3. Результаты

3.1. KRG ингибировал активность TYR и подавлял содержание меланина в бесклеточной системе.

Фермент TYR участвует в лимитирующей стадии меланогенеза [20,21]. Поэтому, чтобы проверить, способен ли KRG подавлять выработку этого фермента, мы провели бесклеточный анализ TYR грибов. Как показано на фиг. 1А, KRG сильно ингибирует продукцию TYR. Клетки B16/F10 обрабатывали KRG и стимулировали a-MSH, чтобы вызвать секрецию меланина, и было обнаружено, что она эффективно подавлялась KRG, как показано на фиг. 1B. Койевая кислота, известный отбеливающий агент, использовалась в качестве положительного контроля в обоих экспериментах.

Согласно соответствующим исследованиям, цистанхе — распространенное растение, известное как «чудодейственное растение, продлевающее жизнь». Его основным компонентом является цистанозид, который обладает различными эффектами, такими как антиоксидантное, противовоспалительное и стимулирующее иммунную функцию. Механизм между цистанхе и отбеливанием кожи заключается в антиоксидантном действии гликозидов цистанхе. Меланин в коже человека вырабатывается путем окисления тирозина, катализируемого тирозиназой, причем реакция окисления требует участия кислорода, поэтому свободные кислородные радикалы в организме становятся важным фактором, влияющим на выработку меланина. Цистанхе содержит цистанозид, который является антиоксидантом и может снижать образование свободных радикалов в организме, подавляя тем самым выработку меланина.

Нажмите на преимущества таблеток Cistanche

Для получения дополнительной информации:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

3.2. Влияние KRG на экспрессию мРНК и белков MITF и TRP

Вышеупомянутые результаты показали влияние KRG на содержание TYR и меланина. Однако, чтобы выяснить механизм ингибирования меланина с помощью KRG, мы оценили транскрипцию и трансляцию генов, связанных с путем меланогенеза: TRP-1 и TRP-2, TYR и фактор транскрипции, ассоциированный с микрофтальмом (MITF ). Как показано на рис. 2А и В, все четыре компонента пути меланогенеза сильно ингибировались KRG. Таким образом, KRG был подтвержден в качестве эффективного отбеливающего агента в исследовании in vitro.

3.3. Влияние перорального приема KRG на массу тела и потребление пищи

Воздействие искусственного УФ-В вызывает у животных стресс, что может привести к потере аппетита; поэтому мы оценили диетическое потребление и диетическую эффективность мышей HRM-2, подвергавшихся воздействию УФ-В в течение 5 недель, получавших солнцезащитный крем и перорально вводивших KRG. Как показано на фиг. 3А, не было значительного изменения массы тела в группах с нормальным, контрольным УФ-В или в группах лечения. Также было обнаружено, что потребление пищи значительно увеличилось в группах положительного контроля и группы, получавшей KRG, как показано на фиг. 3B. Эти результаты показывают, что, хотя УФВ вызывал стресс у мышей, лечение KRG эффективно предотвращало потерю аппетита и веса у мышей.

3.4. Анализ экспрессии генов, связанных с морщинами, у мышей HRM-2, облученных УФ-В лучами

Чтобы измерить влияние KRG на образование морщин на коже, мышей HRM-2 облучали ультрафиолетом B, чтобы вызвать появление морщин. После 5 недель облучения ткани кожи изолировали и анализировали экспрессию генов, связанных с морщинами (т.е. IL-1b, MMP-2 и MMP- 9). Как показано на фиг. 4A и B, экспрессия белка MMP-2, определенная с помощью ELISA, и экспрессия мРНК, определенная с помощью ПЦР в реальном времени, были значительно ниже в группе положительного контроля и при лечении KRG. группы, чем в контрольной группе, облученной УФ-В. Уровни MMP-9 и IL-1b также были значительно снижены в группах, получавших KRG, по сравнению с контрольной группой, облученной UVB, как показано с помощью ПЦР в реальном времени (рис. 4C и D).

