Антиноцицептивная и противовоспалительная активность Cistanche Deserticola у грызунов

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Ли-Вэй Лин и др.

Абстрактный

В настоящем исследовании корневищаЦистанхепустыня(Orobanchaceae, сокращенно CD) экстрагировали 50-процентным этанолом и последовательно выделяли этилацетатом, н-бутанолом и водой. обезболивающее ианти-воспалительныйЭффекты экстракта CD и трех слоев оценивались на нескольких моделях животных. CD(Cистанчепустынная)Экстракты эффективно ингибировали реакцию корчей, вызванную 1-процентным раствором уксусной кислоты, и двухфазную реакцию облизывания, вызванную 1-процентным раствором формалина, а также уменьшали отек, вызванный 1-процентным раствором каррагинана, но не зимозаном. Кроме того, бутановый и водный слои CD(Cистанчепустынная)Экстракт не только уменьшал боль, вызванную уксусной кислотой и формалином, но также уменьшал отек, вызванный каррагинаном. Эффекты бутанового слоя CD(Cистанчепустынная)экстракт лучше, чем у водного слоя. Кроме того, влияние бутанового слоя CD(Cистанчепустынная)экстракт не отменялся налоксоном. Эти результаты показали, что обладает обезболивающим ианти-воспалительныйэффекты, а бутановый и водный слои являются в основном активными составляющими. Кроме того, обезболивающее ианти-воспалительныйэффекты бутанового слоя CD(Cистанчепустынная)экстракт не были связаны с опиоидными рецепторами и иммунной системой.

Ключевые слова:Цистанхе пустынная; Анальгетическая активность; Противовоспалительная активность

1. Введение

ЦистанхепустыняМа. (Orobanchaceae, сокращенно CD), местное растение в Китае, широко используемое в традиционной медицине для различных терапевтических процедур, включая седативное, обезболивающее и иммуностимулирующее действие (Lee, 1986). Современные фармакологические исследования указывают на БК.(Cистанчепустынная)экстракт обладал иммуностимулирующим действием (Chin and Su, 1993), эффектом удаления свободных радикалов (Hsu et al., 1995) и повышением активности SOD (Chang et al., 1995). В недавнем исследовании свободнорадикальная реакция играла значительную роль в воспалительных процессах (Arrigoni-Martelli, 1985). Поэтому в настоящем исследовании была предпринята попытка изучить предполагаемые обезболивающие эффекты ЦД.(Cистанчепустынная)экстракта у мышей с тестом корчей, индуцированным уксусной кислотой (Taber et al., 1969), и тестом вылизывания, индуцированным формалином (Shibata et al., 1989). Во-вторых, мы также изучили возможныеанти-воспалительныйдеятельность КД(Cистанчепустынная)экстракт на классический воспалительный процесс с тестом на отек, вызванный каррагинаном (Winter et al., 1962), и альтернативный воспалительный процесс с тестом на отек, вызванный зимозаном (Tarayre et al., 1989). Наконец, мы исследовали активные слои экстракта ЦД, разделенные различными растворителями. '

2. Материалы и методы

2.1. Растительный материал и экстракты

Корневища компакт-диска(Cистанчепустынная)были приобретены на тайваньском рынке и подтверждены профессором MT Hsieh. Образец ваучера (№ CMC-ICPS-000626) был сохранен в гербарии Института китайских фармацевтических наук Китайского медицинского колледжа для дальнейшего использования. Извлечение и изоляция компакт-диска(Cистанчепустынная)последовали за предыдущими сообщениями (Lu, 1998). CD(Cистанчепустынная)экстракта (выход 34,2%) и три слоя*/этилацетатный слой, бутанольный слой и водный слой (их выходы 3,4, 10,2, 30,6%) (сокращенно CDE, CDB и CDW соответственно)*/. приготовление экстрактов.

2.2. Приготовление экстрактов и препарата

CD(Cистанчепустынная)экстракт ({{0}}.1, 0,3, 1 г/кг) и три слоя CD(Cистанчепустынная)экстракты ({{0}}.03, 0.1, 0.3 г/кг) растворяли в 0,5% карбоксиметилцеллюлозе и вводили перорально за 60 мин до к введению индуктора. Ацетилсалициловую кислоту (АСК) (100, 300 мг/кг) и индометацин (ИН ДОЛ) (10 мг/кг) готовили в виде суспензии с 0,5% карбоксиметилцеллюлозой и вводили внутрибрюшинно перед введением индуктора. Налоксон (1 мг/кг) растворяли в физиологическом растворе.

