Антимеланогенезные и антитирозиназные свойства Pistacia atlantica subsp. mutica на клетках мышиной меланомы B16F10

Контактное лицо: ali.ma@wecistanche.com

Самира Эгбали-Фериз1, Акрам Талегани2, Хади Аль-Наджар3, Сейед Ахмад Эмами1, Хома Рахими4, Джавад Асили1, Самира Хасанзаде1 и Захра Таярани-Наджаран5*

Абстрактный:Pistacia atlantica (P. atlantica) subsp. mutica используется в народной медицине и славится своими целебными свойствами. Целью данного исследования было оценить влияние метанола (MeOH), н-гексана, дихлорметана (CH2Cl2), н-бутанола (BuOH), этилацетата (EtOAc), водных экстрактов и эфирного масла P. atlantica subsp. mutica на синтез меланина и окислительный стресс в клеточной линии меланомы B16F10. Жизнеспособность клеток B16F10 после обработки различными экстрактами растения в возрастающих концентрациях (0,{9}} мкг/мл) измеряли с помощью резазурина. Состав эфирного масла был определен с помощью анализа газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС) и ингибирующего действия на синтез меланина, грибов.тирозиназаактивность, клеточную тирозиназу и окислительный стресс оценивали колориметрическим и флуорометрическим методами. Данные показали, что экстракты при концентрациях 0.2-200 мкг/мл не проявляли значительной токсичности в отношении клеток меланомы, но концентрации эфирного масла 200 мкг/мл оказывали цитотоксическое действие. Pistacia atlantica subsp. mutica может ингибировать грибтирозиназаМероприятия. Также уменьшилось количество меланина в клетках B16F10. Кроме того, способность P. atlantica subsp. mutica в уменьшении количества активных форм кислорода в клетках меланомы.антиоксидантМероприятия. Кроме того, все концентрации эфирного масла не оказали существенного влияния в этом исследовании.меланогенезтормозной иантиоксидантэффекты P. atlantica subsp. mutica на клетках B16F10 может указывать на потенциальную отбеливающую активность растения для использования в дерматологических продуктах по уходу за кожей и для предотвращения старения кожи в косметической промышленности.Ключевые слова:Анти-тирозиназа; Меланогенез; P. atlantica подвид. Мутика.

Нажмите чтобыПольза цистанхе как антиоксиданта

ВВЕДЕНИЕ

Меланин представляет собой кожный пигмент, который синтезируется в меланосомах и переносится в кератиноциты в ходе физиологического процесса, называемогомеланогенез. Меланин играет важную роль в защите от УФ-повреждений и определяет цвет кожи, волос и глаз. Избыточное производство меланина связано с меланомой и аномальной пигментацией кожи (1-3). Ключевым ферментом в биосинтезе меланина является тирозиназа, которая катализирует две отдельные реакции: окисление 3,4-дигидроксифенилаланина (ДОФА) до допахинона и гидроксилирование L-тирозина до ДОФА (4).Тирозиназаили полифенолоксидаза — медьсодержащий фермент со смешанной функцией, обнаруженный в микроорганизмах, животных и растениях (5). Тирозиназа является наиболее влияющим фактором на потемнение фруктов и овощей. Перепроизводство и накопление меланина может привести к большому количеству кожных заболеваний, включая меланодермию, веснушки, солнечный меланоз и пигментные пятна (6). Следовательно,тирозиназаИнгибиторы вызвали большой интерес в пищевой и косметической промышленности. Во многих живых организмах окисление необходимо для производства энергии для подпитки биологических процессов.

Однако перекись водорода (H2O2) и другие активные формы кислорода (АФК) вызывают гибель клеток и повреждение тканей при многих физиологических и патологических явлениях, включая увеличение АФК после УФ-облучения в процессе меланогенеза. Кроме того, хорошо известно, что УФ-индуцированная продукция АФК участвует в патогенезе ряда кожных заболеваний, включая старение, морщины, фоточувствительность и злокачественные новообразования (7). Таким образом, поиск природных источниковантиоксидантыс анти-тирозиназаактивность помогает модифицировать повреждения кожи, связанные с избыткоммеланогенез (4).

