Влияющие на кожу свойства и компоненты экстракта надземных частей Persicaria Senticosa

Контактное лицо: ali.ma@wecistanche.com

Юн-Хёк Чхве, 1 Джэ Ён Ли, 2 Джи Ын Ли, 1 Ён У Чжон, 1 Вонсик Чжон, 1 Сон Су Хон, 1 Ён-Рак Чо, 2 и Чун Ван Чой 1

1. Введение

Персикария колючаяоднолетнее растение семейства Polygonaceae, распространенное по всей Корее. С давних времен это растение использовалось в народной медицине с благотворным эффектом для лечения различных заболеваний, таких как удаление опухших частей раны или карбункулов, целлюлита и кровообращения, а также устранение застоя крови. Недавние исследования показали, чтоПерсикария колючаяоказывает противовоспалительное действие [1]; однако об этом растении не сообщается как о биоактивном косметическом ингредиенте. Предыдущие фитохимические исследования цветков, стеблей и корней рода Polygonum выявили различные флавоноиды и фенольные соединения, такие как гидроксибензойная кислота, рутин, кверцетин-3-O-глюкуронид, кверцетин-3-O-глюкозид и лютеолин-7-O-рутинозид считали основными активными компонентами [2, 3]. Эти активные соединения проявляют разнообразные фармакологические эффекты, такие как противовоспалительное, противоязвенное, антигипертензивное и противораковое действие [4]. Во время скрининга косметических ингредиентов путем измерения эффекта удаления радикалов на 1,1-дифенил-2-пикрилгидразил (DPPH), удаления радикалов ABTS, ингибирования эластазы,тирозиназаингибирование и анализ оксида азота, было обнаружено, что несколько экстрактов Polygonumextracts проявляют сильную активность.

Нажмите чтобыЦистанхе используется для снижения активности тирозиназы.

2. Материалы и методы

2.1. Растительные материалы и общие процедуры натуральных продуктов.

Персикария колючаябыл собран в Со-мён, Чхунчхон-си, Канвондо, Корея, в 2016 (GPS: N 37, градус 55′30,1″, E 127, градус 37′ 57,0″, высота над уровнем моря: 434 м). Образцы ваучеров (G071) были заверены доктором Чун Ван Чоем.Персикария колючаябыли депонированы в гербарии биоцентра Gyeonggido Business & Science Accelerator, Сувон, Южная Корея (рис. S3). 99,9-процентный метанольный экстракт 34Polygonum был получен из Корейского банка растительных экстрактов в Корейском научно-исследовательском институте биологических наук и биотехнологий (Тэджон, Корея). Эксперименты по ЯМР 1Н и 13С проводили на спектрометре Bruker Ascend 700 МГц с тетраметилсиланом (ТМС). LC-ESI-MS получали на приборе Triple TOF 5600 plus (AB SCIX, США) и HRESI-MS на приборе LTQ Orbitrap XL (Thermo, США). Тонкослойную хроматографию (ТСХ) проводили на пластинах с силикагелем 60F254 (Merck, Германия) и силикагелем 60 RP-18 F254S (Merck, Германия). Колоночную хроматографию (CC) проводили с использованием силикагеля 60 (70~230 меш, Merck, Германия), ODS-A (12 нм S-7 мкм, YMC GEL, Япония), а препаративную ВЭЖХ выполняли на ЖХ{{ 23}}А (Симадзу, Япония).

2.2. НЕТ анализа.

Клетки RAW 264.7 высевали в 96-луночные планшеты (5 × 104 клеток/лунку) и обрабатывали образцом в течение 1 ч перед стимуляцией ЛПС (1 мкг/мл) в течение 24 ч. Отрицательный контроль обрабатывали бессывороточной средой. Количество нитрита, нестабильного метаболита NO, измеряли с помощью реактива Грисса (1% сульфаниламида и 0,1% нафтилэтилендиаминдигидрохлорида в 2,5% фосфорной кислоте). Затем измеряли поглощение при 540 нм с использованием считывателя ELISA. Количество нитрата определяли по стандартной кривой для нитрита натрия [5–7].

2.3. Анализ клеточной цитотоксичности.