3.5. Влияние KRG на меланогенез при повреждении кожи, облученном ультрафиолетом B

Чтобы подтвердить отбеливающую эффективность KRG, исследовали разницу в образовании меланина на 1, 3 и 5 неделе УФ-облучения, разделив дорсальную кожу мышей HRM-2 на левую (необработанную) и правую (УФВ-облучение). и срезы, обработанные образцами). Как показано на фиг. 5А, в течение 1-й недели воздействия УФ-В на мышей с применением крема для загара и КРГ не наблюдалось значительного снижения выработки меланина при обеих дозах КРГ. На 3-й неделе наблюдалось незначительное снижение выработки меланина в группе положительного контроля, получавшей солнцезащитный крем, и в группах KRG по сравнению с контрольной группой, облученной УФ-В, как показано на рис. 5В. На 5-й неделе, как ясно показано на рис. 5C, в группе положительного контроля, получавшей крем для загара, и в обеих группах, получавших KRG, наблюдалось значительное снижение выработки меланина. Эти результаты показали, что KRG является эффективным средством для отбеливания кожи.

3.6. Анализ влияния KRG на образование морщин у мышей HRM-2

Чтобы определить влияние KRG на образование и глубину морщин, мышей HRM-2 облучали УФ-В для индукции фотостарения, а глубину морщин кожи измеряли с помощью 3D-анализатора, как описано в разделе «Материалы и метод». раздел (2.11) на неделе 3, 4 и 5. Как показано на рис. 6A и B, в группе положительного контроля, получавшей солнцезащитный крем, и в обеих группах, получавших KRG, наблюдалось значительное уменьшение образования и глубины морщин.

3.7. Влияние КРГ на уменьшение толщины эпидермиса и увеличение коллагена

УФ-излучение может увеличивать толщину эпидермиса, в результате чего кожа становится толще и грубее. Более того, постоянное воздействие УФ-В может привести к деградации ММР и вызвать потерю коллагена, что необходимо для хорошего здоровья кожи [22]. Как показано на фиг. 7А, толщина эпидермиса, индуцированная УФ-В, значительно уменьшилась в группе положительного контроля, получавшей солнцезащитный крем, и в обеих группах, получавших KRG. Кроме того, на рис. 7В показано, что толщина эпидермиса, визуализируемая окрашиванием гематоксилином и эозином, была уменьшена в группе положительного контроля, получавшей солнцезащитный крем, и в обеих группах, получавших KRG. Окрашивание трихом по Массону, выполненное для визуализации компонентов матрикса в коже мышей HRM-2, выявило снижение интенсивности окрашивания в контрольной группе, облученной УФ-В, в результате деградации коллагеновых волокон; и наоборот, у мышей, получавших солнцезащитный крем и обе дозы KRG, интенсивность окрашивания была резко увеличена по сравнению с контрольной группой УФ-В (рис. 7C). Эти результаты ясно показали, что KRG является безопасным и эффективным средством для отбеливания кожи и омолаживающим эффектом.

3.8. Влияние крема с красным женьшенем на кожу человека

Эластичность кожи (также называемая упругостью) была измерена, как показано в таблице 1. Среднее увеличение эластичности 0.03386 наблюдалось в экспериментальной группе, на которую наносился крем, содержащий 3 процента красного женьшень. Контрольная группа, получавшая сливки без женьшеня, показала среднее повышение устойчивости на 0,0255.

Содержание масла в экспериментальной группе было увеличено до 67,8% по сравнению с контрольной группой, в которой содержание масла составляло 45,6%, как показано в Таблице 2. Детально результаты показали, что содержание масла увеличилось на 50% во всех опытные группы: 46,6% в полушарии, 25,4% в левой щеке и 32,6% в целом.

Содержание влаги снизилось как в контрольной, так и в экспериментальной группах, как показано в Таблице 3. Считается, что это связано с изменением погодных условий в период с октября по ноябрь в Республике Корея.

Изменение тонуса кожи в опытной группе составило в среднем снижение на 8,24; и наоборот, контрольная группа показала увеличение на 2,12 (таблица 4). В частности, тон кожи лба был повышен как в контрольной, так и в экспериментальной группах. В экспериментальной группе тонус кожи снизился как на правой, так и на левой щеке; и наоборот, в контрольной группе тонус их кожи повысился как на лбу, так и на правой щеке, что указывало на потемнение кожи. Таким образом, мы делаем вывод, что крем с женьшенем уменьшал склонность кожи к потере цвета; другими словами, это усилило эффект осветления.

Средняя эритема кожи уменьшилась на 33,8 в опытной группе и на 3,6 в контрольной группе (табл. 5). Эти результаты убедительно свидетельствуют о положительном влиянии экстракта красного женьшеня на улучшение общего состояния кожи без каких-либо побочных эффектов.

