Влияние сахарного диабета на сексуальную функцию, гистоморфологию и экспрессию актина -smooth мышц в кавернозном организме полового члена у крыс
Mar 05, 2025
Абстрактный:
Цель:Чтобы наблюдатьсексуальная функция диабетамодели крыс и исследуйте возможный механизм вторичной половой дисфункции, вызванной гипергликемией.
МетодыЭкспериментальные крысы были случайным образом разделены на пустую группу (n =5) иДиабетическая группа(n =15). После того, как модель животных диабета была успешно построена, была оценена сексуальная функция двух групп. Наблюдались гистологические характеристики яичка в двух группах. Была измерена экспрессия актина -smale Actin (-SMA) в ткани полового члена двух групп. Результаты уровни гормонов половых сывороток были значительно снижены (P<0.01). Histomorphological observation showed that in the diabetes group the interstitial tissue of testis was disordered; Compared with the blank group, the number of smooth muscle cells in the penis tissue was reduced, and the degree of fibrosis was aggravated. The expression of α-SMA positive cells in the diabetes group was significantly decreased (P<0.01).
ЗаключениеСнижение уровня половых гормонов, снижение числа гладких мышечных клеток в кавернозном организме полового члена, снижение экспрессии -SMA в кавернозном организме полового члена, неупорядоченная структура интерстициальной ткани яичка, морфологические изменения клеток гладких мышц и обострение фиброза у крыс диабета являются важными фенотипическими особенностями этого заболевания. Изучение диагноза и лечения этого заболевания с помощью этих фенотипических особенностей будет иметь большое значение.
Ключевые слова:сахарный диабет;эректильная дисфункция; сексуальная функция; Секс -гормон; - Экспрессия актина гладких мышц
Травяные добавки Cistanche для эректильной дисфункции, вызванной диабетом
Сахарный диабет (DM)долгое время был центром внимания как внутри страны, так и на международном уровне из -за его высокой частоты и распространенности [1]. Различные осложнения, вызванные DM, значительно влияют на качество жизни пациентов. Среди них заболеваемостьэректильная дисфункция (ред.)в мужчинеПациенты СДзаметно повышен. В настоящее время DM стал группой высокого риска для ED [2–3]. Следовательно, проводя подробные исследования наDM-индуцированный ED (DMED)имеет большое значение. Это исследование направлено на то, чтобы наблюдать за влиянием DM на эректильную функцию, половые гормоны, уровни экспрессии актина -smaoot -мышечной актин (-SMA) в кавернозном организме полового члена и морфологию интерстициального и морфологии интерстициального яичка иПениловая кавернозная гладкая мышцаТкани у крыс, предварительное изучение потенциальной патологической основы ЭД, индуцированной СД.
1 материалы и методы
1.1 Экспериментальные животные и реагенты
Были отобраны двадцать взрослых самцов SPF-крыс SPF с равномерной массой тела. Основные экспериментальные реагенты включали стрептозотоцин (STZ) и апоморфин (APO), а также антитела, необходимые для обнаружения экспрессии -SMA. Это исследование было одобрено Комитетом по защите животных и этике больницы Дунжимен, Пекинским университетом китайской медицины (№ 17-04).
1.2 Экспериментальные методы
1.2.1 Создание модели диабетической крысы
Twenty experimental SD rats were randomly divided into a control group (5 rats) and a diabetes group (15 rats). STZ was dissolved in citrate buffer to prepare a 10 mg/mL solution. The diabetes group was intraperitoneally injected with STZ solution at a dose of 55 mg/kg to induce the DM model rats. Blood glucose levels >16,7 ммоль/л в любое время после 5 дней внутрибрюшинной инъекции STZ считались стандартом для успешного создания модели DM [4].
1.2.2 Тест на эректильную функцию у крыс
После подтверждения успешного моделирования DM крыс взвешивали и помещали в прозрачную стеклянную коробку. Растворитель APO (100 мкг/кг) подкожно вводили в задней части шеи на основе массы тела. Окружающая среда была тихой, и внутреннее освещение было отрегулировано до уровня, достаточного для наблюдения за эрекцией полового члена у крыс. Количество эрекции полового члена в течение 30 минут после того, как подкожная инъекция наблюдалось и зарегистрировалось. Критерии эрекции полового члена: расширение полового члена, ретракция крайней плоти, воздействие на гланы, сопровождаемое гиперемией и покраснением, и видимость средних и нижних сегментов полового члена.
1.2.3 Измерение половых гормонов у крыс
Уровни в сыворотке половых гормонов в двух группах были измерены с использованием метода радиоиммуноанализа в соответствии с конкретными процедурами, изложенными в инструкциях на комплект радиоиммуноанализа.
1.2.4 Гистопатологическое наблюдение за интерстициальной тканью яичка
После сбора крови из брюшной аорты крыс правое яичко было равномерно экстрагировано. Яичко промывали буфером PBS и полностью фиксировали в параформальдегиде в течение 72 часов. Ткань встраивали в парафин, срези, окрашивали гематоксилином-эозином (H & E) и наблюдали за гистологическими характеристиками.
1.2.5 Наблюдение за каверновым фиброзом полового члена у крыс
После сбора крови из брюшной аорты ткань полового члена удаляли и промывали буфером PBS. Ткань полностью фиксировали в параформальдегиде в течение 72 часов, встроенной в парафин, срези и окрашивали трихромом Массона. Относительное содержание гладких мышц/коллагеновых волокон в кавернозной ткани каждой группы наблюдалось под микроскопом.
