Как цистанхи предотвращают заболевания печени

Контакт:joanna.jia@wecistanche.com/ WhatsApp: 008618081934791

Абстрактный

Исследовать предварительные характеристики, антиоксидантную и гепатопротекторную активность полисахаридов изCistanche deserticola (CDPs), три полисахаридные фракции, CDP-A, CDP-B и CDP-C, были получены последовательно мембранной фильтрацией (микрофильтрация, ультрафильтрация и нанофильтрация). Были проанализированы молекулярные массы, моносахаридные композиции, чистота и ИК-спектры трех фракций. Результаты показали, что CDP-C содержит более высокую долю галактуроновой кислоты (GalUA), чем CDP-B и CDP-A. Антиоксидантная активность также была проанализирована, и результаты показали, что CDP-C обладает самой высокой активностью. Таким образом, гепатопротекторная активность CDP-C была изучена дополнительно. Исследования in vitro CDP-C способствовали жизнеспособности клеток HepG2. В исследованиях in vivo CDP-C улучшал изменения, вызванные алкоголем, включая серологические индексы (аланинтрансаминаза, кислая фосфатаза, γ-глутамилтранспептидаза и триглицерид) и печеночные показатели (супероксиддисмутаза, малондиальдегид, глутатион-S-трансфераза и триглицерид) у модельных животных. Выраженный микровезикулярный стеатоз и легкий некроз в печеночной гистопатологии модельных животных также были ослаблены введением CDP-C. Эти результаты показали, что CDP-C обладает гепатопротекторной активностью против хронического повреждения печени, вызванного алкоголем. Основной механизм может заключаться в том, что CDP-C может уменьшать содержание MDA и TG и модулировать активность относительного фермента. Это свойство может ассоциироваться с GalUA в CDP-C.

Ключевое слово: Cistanche deserticola; Полисахариды; Предварительные характеристики; Антиоксидант; Гепатопротекторная активность.

цистанчеbienfaitsдезертикола

1. Введение

Цистанч является многолетним голопаразитом и в основном распространен в пустынном регионе северо-западного Китая [1, 2]. Стебель вида Cistanche (Orobanchaceae) был впервые зарегистрирован в китайской Materia Medica Шэнь Нонга. Цистанхе уже давно используется в качестве традиционного фитопрепарата для лечения почечной недостаточности, импотенции, старческих запоров, болезненности и слабости талии и коленей, а также дефицита крови [3, 4]. Фармакологическими исследованиями выявлено, что цистанче обладает противовоспалительной активностью [5, 6], антиостеопорозной активностью [7, 8], седативным действием [9], антифатиговой активностью [10], нейропротекторным действием [11]. Кроме того, полисахариды из Cistanche deserticola (CDP) обладают антигипергликемическим и гиполипидемическим действием [12], иммунологической активностью [13] и пролиферативным действием на лимфоциты [14].

Алкоголь, потребляемый во всем мире напиток и пищевая добавка ежегодно вызывают почти 2,5 миллиона смертей в мире [15, 16]. Эти смерти в основном связаны с заболеваниями печени, вызванными злоупотреблением алкоголем [17, 18]. Алкоголь-индуцированная болезнь печени представляет собой сложное многоступенчатое хроническое прогрессирование, обычно развивающееся от алкогольного стеатоза до алкогольного гепатита и, наконец, до алкогольного цирроза [19]. Таким образом, выявление активных натуральных продуктов для тех потребителей алкоголя, чтобы предотвратить или замедлить прогрессирование алкогольного повреждения печени на ранней стадии, является полезной стратегией управления.

Cistanche deserticola Y. C. Ma и Cistanche tubulosa (Schrenk) Wight являются двумя лекарственными видами, зарегистрированными в Китайской фармакопее [3]. Во многих работах разъясняется гепатопротекторная активность C. tubulosa [20-24] и C. deserticola [25, 26]. Но эти гепатопротекторные исследования всегда были направлены на острое повреждение печени, вызванное тетрахлорметаном (CCl4) или D-галактозамином и липополисахаридом, но не касались хронического повреждения печени, связанного со злоупотреблением алкоголем. Кроме того, эти отчеты были в основном сосредоточены на механизме фенилетаноидных гликозидов (PhG), а не на CDP. Поэтому в настоящем исследовании были исследованы предварительные характеристики CDP и их антиоксидантной активности (in vitro). Кроме того, модель повреждения печени мышей ICR, индуцированная белым спиртовым вином, была установлена для изучения гепатопротекторной активности CDP против хронического повреждения печени, вызванного алкоголем.