4. Дискуссия

Меланоциты — это специализированные клетки, продуцирующие меланин, находящиеся в базальном слое эпидермиса. Эти клетки участвуют в производстве и транспортировке меланина к соседним кератиноцитам и последующем формировании однородного слоя пигментации кожи. Меланин является важным пигментом, выполняющим две функции. Первая и наиболее важная функция заключается в пигментации кожи, а вторая функция заключается в защите кожи от вредного УФ-излучения за счет уменьшения количества активных форм кислорода [23,24]. Когда кожа подвергается воздействию УФ, активируется гормон а-МСГ, который вызывает выработку меланина из меланоцитов [25]. Ключевыми регуляторами всего этого процесса производства меланина являются MITF, фактор транскрипции для регуляции TYR, и связанные с тирозином белки (TRP-1 и TRP-2) [4,26e28]. Эти компоненты участвуют в производстве меланина и пигментации кожи.

Старение кожи можно разделить на два типа [29]. Внутреннее (или эндогенное) старение является неизбежным явлением старения, которое происходит при старении человека. Клинические признаки этого типа старения относительно мягкие и включают тонкие линии, сухость кожи и снижение эластичности [30]. Фотостарение (экзогенное старение) относится к феномену старения, наблюдаемому в коже, подвергающейся воздействию солнечных лучей в течение длительного времени. Элементом, ответственным за повреждение, является ультрафиолетовое излучение солнечного света. Этот тип фотостарения можно предотвратить, применяя имеющийся в продаже солнцезащитный крем перед выходом на солнце и сводя к минимуму время пребывания на солнце. Клинические признаки экзогенного старения вредны, такие как очень грубая, сухая кожа со сниженной эластичностью и образованием глубоких морщин с сильным провисанием кожи. Фотостареющая кожа также очень склонна к заболеваниям пигментации, таким как солнечное лентиго [31,32].

Более того, когда кожа подвергается чрезмерному воздействию солнечного света, содержащего УФВ, количество внеклеточных ММП увеличивается, вызывая деградацию белков матрикса, основным компонентом которого является коллаген [33]. Во всем мире коллаген считается необходимым элементом для эластичности кожи, и известно, что его деградация вызывает раннее образование морщин и снижает эластичность кожи. После воздействия УФ-В повышение уровня ММП приводит к деградации коллагена и других белков-субстратов [34]. Таким образом, это тип раны, нанесенной солнечным излучением на кожу, и наш организм прилагает усилия для заживления ран посредством синтеза нового коллагена. Однако, поскольку процесс заживления ран не всегда совершенен, постоянное воздействие УФ-В на кожу приводит к клиническим симптомам старения, включая морщины.

Хотя меланоциты выделяют большое количество растворимых компонентов, простагландин E2, простагландин F2a, адренокортикотропный гормон и NO считаются регуляторами меланогенеза [35-38]. Однако эффекты цитокинов на процесс меланогенеза достаточно сложны. Например, среди семейства IL в стимуляции меланогенеза участвуют IL-1a/1b и гранулоцитарно-макрофагальные колониестимулирующие факторы; однако IL-6, трансформирующий фактор роста бета-1 (TGF-b1) и фактор некроза тканей a (TNF-a) подавляют выработку меланина. Наши результаты показали, что IL-1b был повышен в контрольной группе, облученной УФ-В, но значительно снизился при лечении KRG. В заключение, KRG и крем KRG обладают мощными антимеланогенными и отбеливающими свойствами и могут быть превращены в коммерчески доступное косметическое средство.

Конфликт интересов

Благодарности

Приложение А. Дополнительные данные

Рекомендации

[1] Бреннер М., Слушание VJ. Защитная роль меланина от УФ-повреждений в коже человека. Фотохим Фотобиол 2008;84:539e49.

[2] Kim DS, Jeong YM, Park IK, Hahn HG, Lee HK, Kwon SB, Jeong JH, Yang SJ, Sohn UD, Park KC. Новое производное 2-имино-1,3-тиазолина, KHG22394, ингибирует синтез меланина в клетках меланомы мыши B16. Биол Фарм Булл 2007;30:180e3.

[3] Kim DS, Kim SY, Park SH, Choi YG, Kwon SB, Kim MK, Na JI, Youn SW, Park KC. Ингибирующее действие 4-н-бутилрезорцина на активность тирозиназы и синтез меланина. Биол Фарм Булл 2005;28:2216e9.

[4] Kim HR, Kim H, Jung BJ, You GE, Jang S, Chung DK. Липотейхоевая кислота, выделенная из Lactobacillus plantarum, ингибирует меланогенез в клетках меланомы мыши B16F10. Мол Клетс 2015; 38:163e70.

