Различия в составе и лечебной эффективности сырья и продуктов паровой обработки вина из цистанчи Herba

Абстрактный:

ЦельСравнить изменения химического состава и лечебной эффективности Руконгронга (Cistanches Herba) до и после обработки, чтобы уточнить принцип тушения с вином.

Методы ЖХ-МС применялись для определения типов химического состава до и после приготовления Cistanches Herba в сочетании с многомерным статистическим анализом для обнаружения несоответствия компонентов до и после тушения с вином. Разница в эффективности была доказана на крысиной модели дефицита Ян гидрогенизированного кортизона в почках.

РезультатыВсего было идентифицировано 45 химических компонентов.Образцы цистанчей Herba; Соединения способствовали различиям междуCistanches Herba и цистанчи Herba, тушеные в винеявляютсяэхинакозидвербаскозид, изоактеозид и тубулозид B; Общий экстракт фенилэтаноидных гликозидов Cistanches Herba оказывает лучший эффект на улучшение состояния крыс с дефицитом Ян в почках, чем тушеные в вине Cistanches Herba. Вывод. Состав цистанхе меняется после тушения с вином, и усиливается эффект на дефицит Ян в почках. Ингредиентами преображения из Cistanches Herbato, тушеных в вине Cistanches Herba, могут быть активные ингредиенты, укрепляющие почки и поддерживающие Ян.

Ключевые слова: Цистанчес Херба; цистанчес Херба, тушеный в вине;недостаточность Ян в почках;эхинакозид;вербаскозид; изоактеозид тубулозид B

ПРОДАЕТСЯ ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННАЯ ТРАВА ЦИСТАНЧА

Служба поддержки Wecistanche

Электронная почта:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Телефон:+86 15292862950

Он известен как «женьшень» и в основном распространен во Внутренней Монголии, Нинся (Азуци), Ганьсу (Чанма), Синьцзяне и других регионах [1]. Цистанхе теплый по своей природе, сладкий и соленый на вкус, проникает в меридианы почек и толстого кишечника. Он питает печень и почки, приносит пользу эссенции и крови, увлажняет кишечник и облегчает запоры. Его можно использовать при дефиците Ян в почках, импотенции и бесплодии, болезненности талии и коленей, слабости мышц и костей, сухости кишечника и запорах [2]. Современные исследования показывают, что мясистые стебли с чешуйчатыми листьями цистанхе в основном содержат различные химические компоненты, такие как гликозиды фенилэтанола, терпены циклопентанового эфира и их гликозиды, лигнаны, сахара и т. д. [3], и обладают множественными фармакологическими эффектами, такими как:против старения,антиоксидант,против слабоумия,против усталости, а также увлажнение кишечника и облегчение запоров [4].

После тушения в вине тонизирующий эффект цистанхе усиливается. Принцип обработки четко не объяснен. Фан Янан и др. [5-7] изучали влияние Цистанхе на дефекацию крыс, иммунную функцию, кишечные нейротрансмиттеры и связанную с ними экспрессию генов до и после обработки. Да и др. использовал влияние фенилэтанолгликозидов до и после обработки, чтобы объяснить принцип его обработки; Чжан Чао и др. [8] использовали изменение содержания фенилэтанолгликозидов до и после обработки для объяснения принципа обработки; Чжан Шуюн и др. [9] использовали изменения содержания бетаина до и после обработки, чтобы объяснить влияние обработки на Cistanche. Существующая литература по обработке Цистанхе в основном сосредоточена на фармакологии, а исследования компонентов также сосредоточены на изменении содержания конкретных компонентов, при этом отсутствует систематическое изучение различий компонентов. В этом эксперименте использовалась технология жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС) в сочетании с многомерным статистическим анализом для идентификации химических компонентов цистанха, поиска маркеров различия между сырым цистаншем и продуктами, приготовленными в вине, а также для изучения разницы в эффективности цистанхе. сырой цистанхе и тушеные в вине продукты на крысиной модели дефицита ян в почках, вызванного гидрокортизоном, чтобы объяснить материальную основуЦистанхе тонизирует почки и усиливает Ян.и принцип обработки цистанхе, тушеной в вине.

ПРОДАЕТСЯ ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННАЯ ТРАВА ЦИСТАНЧА

1 Материалы

1.1 Инструменты

Масс-спектрометр высокого разрешения с тандемной ионной ловушкой электростатического поля Ultimate 3000 UPLC-LTQ Orbitrap XL (Thermo Fisher Scientific, США), рабочая станция Theraio Xcaliber; электронные весы BT125D 1/100000 (Sartorius Instrument System, Германия); Ультразвуковой очиститель с ЧПУ KQ500DE (Kunshan Ultrasonic Instrument Co., Ltd.); высокоскоростной диспергатор XHF-D (Guangzhou Hu Ruiming Instrument Co., Ltd.); Ридер микропланшетов Multiskan FC (Thermo Scientific); высокоскоростная центрифуга HC-3518 (Anhui Zhongke Zhongjia Scientific Instrument Co., Ltd.); BW-YLS-1B многофункциональный регистратор произвольной активности крыс (Shanghai Ruanlong Technology Development Co., Ltd.).