экстракт цистанче и тонгкат али травы

2. Материалы и методы

2.1. Материалы

Стебли C. deserticola были собраны из Алашаньской лиги, Внутренней Монголии Китая,и идентифицирован профессором Сяодун Ваном (Отдел биоперерабатывающей инженерии, Институт технологической инженерии, Китайская академия наук, Пекин, П.Р. Китай).

Диметилсульфоксид (ДМСО), 2, 2-азино-бис (3-этилбензтиазолин-6-сульфоновая кислота) (АБТС), 3-(4, 5-диметилтиазол-2-ил)-2, 5-дифенилтетразолий бромид (МТТ) и 1-дифенил-2-пикрил-гидразил (DPPH) были приобретены у Sigma Chemical Co. (Сент-Луис, Миссури, США). Модифицированная орлиная среда Dulbecco (DMEM) и фетальная бычья сыворотка (FBS) были приобретены у Invitrogen, Inc. Уайт-спирит Эр Го-ту был приобретен у Beijing Red Star Co., LTD. Bicyclol был приобретен у Beijing Union Pharmaceutical Factory. Водные растворы готовили сверхчистой водой из системы очистки воды Milli-Q (Millipore, Bedford, MA, США). Все остальные реагенты были аналитического класса.

2.2. Вытяжка CDP и фракционная фильтрация

Сырые CDP были подготовлены по ранее сообщенному методу нашей группы [27] с небольшими изменениями. Вкратце, порошок (40 меш) C. deserticola (50 кг) был ультразвуком (40 кГц и 6 кВт) экстрагирован 1000 л водного раствора этанола (50%, v/v) при 60 ◦C в течение 120 мин. Полисахариды отделяли от экстракта макропористой смолой (HPD 300). Раствор полисахарида концентрировали при пониженном давлении, депротеинизировали с помощью метода Севага [28], а лиофилизированный продукт называли сырыми CDP.

Затем 50 г сырых CDP растворяли в 2,5 л сверхчистой воды и последовательно отделяли микрофильтрацией, ультрафильтрацией и нанофильтрацией (номинальные отсечки молекулярной массы составляли 300 кДа, 10 кДа и 200 Да. Эффективная площадь мембраны составляла 0,625 м2). Сохраненный раствор микрофильтрации лиофилизировали и называли CDP-A. Проникший раствор микрофильтрации фильтровали ультрафильтрацией, а сохраненный раствор лиофилизировали и называли CDP-B. Проникший раствор ультрафильтрации фильтровали нанофильтрацией, сохраненный раствор лиофилизировали и называли CDP-C.

2.3. Предварительные характеристики CDP

Молекулярные размеры CDP оценивали в соответствии с ранее сообщенным методомнаша группа [29]. Моносахаридные композиции анализировали с помощью метода, описанного P. Zhang et al [30]. Чистоту определяли по фенол-сернокислотному методу [31]. Содержание белка определяли с помощью метода, упомянутого Брэдфордом и Майей Козарски [32, 33]. FT-IR спектры CDP были захвачены с помощью инфракрасного спектрометра с преобразованием Фурье (FT / IR-660 Plus, JASCO) в диапазоне 400 ~ 4000 см-1.

2.4. Антиоксидантная активность

Эффекты поглотителей CDP на гидроксильные, супероксидные анионы, DPPH и РАДИКАЛЫ ABTS оценивались в соответствии с методами, описанными Sun [34], Wang [35], Yap [36] и Fatiha [37] соответственно.