Клетки RAW 264.7 высевали с плотностью 5 × 104 клеток/лунку в 96-луночные планшеты. Клетки обрабатывали образцами в течение 1 часа перед стимуляцией LPS (1 мкг/мл) в течение 24 часов. В каждую лунку добавляли МТТ (5 мг/мл в PBS) и инкубировали в течение 2 часов. Среду удаляли из лунок аспирацией, в каждую лунку добавляли ДМСО и встряхивали планшет. Поглощение каждой лунки измеряли при длине волны 540 нм с использованием считывателя ELISA. Данные представлены как среднее значение ± стандартное отклонение для трех повторов.

2.4. Анализ активности удаления радикалов DPPH.

Активность DPPH по удалению радикалов измеряли с использованием метода, описанного Blois [8] и Ozgen et al. [9]. К образцу добавляли растворенный в метаноле раствор ДФПГ, разбавляли до необходимой концентрации и проводили реакцию при комнатной температуре в течение 30 мин. Поглощение измеряли при 517 нм с использованием считывателя ELISA. В качестве положительного контроля использовали антиоксидант бутилированный гидроксианизол (БГА) и определяли значение IC50 образца.

2.5. Активность по удалению радикалов ABTS.

Активность ABTS по удалению радикалов измеряли с использованием ранее описанного метода [10, 11]. ABTS plus получали путем смешивания 7 мМ раствора ABTS и 2,45 мМ раствора персульфата калия (K2S2O8) с ABTS: K2S2O8 (соотношение 2:1) в течение 12–16 ч с образованием катиона (ABTS plus). Поглощение измеряли при 734 нм с использованием считывателя ELISA. BHA, антиоксидант, использовали в качестве положительного контроля.

2.6. Анализ ингибирования тирозиназы.

Тирозиназаингибирующую активность измеряли с использованием метода, описанного Yagie et al. [12]. Реакцию проводили в 0.1М калийфосфатном буфере (рН 6,5), содержащем 1,5 мМ L-тирозина и 1250 ед/мл грибной тирозиназы. Реакционную смесь инкубировали при 37°С в течение 20 мин. Исследуемые образцы были проанализированы на ингибирование тирозиназы путем измерения ее влияния натирозиназаактивность с использованием микропланшета SpectraMax 190PC ELISAreader при 490 нм. Арбутин и койевую кислоту использовали в качестве положительного контроля и определяли значение IC50 образца.

2.7. Анализ ингибирования эластазы.

Реакцию проводили в {{0}},5 мМ трис-буфере (pH 8,5), содержащем 1 мг/мл N-сукцинил-(Ala)3-p-нитроанилида и 0,6 ед/мл эластазы. . Реакционную смесь инкубировали при 25°С в течение 10 мин. Исследуемые образцы анализировали на ингибирование эластазы путем измерения его влияния на активность эластазы с использованием считывателя ELISA при 405 нм. Урсоликацид использовали в качестве положительного контроля и определяли значение IC50 образца [13].

2.8. Статистический анализ.

Статистический анализ данных был выполнен с помощью программного обеспечения PRIZM5 (GraphPad, Калифорния, США), и данные представлены как среднее ± стандартное отклонение. Односторонний t-критерий Стьюдента использовался для анализа значимости различий между группами, и P < 0:05="" считалось="" статистически="">

3. Результаты и обсуждение

3.1. Связанные с кожей свойства экстрактов растений семейства Polygonaceae.

Эффект удаления радикалов на DPPH, удаление радикалов ABTS, ингибирование эластазы,тирозиназаБыло обнаружено, что ингибирование и анализ оксида азота на нескольких экстрактах Polygonum показывают мощную активность. Результаты показали, что Persicariajaponica и Rumex longifolius имеют анализ NO (IC{{0}}.3 и менее 25,0 мкг/мл). Для DPPH IC50 метанольного экстракта Polygonum ciliinerve, Polygonum alpinum и Persicaria Chinensis составляла 36,9, 15,4 и 19,2 мкг/мл соответственно. В активности по удалению радикалов ABTS IC50 метанолового экстракта Polygonum cuspidate и Polygonum alpinum составляла 5,2. и 5,3 мкг/мл соответственно. ВтирозиназаИнгибирующая активность, IC50 метанольного экстракта Polygonum sachalinensroot и Polygonum cuspidata составила 289,0 и 483,9 мкг/мл соответственно. В анализе ингибирования эластазы IC50 метанольного экстракта Polygonum sachalinense, Polygonum cuspidatum, Persicaria hydropiper, Persicaria sieboldi, Polygonumorientale, Persicaria lapathifolia, Persicaria dissitiflora, Rumexacetosella, Rumex Crispus, Polygonum alpinum, Persicarialongiseta, Persicaria Chinensis, Persicaria Persicaria conspicua, Rheum palmatum и Persicaria lapathifolia была ниже 100 мкг/мл (таблица 1).

