Иридоидные и ациклические монотерпеновые гликозиды, канканозиды L, M, N, O и P из Cistanche Tubulosa

Цистанхе трубчатая(SЧРЕНК) R. WВОСХОД(Orobanchaceae) — многолетнее паразитическое растение, произрастающее на корняхСальвадораилиКалотрописВид, распространенный в Северной Африке, Аравии и странах Азии.1) Стебли этого растения (по-японски Канка-никудзую) традиционно использовались длялечение импотенции, бесплодия, люмбаго и слабости телаа также стимулятор кровообращения.1,2) В ходе наших исследований биологически активных компонентов из стеблейС. трубчатая, 3-6) ранее мы сообщили о двадцати четырех фенилэтаноидных аминогликозидах, включая канканозиды H.1, H2, I, J1, J2, K1и К2и два ацилированных олигосахара из свежих стеблейС. трубчатая. 5,6) Кроме того, директорфенилэтаноидные гликозиды, эхинакозид, актеозид и изоактеозидБыло обнаружено, что они ингибируют повышение уровней аспартатаминотрансферазы (АСТ) и аланинаминотрансферазы (соли) в сыворотке мышей с поврежденной печенью, вызванноеD-галактозамин (D-GalN)/липополисахарид в дозах 25-100 мг/кгдля ОС(p.o.). Выяснены также структурные требования фенилэтаноидных гликозидов для гепатопротекторной активности.5) В этом продолжающемся исследовании компонентов свежих стеблейС. трубчатая, мы дополнительно выделили одиннадцать иридоидных гликозидов, включая канканозиды L (1), M (2) и N (3), семь ациклических монотерпеновых гликозидов, включая канканозиды O (4) и P (5), три фенилпропаноида и четыре лигнана. Эта статья посвящена выделению и выяснению структуры пяти новых соединений (1-5).

НАТУРАЛЬНЫЙ ЦИСТАНШ ТУБУЛОЗНЫЙ ДЛЯ СНЯТИЯ СЕКСУАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Свежие стебли C. Tubeulosa (выращенные в Урумчи, провинция Синьцзян, Китай) экстрагировали метанолом с обратным холодильником с получением метанольного экстракта (8,36% от свежих стеблей). Из метанольного экстракта с помощью колоночной хроматографии Diaion HP-20 (H2O→MeOH) получали фракции, элюированные H2O и MeOH (5,63% и 2,73% соответственно), как описано ранее.5) Фракцию, элюированную MeOH, получали подвергали колоночной хроматографии на SiO2 и ODS и, наконец, ВЭЖХ с получением канканозидов L (1, 0.0026%), M (2, 0.{{27) }}001%), N (3, 0.00{{60}}7%), O (4, 0.0{{90}}2{{105}}%) и P (5, 0 .0002%), 6-дезоксикаталпол3,7) (6, 0.197%), барциозид3,7) (7, { {147}}.0583%), глюрозид3,7) (8, 0.0443%), канканоизид А3) (9, 22,3 мг, 0,0010%), муссаенозидовая кислота3,7) ( 10, 0,0056%), 8- эпилогановая кислота3,8) (11, 0,0023%), 8-эпидеоксилогановая кислота3,7) (12, 0,0004%), генипозидовая кислота3,7) (13, 0,0040% ), канканозид Е3) (14, 0,0026%), (2E,6Z)-8-bD-глюкопиранозилокси-2,6-диметил-2,6-октадиеновая кислота3 ,9) (15, 31,0 мг, 0,0014%), (2E,6E)-3,7-диметил-8-гидроксиоктадиен-1-ил-ObD-глюкопиранозид10) (16, 0,0082%), 8-гидроксигераниол 8-O-bD-глюкопиранозид11) (17, 0,0044%), бетулалбузид А12) (18, 0,0004%), кониферин13) (19, 0,0002%), сирингин13) ( 20, 0,0015%), синаповый альдегид 4-ObD-глюкопиранозид14) (21, 0,0001%), ( )-пинорезинол ObD-глюкопиранозид4,8,15) (22, 0,0010%), эукоммин А16) (23, 0,0002) %), изоэукоммин А17) (24, 0,0010%) и ( )-сирингарезинол ObD-глюкопиранозид4,8,18) (25, 0,0044%).