[5] Гольдштейн Б. Женьшень: его история, распространение и народные традиции. Am J Chin Med (Гард-Сити, Нью-Йорк) 1975; 3: 223e34.

[6] Шевалье А. Энциклопедия лекарственных растений. Сент Леонардс. Новый Южный Уэльс: Dorling Kindersley pty limited; 1996.

[7] Ким Б.М., Ким Д.Х., Пак Дж.Х., На Х.К., Сурх Ю.Дж. Гинзенозид Rg3 индуцирует апоптоз клеток рака молочной железы человека (MDA-MB-231). J Рак Предыдущий 2013; 18: 177e85.

[8] Ким Э.К., Ли Д.Х., Чо С.Х., Шен Г.Н., Джин Л.Г., Мён К.С., О Х.Дж., Ким Д.Х., Юн Д.Д., Ро С.С. Получение черного женьшеня обыкновенного новыми методами и его противоопухолевое действие. Корейский журнал травологии 2008; 23:85e92.

[9] Saba E, Jeong DH, Roh SS, Kim SH, Kim SD, Kim HK, Rhee MH. Экстракты Chong-Myung-Tang, обогащенные черным женьшенем, улучшают пространственное обучение у крыс и оказывают противовоспалительное действие in vitro. J Ginseng Res 2017;41:151e 8.

[10] Saba E, Kim SH, Kim SD, Park SJ, Kwak DM, Oh JH, Park CK, Rhee MH. Облегчение диабетических осложнений с помощью экстракта красного женьшеня, обогащенного гинзенозидом Rg3-, у мышей с ЛПНП, получавших западную диету. J Ginseng Res 2017;42:352e5.

[11] Saba E, Son Y, Jeon BR, Kim SE, Lee IK, Yun BS, Rhee MH. Ацетилэбурикоевая кислота из laetiporus sulphurous var. miniatures подавляет воспаление в клетках мышиных макрофагов RAW 264.7. Микобиология 2015;43:131e6.

[12] Дай Д., Чжан К.Ф., Уильямс С., Юань К.С., Ван К.З. Женьшень при раке: потенциальная роль в модуляции опосредованного воспалением ангиогенеза. Am J Chin Med 2017; 45:13e22.

[13] Saba E, Jeon BR, Jeong DH, Lee K, Goo YK, Kim SH, Sung CK, Roh SS, Kim SD, Kim HK и др. Экстракт черного женьшеня уменьшает гиперхолестеринемию у крыс. J Ginseng Res 2016;40:160e8.

[14] Кристенсен Л.П. Химия гинзенозидов, биосинтез, анализ и потенциальное воздействие на здоровье. Adv Food Nutr Res 2009; 55: 1e99.

[15] Сонг М., Мун Дж. Х., Ко Х.К., Ким Б.С., Ким М.Б. Порошок красного корейского женьшеня при лечении меланодермии: неконтролируемое обсервационное исследование. J Ginseng Res 2011; 35:170e5.

[16] Кабанес Дж., Чазарра С., Гарсия-Кармона Ф. Койевая кислота, косметическое средство для отбеливания кожи, является медленно связывающимся ингибитором катехолазной активности тирозиназы. J Pharm Pharmacol 1994;46:982e5.

[17] Биссет Д.Л., Хэннон Д.П., Орр ТВ. Животная модель кожи солнечного старения: гистологические, физические и видимые изменения в коже голых мышей, облученных УФ-излучением. Фотохим Фотобиол 1987;46:367e78.

[18] Кардифф Р.Д., Миллер К.Х., Манн Р.Дж. Ручное окрашивание срезов тканей мыши гематоксилином и эозином. Протокол Cold Spring Harb 2014; 2014: 655e8.

[19] Chang JY, Kessler HP. Трихромное окрашивание по Массону помогает дифференцировать миофиброму от поражений гладкой мускулатуры в области головы и шеи. J Formos Med Assoc 2008;107:767e73.

[20] Огучи К., Танака Т., Илия И., Ито Т., Иинума М., Мацумото К., Акао Ю., Нозава Ю. Гнетол как мощный ингибитор тирозиназы из рода Gnetum. Biosci Biotechnol Biochem 2003;67:663e5.

[21] Yokota T, Nishio H, Kubota Y, Mizoguchi M. Ингибирующее действие глабридина из экстрактов солодки на меланогенез и воспаление. Pigment Cell Res 1998; 11:355e61.