3.2. Кожные свойства фракций Persicaria senticosa.

Влияние удаления радикалов на 1,1-дифенил-2-пикрилгидразил (DPPH), удаление радикалов ABTS, ингибирование эластазы и анализ оксида азота на несколькихПерсикария колючаябыло обнаружено, что фракции проявляют мощную активность. Результаты показали, что фракции CH2Cl2 и EtOAc имеют анализ NO (менее 25 и 44,64 мкг/мл соответственно). Активность фракций EtOAc по удалению радикалов DPPH и ABTS составляла 13,7 и 5,0 мкг/мл. В анализе ингибирования эластазы IC50 фракций н-гексана и CH2Cl2 составляла менее 100 мкг/мл (таблица 2).

3.3. Выделение и определение соединений из экстракта персикарии колючей.

Персикария колючаянадземные части (1,4 кг), высушенные в тени и измельченные в порошок, добавляли к 4{{1{0}} 70 % этанолу (для ВЭЖХ) и два раза при комнатной температуре (каждый раз в течение 2 дней) и концентрировали в вакууме при 40 градусах с получением 180,4 г экстрактов. Экстракты суспендировали в дистиллированной воде, а затем распределяли с н-гексаном (4:0 л × 3), CH2Cl2 (4:0 л × 3), EtOAc (4:0 л × 3) и н-бутанолом (4:0 л × 3). с получением н-гексана (11,7 г), CH2Cl2 (7,4 г), EtOAc (21,7 г), бутанола (22,5 г) и водорастворимых фракций (110,1 г) (схема 1). Фракцию EtOAc (21,7 г) разделяли с помощью МЭЖХ с использованием градиентных смесей в качестве элюентов (F001-003). Соединения 1 (3,2 мг) и 5 ​​(3,9 мг) выделяли из F002, который использовали препаративной ВЭЖХ. Фракцию F001 отделяли с помощью ВЭЖХ с использованием градиентных смесей в качестве элюентов (F011-F018). Соединение 6 (1,5 мг) выделяли из F016, который использовали с помощью препаративной ВЭЖХ. Соединение 7 (2,7 мг) выделяли из F017, который использовали с помощью препаративной ВЭЖХ. F012 разделяли с помощью МЭЖХ, в которой в качестве элюентов использовали градиентные смеси (F121-F124). Соединение 4 (10,8 мг) выделяли из F124, который использовали с помощью препаративной ВЭЖХ. Кроме того, F014 разделяли препаративной ВЭЖХ с использованием градиентных смесей в качестве элюентов (F141-F143). Соединение 3 (2,3 мг) выделяли из F141 с помощью препаративной ВЭЖХ. Соединение 2 (4,8 мг) выделяли из F142 с помощью полупрепаративной ВЭЖХ. Очистку растворимого слоя EtOAc осуществляли разделением с помощью колоночной хроматографии и анализом MPLC до соединений 1-7. Он был идентифицирован как лолиолид (1) [14], кверцетин-3-O-глюкозид (2) [15], кверцетин-3-O-глюкуронид (3) [16], 4-метокси кафтраровая кислота (4) [17], кемпферол-3-(6-метилглюкуронид) (5) [18], кверцетин-3-(6-метилглюкуронид) (6) [19, 20] и кверцетин (7) [21]. Структура была выяснена комбинацией 1D и 2D ЯМР и МС-спектрометрии, а также сравнением с литературными данными (рис. 1).

3.4. Связанные с кожей свойства соединений Persicariasenticosa.