2.3. Животные

Самцов крыс Sprague-Dawley (200-250 г) использовали для изученияанти-воспалительныйвиды деятельности. Самцов мышей ICR (20-25 г) использовали для тестирования обезболивающего действия. Всех животных использовали в экспериментах в соответствии с Руководящими принципами по уходу и использованию лабораторных животных. Перед началом эксперимента их содержали не менее 1 недели в помещении с регулируемой температурой 239°C и влажностью 60% со свободным доступом к стандартной пище в гранулах (поставляемой и разработанной Fwusow Industry Co. LTD., Тайвань). ) и водопроводной воды, при этом поддерживался цикл свет/темнота 12-12 ч (световая фаза: 08:00-20:00 ч). Затем вводили лекарства и анальгетики ианти-воспалительныйанализы проводились двойным слепым методом. После измерения поведения все животные были умерщвлены углекислым газом.

2.4. Антиноцицептивное исследование

2.4.1. Реакция корчей живота, вызванная уксусной кислотой, у мышей

Мышей случайным образом разделили на несколько групп. Каждой мыши вводили внутрибрюшинно 1% раствор уксусной кислоты (10 мл/кг массы тела). Мышей помещали в индивидуальные боксы для наблюдения. Симптомы корчи в животе, вызванные уксусной кислотой, были аналогичны описанным Taber et al. (1969). Контрольные животные получали растворы носителя в тех же экспериментах. Через пять минут после инъекции уксусной кислоты количество реакций корчей на мышь подсчитывали в течение 10 мин во время индуцированных уксусной кислотой корчей живота. Наконец, количество реакций корчей позволило нам выразить процент защиты, используя следующее соотношение: (среднее контрольное — среднее обработанное) /100/среднее контрольное.

2.4.2. Формалин-индуцированная реакция лизания у мышей

Этот метод представляет собой модификацию метода, описанного Shibata et al. (1989). Каждую мышь помещали в камеру наблюдения на прозрачное акриловое дно пластины на 5 мин до инъекции формалина. Под полом большое зеркало было наклонено под углом 45°, чтобы можно было четко наблюдать за лапами животного. Животным вводили 25 мл 1-процентного формалина в правую подподошвенную область. Затем каждое животное возвращали в камеру и наблюдали за двумя отдельными периодами интенсивной реакции вылизывания. Первый период (ранняя фаза) регистрировался 0/5 мин после введения формалина, а второй период (поздняя фаза) регистрировался через 10/35 мин после введения. Время (с), затрачиваемое на облизывание инъецированной лапы, измеряли как показатель болевой реакции.

2.5. Противовоспалительное исследование на крысах

анти-воспалительныйактивность определяли у крыс путем измерения среднего увеличения объема задней лапы после подподошвенной инъекции воспалительных агентов, таких как каррагинан (Winter et al., 1962) или зимозан (Tarayre et al., 1989). Животным вводили 0,1 мл 1-процентного каррагинана или 2-процентного зимозана в правую заднюю лапу под подошвенный апоневроз. Воспаление количественно оценивали в миллилитрах с использованием плетизмометра (7150 Ugo Basile), который регистрировал небольшие различия в уровне воды, вызванные смещением объема. Перед любым лечением определяли средний объем задних лап каждого животного (Vo) по трем измерениям, которые не отличались более чем на 4% (точность прибора). Затем через 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210, 240 мин после введения воспалительных средств определяли средний объем задних лап каждого животного (Vt) при трех измерениях, не отличавшихся более чем от 4 процента.

Процент отека в каждой записи рассчитывали путем сравнения среднего объема задних лап каждого животного (Vt) после инъекции воспалительных агентов со средним объемом задних лап каждого животного (Vo) до любого лечения (Паланихамия). и Нагараджан, 1990). Проценты ингибирования были получены для каждой группы с использованием следующего соотношения: [(Vt-Vo)контроль/(Vt-Vo)обработанный]-100/(Vt-Vo)контроль.

2.6. статистический анализ

Все данные, полученные во время обезболивания ианти-воспалительныйактивность была выражена в терминах средних и стандартных ошибок и дополнительно проанализирована с использованием однофакторного дисперсионного анализа ANOVA с последующим тестом Шеффа. Когда вероятность (P) была меньше 0,05, разница считалась значимой.

