеза рассчитывали и оценивали с использованием GraphPad 7.02 Software Inc. F-критерий дополнительной суммы квадратов использовали для сравнения соответствия параметров каждой группы данных кривой. Доверительный интервал был скорректирован до 95 процентов.

5. Выводы

В этом исследовании использовались эмбрионы рыбок данио в качестве модельного организма для проверки защитной способности шести фенольных соединений и трех каротиноидов, обычно встречающихся в пищевых продуктах. Все соединения, кроме -каротина, проявляли защитное действие против летальности, вызванной окислительным стрессом. Кроме того, апигенин, рутин и куркумин также проявляли защитные эффекты против индуцированного tBOOH дисморфогенеза. Мы предлагаем использовать тест эмбрионов рыбок данио, как представлено здесь, для оценки защитных эффектов in vivo новых биоактивных пищевых компонентов с потенциальной антиоксидантной способностью.

Кристина Артеага 1,20, Нурия Буаш13, Элизабет Тейшидо 13⑤, Фернанда Маризанде 2, Сантьяго Кадена4 и Альберто Бустиллос 5,*

1 Отделение токсикологии, кафедра фармакологии, токсикологии и терапевтической химии, Фармацевтическая школа,

Университет Барселоны, Avda Joan XXIIs/n, 08028Барселона, Испания;

2 Факультет медицинских наук, питания и диетологии, Технический университет Амбато, Амбато 180207, Эквадор;

3 Научно-исследовательский институт питания и безопасности пищевых продуктов INSA-UB, кампус Food and Nutrition Torribera,

Университет Барселоны, Прат-де-ла-Риба 171, 08921 Санта-Колома-де-Граменет, Испания

4 Факультет прикладных наук, Международный университет SEK, Кито 170134, Эквадор;

5 Факультет медицинских наук, медицина, Технический университет Амбато, Амбато 180207