Род Pistacia является членом семейства Anacardiaceae, включающего около 9 видов, и в основном распространен в Средиземноморье, Европе и некоторых частях Азии (8,9). Pistacia atlantica (P. atlantica) Desf. имеет 3 подвида, а именно: P. atlanticasubsp. курдика (Зохары) Реч. ф., P. atlanticasubsp. mutica (Fischer & CA Meyer) Rech. ф. и P. atlantica subsp. cabulica (Запасы) Реч. ф. Три упомянутых подвида P. atlantica, P. khinjuk Stocks и P. vera L. выращивают в Иране (10). Плоды P. atlanticasubsp. mutica, а именно Baneh, имеет форму от круглой до овальной с диаметром 0,5-0,7 см. Антиоксидантная и противораковая активность оболочки P. atlantica связана с высоким общим содержанием фенолов в растении. P. atlantica традиционно используется для облегчения дискомфорта и боли в верхней части живота, диспепсии и язвенной болезни (11-13). Однако исследований ингибирующей меланогенез активности P. atlantica subsp. Мутика. Итак, в данном проекте мы выбрали клетки меланомы B16F10 для изучения антиоксидантных и антимеланогенных свойств P. atlantica subsp. экстракты мутика. Целью данного исследования было изучение ингибирующего действия метанола (MeOH), н-гексана, дихлорметана (CH2Cl2), н-бутанола (BuOH), этилацетата (EtOAc), водного (H2O) экстрактов и эфирного масла P. атлантикаподвид. Мутика фрукты намеланогенези оценить возможностиантиоксидантмощности установки на клетках меланомы B16F10.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Химикаты

Грибтирозиназаиз Agaricus bisporus, койевая кислота, резазурин, L-3,4-дигидроксифенилаланин (L-DOPA), дихлордигидрофлуоресцеиндиацетат (DCFH-DA), эгтазовая кислота (EGTA), диметилсульфоксид (ДМСО ), фенилметилсульфонилфторид, глицерофосфат, -меркаптоэтанол, фосфатно-солевой буфер (PBS), ортованадат натрия, трис-буферный раствор твин 20 (TBST), приобретенный у Sigma (США). Фетальную бычью сыворотку (FBS), пенициллин, стрептомицин и трипсин-ЭДТА получали от GibcoBRL (Гранд-Айленд, США). Клеточная линия меланомы (B16F10, кат. № C540) была приобретена в Институте Пастера Ирана (Тегеран, ИР Иран). Все остальные химикаты и растворители были от Merck (Германия).

Приготовление экстрактов

P. atlantica подвид. mutica был собран в мае 2014 г. в горах Бардаскан, провинция Хорасан-Разави, на северо-востоке Ирана и идентифицирован г-жой М. Сузани. Ваучерный образец (№: 13069) был депонирован в гербарии Школы фармации Мешхедского университета медицинских наук, Мешхед, ИРИ, Иран. Незрелые плоды P. atlantica subsp. mutica (200 г) измельчали ​​в блендере (Toos chekan Co, IR, Иран), а затем перколировали с МеОН при комнатной температуре в течение 24 ч в соответствии с ранее опубликованным протоколом (14). После экстракции растворитель выпаривали на роторном испарителе, а затем сушили вымораживанием. Экстракт метанола (94 г) далее фракционировали путем распределения растворитель-растворитель с получением пяти различных фракций, включая MeOH, н-гексан, CH2Cl2, BuOH, EtOAc и H2O.

Выделение эфирного масла

Незрелые плоды P. atlantica subsp.mutica (15{3}} г) подвергали гидродистилляции на аппарате типа Клевенджера в течение 3 ч. Было получено бесцветное масло с выходом 0,8% (по объему). Полученное эфирное масло сушили над безводным сульфатом натрия и хранили при 4 градусах в темноте до дальнейших испытаний.

Газовая хроматография и газовая хроматография-масс-спектрометрия

Газохроматографический (ГХ) анализ выполняли с использованием Varian CP{{0}}, оснащенного детектором FID, сопряженным с колонкой из плавленого кварца (CP-Sil 8CB, 50 м × 0,25). мм, толщина пленки 0,12 мкм) при следующих условиях: температура печи 50-250 град со скоростью 3 град/мин; температура инжектора 260 градусов, коэффициент разделения 1:5, с газом-носителем, скорость потока N2 2 мл/мин; температура детектора 280 градусов.