Структуры канканозидов L (1), M (2) и N (3)

Канканозид L (1) был получен в виде белого порошка с отрицательным оптическим вращением ([a]D 26 - 45.7 в MeOH). Его ИК-спектр показал сильную полосу поглощения при 3433 и 1{{20}}80 см- 1, что указывает на гликозидный фрагмент. МС с бомбардировкой быстрыми атомами (FAB) в ходе 1 эксперимента в режимах положительных и отрицательных ионов показала пики квазимолекулярных ионов при m/z 371 [M Na] и 347 [M-H]- соответственно, а молекулярная формула была определен как C15H24O9 с помощью измерения FABMS с высоким разрешением. Кислотный гидролиз 1 с 1,0 М соляной кислотой (HCl) высвобождает D-глюкозу, которую идентифицируют методом ВЭЖХ с использованием оптического вращающегося детектора. 3-6) Спектры 1 H- и 13C-ЯМР 1 (CD3OD, таблицы 1, 2), которые были присвоены различными экспериментами ЯМР, 19) показали сигналы, которые можно отнести к четырем метиленам [d 1,43 (1H, br dd, J= примерно 5, 13 Гц, 4a-H), 1,73 ( 1H, шир. дд, J= ок. 12, 14 Гц, 6a-H), 1,85 (1H, м, 4b-H), 1,93 (1H, уш. дд, J= ок. 8 , 14 Гц, 6b-H), 3,50 (1H, ддд, J= 2.4, 12,5, 13,0 Гц, 3a-H), 3,83 (1H, шир. дд, J=

ок. 5, 13 Гц, 3b-H), 3,78, 4,12 (по 1H, оба d, J= 13.1 Гц, 10-H2)], два метина [d 2,15 (1H, dd, J=7.2, 8,9 Гц, 9-H) и 2,23 (1H, м, 5-H)] и ацетальную группу [d 4,81 (1H, d, J{{28) }},9 Гц, 1-H)] вместе с b-глюкопиранозильным фрагментом [d 4,70 (d, J= 7,9 Гц, 1 -H)]. Как показано на рис. 1, эксперимент по корреляционной спектроскопии 1 H–1 H (1 H–1 H COSY) на 1 показал наличие частичных структур, выделенных жирными линиями. В эксперименте по гетероядерной корреляции множественных связей (HMBC) на 1 наблюдались дальние корреляции между следующими протонами и атомами углерода (1-H и 3-C, 8-C; {{ 49}}Н и 1-С; 7-Н и 8-С, 10-С; 9-Н и 8-С; }}H2 и 7-C, 8-C, 1 -H и 1-C), как показано на рис. 1. Далее относительная стереоструктура 1 характеризовалась фазочувствительностью; Эксперимент по спектроскопии ядерного усиления Оверхаузера (фазочувствительная NOESY), который показал корреляции NOE между следующими парами протонов (1-H и 3aH; 3a-H и 4a-H; 3b-H и 4b-H; 4b-H и 5-H, 9-H и 6b-H, 9-H и 7-H; и 10-H2), как показано на рис. 1. Спектры 1 H- и 13C-ЯМР соединения 1 накладывались на спектры основного иридоидного компонента 6-дезоксикатапола (6), за исключением сигналов, обусловленных к насыщенному фрагменту d-лактола. Наконец, гидрирование 6 дало 1, поэтому было установлено, что стереоструктура канканозида L представляет собой 3,4-дигидро-6-дезоксикатальпол (1).

НАТУРАЛЬНЫЙ ЦИСТАНШ ТУБУЛОЗНЫЙ ДЛЯ СНЯТИЯ РАССТРОЙСТВА ВОЗБУЖДЕНИЯ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Канканозид М (2) был получен в виде белого порошка с отрицательным оптическим вращением ([a]D 26 - 18.7 в MeOH). В ИК-спектре соединения 2 наблюдались полосы поглощения при 3433, 1736, 1655 и 1076 см- 1, приписываемые гидроксильным, d-лактоновым, олефиновым и эфирным фрагментам. Спектр положительных ионов FAB-MS 2 показал пик квазимолекулярных ионов при m/z 353 [M Na], а молекулярная формула была определена как C15H22O8 посредством измерения FAB-MS положительных ионов с высоким разрешением. Кислотный гидролиз 2 с 1,0 М HCl приводит к высвобождению D-глюкозы. Спектры 1 H- и 13CNMR соединения 2 (CD3OD, табл. 1, 2) показали сигналы, соответствующие четырем метиленам [d 1,66, 2,11 (по 1H каждый, оба м, 4-H2), 2,15, 2,75 (по 1H, оба м, 6-H2), 4,29 (1H, ддд, J= 2.8, 8,4, 14,3 Гц, 3b-H), 4,32, 4,51 (по 1H, оба d, J{{61) }}.1 Гц, 10-H2), 4,35 (1H, ддд, J= 3.1, 6,7, 14,3 Гц, 3a-H)], два метина [d 2,97 (1H, м, 5-H), 3,82 (1H, шир. с, 9-H)], олефин [d 5,94 (1H, м, 7-H)] и насыщенную лактоновую группу (d C 174,9) вместе с bD-глюкопиранозильным фрагментом [d 4,32 (1H, d, J= 7,9 Гц, 1 -H)]. Как показано на рис. 1, эксперимент 1 H–1 H COSY на 2 показал наличие частичных структур, написанных жирными линиями, а в эксперименте HMBC наблюдались дальние корреляции между следующими парами протона и углерода ({{ 103}}Н и 1-С, 8-С и 9-Н и 1-С, 8-С; }}H2 и 7-С, 8-С, 9-С; 1 -Н и 10-С). Относительная стереоструктура 2 была охарактеризована фазочувствительным экспериментом NOESY, который показал корреляции NOE между следующими парами протонов (3a-H и 4a-H; 3b-H и 4b-H; 4b-H и 5- H; 5-H и 6b-H, 9-H), как показано на рис. 1. Таким образом, стереоструктура 2 была выяснена, как показано.