цистанхе эректильная дисфункциядляпочка

2.5. Гепатопротекторная активность CDP-C in vitro

На основании результатов антиоксидантного анализа был выбран CDP-C для изучения гепатопротекторной активности. Клетки HepG2 (приобретенные у Китайского центра коллекции типовых культур, Пекин, Китай) культивировали в DMEM, содержащем термоинактивированный FBS (10%), стрептомицин (0,1 мкг / мл), пенициллин (100 МЕ / мл) и заменимую аминокислоту. Клетки инкубировали в увлажненной атмосфере 5% CO2 при 37°C, собирали в фазе экспоненциального роста, высевали в 96-луночные пластины (4×104 клетки на лунку, 100 мкл) и инкубировали в течение 24 ч. Клетки отрицательной группы обрабатывали алкоголем (конечная концентрация составляла 3,5%, v/v), в то время как наивную группу обрабатывали водой. Клетки положительной группы обрабатывали алкоголем и бициклолом (конечная концентрация составляла 200 мкг/мл). Клетки четырех тестовых групп обрабатывали алкоголем и CDP-C (конечная концентрация CDP-C составляла 0,11, 0,3333, 1,00 и 3,00 мг/мл). Все клетки культивировали еще 48 ч.

Жизнеспособность клеток HepG2 определяли методом анализа МТТ, упомянутым J. Tong et al [38] с небольшой модификацией. Вкратце, МТТ (5 мг/мл, 20 мкл на лунку) добавляли в клеточные 96-луночные пластины, и клетки инкубировали в течение 4 ч. Растворы удаляли и добавляли ДМСО (150 мкл/лунка). Поглощение каждой скважины измерялось при 492 нм с помощью 96-луночного пластинчатого считывателя (Thermo Scientific, America). Жизнеспособность клеток рассчитывали по следующей формуле:

Жизнеспособность клеток (%) = (Образец - Абланк) ×100/ (Наивный - Абланк)

Где образец A представлял собой поглощение экспериментальной группы; Наивным было поглощение контрольной группы без пробы; Заготовка представляла собой поглощение питательной среды без какого-либо образца и засеянной клетки.

2.6. Гепатопротекторная активность CDP-C in vivo

2.6.1. Животные

Были использованы взрослые самки мышей ICR (22-25 г, приобретенные у Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co. Ltd. Номер лицензии на животных был 11400700128). Животных размещали в экологически контролируемом помещении с кормом и водой до либитума (относительная влажность составляла 40-60%, 22-26°С), вентиляция воздуха составляла 12-18 раз/ч, а состояние светового облучения составляло 12 ч светло-темного цикла 150-300 люкс. Мышей акклиматизировали к условиям комнаты животных за 7 дней до экспериментов. Все процедуры с участием животных на протяжении всех экспериментов проводились в строгом соответствии с правилами использования лабораторных животных, принятыми и обнародованными Национальными институтами здравоохранения США.

2.6.2. Экспериментальное проектирование

Мыши ICR были случайным образом разделены на шесть групп (наивная группа, отрицательная контрольная группа, положительная контрольная группа и три тестовые группы) с 10 животными в каждой группе. Наивную группу перорально вводили дистиллированной водой. Отрицательную контрольную группу вводили перорально с алкоголем (Er Guo-tou white spirit, 56%, 6 мл/кг). Положительную контрольную группу вводили перорально с бициклолом (300 мг/кг) и через 5 часов с алкоголем. Трем тестовым группам вводили перорально с CDP-C в дозе 200, 600, 1800 мг/кг и через 5 часов с алкоголем. Всем мышам вводили в течение 31 дня подряд.

2.6.3. Определение серологических показателей

Примерно через 4 ч после последней алкогольной обработки кровь собирали из глазницы и центрифугировали по 3000 г в течение 15 мин. После отделения сыворотки определяли ферментную активность аланинтрансаминазы (АЛТ), кислой фосфатазы (АСР), γ-глутамилтранспептидазы (γ-ГТФ) и триглицеридов (ТГ) с помощью диагностических наборов.
2.6.4. Определение печеночных показателей

После сбора крови все мыши были казнены. Печень каждой мыши немедленно иссекали, промывали физиологическим физиологическим раствором. Кусочек печеночной ткани отделяли от левой доли. Затем ткань измельчали и гомогенизировали водным раствором хлорида калия (1,15%, мас./об.) в стеклянном гомогенизаторе (Potter Elvehjem Teflon) в течение 60 секунд, чтобы сделать печень гомогенатной (10% мас./об.). Ферментная активность супероксиддисмутазы (SOD), малондиальдегида (MDA), глутатион S-трансферазы (GST), а также содержание триглицеридов (TG) были измерены с использованием диагностических наборов.