Анализы методом газовой хроматографии-массы (ГХ-МС) выполняли с использованием аппарата Agilent 5975, оснащенного колонкой HP-5 MS (30 м × 0, 25 мм внутр. диаметра, {{ 14}} толщина пленки 0,25 мкм), сопряженный с четырехкратным масс-детектором и компьютером, оснащенным библиотекой Wiley 7n.L. Температура печи 50-250 градусов со скоростью 3 градуса/мин, температура инжектора 250 градусов, объем впрыска: 0,1 мкл, раздельный ввод с коэффициентом деления 1:50, расход газа-носителя (гелия) 1 мл/мин. мин., источник ионов: 70 эВ, ток ионизации: 150 мкА, диапазон сканирования: 35-465. Идентификацию компонентов эфирного масла проводили на основе удерживающей газовой хроматографии, полученной со ссылкой на ряд н-алканов (C6-C20) на колонке HP-5MS, сравнение их масс-спектров и картины фрагментации приведены в литературе и компьютерное сопоставление с библиотекой Wiley 7n.L (15). Количественную оценку относительного количества отдельных компонентов незрелых плодов проводили методом процента площади без учета калибровочного коэффициента.

Культура клеток

Клеточная линия меланомы B16F10 выдерживалась при температуре 37 градусов во влажной атмосфере (90 процентов), содержащей 5 процентов CO2. Клетки культивировали в среде RPMI-1640 (Bioidea, Иран) с 10% (об./об.) FBS, 100 МЕ/мл пенициллина и 100 мкг/мл стрептомицина. Исходный раствор P. atlantica subsp. mutica готовили в концентрации 50 мкг/мл в ДМСО и хранили при температуре -40. В качестве положительного контроля во всех экспериментах использовали койевую кислоту (2 и 4 мМ). Клетки культивировали в 96-луночных планшетах с плотностью 105 клеток/мл. Активность экстракта в каждом эксперименте рассчитывали по следующей формуле:

��процент активности=Поглощение образца/Абсорбция контроля*100

Анализ жизнеспособности клеток

Резазурин — это индикатор здоровья клеток, использующий восстанавливающую способность живых клеток и преобразующийся в резоруфин. Резазурин представляет собой синее, нетоксичное, нефлуоресцентное и проникающее в клетки соединение, которое в живых клетках превращается в красный цвет и в сильно флуоресцентный резоруфин (16). Около 104 клеток меланомы B16F10 высевали в каждую лунку 96-микролуночного планшета и обрабатывали различными концентрациями экстрактов и эфирного масла P. atlantica subsp. mutica (0,2-200 мкг/мл). После 4-часовой инкубации измеряли поглощение резазурина и резоруфина при 570 нм и 600 нм с помощью многорежимного считывателя микропланшетов H4 Hybrid (BioTek, Winooski, США). Каждый эксперимент проводили в трехкратной повторности. Полумаксимальную ингибирующую концентрацию (IC50) рассчитывали с использованием программного обеспечения GraphPad по кривой зависимости концентрации от эффекта: логарифм концентрации по сравнению с реакцией.

Анализ активности тирозиназы грибов

Деятельность гриба.тирозиназапри окислении L-ДОФА измеряли спектрофотометрически, как описано ранее (17), с некоторыми модификациями. Вкратце, 160 мкл 5 мМ L-DOPA (в 100 мМ буфере фосфата натрия, рН 6,8) и 20 мкл того же буфера с P. atlanticasubsp и без него. mutica и эфирное масло (10-1000 мкг/мл) смешивали с 20 мкл грибной тирозиназы (200 единиц/мл) и затем инкубировали при 37°С в течение 30 мин. Поглощение измеряли при 475 нм с помощью многорежимного считывателя микропланшетов Synergy H4 Hybrid (BioTek, Winooski, США).

Определение содержания меланина в клетках меланомы

Клетки меланомы, B16F10, высевали при плотности 105 клеток на лунку в 96-луночные культуральные планшеты и инкубировали в течение 24 часов. Затем их инкубировали с различными концентрациями (0,2-200 мкг/мл) P. atlantica subsp. экстракты мутика и эфирное масло в течение 24 часов. Содержание меланина измеряли, как описано ранее (18). После обработки клетки собирали с помощью трипсина. Их промывали PBS. Осадки клеток солюбилизировали в 50 мкл раствора гидроксида натрия (2 М) в течение 60 мин при 60°С. Содержание меланина измеряли путем измерения поглощения при 405 нм с помощью многорежимного считывателя микропланшетов Synergy H4 Hybrid (BioTek, Winooski, США).