использованная литература

1.Тан, БЛ; Норхайзан, Мэн; Лью, В.-П.-П. Питательные вещества и окислительный стресс: друг или враг? Оксид. Мед. Клетка. Лонгев. 2018, 2018, 9719584. [CrossRef] [PubMed]
2. Sies, H. Биохимия окислительного стресса. Ангью. Чеми Инт. Эд. англ. 1986, 25, 1058–1071. [Перекрестная ссылка]
3. Dröge, W. Свободные радикалы в физиологическом контроле клеточной функции. Физиол. 2002, 82, 47–95. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
4. Рендра, Э.; Рябов, В.; Моссель, ДМ; Севастьянова Т.; Хармсен, MC; Кжишковска Дж. Активные формы кислорода (АФК) в активации и функционировании макрофагов при диабете. Иммунобиология 2019, 224, 242–253. [Перекрестная ссылка]
5. Лин, МТ; Бил, М.Ф. Митохондриальная дисфункция и окислительный стресс при нейродегенеративных заболеваниях. Природа 2006, 443, 787–795. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
6. Теронд П. Окислительный стресс и повреждения биомолекул (липидов, белков, ДНК). Анна. фарм. о. 2006, 64, 383–389. [Перекрестная ссылка]
7. Ермак Г.; Дэвис, KJA Кальций и окислительный стресс: от клеточной сигнализации до гибели клеток. Мол. Иммунол. 2002, 38, 713–721. [Перекрестная ссылка]
8. Вадва Р.; Гупта, Р.; Маурья, П.К. Окислительный стресс и ускоренное старение при нейродегенеративных и нейропсихиатрических расстройствах. Курс. фарм. Дес. 2018, 24, 4711–4725. [Перекрестная ссылка]
9. Маритим, AC; Сандерс, Р.А.; Уоткинс, Дж. Б. Диабет, окислительный стресс и антиоксиданты: обзор. Дж. Биохим. Мол. Токсикол. 2003, 17, 24–38. [Перекрестная ссылка]
10. Синха, Н.; Дабла, П.К. Окислительный стресс и антиоксиданты при гипертонии — текущий обзор. Курс. гипертензии. 2015, 11, 132–142. [Перекрестная ссылка]
11. Клауниг, Дж. Э. Окислительный стресс и рак. Курс. фарм. Дес. 2018, 24, 4771–4778. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
12. Sies, H. Окислительный стресс: концепция окислительно-восстановительной биологии и медицины. Редокс Биол. 2015, 4, 180–183. [Перекрестная ссылка]
13. Пиетта, П.-Г. Флавоноиды как антиоксиданты. Дж. Нат. Произв. 2000, 63, 1035–1042. [Перекрестная ссылка]
14. Холливелл, Б.; Gutteridge, JMC Free Radicals in Biology and Medicine, 5-е изд.; Издательство Оксфордского университета: Оксфорд, Великобритания, 2015 г.; ISBN 9780198717478.
15. Холлман, ПК; Катан, М.Б. Пищевые флавоноиды: потребление, влияние на здоровье и биодоступность. Пищевая хим. Токсикол. Междунар. Дж. Публ. бр. инд. биол. Рез. доц. 1999, 37, 937–942. [Перекрестная ссылка]
16. Хертог, М.Г.; Холлман, ПК; Катан, МБ; Кромхаут, Д. Потребление потенциально антиканцерогенных флавоноидов и их детерминант взрослыми в Нидерландах. Нутр. Рак 1993, 20, 21–29. [Перекрестная ссылка]
17. Мартинес С.; Гонсалес, Дж.; Кулебрас, Дж.; Туньон, М. Флавоноиды: антиоксиданты Propiedades y acciones. Нутр. Хосп. 2002, 17, 271–278.
18. Артеага, К.; Бустиллос, А .; Гомес, J. Migración де нейтрофифилос ан личинок pez cebra expuestos экстракты де sofrito де томат. Арка Латиноам. Нутр. 2021, 70, 216–224. [Перекрестная ссылка]
19. Янг, Эй Джей; Лоу, Г.Л. Каротиноиды — антиоксидантные свойства. Антиоксиданты 2018, 7, 28. [CrossRef] [PubMed]
20. Ксавье, ААО; Перес-Гальвес, А. Каротиноиды как источник антиоксидантов в рационе. Подячейка. Биохим. 2016, 79, 359–375. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
21. Шталь, В.; Sies, H. Антиоксидантная активность каротиноидов. Мол. Асп. Мед. 2003, 24, 345–351. [Перекрестная ссылка]
22. Бойкс, Н.; Тейшидо, Э .; Пике, Э.; Льобет, Дж. М.; Гомес-Каталан, Дж. Модуляция и защитные эффекты антиоксидантных соединений от индуцированной окислителями токсичности развития у рыбок данио. Антиоксиданты 2020, 9, 721. [CrossRef]
23. Fenton, HJH Окисление винной кислоты в присутствии железа. Дж. Хим. соц. Транс. 1894, 65, 899–910. [Перекрестная ссылка]
24. Фаниендра, А.; Джестади, ДБ; Периясами, Л. Свободные радикалы: свойства, источники, мишени и их значение при различных заболеваниях. Индиан Дж. Клин. Биохим. 2015, 30, 11–26. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
25. Фернандес-Пачон, штат Массачусетс; Вилланьо, Д.; Тронкосо, AM; García-Parrilla, MC Revisión de los métodos de Evaluación de la actividad антиоксидант в пробирке дель вина у valoración де sus efectos in vivo. Арка Латиноам. Нутр. 2006, 56, 110–122. [PubMed] 26. Кавиа-Сайс, М.; Бусто, доктор медицины; Пилар-Искьердо, MC; Ортега, Н.; Перес-Матеос, М.; Муньис, П. Антиоксидантные свойства, активность по удалению радикалов и способность защиты биомолекул флавоноида нарингенина и его гликозида нарингина: сравнительное исследование. J. Sci. Фуд Агрик. 2010, 90, 1238–1244. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
27. Патель, К.; Сингх, ГК; Патель, Д.К. Обзор фармакологических и аналитических аспектов нарингенина. Подбородок. Дж. Интегр. Мед. 2014, 24, 551–560. [Перекрестная ссылка]
28. Рашми Р.; Магеш, СБ; Рамкумар, К.М.; Сурьянараянан, С .; Суббарао, М.В. Антиоксидантный потенциал нарингенина помогает защитить ткань печени от повреждения, вызванного стрептозотоцином. Представитель биохим. Мол. биол. 2017, 7, 76–84.
29. Шукла, Р.; Пандей, В.; Ваднере, врач общей практики; Lodhi, S. Глава 18 — Роль флавоноидов в лечении воспалительных заболеваний. В биоактивной пище как диетическом вмешательстве при артрите и связанных с ним воспалительных заболеваниях; Уотсон, Р.Р., Приди, В.Р., ред.; Academic Press: Лондон, Великобритания, 2019 г.; стр. 293–322; ISBN 978-0-12-813820-5.
30. Чен, Ю. Х.; Ян, З.С.; Вэнь, CC; Чанг, Ю.С.; Ван, Британская Колумбия; Сяо, Калифорния; Ших, Т.Л. Оценка взаимосвязи структура-активность флавоноидов как антиоксидантов и токсикантов личинок рыбок данио. Пищевая хим. 2012, 134, 717–724. [Перекрестная ссылка]
31. Кушман, М.; Чжу, Х .; Геален, Р.Л.; Кракер А.Дж. Синтез и биохимическая оценка ряда аминофлавонов в качестве потенциальных ингибиторов протеин-тирозинкиназ p56lck, EGFr и p60v-src. Дж. Мед. хим. 1994, 37, 3353–3362. [Перекрестная ссылка]
32. Чоффи, Г.; Песка, штат Массачусетс; Де Капрари, П.; Брака, А .; Северино, Л.; Де Томмази, Н. Фенольные соединения в оливковом масле и оливковых жмыхах из Чиленто (Кампания, Италия) и их антиоксидантная активность. Пищевая хим. 2010, 121, 105–111. [Перекрестная ссылка]