1.2.6 Измерение уровней экспрессии -SMA в кавернозной ткани полового члена
Кавернозной ткани полового члена подвергали рутинной депаррафинизации воду, промывали буфером PBS в течение 5 минут и подвергали восстановлению микроволнового тепла в цитратном буфере (pH 6. 0) в течение 20 минут. После охлаждения до комнатной температуры ткань трижды промывали PBS, 3 минуты каждый раз. 3% раствор перекиси водорода применяли в темной комнате при комнатной температуре в течение 15 минут, а затем промыв PBS. Затем добавляли антитело к SMA, и ткань инкубировали в течение ночи на 4 градуса. После возвращения к комнатной температуре ткань промывали PBS, инкубировали со вторичным антителом при 37 градусах в течение 30 минут и снова промывали PBS. DAB был применен для развития цвета в темноте, и реакцию прекращали водой. PBS использовали в качестве замены для первичного антитела в качестве отрицательного контроля, и был проведен количественный анализ с помощью анализатора изображения.
1.3 Статистические методы
Данные, собранные в этом исследовании, были организованы с использованием Microsoft Excel, а затем проанализированы с использованием SPSS 25. 0 для статистического тестирования. Данные каждой группы выражаются как среднее ± стандартное отклонение (x̄ ± s). P-значение меньше, чем 0. 0 5 (p <0,05) считалось статистически значимым.
2 результаты
2.1 Сравнение массы тела и изменений глюкозы в крови между двумя группами
См. Таблицу 1.
2.2 Сравнение скорости эрекции полового члена между двумя группами
См. Таблицу 2.
2.3 Сравнение уровней половых гормонов в сыворотке между двумя группами
См. Таблицу 3.
2.4 Патологическое наблюдение за интерстициальной тканью яичка между двумя группами
Интерстилярная ткань яичка контрольной группы оказалась нормальной. Интерстициальные клетки имеют круглую или овальную форму, с обычной морфологией, нормальным межклеточным расстоянием, упорядоченным расположением и отсутствием значительного снижения числа клеток. Напротив, диабетическая группа показала отек интерстилярного яичка, нерегулярную морфологию клеток, свободные межклеточные пространства, неупорядоченное расположение, нарушенные внутриклеточные структуры и признаки дедуфференцировки в некоторых клетках, теряя структурные особенности. См. Рисунок 1.
| Группа | Размер выборки (n) | Базовый вес тела (G) | Вес тела через 5 дней после моделирования (G) | Глюкоза в крови через 5 дней после моделирования (MMOL/L) | Вес тела перед жертвой (G) | Глюкоза в крови перед жертвой (ммоль/л) |
|---|---|---|---|---|---|---|
| Диабетическая группа | 15 | 220.4 ± 5.5 | 264.2 ± 10.8** | 24.3 ± 5.0** | 316.7 ± 16.4** | 25.2 ± 5.1** |
| Контрольная группа | 5 | 220.0 ± 5.2 | 286.2 ± 10.1 | 4.9 ± 1.3 | 319.1 ± 13.9 | 6.8 ± 1.2 |
Примечание: По сравнению с контрольной группой,P <0. 01.
Таблица 2: Сравнение скоростей эрекции полового члена между двумя группами
| Группа | Размер выборки (n) | Положительные случаи в тесте на эрекцию (n) | Уровень эрекции (%) |
|---|---|---|---|
| Диабетическая группа | 15 | 5 | 33.3** |
| Контрольная группа | 5 | 4 | 80.0 |
Примечание: По сравнению с контрольной группой,P <0. 01.
Таблица 3: Сравнение уровней гормонов сывороточного полов между двумя группами (x̄ ± s)
| Группа | Размер выборки (n) | T (nmolt·l⁻⁻) | Fsh (iu · l⁻⁻) | Lh (ng · l⁻⁻) |
|---|---|---|---|---|
| Диабетическая группа | 15 | 3.38 ± 0.87** | 8.49 ± 3.06** | 489 ± 50.12** |
| Контрольная группа | 5 | 6.04 ± 1.26 | 5.98 ± 1.03 | 386 ± 40.73 |
Примечание: По сравнению с контрольной группой,P <0. 01.
2.4 Патологическое наблюдение за интерстициальной тканью яичка между двумя группами
В контрольной группе интерстилярная ткань яичка оказалась нормальной: интерстициальные клетки были круглыми или овальными, показывающими регулярную морфологию, нормальные межклеточные пространства и упорядоченное расположение. Количество ячеек не показало какого -либо значительного снижения. По сравнению с контрольной группой, диабетическая группа демонстрировала интерстилярное отек яичка, клетки нерегулярной формы, свободные межклеточные пространства, неупорядоченное расположение, нарушение внутриклеточных структур и признаки дедифференцировки в некоторых клетках, теряя свои структурные особенности. См. Рисунок 1.
2.5 Наблюдение за каверновым фиброзом между двумя группами между двумя группами
Окрашивание Массона использовалось для наблюдения за различиями в степени фиброза в кавернозной ткани полового члена между двумя группами. В диабетической группе доля коллагеновых волокон была значительно выше, с увеличением относительного содержания, в то время как доля клеток гладких мышц была меньше, с уменьшением относительного содержания. См. Рисунок 2.
Рисунок 1 Он окрашивает результаты яичек в двух группах (× 10, n=3)
Рисунок 2 Результаты окрашивания в Массоне Corpora Cavernosa в двух группах (× 4, n=3)
2.6 Экспрессия -SMA в клетках гладких мышц кавернозума в двух группах в двух группах
Иммуногистохимия использовалась для обнаружения экспрессии -SMA в двух группах. По сравнению с пустой группой, коричневая желчная окрашенная часть в диабетической группе была значительно снижена, то есть положительная экспрессия -клетки -SMA в диабетической группе была значительно снижена. См. Рисунок 3.
Рис. 3 Результаты иммуногистохимии корпусного каверносума в двух группах (× 10, n=3)