[22] Jablonska-Trypuc A, Matejczyk M, Rosochacki S. Металлопротеиназы матрикса (MMP), основные ферменты внеклеточного матрикса (ECM) при деградации коллагена, как мишень для противоопухолевых препаратов. J Enzyme Inhib Med Chem 2016; 31: 177e83.

[23] Englaro W, Bertolotto C, Brunet A, Pagès G, Ortonne JP, Ballotti R. Ингибирование митоген-активируемого пути протеинкиназы запускает дифференцировку клеток меланомы B16. Журнал биологической химии 1998; 273:9966e70.

[24] Tam I, Stepien K. Меланоциты – иммунокомпетентные пигментированные клетки. Постеры Дерматологии и Аллергологии 2007;24:188.

[25] Lee HJ, Lee WJ, Chang SE, Lee GY. Гесперидин, популярный антиоксидант, ингибирует меланогенез посредством erk1/2-опосредованной деградации MITF. Int J Mol Sci 2015;16: 18384e95.

[26] Hu YH, Liu X, Jia YL, Guo YJ, Wang Q, Chen QX. Ингибирующая кинетика хлоркоричных кислот на тирозиназу грибов. J Biosci Bioeng 2014;117:142e6.

[27] Masamoto Y, Ando H, Murata Y, Shiraishi Y, Tada M, Takahata K. Ингибирующая активность грибной тирозиназы эскулетина, выделенного из семян Euphorbia lathyris L. Biosci Biotechnol Biochem 2003;67:631e4.

[28] Ву М., Хемесат Т.Дж., Такемото К.М., Хорстманн М.А., Уэллс А.Г., Прайс Э.Р., Фишер Д.З., Фишер Д.Э. c-Kit запускает двойное фосфорилирование, которое сочетает в себе активацию и деградацию основного меланоцитарного фактора Mi. Гены Дев 2000;14:301e12.

[29] Тобин Д.Дж. Введение в старение кожи. Журнал жизнеспособности тканей 2017; 26:37e 46.

[30] Helfrich YR, Sachs DL, Voorhees JJ. Обзор процессов старения кожи и фотостарения. Дерматол Нурс 2008;20:177e83. викторина 184.

[31] Фишер Дж.Дж., Канг С., Варани Дж., Бата-Чорго З., Ван И., Датта С., Вурхиз Дж.Дж. Механизмы фотостарения и хронологическое старение кожи. Архив дерматологии 2002; 138:1462e70.

[32] Эль-Домиати М., Аттиа С., Салех Ф., Браун Д., Бирк Д., Гаспарро Ф., Ахмад Х., Уитто Дж. Внутреннее старение в сравнении с фотостарением: сравнительное гистопатологическое, иммуногистохимическое и ультраструктурное исследование кожи. Экспериментальная дерматология 2002; 11:398e405.

[33] Бреннан М., Бхатти Х., Нерусу К.С., Бхагаватула Н., Канг С., Фишер Г.Дж., Варани Дж., Вурхиз Дж.Дж. Матриксная металлопротеиназа-1 является основным коллагенолитическим ферментом, ответственным за повреждение коллагена в коже человека, облученной УФ-излучением. Фотохимия и фотобиология 2003;78:43e8.

[34] Quan T, Qin Z, Xia W, Shao Y, Voorhees JJ, Fisher GJ. Металлопротеиназы, разлагающие матрикс, при фотостарении. J Investig Dermatol Symp Proc 2009;14:20e4.

[35] Гиллбро Дж. М., Олссон М. Дж. Меланогенез и механизмы осветления кожи – существующие и новые подходы. Int J Cosmet Sci 2011; 33:210e21.

[36] Romero-Graillet C, Aberdam E, Clément M, Ortonne JP, Ballotti R. Оксид азота, вырабатываемый облученными ультрафиолетом кератиноцитами, стимулирует меланогенез. Журнал клинических исследований 1997; 99:635.

[37] Wakabayashi Y, Nakajima H, Imokawa G. Аннулирующий эффект модификаторов N-связанных углеводов на фактор стволовых клеток и эндотелин -1-стимулируемую эпидермальную пигментацию в эпидермальных эквивалентах человека. Журнал дерматологических наук 2013; 69: 215e28.

[38] Mizoguchi M. Развитие меланоцитов: с призывом к молодым женщинам-ученым. Pigment Cell Res 2004; 17:533e44.

Для получения дополнительной информации: david.deng@wecistanche.com WhatsApp:86 13632399501