2.6.5. Гистопатологические исследования

Остаточную часть печени фиксировали в фиксаторе Буэна в течение 24 ч, после обезвоживания с использованием водного раствора этанола (50-100%, v/v) ткань печени очищали в ксилоле и внедряли в парафин. Печеночные срезы (5 мм) окрашивали квасцами гематоксилином и эозином (H-E). Снимки срезов печени и гистопатологических изменений фиксировались световым микроскопом (Nikon-DS-L1-5M).

2.7. Статистический анализ

Данные были выражены в виде средств ± стандартной погрешности среднего (S.E.M) из трех (анализ химического состава и антиоксидантный анализ), пяти (жизнеспособность клеток) или десяти (исследования in vivo) независимых экспериментов. Статистическая значимость различий между группами была проанализирована с помощью одностороннего анализа дисперсии (ANOVA), за которым последовал тест Стьюдента-Ньюмана-Кеулса с использованием программного обеспечения SPSS 19.0. Во всех анализах, p<0.05,><0.01, or=""><0.001 indicated="" statistical="">

3. Результаты и обсуждение

3.1. Характеристики CDP

Как показано на рис.1А, CDP-A содержит две группы, молекулярные массы которых составляют 4000 кДа и 3946 кДа. Молекулярные массы CDP-B и CDP-C составляют 2400 кДа и 1300 кДа, моносахаридные композиции показаны на рис. 1B. CDP-A, CDP-B и CDP-C содержат шесть основных моносахаридов с различными пропорциями, включая маннозу (Man), рамнозу (Rha), галактуроновую кислоту (GalUA), глюкозу (Glc), галактозу (Gal) и арабинозу (Ara). Помимо вышеупомянутых шести моносахаридов, ксилоза (xyl) также появляется в CDP-C. Кроме того, CDP-C содержит большую долю GalUA, чем две другие фракции.

Чистота и содержание белка CDP приведены в таблице 1. Таблица 1 показывает, что CDP-A имеет самую высокую чистоту, которая составляет 75,57%, в то время как чистота CDP-B и CDP-C составляет 74,72% и 68,92% соответственно. Содержание белка в CDP-A, CDP-B и CDP-C составляет 1,27%, 1,24% и 1,05% соответственно.

Таблица 1.Чистота и содержание белка в CDP. Данные являются средством, ± S.E.M трех реплик.

FT-IR спектры углеводов используются для определения их структурных особенностей и обычно используются для качественного анализа органических функциональных групп, особенно для O-H, C-O и C=O [39]. FT-IR спектры CDP показаны на рис. 1С. Каждый спектр показывает сильный и широкий пик растяжения около 3293 см−1 для вибрации растяжения O-H, а также слабый пик поглощения при 2939 см−1 для вибрации растяжения C-H. Полоса поглощения при 1650 см−1 вызвана асимметричной вибрацией растяжения C=O. Широкая полоса поглощения при 1418см−1 объясняет деформирующую вибрацию связи C-H. Каждый конкретный полисахарид имеет определенную полосу в области 1000-1200 см−1, в которой преобладает кольцевая вибрация, перекрываемая растягивающей вибрацией боковых групп (C-OH) и вибрацией гликозидной зоны (C-O-C). Абсорбция на уровне 1036 см−1 указывает на пиранозную форму сахара. Абсорбция почти 829 см−1 предполагает связь α гликозидов в молекулярной структуре CDP. 1 С, полоса поглощения CDP-C при 1650 см−1 сильнее, чем CDP-A и CDP-B, что означает, что содержание C=O в CDP-C больше, чем в CDP-A и CDP-B. Этот результат согласуется с результатами рис.1 A, который показывает, что доля GalUA в CDP-C больше, чем в CDP-A и CDP-B.