Эффект удаления радикалов на DPPH,тирозиназаингибирование и анализ оксида азота на нескольких соединениях изПерсикария колючаябыло обнаружено, что он проявляет мощную активность (рис. S4–7). Результаты показали, что соединение 7 имеет анализ NO (IC50 29,7 мкг/мл). Для DPPH IC50 соединений 2, 3, 5 и 7 составляло 39,6, 31,2, 37,0 и 22,7 мкг/мл соответственно. При ингибирующей тирозиназу активности IC50 соединения 7 составляла 14,3 мкг/мл (таблица 3).

4. Выводы

Персикария колючаяоднолетнее растение семейства Polygonaceae, распространенное по всей Корее. С давних времен это растение использовалось в народной медицине с благотворным эффектом для лечения различных заболеваний. В этом исследовании оценивались связанные с кожей свойства и компоненты экстракта надземной части Persicaria senticosa и тридцати четырех растений Polygonaseae. В ходе скрининга косметических ингредиентов путем измерения эффекта удаления радикалов на DPPH, ABTS удаление радикалов, разглаживание морщин оценивали с помощью ингибирования эластазы, отбеливание изучали с помощьютирозиназаингибирование и противовоспалительное действие тестировали с помощью анализа оксида азота. Было обнаружено, что некоторые экстракты ромашки проявляют потенциальную активность. Результаты показали, что экстракт Persicaria senticosamethanolic обладает активностью по удалению радикалов DPPH и ABTS (IC50 61.0 и 17,5 мкг/мл). В анализе ингибирования эластазы и анализе оксида азота IC50 метанольного экстракта Persicaria senticosa составляла 241,5 мкг/мл и 71,8 мкг/мл соответственно. 70-процентный этанольный экстракт Persicaria senticosa разделяли на н-гексан, CH2Cl2, EtOAc, н-BuOH и водные фракции.

Растворимая в EtOAc фракция показала сильное воздействие на кожу (рис. 2 и таблица 3). Эти результаты свидетельствуют о том, что активные компоненты вПерсикария колючаяответственные за активность, связанную с кожей, были сконцентрированы в растворимой в EtOAc фракции Persicaria senticosa (схема 1). С другой стороны, растворимая в н-гексане фракция, растворимая в дихлорметане фракция и растворимая в BuOH фракция, полученные из экстракта Persicaria senticosa, показали равноэффективную активность в отношении анализа оксида азота, DPPH и активности по удалению радикалов ABTS, тогда как оставшаяся водная фракция продемонстрировала слабое ингибирующее действие (таблица 2). ).

Таким образом, очистка под контролем биоанализа трех активных фракций, т. е. растворимой в EtOAc фракцииПерсикария колючаяпроводили для очистки активных компонентов, ответственных за действие на кожу, с последующим процессом, описанным на схеме 1 соответственно.

Очистка растворимого слоя EtOAc отПерсикария колючая70-процентный этанольный экстракт выполняли разделением колоночной хроматографией и анализом MPLC до соединений 1-7. Он был идентифицирован как лолиолид (1), кверцетин3-O-глюкозид (2), кверцетин-3-O-глюкуронид (3), 4-метоксикафтаровая кислота (4), кемпферол{{ 11}}(6-метилглюкуронид) (5), кверцетин-3-(6-метилглюкуронид) (6) и кверцетин (7). Структура была выяснена комбинацией 1D- и 2D-ЯМР и МС-спектрометрии, а также сравнением с литературными данными (рис. S2). Эффект удаления радикалов на 1,1-дифенил-2-пикрилгидразил (DPPH),тирозиназаингибирование, и было обнаружено, что анализ оксида азота на нескольких соединениях из Persicaria senticosa показывает сильную активность. Результаты показали, что соединение 7 имеет анализ NO (IC5029,7 мкМ). Для DPPH IC50 соединений 2, 3, 5 и 7 составляла 39,4, 32,1, 37,0 и 22,7 мкМ соответственно. Втирозиназаингибирующей активности, IC50 соединения 7 составляла 14,3 мкМ. Как показано на фиг. 3, соединения 2 и 5 являются основными соединениями в растворимой в EtOAc фракции Persicaria senticosa (- рис. S1). А соединения 2 и 5 показали превосходную антиоксидантную активность (рис. 4), что согласуется с предыдущими исследованиями [18, 22].

Настоящее исследование показало, чтоПерсикария колючаяи Polygonaseae содержат химические соединения с активностью, связанной с кожей, и могут быть интересны в качестве нового источника биоактивных веществ для косметической промышленности.