Спонтанный гранулоцитарный лейкоз у мышей NOD/Shi-scid IL-2R null

Абстрактный:Здесь мы сообщаем о случае спонтанного гранулоцитарного лейкоза у 51-недельного мальчика NOD/Shi-скидИл-2р нулевая (NOG) мышь. Мышь показалапрогрессирующая анемияигрубые дыхательные движения. Макроскопически селезенка изменена в цвете и увеличена. Гистологически костный мозггрудинабедренная кость была очень клеточной и почти исключительно заполненанеопластические клетки. Ядра неопластических клеток были крупными, от овальной до слегка неправильной формы, небольшое количество клеток имелопочка- или кольцевидные ядра.Неопластические клеткиобширно инфильтрировал органы, при этом заметно поражались селезенка и печень. Иммуногистохимически большая популяция неопластических клеток в красной пульпе селезенки и синусоидах печени была положительной намиелопероксидаза. На основании гистологических особенностей в данном случае был поставлен диагноз:гранулоцитарный лейкоз. Эта новая информация оспонтанные опухолиможет быть полезно для правильного использования этого штамма мышей в дальнейших исследованиях. (DOI: 10.1293/tox.2020-0092; J Toxicol Pathol 2021; 34: 241–244)

Ключевые слова: гранулоцитарный лейкоз, мышь NOG, спонтанная опухоль

НАЖМИТЕ ЗДЕСЬ, ЧТОБЫ ПОЛУЧИТЬ НАТУРАЛЬНЫЙ ОРГАНИЧЕСКИЙ ЭКСТРАКТ ЦИСТАНШИ С 25% ЭХИНАКОЗИДА И 9% АКТЕОЗИДА ДЛЯ ФУНКЦИИ ПОЧЕК

Служба поддержки Wecistanche — крупнейшего экспортера цистаншей в Китае:

Электронная почта:wallence.suen@wecistanche.com

Whatsapp/Телефон:+86 15292862950

Магазин для получения дополнительных технических характеристик:

https://www.xjcistanche.com/cistanche-shop

Спонтанный гранулоцитарный лейкозредко встречается у некоторых линий мышей, хотя химические агенты и ионизирующая радиация могут увеличить заболеваемость у некоторых линий мышей1, 2. Мыши NOD/Shi-scid IL-2R null (NOG)животные с иммунодефицитоми представляют дефекты в Т-, В- и естественных клетках-киллерах, а также плохо функционирующие макрофаги и дендритные клетки в результате нокаута -цепи рецептора IL-2 (IL2Rc) в штамме NOD-scid3. Этот штамм мышей используется для доклинических испытаний, таких как тест на онкогенность, для оценки качества и безопасности биологических продуктов для регенеративной медицины с использованием клеток/тканей человеческого происхождения из-за заметно лучшего приживления ксеногенных клеток4-6. Хотя иммунодефицитное состояние и его последствия для ксенотрансплантатов хорошо изучены, имеется мало информации о спонтанных опухолях, возникающих у этой линии мышей, таких как лимфома тимуса,молочная железажелеза аденома/аденокарцинома, бронхиолоальвеолярный рак, рабдомиосаркомаи тератома7. Здесь мы сообщаем о случае гранулоцитарного лейкоза у самца мыши NOG 51-недельного возраста.

Животное было получено от In-Vivo Science Inc. (Канагава, Япония) в возрасте 6 недель и не подвергалось лечению. Животное содержалось индивидуально в пластиковой клетке с индивидуально вентилируемой системой клеток (Maxi Miser Caging System; Oriental Giken Inc., Токио, Япония) в помещении с барьерной системой с контролируемой средой, в которой поддерживалась температура 22 ± 2 градуса с влажность 50 ± 20 % и 12--часовой цикл света/темноты. Мышам давали автоклавированный гранулированный рацион (CRF-1; Charles River Japan, Inc., Токио, Япония) с автоклавированной водопроводной водой и свободным количеством воды. С животным обращались в соответствии с протоколом, одобренным Институциональным комитетом по уходу и использованию животных компании CMIC Pharma Science Co., Ltd., аккредитованной AAALAC International.