Анализ активности клеточной тирозиназы

Окисление ДОФА до ДОФА хрома анализировали спектрофотометрически как индикатортирозиназадеятельность (18). 106 клеток меланомы B16F10 высевали в каждую лунку 96-луночного планшета в течение ночи. После обработки клеток различными концентрациями (0,2-200 мкг/мл) P. atlantica subsp. экстракты mutica и эфирное масло в течение 24 ч. Клетки открепляли с помощью трипсина; промывали PBS и лизировали 50 мкл натрий-фосфатного буфера (pH 6,8, 100 мМ), содержащего 1 процент тритона X-100 и 0,1 мМ фенилметилсульфонилфторида. Лизаты центрифугировали при 10{17}} об/мин в течение 20 мин при 4°С. 100 мкл каждого лизата (каждый содержит 100 мг белка) смешивали с 30 мкл 5 мМ ДОФА в 96-луночном планшете и инкубировали при 37 градусах в течение 2 часов, оптическую плотность измеряли при 475 нм с помощью многорежимного считывателя микропланшетов Synergy H4 Hybrid. (BioTek, Winooski, США).

Определение уровня клеточных активных форм кислорода

Уровень активных форм кислорода измеряли, как описано ранее с небольшими изменениями (19). Клетки меланомы, B16F10, (2 × 104) высевали в 96-луночные планшеты в течение ночи, а затем обрабатывали различными концентрациями (0,2-200 мкг/мл) P. atlantica subsp. . экстракты мутика и эфирное масло в течение 24 часов. Затем клетки инкубировали с 50 мкл H2O2 (24 мМ) при 37°С в течение 30 мин. Затем к клеткам добавляли 50 мкл DCFH-DA и измеряли интенсивность флуоресценции DCF при эмиссии 504 нм и возбуждении 524 нм с помощью ридера микропланшетов Synergy H4 (BioTek, США).

Вестерн-блоттинг анализ

Клетки меланомы B16F10 культивировали в колбах объемом 75 см3 с метанольным экстрактом и без него (0.5-100 мкг/мл) в течение 24 часов. Затем клетки лизировали в буфере (50 мМ трис-HCl, pH 7,4, 2 мМ EGTA, 1 мМ фенилметилсульфонилфторид, 10 мМ глицерофосфат, 10 мМ -меркаптоэтанол, 1 мМ ортованадат натрия, 0,1% дезоксихолевая кислота. натриевая соль). Равное количество белков (50 мкг) наносили на электрофорез в 12-процентном додецилсульфате натрия (SDS) в полиакриламидном геле и переносили на поливинилидендифторидные мембраны. Мембраны блокировали в течение 2 ч в 10% обезжиренном молоке в буфере TBST (20 мМ трис-HCl pH 7,4, 100 мМ NaCl и 0,1% твин 20) при комнатной температуре. После промывки буфером TBST мембрану инкубировали в течение ночи с первичными антителами: 1:300 (кроличьи анти-тирозиназаантитело (Santa Cruz Biotechnology, CA)). После 3-кратной промывки буфером TBST мембраны затем инкубировали в течение 2 ч с анти-кроличьим IgG (1:2000) в качестве вторичного антитела (клеточная сигнализация). Повторяли 3-кратную промывку буфером TBST, и полосы белка выявляли с помощью системы детекции методом вестерн-блоттинга с усиленным хемилюминесцентным (ECL) прайм-блоттингом (BioRaD, США) (20). Антитело к - -актину использовали в качестве контроля загрузки.