1.2 Наркотики

Метанол масс-спектрометрической чистоты (Fisher); муравьиная кислота масс-спектрометрического качества (массовая доля 99%, Sigma Aldrich); вода (дистиллированная вода Watsons); Jinkui Shenqi Pills (фармацевтическая фабрика Beijing Tongrentang Technology Development Co., Ltd., номер партии 1701653); натриевая соль гидрокортизона сукцината (Tianjin Biochemical Pharmaceutical Co., Ltd., номер партии 011705067); набор супероксиддисмутазы (SOD) (номер партии 20170115) и набор малонового диальдегида (MDA) (номер партии 20170117) были приобретены у Nanjing Jiancheng Biotechnology Co., Ltd.; Тестостерон (Т) и эстрадиол (Е2) определялись в Центре контроля качества Циндао Кэчуан, а креатинин (CREA) и азот мочевины крови (АМК) определялись в Центре анализа и тестирования Медицинского университета Внутренней Монголии.

1.3 Животные

100 крыс-самцов SD весом 180-200 г были приобретены на экспериментальной животноводческой ферме Синлун в районе Хайдянь, Пекин, номер лицензии: SCXK (Пекин) 2016-0003. Этот эксперимент на животных был одобрен Комитетом по этике Пекинского университета китайской медицины, номер этики: BUCM-4-2022091301-3095.

1.4 Образцы

Шесть партий Cistanche Deserticola были признаны подлинными профессором Ли Сянри из Школы китайской медицины Пекинского университета китайской медицины и были получены из высушенных мясистых стеблей с чешуйчатыми листьями Cistanche Deserticola YC Ma, растения семейства Orobanchaceae. Подробная информация об образцах представлена ​​в таблице 1.

Таблица 1. Информационный листок образцов Cistanches Herba

2 метода

2.1 Подготовка проб

2.1.1 Подготовка сырья Возьмите чистую цистанхе пустынную, размягчите, нарежьте толстыми ломтиками и высушите.

2.1.2 Приготовление винно-тушеных изделий

Возьмите 100 г ломтиков Cistanche Deserticola, добавьте 30 мл рисового вина, хорошо перемешайте и тушите до тех пор, пока вино не впитается. Потушите его в воде 12 ч, достаньте, дайте немного остыть и обсушите. На рисунке 1 показаны образцы сырого Cistanche Deserticola и тушеного в вине Cistanche Deserticola.

2.2 Исследование разницы компонентов Cistanche Deserticola до и после тушения в вине

2.2.1 Приготовление раствора

Возьмите примерно {{0}},2 г сухого порошка образца (пропущенного через сито 65-), аккуратно взвесьте, поместите в коричневую мерную колбу емкостью 50 мл, добавьте 25 мл 50% метанола. водный раствор, плотно закупорить, взвесить массу, выдержать 30 минут, обработать ультразвуком 40 минут (мощность 250 Вт, частота 35 кГц), остудить, еще раз взвесить, добавить 50% водный раствор метанола для восполнения потерянной массы, встряхнуть хорошо, дайте постоять, отфильтруйте надосадочную жидкость через микропористую фильтрующую мембрану с размером пор 0,22 мкм и поместите фильтрат в коричневую бутылку с жидкой фазой, чтобы получить раствор.

ПРОДАЕТСЯ ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННАЯ ТРАВА ЦИСТАНЧА

2.2.2 Хроматографические условия

Хроматографическая колонка Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 (100 мм×2,1 мм, 1,7 мкм), температура колонки 35 градусов; температура в камере для пробы 10 градусов, объем ввода пробы 3 мкл, метанол (A)-0.1% водный раствор муравьиной кислоты (B) в качестве подвижной фазы, градиентное элюирование: 0-4 мин, 10%{ {13}}% метанола; 4-18 мин, 26%-40% метанола; 18-24 мин, 40%-100% метанола; 24-28 мин, 100% метанол. Объемная скорость потока составляла 0,3 мл/мин, длина волны регистрации — 330 нм.

2.2.3 Условия масс-спектрометрии

Использовался источник ионизации электрораспылением (ESI), сканирование в режиме отрицательных ионов, температура капилляра 350 градусов, объемный расход окружающего газа 30 усл, объемный расход вспомогательного газа 10 усл, напряжение распыления 3.