Канканозид N (3) был выделен в виде белого порошка с отрицательным оптическим вращением ([a]D 25 - 24.6 в МеОН). В FAB-MS с положительными ионами 3 наблюдался пик квазимолекулярного иона при m/z 371 [M Na]. Молекулярная формула C16H28O8 была определена методом FAB-MS высокого разрешения. Кислотный гидролиз 3 с помощью 1,0 M HCl приводит к высвобождению D-глюкозы. Данные 1 Н- и 13С-ЯМР (CD3OD, табл. 1, 2) показали сигналы, которые можно отнести к метилу [d 1.07 (3H, d, J= 7.2 Гц, {{ 28}}H3)], четыре метилена {d 1,37, 1,87 (по 1H, оба м, 7-H2), 1,65, 1,81 (по 1H, оба м, 6-H2), [3,65 ( 1H, дд, J= 9.1, 9,8 Гц), 3,90 (1H, дд, J= 5.9, 9,8 Гц), 11-H2] и [3,70 (1H, дд, J= 3.3, 12,0 Гц), 3,88 (1H, м), 3-H2]}, четыре метина [d 1,69 (1H, м, 4-H), 1,75 (1H, м, 9-H), 2,06 (1H, м, 8-H), 2,16 (1H, м, 5-H)] и полуацетальную группу [d 4,67 ( 1H, d, J= 7,4 Гц, 1-H)] вместе с bD-глюкопиранозильным фрагментом [d 4,26 (1H, d, J= 7,9 Гц, {{101 }}ЧАС)]. Иридоидная структура 3 была уточнена с помощью экспериментов 1 H–1 H COSY и HMBC, а относительная стереоструктура была охарактеризована фазочувствительным экспериментом NOESY, как показано на рис. 1. Следовательно, стереоструктура 3 была выяснена, как показано.

НАТУРАЛЬНАЯ ЦИСТАНША TUBULOSA ДЛЯ РЕШЕНИЯ СЕКСУАЛЬНЫХ ПРОБЛЕМ PHGS75% ECH 30% ACT 12%

Структуры канканозидов О (4) и Р (5)

Канканозиды О (4) и Р (5), C16H26O8, также были получены в виде белых порошков с отрицательным оптическим вращением (4: [a]D 23 - 26.1; 5: [a]D 21 - 32. 7, оба в МеОН). В ИК-спектрах соединений 4 и 5 наблюдаются полосы поглощения при 3433, 1696, 1647 и 1076 см- 1 для 4, а также 3434, 1701, 1647 и 1{. {95}}76 см- 1 для 5, относящихся к гликозидным, карбоксильным и олефиновым функциям. Их УФ-спектры показали общий максимум поглощения при 217 нм, что указывает на присутствие в них фрагмента a,b-ненасыщенной карбоновой кислоты. Кислотный гидролиз 4 и 5 высвобождает D-глюкозу, тогда как при ферментативном гидролизе глюкозидазой 4 и 5 дают (2E,6E)-8-гидрокси-2,6-диметил{{37} },6-октадиеновая кислота20) (4a) и (2E,6E)-8-гидрокси-3,7- диметил-2,{{ 47}}октадиеновая кислота21) (5а) соответственно. Данные 1 Н- и 13С-ЯМР соединения 4 (CD3OD, табл. 2, 3) показали сигналы, относящиеся к двум метилам [d 1,71 (3H, уш с, 10-H3), 1,81 (3H, d, J{{ 66}},0 Гц, 9-H3)], три метилена {d 2,19 (2H, br t, J= ок. 7 Гц, 5-H2), 2,36 (2H, м, 4-H2), [4,24 (1H, дд, J= 7,6, 12,0 Гц), 4,33 (1H, дд, J= 6,2, 12,0 Гц), { {96}}H2]} и два тризамещенных олефина [d 5,41 (1H, ddd, J= 1.2, 6,2, 7,6 Гц, 7- H), 6,75 (1H, tq, J{ {111}}.2, 1,0 Гц, 3-H)] вместе с b-Dглюкопиранозильной частью [d 4,34 (d, J= 7,8 Гц, 1 -H)]. При сравнении сигналов углерода в спектре ЯМР 13С 4