3. Результаты и обсуждение

Предварительное лечение животных пероральными дозами ЦД(Cистанчепустынная)экстракт (0.1-1 г/кг) приводил к дозозависимому и значительному ингибированию индуцированной уксусной кислотой реакции корчей (таблица 1) и двухфазных фаз индуцированной формалином реакции вылизывания у мышей ( Рис. 1(А)). Ингибирование, вызванное CD(Cистанчепустынная)экстракта в дозе 1 г/кг на реакцию корчей, вызванную уксусной кислотой, и реакцию вылизывания, вызванную формалином, составляли около 54 и 45 процентов соответственно. Ацетилсалициловая кислота в качестве положительного контроля в дозе 0.1-0.3 г/кг также уменьшала вызванную уксусной кислотой реакцию корчей с ингибированием на 45-64 процентов (таблица 1). Однако другой положительный контроль индометацин в дозе 10 мг/кг ингибировал только позднюю, но не раннюю фазу индуцированной формалином реакции вылизывания у мышей с максимальным ингибированием 32% (рис. 1(А)). Кроме того, только бутанольный и водный слои из трех слоев CD(Cистанчепустынная)экстракт с концентрацией 0.1-0.3 г/кг также вызывал значительное антиноцицептивное действие, и эти обезболивающие эффекты бутанольного слоя были лучше, чем эффекты водного слоя (таблица 1 и рис. 1(B)) . Во-вторых, мы оценилианти-воспалительныйдеятельность компакт-диска(Cистанчепустынная)экстракта и три слоя против классического (каррагинан-индуцированного) и альтернативного (индуцированного зимозаном) образования отеков. Мы нашли этот компакт-диск(Cистанчепустынная)Экстракт в дозе 0.1-1 г/кг также значительно ингибировал образование отека, вызванного каррагинаном, дозозависимым образом, а индометацин в дозе 10 мг/кг также эффективно ингибировал образование отека, вызванного каррагинаном, у крыс (рис. 2). Однако образование отека, вызванное зимозаном, не ингибировалось CD.(Cистанчепустынная)экстракт на уровне 0.1-1 г/кг у крыс (данные не показаны). Кроме того, только бутанольный слой из трех слоев CD(Cистанчепустынная)Экстракт в дозе 0.1-0.3 г/кг также значительно подавлял образование отеков, вызванных каррагинаном, у крыс (рис. 2). Согласно фитохимическим отчетам, актеозид и янтарная кислота, входящие в состав бутанольного слоя CD(Cистанчепустынная)экстракт (Hsu et al., 1994, 1995), обладаланти-воспалительныйактивность в отношении образования химических отеков (Мурай и др., 1995; Кабачный и др., 1987). Исходя из наших текущих данных и других предыдущих отчетов, мы предложили корневища CD(Cистанчепустынная)обладает обезболивающим ианти-воспалительныйактивность у грызунов, а активные компоненты в основном выходят в бутанольном слое ЦД(Cистанчепустынная)извлекать. Являются ли актеозид и янтарная кислота активными ингредиентами CD(Cистанчепустынная), мы выделим и оценим их обезболивающее ианти-воспалительныйактивность в будущем.

Рис. 1. Эффект КД(Cистанчепустынная)экстракт ({{0}}.1, 0,3 и 1 г/кг), этилацетатный, бутанольный и водный слои ЦД(Cистанчепустынная)экстракт (CDE, CDB и CDW) ({{0}}.03, 0.1 и 0.3 г/кг) и индометацин (INDOL, 10 мг/кг) на ранней (0/5 мин) и поздней фазе (10/35 мин) индуцированной формалином реакции лизания у мышей. Каждое значение представлено как среднее9/SE (N/7). *PB/0,05, *** PB/0,001 по сравнению с группой ВЭГ.

Рис. 2. Эффект КД(Cистанчепустынная)экстракт ({{0}}.1, 0,3 и 1 г/кг), этилацетатный, бутанольный и водный слои ЦД(Cистанчепустынная)экстракт (CDE, CDB и CDW) ({{0}}.03, {{10}}.1 и 0,3 г/кг) и индометацин (INDOL, 10 мг/кг) на каррагинан-индуцированный отек лап у крыс. Каждое значение представлено как среднее9/SE (N/6). *PB/0,05, ** PB/0,01 по сравнению с группой ВЭГ

Кроме того, Shibata et al. (1989) предполагают, что ранняя фаза реакции вылизывания, вызванная формалином, была связана с брадикинином и субстанцией Р, а поздняя фаза была связана с брадикинином, аутокринным и простагландином. Наши текущие данные указывают на то, что налоксон не отменяетанти-воспалительныйактивность бутанольного слоя ЦД(Cистанчепустынная)экстракта на обе фазы реакции вылизывания, вызванной формалином (рис. 3), и обезболивающее действие на реакцию корчей, вызванную уксусной кислотой (таблица 1). Таким образом, анальгетик ианти-воспалительныйэффекты бутанольного слоя экстракта ЦД могут быть не связаны с опиоидными рецепторами. Более того, компакт-диск(Cистанчепустынная)Экстракт и его бутанольный слой ингибировали только индуцированное каррагинаном образование отека у крыс. Индуцированный каррагинаном отек из-за инфильтрации полиморфно-ядерных лейкоцитов и активации кининовой системы, особенно брадикинина, отличается от индуцированного зимозаном отека из-за притока моноцитов и активации иммунной системы (Damas et al., 1990; Dawson et al., 1991). Янтарная кислота, входящая в состав бутанольного слоя экстракта CD, ингибирует функцию полиморфноядерных лейкоцитов (Rotstein et al., 1985). Эти результаты показали, что анальгетик ианти-воспалительныйэффекты бутанольного слоя CD(Cистанчепустынная)экстракт может быть связан с кининовой системой, но не с опиоидными рецепторами и иммунной системой, хотя CD(Cистанчепустынная)обладали иммуностимулирующим эффектом (Чин и Су, 1993). Для подробного изучения механизма обезболивания ианти-воспалительныйактивности, мы будем дополнительно исследовать активные слои или ингредиенты экстракта CD.