статистический анализ

Относительные результаты экспериментов были представлены как среднее ± стандартное отклонение трех независимых измерений. Дисперсионный анализ и вычисление IC50 выполняли с помощью GraphPad Prism 6.0 с использованием одностороннего теста ANOVA, а средние значения сравнивали с помощью тестов Даннета. P <0,05 означает="" статистически="" значимое="" различие="" между="" клетками,="" обработанными="" экстрактом,="" и="" контролем.="" двусторонний="" тест="" anova="" и="" пост-тест="" сравнения="" бонферрони="" использовали="" для="" сравнения="" эффекта="" различных="" экстрактов="" в="" каждом="">

ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ

Состав эфирного масла

Для количественного определения использовали газовую хроматографию, а для идентификации соединений – Gc-Mass. Результаты анализа ГХ и ГХ-МС представлены в таблице количественной и качественной идентификации соединений. В случае P. atlanticasubsp. mutica, в эфирном масле было идентифицировано 68 компонентов, которые составляли 99,8% от общего состава масла (таблица 1). Сгруппированные соединения эфирного масла были определены как монотерпеновые углеводороды 86,5 процента, оксигенированные монотерпены 3,7 %, сесквитерпеновые углеводороды 8,7 %, оксигенированные сесквитерпены 0,1 % и прочие 0 0,8 процента. Основными компонентами эфирного масла были -E-оцимен 29,7%, мирцен 17,1%, -Z-оцимен 17,0%, -пинен 10,2% и E-кариофиллен 7,1%.

Влияние экстрактов на выживаемость клеток

Жизнеспособность клеток контролировали с помощью резазурина. Клетки меланомы, B16F10, высевали в 96-луночный планшет. Через 24 часа клетки обрабатывали различными концентрациями ({9}}.2-200 мкг/мл) P. atlantica subsp. mutica результаты показали, что экстракты не оказывали значительного цитотоксического действия на клетки B16F10 в концентрациях, использованных в этом исследовании (рис. 1). Доксорубицин в качестве положительного контроля значительно индуцировал гибель клеток (P <>

Влияние экстрактов на активность тирозиназы грибов

Оценивали влияние P. atlantica на ингибирование тирозиназы грибов при окислении L-ДОФА. Результаты показали, что грибтирозиназаактивность ингибировалась всеми различными экстрактами, но концентрация 1000 мкг/мл экстракта н-гексана не оказала существенного влияния в этом тесте. В качестве положительного контроля использовали койевую кислоту (2 и 4 мМ) (P < 0,05)="" (рис.="">

Влияние экстрактов и эфирного масла на синтез меланина

Для изучения действия различных экстрактов и эфирного масла P. atlantica subsp. mutica на синтез меланина, оценивали содержание меланина в обработанных экстрактом клетках меланомы B16F10. В качестве положительного контроля использовали койевую кислоту (2 и 4 мМ).

Результаты показали, что экстракты MeOH, CH2Cl2 и EtOAc (0.2-200 мкг/мл), н-гексан (2-200 мкг/мл) и экстракт H2O (20 мкг/мл }} и 200 мкг/мл) оказывали ингибирующее действие на синтез меланина (P < 0,05)="" (рис.="" 3).="" однако="" все="" концентрации="" эфирного="" масла="" и="" экстракта="" buoh="" не="" оказывали="" существенного="" ингибирующего="" действия="" на="" синтез="" меланина.="" результаты="" эфирного="" масла="" не="" показаны="" на="">

Влияние экстрактов на клеточную тирозиназную активность

Для оценки механизма ингибирующего действия P. atlantica subsp. экстракт мутика намеланогенезв частности, мы оценили внутриклеточноетирозиназаактивность в клетках меланомы B16F10. Результаты показали, что экстракты MeOH, EtOAc и BuOH (0,2-200 мкг/мл), н-гексана (0,2 мкг/мл) и CH2Cl2 (20 и 200 мкг/мл) экстракты P. atlantica subsp. mutica может значительно ингибировать активность клеточной тирозиназы (P <0,05) (рис.="" 4),="" но="" водный="" экстракт="" не="" оказывает="" ингибирующего="" действия="" на="" активность="" клеточной="">

Влияние экстрактов на уровень активных форм кислорода в клетках

Уровень внутриклеточных АФК свидетельствует оантиоксидантемкость P. atlantica subsp.mutica измеряли в клетках, обработанных только 24 мМ H2O2 или различными экстрактами в клетках меланомы B16F10. Результаты показали, что все концентрации экстрактов P. atlanticasubsp. mutica, за исключением 0.2 мкг/мл экстракта CH2Cl2, может значительно подавлять окислительный стресс, вызванный H2O2 (P <0,05) (рис.="">