33. Булотта, С.; Коррадино, Р .; Челано, М .; Д'Агостино, М .; Майуоло, Дж.; Оливерио, М.; Прокопио, А .; Янноне, М .; Ротироти, Д.; Руссо Д. Антипролиферативное и антиоксидантное действие олеуропеина и его полусинтетических гиперацетилированных производных на клетки рака молочной железы. Пищевая хим. 2011, 127, 1609–1614. [Перекрестная ссылка]
34. Хан, Дж.; Талорете, ТПН; Ямада, П.; Исода, Х. Антипролиферативное и апоптотическое действие олеуропеина и гидрокситирозола на клетки рака молочной железы человека MCF-7. Цитотехнология 2009, 59, 45–53. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
35. Лян, Н.; Kitts, DD Роль хлорогеновых кислот в контроле окислительного и воспалительного стресса. Питательные вещества 2015, 8, 16. [CrossRef] [PubMed]
36. Парк, С.-Ю.; Фридман, Северная Дакота; Хайман, Калифорния; Ле Маршан, Л.; Уилкенс, LR; Setiawan, VW Ассоциация потребления кофе с общей и причинно-специфической смертностью среди небелого населения. Анна. Стажер Мед. 2017, 167, 228–235. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
37. Таджик, Н.; Таджик, М.; Мак, И.; Энк, П. Потенциальное воздействие хлорогеновой кислоты, основных фенольных компонентов кофе, на здоровье: всесторонний обзор литературы. Евро. Дж. Нутр. 2017, 56, 2215–2244. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
38. Пул Р.; Кеннеди, О.Дж.; Родерик, П.; Фаллоуфифилд, Дж. А.; Хейс, ПК; Паркс, Дж. Потребление кофе и здоровье: общий обзор мета-анализов множественных последствий для здоровья. БМЖ 2017, 359, j5024. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
39. Танвир, Э.М.; Хоссен, MS; Хоссейн, М. Ф.; Афроз Р.; Ган, СХ; Халил, Мичиган; Карим, Н. Антиоксидантные свойства популярных сортов куркумы (Curcuma longa) из Бангладеш. J. Качество продуктов питания. 2017, 2017, 8471785. [Перекрестная ссылка]
40. Федор, Дж.; Бурда, К. Потенциальная роль каротиноидов как антиоксидантов в здоровье и болезнях человека. Питательные вещества 2014, 6, 466–488. [Перекрестная ссылка]
41. Эггерсдорфер, М.; Висс, А. Каротиноиды в питании и здоровье человека. Арка Биохим. Биофиз. 2018, 652, 18–26. [Перекрестная ссылка]
42. Падманабхан П.; Чима, А .; Палиат, Г. Плоды пасленовых, включая помидоры, баклажаны и перец, 1-е изд.; Elsevier Ltd: Лондон, Великобритания, 2015 г.
43. Катая-Туомола, М.К.; Контто, Дж. П.; Маннистё, С .; Олбанес, Д.; Virtamo, JR Влияние добавок альфа-токоферола и бета-каротина на макрососудистые осложнения и общую смертность от диабета: результаты исследования ATBC. Анна. Мед. 2010, 42, 178–186. [Перекрестная ссылка]
44. Амбати, Р.Р.; Мои, PS; Рави, С .; Асватанарайана, Р. Г. Астаксантин: источники, экстракция, стабильность, биологическая активность и его коммерческое применение — обзор. Наркотики марта 2014 г., 12, 128–152. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
45. Деннери, П.А. Влияние окислительного стресса на эмбриональное развитие. Врожденные дефекты Res. C Embryo Today 2007, 81, 155–162. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
46. ​​Selderslaghs, ВВТ; Бласт, Р.; Виттерс, Х.Э. Исследование осуществимости анализа рыбок данио в качестве альтернативного метода скрининга токсичности для развития и эмбриотоксичности с использованием обучающего набора из 27 соединений. Воспр. Токсикол. 2012, 33, 142–154. [Перекрестная ссылка]
47. Киммель, CB; Баллард, WW; Киммел, С.Р.; Ульманн, Б.; Шиллинг Т. Ф. Стадии эмбрионального развития рыбок данио. Дев. Дин. 1995, 203, 253–310. [Перекрестная ссылка] [PubMed]
48. Тейшидо, Э.; Пике, Э.; Гомес-Каталан, Дж.; Llobet, JM Оценка задержки развития в анализе тератогенности эмбрионов рыбок данио. Токсикол. In Vitro 2013, 27, 469–478. [Перекрестная ссылка] [PubMed]