Цистанхетрубчатыйимеет много эффектов, нажмите здесь, чтобы узнать больше

использованная литература

Arrigoni-Martelli, E., 1985. Фармакология удаления свободных радикалов при воспалении. Международный журнал тканевых реакций 7, 513/519.
Чанг Ю., Ву Х., Ван С.Н., Ченг Х.К., 1995. Исследование сильного воздействияЦистанхепустыняMa., Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck и Cistanche tubulosa (Schenk) R Wight. Китайский журнал китайских материалов и медицины 26, 143/146.
Chin, HL, Su, YC, 1993. Изучение фармакологических эффектовЦистанхепустыняМа. Китайский журнал китайских материалов и медицины 19, 143/146.
Дамас Дж., Бурдон В., Ремакл-Волон Г., Адам А., 1990. Кинины и перитонеальный экссудат, индуцированные каррагенином и зимозаном у крыс. Британский журнал фармакологии 101, 418/422.

Доусон Дж., Седжвик А.Д., Эдвардс Дж.К., Лиз П., 1991. Сравнительное исследование клеточных, экссудативных и гистологических ответов на каррагинан, декстран и зимозан у мышей. Международный журнал тканевых реакций 13, 171/185.

Hsu, WH, Chu, SH, Chao, CH, Hsu, Y., Yuan, KW, Yen, CH, Chi, CY, Chan, C., 1994. Исследование химических составляющихЦистанхепустыняМа. Китайский журнал китайских материалов и медицины 25, 509/513.
Hsu, WH, Chu, SH, Sheng, LC, Yuan, KW, Mao, CN, 1995. Исследование химических компонентов и фармакологических эффектовЦистанхепустыняМа. и Cistanche salsa (CA Mey) G. Beck. Китайские традиционные травяные лекарства 26, 143/146.
Кабачный В.И., Черных В.П., Дроговоз С.М., Голубенко Ю.А., Богуцкая Е.Е., 1987. Поисканти-воспалительныйпрепараты производных гетероиламидов янтарной кислоты. Фармакология и токсикология 50, 94/97.
Ли, С.Л., 1986. Пен-Цао-Кун-Му. Публикации Национального исследовательского института китайской медицины, Тайбэй, с. 20.
Lu, MC, 1998. Исследования седативного эффектаЦистанхепустыня. Журнал этнофармакологии 59, 161/165.
Мураи М., Тамаяма Ю., Нишибе С., 1995. Фенилэтаноиды в траве подорожника ланцетного и ингибирующее действие на отек уха мыши, вызванный арахидоновой кислотой. Планта Медика 61, 479/480.
Palanichamy, S., Nagarajan, S., 1990. Анальгетическая активность экстракта листьев Cassia alata и kemp Eerol 3-0-Sophoroside. Журнал этнофармакологии 29, 73/78.
Rotstein, OD, Pruett, TL, Fiegel, VD, Nelson, RD, Simmons, RL, 1985. Янтарная кислота, побочный продукт метаболизма видов Bacteroides, ингибирует функцию полиморфноядерных лейкоцитов. Инфекция и иммунитет 48, 402/408.
Шибата М., Окубо Т., Такахаши Х., Иноки Р., 1989. Модифицированный формалиновый тест: характерная двухфазная болевая реакция. Боль 38, 347/ 352.
Taber, RI, Greenhouse, DD, Rendell, JK, Irwin, S., 1969. Взаимодействие агонистов и антагонистов опиоидов при растяжении брюшной полости у мышей, вызванном уксусной кислотой. Журнал фармакологии и экспериментальной терапии 169, 29/38.
Тарайр, Дж. П., Делон, А., Алиага, М., Барбара, М., Бруникель, Ф., Кайоль, В., Пюч, Л., Консул, Н., Тисн-Версаль, Дж., 1989.
Фармакологические исследования зимозанового воспаления у крыс и мышей. 1: Индуцированный зимозаном отек лап у крыс и мышей. Фармакологические исследования 21, 375/384.
Winter, CA, Risley, EA, Nuss, GW, 1962. Вызванный каррагинаном отек задней лапы крысы как тест наанти-воспалительныйнаркотики. Труды Общества экспериментальной биологии и медицины 111, 544/547.