с таковыми 4а наблюдался сдвиг гликозилирования в положении 8- (d C 4: 65,5; 4a: 59,4). Положение глюкозидной связи было также подтверждено экспериментами с HMBC, как показано на рис. 2. Следовательно, было выяснено, что стереоструктура 4 представляет собой (2E,6E)-8-bD-глюкопиранозилокси-2,{{ 16}}диметил-2,6-октадиеновая кислота. С другой стороны, данные 1 H- и 13C-ЯМР соединения 5 (CD3OD, табл. 2, 3) указывают на присутствие (2E,6E)-8-гидрокси{{30}} ,7-диметил-2,6-фрагмент октадиеновой кислоты [d 1,70 (3H, шир. с, 10-H3), 2,14 (3H, шир. с, 9- H3), 2,24 (2H, м, 4-H2), 2,27 (2H, м, 5-H2), 4,05, 4,20 (по 1H, оба шир. д, J= ок. 12 Гц, 8-H2), 5,47 (1H, tq, J= 7.1, 0,9 Гц, 6-H), 5,67 (1H, шир. с, 1-H )] вместе с bD-глюкопиранозильной частью [d 4,23 (d, J= 7,7 Гц, 1 -H)]. Связь bD-глюкопиранозильного фрагмента в 5 была выяснена на основе экспериментов HMBC, как показано на рис. 2. Кроме того, типичный сдвиг гликозилирования наблюдался для сигналов в положении 8- (d C 5: 75,6; 5a: 68.8). на основании вышеупомянутых данных стереоструктура 5 была определена как (2E,6E)-8-bD-глюкопиранозилокси-3,7-диметил-2,{{103 }}октадиеновая кислота.

Влияние компонентов на цитотоксичность, индуцированную фактором некроза опухоли-а (TNF-a), в клетках L929

Известно, что TNF-a опосредует различные повреждения органов посредством индукции клеточного апоптоза. В случае печени биологические эффекты TNF-a связаны с повреждением печени, вызванным печеночными токсинами, ишемией/реперфузией, вирусным гепатитом и алкоголем.22-24) Таким образом, TNF-a считается важная цель для открытия противовоспалительных и гепатопротекторных средств. Основываясь на вышеупомянутой концепции, мы исследовали защитные компоненты продуктов природного происхождения в отношении гибели клеток, индуцированной TNF-a, в клетках L929, TNF-a-чувствительной клеточной линии.25) Ранее мы сообщали

что несколько компонентов Piper chaba, 26-29) Boesenbergia rotunda, 30,31) Punica granatum, 32) Helichrysum arenarium, 33-35) и Sapindus rarak, 36-38) обладают ингибирующим действием. цитотоксичности, индуцированной TNF-a, в клетках L929. Поскольку фенилэтаноидные компоненты C. Tubeulosa (например,эхинакозид, актеозид и изоактеозиди т. д.) 5) также ингибировал эту цитотоксичность, мы дополнительно исследовали компоненты иридоида, фенилпропаноида и лигнана, как показано в таблице 4. В результате канканозид А (9, ингибирование: 16,3±2,0% при 1 00 мМ), муссаенозидовая кислота (10, 44,7±8,7%), 8-эпигаминовая кислота (11, 10,7±0,4%), 8-гидроксигераниол 8-ObD- Было обнаружено, что глюкопиранозид (17, 21,3±2,4%) и ( )-пинорезинол ObD-глюкопиранозид (22, 22,3±1,6%) проявляют значительную активность. Хотя их активность была слабее, чем у эхинакозида (IC50= 31,1 мМ), актеозида (17,8 мМ) и изоацетеозида (22,7 мМ), основных компонентов фенилэтаноида.5).

НАТУРАЛЬНЫЙ ЦИСТАНШ ТУБУЛОЗНЫЙ ДЛЯ УЛУЧШЕНИЯ ПОЛОВОЙ ФУНКЦИИ PHGS75% ECH 30% ACT 12%