3.2. Антиоксидантная активность CDP

3.2.1. Анализ гидроксильных радикалов

Среди активных форм кислорода гидроксильный радикал является наиболее реакционноспособным и вызывает серьезное повреждение соседних биомолекул [40]. Для гидроксильного радикала существует два типа механизмов антиоксидантного окисления: один удаляет уже сгенерированный гидроксильный радикал, а другой подавляет генерацию гидроксильного радикала. Для последнего гидроксильный радикал образуется реакцией комплекса Fe (II) с перекисью водорода. Антиоксидантная активность CDP может влиять на ионы металлов, которые не реагируют с H2O2 и производят гидроксильный радикал, но хелат с CDP и образуют металлический комплекс. Металлический комплекс не может в дальнейшем реагировать с H2O2 с образованием гидроксильного радикала [41-43]. Таким образом, CDP показывают эффекты очистки гидроксильных радикалов.

2 А показана поглотительная способность CDP на гидроксильном радикале в зависимости от концентрации. Скорость очистки CDP-A, CDP-B и CDP-C составляет 29,56%, 33,44% и 38,22% соответственно. CDP-C проявляет более высокую активность по удалению гидроксильных радикалов. Учитывая, что CDP-C содержит более высокую долю GalUA, чем CDP-A и CDP-B, антиоксиданты CDP могут относиться не только к лигирующим свойствам ионов металлов, но и к содержимому GalUA, Ara и Gal [44-46].

3.2.2. Супероксидно-анионный радикальный анализ

Супероксидный анионный радикал представляет собой токсичный вид, который генерируется многочисленными биологическими и фотохимическими реакциями и тем самым вызывает повреждение тканей [47]. Хотя супероксид-анион является относительно слабым окислителем, он играет важную роль в образовании других более сильных реакционноспособных окислительных форм, таких как синглетный кислород и гидроксильный радикал [48]. 2 В показана взаимосвязь между концентрациями и поглотительной способностью CDP на супероксидных анионных радикалах. По мере увеличения концентрации CDP-C демонстрирует более высокую способность к очистке, чем CDP-B и CDP-A.

3.2.3. Радикальный анализ DPPH

DPPH, одно из стабильных азот-центрированных соединений, обладающих протонно-свободным радикалом с характерным поглощением при 517 нм, значительно снижается при воздействии поглотителей протонных радикалов, поэтому он широко используется для оценки активности антиоксидантов по удалению свободных радикалов. Хорошо известно, что свободные радикалы DPPH, поглощаемые антиоксидантами, обусловлены их способностью жертвовать водородом. Антиоксиданты переносят либо электроны, либо атомы водорода в радикал DPPH и образуют DPPH-H, который является нерадикальным образованием [49].

Были протестированы общие эффекты очистки DPPH всех образцов, и результаты показаны на рисунке 2 C. Способности cdp к очистке на радикале DPPH отображаются в зависимости от концентрации. По мере увеличения концентрации с 1,0 до 5,0 мг/мл поглощающая способность CDP-C увеличивается с 52,5% до 58,7%, что выше, чем у CDP-B (с 34,2% до 56,8%) и CDP-A (с 12,5% до 52,8%). Эффект очистки DPPH CDP-C может быть связан с карбонильными группами в GalUA.

3.2.4. Радикальный анализ АБТС

Радикальный анализ ABTS часто используется для измерения общей антиоксидантной силы мощного антиоксиданта тестовых образцов [50]. Эффекты ABTS по очистке всех образцов показаны на рисунке 2 D. Способность CDP к удалению радикалов ABTS проявляется в зависимости от дозы. IC50 CDP-A, CDP-B и CDP-C составляют около 4,0 мг / мл, 2,5 мг / мл и 1,2 мг / мл соответственно. Результаты показывают, что CDP обладают активностью ABTS по очистке.

Таким образом, антиоксидантная активность CDP-C была выше, чем CDP-A и CDP-B. Он сообщил, что некоторые фармакологические действия полисахаридов были связаны с его GalUA[51]. В этом эксперименте доля GalUA в CDP-C была больше, чем в CDP-A и CDP-B, CDP-C была выбрана для исследования гепатопротекторного эффекта против хронического заболевания печени, вызванного алкоголем.