Влияние экстрактов на уровень клеточного белка тирозиназы

Внутриклеточный эффект P. atlanticasubsp. mutica на связанные с меланогенезом белки, такие как тирозиназа, в качестве индикаторамеланогенезоценивали вестерн-блоттингом. Как показано на рис. 6,тирозиназауровни белка были значительно снижены у P. atlantica subsp. обработка экстрактом mutica в концентрации {{0}},5 и 10 мкг/мл (P <0,05). -актин="" использовали="" в="" качестве="" внутреннего="">

Влияние эфирного масла на разные параметры

Эфирное масло в концентрации 0.2-200 мкг/мл не оказывало существенного влияния на все вышеперечисленные параметры, за исключением концентрации 200 мкг/мл, которая оказывала цитотоксическое действие на клетки меланомы. Следовательно, результаты по эфирному маслу не включены в раздел результатов, поскольку не наблюдалось ингибирующего действия.

ОБСУЖДЕНИЕ

Косметические средства на натуральной основе широко рекламируются коммерческими агентствами за их безопасность и многофункциональное действие. Поиск новых антимеланогенных агентов сантиоксидантактивности из природных источников является одним из интересов в рецептуре продуктов, используемых для нарушений гиперпигментации. В лекарственных и косметических продуктах, используемых в качестве средств для отбеливания кожи, ингибирование образования меланина, удаление свободных радикалов и ингибированиетирозиназаактивность, которая важна для лечения сопутствующих кожных заболеваний (21).

В этом исследовании антиоксидантная активность различных экстрактов P. atlantica subsp. mutica оценивали и анализировали их влияние на активность тирозиназы и синтез меланина. Экстракты MeOH и EtOAc P. атлантика подвид. mutica показал значительныйантиоксидантактивность при 2, 20 мкг/мл и 20, 200 мкг/мл, что может быть связано с полифенолами и флавоноидами, широко распространенными в растении. Результаты показали, что все экстракты, особенно экстракты MeOH, EtOAc и H2O, могут значительно ингибировать рост грибов.тирозиназаМероприятия. Кроме того, экстракты MeOH, EtOAc и BuOH способны снижать клеточную тирозианную активность, что соответствует снижению выработки меланина в клетках. В этом исследовании все концентрации эфирного масла не оказывали значительного ингибирующего действия на клеточную тирозианзу, синтез меланина иантиоксидантМероприятия. В связи с большей активностью экстракта МеОН в различных экспериментах по сравнению с другими экстрактами мы выбрали указанный экстракт для вестерн-блоттинга. Таким образом, антимеланогенный эффект этого экстракта был подтвержден во всех анализах на клетках B16F10 и сопоставим с положительным контролем койевой кислоты (таблица 2).

Экстракты MeOH, CH2Cl2 и EtOAc снижают клеточнуютирозиназаактивность, содержание меланина и АФК. Фракции полуполярной природы могут извлекать фитохимические вещества, ответственные за антимеланогенную активность, такие как полифенолы и флавоноиды. Фракция н-гексана и эфирное масло были менее активны, что свидетельствует о том, что растительные фитохимические вещества неполярной и летучей природы не оказывают существенного влияния намеланогенезпроцесс (22,23).

Полифенолы и флавоноиды действуют как ингибиторы образования АФК и могут быть ответственны за антимеланогенные свойства растительных экстрактов (24-27). Основные соединения в экстракте P. atlantica subsp. mutica являются кверцетин, лютеолин, изокверцетин, рутин, 7-лактат лютеолина и фенольные соединения, такие как п-кумаровая кислота, кофейная кислота и галловая кислота, которые ответственны заантиоксидантактивность (28). Сообщалось, что рутин ингибирует активность тирозиназы и является мощным антипигментным средством благодаря наличию гидроксильных групп (29). Интересно, что кверцетин, лютеолин и изокверцетин также имеют в своей структуре много гидроксильных групп, что делает их подходящими для взаимодействия с тирозиназой, что приводит к антитирозиназной активности (21,30). Недавно было показано, что эффекты флавоноидов, таких как лютеолин и кверцетин, в основном опосредованы модуляцией транскрипционного факторамеланогенез-ассоциированный фактор транскрипции (MITF) и/или ферменты меланогенезатирозиназа, DCT или родственный тирозиназе белок 1 (TYRP-1) (31). P-кумаровая кислота и кофейная кислота ингибировали активность тирозиназы грибов и были в 10- и 3- раза более эффективны, чем койевая кислота (32).