У этой мыши наблюдались клинические признаки ослабления, такие как анемия, затрудненное дыхание и снижение массы тела в возрасте от 49 до 51 недели. Животное было подвергнуто эвтаназии в возрасте 51 недели. При вскрытии селезенка обесцвечена и увеличена. В других органах явных отклонений от нормы не наблюдалось. Тимус и лимфатический узел были атрофическими, как и у нормальных мышей NOG.

Все образцы органов и тканей собирали обычным способом, фиксировали в 10% нейтральном забуференном формалине, заливали в парафин и делали срезы толщиной примерно 3 мкм. Для патологоанатомического исследования срезы окрашивали гематоксилином и эозином (НЕ). Срезы селезенки и печени иммуногистохимически окрашивали на поликлональные антитела кролика против миелопероксидазы человека (МПО) (Dako Japan, Токио, Япония) в качестве маркера миелоидных клеток, моноклональные антитела кролика против CD3 человека (Nichirei Biosciences Inc., Токио, Япония). ) в качестве маркера Т-клеток и моноклональное антитело кролика против Pax-5 человека (Abcam Inc., Кембридж, Великобритания) в качестве маркера В-клеток8. Срезы инкубировали с антителами при комнатной температуре в течение 1 часа и иммунодетекцию проводили с использованием набора Histofine® MOUSESTAIN KIT (Nichirei Biosciences Inc.) с 3,3'-диаминобензидин/H2O2 в качестве хромогена. Затем иммуноокрашенные срезыконтрастное окрашивание гематоксилином.

Гистопатологически костный мозг грудины и бедренной кости был высококлеточным и почти исключительно заполнен неопластическими клетками (рис. 1А). Жировая ткань была полностью смещена. В костном мозге встречались единичные клеточные очаги, состоящие из эритроидных и мегакариоцитарных элементов, которые считались остаткаминормальный кроветворение. Большинство неопластических клеток имели бластный вид, характеризующийся большими ядрами овальной или слегка неправильной формы и ретикулярным хроматином, содержащим одно или несколько выступающих ядрышек. Было небольшое количество клеток с почковидными или кольцевидными ядрами, а также несколько клеток с дольчатыми ядрами (рис. 1Б). Гранулы в цитоплазме неопластических клеток не были заметны на срезах, окрашенных HE. В костном мозге были обнаружены многочисленные митотические фигуры, а также единичные апоптотические тельца. Неопластические клетки заметно инвазировали надкостницу и окружающие скелетные мышцы. Произошла обширная инфильтрация неопластических клеток в другие органы и ткани, при этом заметное поражение были поражены селезенка и печень. В селезенке опухолевые клетки наблюдались по всей красной пульпе (рис. 2). Была очевидна капсульная инфильтрация опухолевыми клетками. Наблюдалось несколько развивающихся эритроидных серий и мегакариоцитов. Иногда наблюдались мегакариоциты, содержащие в цитоплазме одну или несколько миелоидных клеток, что указывает на эмпериполез. В печени опухолевые клетки диффузно инфильтрировали капсулу Глиссона и печеночные синусоиды (рис. 3). В некоторых кровеносных сосудах также обнаруживались неопластические клетки с ядрами в форме почки или кольца. Некоторые гепатоциты в перипортальной области с выраженной неопластической клеточной инфильтрацией демонстрировали дегенерацию или некроз, тогда как нормальная структура печеночной дольки оставалась интактной. Неопластическая клеточная инфильтрация также была обнаружена в других органах, включая альвеолярную стенку и периваскулярную область легких, интерстадион в почках, синусоиды в надпочечниках, а также слизистую и подслизистую оболочку желудочного тракта (желудка и кишечника). Иммуногистохимически большая популяция неопластических клеток в красной пульпе селезенки (рис. 4) и синусоидах печени была положительной на МПО. CD3 и Pax-5-положительные клетки не были обнаружены. Результаты иммуноокрашивания CD3 и Pax-5 были аналогичны результатам иммуноокрашивания селезенки нормальных мышей NOG, которые были гистологически гипопластическими и не содержали CD3 или Pax-5-положительных клеток.