3.3. Влияние CDP-C на жизнеспособность клеток HepG2

Измерение жизнеспособности клеток является распространенным способом оценки эффективности природных препаратов [52]. Основываясь на результатах, что CDP-C обладает самой высокой антиоксидантной активностью, было оценено влияние CDP-C на жизнеспособность клеток HepG2. Результаты показаны на рисунке 3. Алкогольное лечение, вызванное выраженным снижением жизнеспособности клеток HepG2. Но CDP-C может заметно улучшить показатели выживаемости по сравнению с отрицательной группой. Как показано на рисунке 3, жизнеспособность клеток не проявляет точно зависимого от концентрации способа с CDP-C. Напротив, когда концентрация CDP-C достигает 3,00 мг / мл, жизнеспособность клеток HepG2 резко снижается. Причина снижения жизнеспособности клеток может заключаться в том, что низкая концентрация CDP-C была полезна для выживания клеток HepG2. Однако, когда концентрация полисахаридов в питательной среде была достаточно высокой, чтобы изменить микроокружение клеток, жизнеспособность клеток HepG2 ингибировалась.

3.4. Фармакологические эффекты CDP-C

3.4.1. Влияние CDP-C на серологические показатели

Злоупотребление алкоголем составляет почти 4% от всех показателей смертности, что стало серьезной социальной проблемой в мире. В организме человека алкоголь метаболизируется в печени после его всасывания через слизистую оболочку желудка и тонкого кишечника [53-55]. Алкогольные заболевания печени обычно возникают после многих лет злоупотребления алкоголем [56]. Обычно патологические состояния, такие как жировая дистрофия печени, гепатит, фиброз и цирроз печени [57], или даже раковые заболевания, такие как гепатоцеллюлярная карцинома и рак толстой кишки [58], наблюдаются при связанных с алкоголем заболеваниях печени. Поэтому алкоголь является типичным гепатоксиком и широко используется в качестве индуктора поражения печени в научных исследованиях [59]. Учитывая, что вызванные алкоголем заболевания печени часто вызваны алкогольными напитками и пищевыми добавками, а не промышленным этанолом, таким образом, уайт-спирит Эр Го-ту был использован для создания модели повреждения печени у мышей ICR в этом исследовании. Бициклол является распространенным агентом, используемым для лечения хронического повреждения печени, поэтому он был использован для установления положительной модели контроля.

Печеночные клетки содержат более высокие концентрации АЛТ в цитоплазме и митохондриях. Из-за различных повреждений печеночных клеток утечка цитозола вызовет увеличение АЛТ в сыворотке крови. Таким образом, продвижение АЛТ является показателем клеточной утечки и функциональных нарушений печени [60]. Таким образом, уровень АЛТ в сыворотке обычно устанавливается в качестве показателя для оценки здоровья печени [61]. По аналогичным причинам γ-GTP, ACP и TG также используются в качестве индикаторов для оценки состояния здоровья печени [62].

В настоящем исследовании гепатопротекторную активность CDP-C оценивали путем определения уровней АЛТ, АСР, γ-ГТФ и ТГ. Результаты показаны на рисунке 4 A, B, C и D. Четырем сывороточным показателям резко способствует лечение алкоголизма в отрицательной группе. Но CDP-C может ослабить эти изменения, вызванные алкогольным введением. Однако не все серологические показатели проявляют дозозависимую манеру с CDP-C. 4 А и В CDP-C при низкой концентрации оказывает значительное влияние на восстановление АЛТ и АСР, но эффект CDP-C при самой высокой концентрации не был значительным. На самом деле многие натуральные продукты полезны для здоровья в низких дозах, но вредны для здоровья при высоких дозах [60]. Причина может заключаться в том, что чрезмерное употребление полисахаридов повлияет на нормальный метаболизм организмов, так чтонегативно сказаться на здоровье организма. Однако детальный механизм нуждается в дальнейшем изучении.

3.4.2. Влияние CDP-C на печеночные показатели

Организмы, подвергшиеся окислительному стрессу, обычно развивали механизм антиоксидантной защиты, а SOD является типичной антиоксидантной системой на основе ферментов [63]. SOD катализирует дисмутацию аниона супероксида в O2 и H2O2 [64]. GST, растворимый белок, расположенный в цитозоле, также играет важную роль в детоксикации печени. По причинам, упомянутым выше, SOD и GST становятся индикаторами алкоголь-индуцированной гепатотоксичности. МДА и ТГ в печени также используются в качестве индикаторов гепатотоксичности [65].