Галловая кислота проявляет ингибирующую тирозиназу активность и восстанавливает допахинон обратно до L-ДОФА посредством окислительно-восстановительного цикла, подобно аскорбиновой кислоте (33). Точно так же в настоящем исследовании P. atlantica subsp. mutica снижал уровень белка тирозиназы в клетках, что сильно коррелирует с присутствием в растении кверцетина, лютеолина, изокверцетина, рутина и других полифенолов.

Есть много сообщений о растениях, обладающих антимеланогенной и антиоксидантной активностью, которые уменьшают окислительный стресс, что может иметь большой потенциал для лечения кожных заболеваний. Например, различные экстракты надземных частей P. atlantica уменьшали окислительный стресс, что может быть связано с полифенолами, флавоноидами и антоцианами, широко распространенными в растении (34). В другом исследовании экстракт МеОН из P. vera снижал секрецию меланина, что было приписано некоторымантиоксидантсоединений в этом растении. Это исследование показало, что койевая кислота в качестве положительного контроля показала значение IC50 0,05 мг/мл, а более высокие концентрации P. vera можно использовать в качестве эффективного средства для лечения кожных заболеваний, таких как рак меланомы (35). ). Гурин и др. показали, что надземные части P. atlantica обладают мощными антиоксидантными свойствами (36). Кроме того, фракции Nepeta satureioides, содержащие MeOH и CH2Cl2, указывают на потенциальное влияние на выработку меланина в клетках меланомы B16F10 и могут вносить вклад в косметические рецептуры средств по уходу за кожей (37). Производные койевой кислоты обладают ингибирующей активностью в отношениитирозиназа. По-видимому, наличие свободной гидроксильной группы и метильного заместителя в этом соединении подтверждает ингибирующую активность. В этом исследовании койевая кислота (положительный контроль) показала значение IC50, равное 0,28 мМ (38). Фенилпропаноидные гликозиды и флавоноиды, выделенные из Teucrium polium L. var. gnaphalodes показали антиоксидантную и ингибирующую тирозиназу активность. Авторы показали, что джаранол показал самую высокую ингибирующую активность в отношении тирозиназы (IC50 0,041 мМ), а полиумозид оказался лучшим антиоксидантом среди протестированных соединений. Койевая кислота показала значение IC50 0,02 мМ (39).

Снижение уровня белка втирозиназаP. atlantica subsp. Мутика иантиоксидантсвойства и снижение АФК подтвердили использование этого агента в качестве агента против меланогенеза. Это исследование впервые определило ингибирующее действие P. atlanticasubsp. Мутика намеланогенезв клетках меланомы B16F10. Чтобы предотвратить накопление и перепроизводство меланина в коже, ингибированиетирозиназаимеет важную роль. Следовательно, что касается сообщаемого антиоксидантного действия P. atlantica subsp.mutica, флавоноиды и фенольные соединения являются важными компонентами растения, ответственными за антимеланогенезную и антитирозиназную активность P. atlantica subsp. Мутика. Как антиоксидантная, так и антимеланогенная активность P. atlantica subsp. mutica может быть подходящим агентом для составов для отбеливания кожи и может быть включена в составы косметических продуктов для ухода за кожей.

ВЫВОД

В заключение, это исследование впервые показало, что экстракты MeOH и EtOAc P. atlantica subsp. Мутика имеет сильныйтирозиназаингибирующая активность, которая соответствует уменьшению меланина. Более того, P. atlanticasubsp. mutica также продемонстрировал высокую очистительную активность иантиоксидантсвойствами, которые можно объяснить главным образом высоким содержанием флавоноидов и полифенолов. Результаты показали, что способность P. atlanticasubsp. mutica для снижения выработки меланина может коррелировать с истощением клеточных АФК и его ингибирующим действием на сигнальный путь, регулирующийтирозиназаМероприятия. Поскольку семиполярный экстракт обладал значительными антитирозиназными и антитирозиназнымимеланогенныйэффекты, поэтому мы заключаем, что соединения, ответственные за эти эффекты, накапливаются в экстракте, а не в эфирных маслах.