Иммуногистохимическое исследование показало, что неопластические клетки произошли из миелоидных клеточных линий. В некоторых пораженных областях, особенно в селезенке и печени, небольшое количество клеток имело почечную, кольцевую или дольчатую форму, что указывает на дифференцировку миелоидных серий. Эти данные позволяют предположить, что неопластические клетки происходят из незрелых гранулоцитов. О тяжелом миелопоэзе может свидетельствовать наличие всех типов развивающихся миелоидных рядов, в отличие от доминирования незрелых клеток при лейкозах. Кроме того, прогрессирующая анемия является частым клиническим признаком гранулоцитарного лейкоза, а увеличение количества эритроидных и мегакариоцитарных клеток незначительное1. Незначительная популяция гранулоцитов с дольчатыми ядрами в пораженной области без явного воспаления указывает на то, что в данном случае выявлен неопластический, а не реактивный миелопоэз.

При гранулоцитарном лейкозе костный мозг может быть замещен незрелыми и зрелыми миелоидными клетками. В предыдущем сообщении о других линиях мышей эти неопластические клетки по-разному инфильтрировали печень, селезенку, лимфатические узлы и т. д.2, и эти клетки в селезенке и печени в основном располагались в красной пульпе и вокруг капсулы Глиссона1. Таким образом, распределение лейкозных клеток в данном случае было идентично таковому в предыдущем случае. На основании морфологии клеток гранулоцитарный лейкоз у мышей подразделяется на два типа: ювенильный тип, который сравним с острым миелогенным лейкозом человека, и зрелый тип с хроническим миелогенным лейкозом человека1. В ювенильном случае в неопластических клетках костного мозга, селезенки и печени преобладали низкодифференцированные клетки, тогда как можно видеть миелоидные элементы, представляющие разную степень зрелости, а процент миелобластов был низким в некоторых зрелых случаях2, 9. В данном случае в лейкозных клетках преобладала незрелая форма с крупными ядрами от овальной до слегка неправильной формы. Кроме того, учитывая клинические данные о том, что общее ухудшение здоровья, включая прогрессирующую анемию и затрудненное дыхание, развилось остро; таким образом, настоящее дело рассматривается как дело несовершеннолетнего.

Рис. 1. Гистологические изображения костного мозга бедренной кости. Ответ: Неопластические клетки диффузно пролиферируют, замещая тем самым костный мозг. Б: Ядра крупные, овальной или слегка неправильной формы. Небольшое количество клеток имеет ядра в форме почки (желтый наконечник стрелки), кольца (зеленый наконечник стрелки) или дольки (белый наконечник стрелки). Фигура митоза обозначена белой стрелкой. ОН пятна. Черная полоса=50 мкм (А), 10 мкм (Б).

В предыдущей публикации о мышах NOG опухолевые поражения в целом встречались редко; однако лимфома тимуса была зарегистрирована у 0,82% в возрастной группе от 16 до 40 недель7, 10. Насколько нам известно, спонтанный гранулоцитарный лейкоз ранее не регистрировался у мышей NOG. У нескольких линий мышей, включая B6C3F1 и BALB/c, гранулоцитарный лейкоз возникал редко2, 11 и не был зарегистрирован у этих мышей в возрасте 12 месяцев или моложе. В данном случае гранулоцитарный лейкоз развился в возрасте 51 недели, что было относительно молодым возрастом. Эта новая информация о спонтанных опухолях может быть полезна для правильного использования этого штамма мышей в дальнейших исследованиях.