В настоящем исследовании влияние CDP-C на функцию печени показано на рис.5. На рисунках A, B, C и D показано влияние CDP-C на SOD, MDA, GST и TG соответственно. Эти четыре снимка показывают, что мыши, получавшие алкоголь, заметно снижают уровни SOD и GST и повышают уровни MDA и TG, но CDP-C, очевидно, может ослабить это изменение. Подобно явлениям, описанным в разделе 3.4.1, печеночные индикаторы также не зависели от дозы с CDP-C. Причина этого может быть аналогична механизму, проиллюстрированному в разделе 3.4.1. Предыдущие исследования сообщали, что влияние полисахаридов на SOD и каталазу может быть связано с индудукцией экспрессии генов SOD и каталазы [66]. Тем не менее, дальнейшие исследования все еще необходимы для выяснения гепатопротекторного механизма CDP-C и взаимосвязи между его структурой и функцией.

3.5. Гистопатологические эффекты CDP-C на мышей, индуцированных алкоголем

На основании гистопатологических наблюдений на участках печени наивная группа продемонстрировала нормальную клеточную архитектуру с отчетливыми печеночными клетками и отсутствием гистологических аномалий (рис. 6 А). Для сравнения, алкогольное введение вызвало серьезное повреждение печени у мышей отрицательной группы. На участках печени наблюдалось отложение гепатоцитарного жира, некроз и отек гепатоцитов, образование вакуолей в клетках, а также исчезновение клеточных границ (рис. 6 В). В печеночных отделах мышей, вводимых бициклолом (рис. 6 С), с различными дозами CDP-C (рис. 6 D-F), наблюдалось очевидное восстановление тех искажений, которые появились в отрицательной контрольной группе. Эти результаты подтвердили, что алкоголь индуцировал определенную степень искажения в гепатоцитах отрицательной контрольной группы. Однако CDP-C восстановил эти изменения.

Общепризнано, что гепатопротекторное действие полисахаридов связано с их антиоксидантной активностью [67, 68]. Было доказано, что высокое содержание уроновой кислоты благотворно влияет на антиоксидантные эффекты полисахаридов [44, 45]. Было также подтверждено, что полисахариды, богатые Галом и Ара, обладают более высокими антиоксидантными эффектами [46]. Однако крупным молекулярным полисахаридам трудно попасть непосредственно в эпителиальные клетки кишечника. Для CDP-C (с молекулярной массой 1300 кДа) нелегко попасть в организм напрямую и играть гепатопротекторную роль. Опубликованные отчеты показали, что молекулярные массы полисахаридов снижались после желудочного и кишечного пищеварения [69]. Таким образом, мы предположили, что CDP-C может разлагаться на полисахариды с низкой молекулярной массой и поглощаться эпителиальными клетками кишечника. Восстанавливающие концы полисахаридов могут быть увеличены за счет распада гликозидных связей [69, 70]. Согласно моносахаридному составу CDP-C, эти деградированные полисахариды с низкой молекулярной массой должны содержать GalUA, Ara и Gal. Следовательно, эти низкомолекулярные полисахариды, которые обладают восстанавливающими концами и содержат GalUA, Ara и Gal, могут играть роль защиты печени в организме. Однако детальный механизм нуждается в дальнейшем изучении.

4. Выводы

Согласно анализу моносахаридного состава и FT-IR спектров, все три фракции CDP содержали Man, Rha, GalUA, Glc, Gal и Ara. CDP-C содержал большую долю GalUA. CDP-C обладал самой высокой антиоксидантной активностью. Результаты исследований in vitro и Vivo показали, что CDP-C обладает гепатопротекторной активностью против хронического повреждения печени, вызванного алкоголем. Основной механизм был связан с модуляцией относительной активности ферментов, уменьшая MDA и TG в печени. Физиологическая активность CDP-C может ассоциироваться с GalUA. Эти результаты дают новое понимание фармакологических целей C. deserticola в профилактике алкогольной болезни печени.

Цистанхе травазащищаетпеченьиповышает иммунитет.

Для получения дополнительной информации, пожалуйста, нажмите здесь.