КВ, напряжение капилляра -35 В, напряжение линзы трубки -110 В, диапазон сканирования m/z 100-1 000, система сбора данных - Xcalibur 2.1.

2.2.4 Анализ главных компонентов (PCA)

После получения двумерной матрицы точных пар данных о массе и времени удерживания на приборной панели отобразится вся автоматически импортированная точная информация о времени удерживания, а для анализа будет использоваться метод PCA модуля расширенной статистики.

2.2.5 Дискриминантный анализ по ортогональному частичному методу наименьших квадратов (OPLS-DA) LCMS сочетает в себе высокую степень разделения жидкостной хроматографии с высокой чувствительностью масс-спектрометрии. Собранные данные довольно велики, и для их обработки требуется многомерный статистический анализ. OPLS-DA делит данные на две группы и использует контролируемую статистическую модель для получения большого количества ортогональных спектров, которые четко показывают различия между двумя группами образцов. В дополнительном формате рисунка S-Plot каждая точка представляет точную пару данных о времени удерживания массы, ось X представляет переменную, чем дальше точка данных находится от нулевой точки, тем больше вклад точки в разность выборки. ; На оси Y представлена ​​корреляция между образцами в одной группе образцов. Чем дальше пара точных данных о массе и времени удерживания от нулевой точки, тем сильнее корреляция. Таким образом, пары данных времени удерживания с точной массой на обоих концах S-образной кривой представляют собой наиболее надежные характеристические ионы из каждой группы образцов.

ПРОДАЕТСЯ ВЫСОКОКАЧЕСТВЕННАЯ ТРАВА ЦИСТАНЧА

2.2.6 Масс-спектрометрический анализ структуры

После получения характеристических ионов был выполнен элементный состав и сопоставление соединений путем расчета точной относительной молекулярной массы и объединения существующей базы данных и соответствующей литературы для идентификации дифференциальных компонентов.

2.3 Исследование разницы в эффективности до и после тушения с вином

2.3.1 Получение экстракта Cistanche Deserticola

Cistanche Deserticola (номер партии 160901) и соответствующий тушенный в вине порошок Cistanche Deserticola экстрагировали в соответствии с условиями «2.2.1», фильтровали после ультразвуковой обработки, повторяли дважды, фильтрат объединяли, концентрировали вакуумной перегонкой и замораживали. сушеный.

2.3.2 Группировка экспериментов на животных и введение лекарственного средства

Рис. 1 Cistanches Herba A и цистанчи Herba B, тушеные в вине.

(1) Группировка: крысам был предоставлен свободный доступ к воде и пище. Через 1 неделю адаптивного кормления они были случайным образом разделены на 5 групп (таблица 2), по 10 крыс в каждой группе, а именно нормальная группа, модельная группа, группа сырого Cistanche Deserticola (PR), группа Cistanche Deserticola, тушеная в вине (PW). и положительный контроль группы таблеток Jinkui Shenqi (JK). (2) Моделирование: За исключением нормальной группы, всем остальным четырем группам внутримышечно вводили гидрокортизона сукцинат натрия в дозе 20 мг/кг в течение 14 дней подряд. Нормальной группе вводили ту же дозу физиологического раствора. Наблюдали за общим состоянием крыс в каждой группе, чтобы определить, проявляют ли они такие симптомы, как страх холода, предпочтение тепла, холодные конечности, прозрачная и длинная моча, свернувшаяся и выгнутая спина, тусклая и грязная шерсть и психическая депрессия. При этом измеряли массу тела, количество спонтанных активностей, потребление пищи, воды, диурез и другие показатели у крыс в каждой группе.

(3) Введение: Дозировку крысам рассчитывали на основе клинической дозировки таблеток Jinkui Shenqi и Cistanche Deserticola. Дозировка каждой группы Cistanche Deserticola составляла 1,80 г/кг в пересчете на количество сырого лекарственного средства. Конкретная дозировка указана в Таблице 2. Каждый экстракт Cistanche Deserticola и таблетки Jinkui Shenqi готовили в виде растворов определенной концентрации с деионизированной водой. Раствор вводили внутрижелудочно ежедневно в объеме внутрижелудочно 10 мл/кг в течение 30 дней подряд. Нормальной группе и модельной группе ежедневно вводили внутрижелудочно равный объем деионизированной воды. Массу тела измеряли еженедельно, а внутрижелудочный объем регулировали в соответствии с массой тела крыс. После введения крыс голодали в течение 12 часов. После анестезии пентобарбиталом брали кровь из брюшной аорты для определения индекса сыворотки. Почки, яички, придатки яичек, семенные пузырьки и простата были удалены для определения соответствующих индексов.